儿科危重急症急救讲座 第二十四讲 重型感染性腹泻病（下）——沙门菌感染与中毒型痢疾

出血性大肠杆菌肠炎1982年在美国俄勒冈州和密歇根州发生因食汉堡包引起的食物中毒事件中,肠出血性大肠杆菌（E H E C）被明确为致病菌。E H E C能引起人的血性腹泻者目前公认有O157∶H7、O26∶H11和O111三个血清型,而O157∶H 7占绝大部分。本讲以O 1 5 7∶H 7肠炎为代表讲述。     

大肠杆菌O157∶H7实验感染动物排菌动态检测

目的 检验大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条在感染动物排菌中的应用效果.方法 将牛和小鼠采用灌胃攻毒方式实验感染大肠杆菌O157∶H7,用大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条与细菌鉴别培养基分别培养检测感染动物粪便中的O157∶H7的排菌量和持续时间.结果 牛在感染大肠杆菌O157∶H7后的第2天开始从粪便排菌,第4～6天达到峰值,排菌时间可持续28 d;小鼠在感染O157∶H7后的第4小时开始从粪便排菌,第6小时达到峰值,排菌时间可持续15 d.结论 大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条与细菌鉴别培养基培养计数的检测结果一致,试纸条更简便、快捷、直观,在1 ～5 min内可得出检测结果.     

应用酶联免疫吸附实验检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7

目的制备和纯化O157∶H7抗原,免疫家兔和豚鼠,获得高效价的抗O157∶H7免疫血清并进行纯化及酶标记。建立对O157∶H7感染患者快速诊断方法,做到早期发现及时治疗,有效控制疫情的蔓延。 方法ELISA双抗体夹心法检测O157∶H7抗原。步骤包被特异性抗体,加处理后的粪便等标本,然后加入抗O157∶H7酶结合物,最后加入底物显色。结果本课题所研制的抗O157∶H7酶结合物只对O157∶H7呈阳性反应,而与其他相关细菌无交叉反应。结论应用酶联免疫吸附试验（即双抗体夹心法）对肠出血大肠杆菌O157∶H7抗原的检测较常规法实验程序简捷、快速、敏感。临床和现场验证结果表明,其方法具有灵敏度高,特异性强操作简单等特点,为肠出血性大肠杆菌O157∶H7的鉴定及快速诊断提供了一种新的检测手段。     

大肠杆菌O157：H7生物学特性研究

血清型O157－H7大肠杆菌,可引起人类出现散发和暴发流行出血性结肠炎（HC）和溶血性尿毒综合症（HUS）,本文对5株大肠杆菌O157：H7的生物学特性进行了研究,结果研实：本菌为革兰氏阴性杆菌,电镜下观察可见细菌表明具有鞭毛,荚膜和菌毛,5菌具有典型大肠杆菌的生化反应,并有其独特的生化特性,不发酵山梨醇,对棉子糖,赖氨酸,鸟氨酸呈100％阳性反应。山梨醇－麦康凯培养基（SMAC）可用于分离大肠杆菌O157：H7,但SMAC至少不能区分大肠杆菌O157：H7和宋内氏痢疾杆菌,除个别抗生素外,此菌对常用的抗生素都敏感。5株大肠杆菌在D－甘露糖存在或不存时,均不能引起人A型红细胞和豚鼠红细胞发生凝集反应,5株菌均能产生一种特殊的肠溶血素,并且培养基对其溶血环的产生有很大影响,所有检测的大肠杆菌O157：H7都产生Vero细胞毒素,不产生不耐热肠毒素和耐热肠毒素,也不具有侵袭力,小鼠毒力试验（LD50）显示毒力远远大于肠毒原性大肠杆菌和宋内氏痢疾杆菌,DNA G＋C Mol%测定表明5株菌之间及其与作为标准大肠杆菌的E.coilK12之间具有很近的亲缘关系,质粒图谱分析结果表明：3株菌携带分子量为2．55MD,4．32MD和59．6MD的3个质粒,一株菌携带两个质粒：分子量为2．09MD和59．6MD,另一株菌也携带两个质粒：分子量为3．98MD和59．6MD。用紫外线照射法从5株大肠杆菌O157：H7中诱导出5种噬菌体,本文提取了大肠杆菌O157：H7的O－特异性多糖,其对小鼠有一定的免疫保护力。     

大肠杆菌O157:H7感染的临床分析

1999年及2000年夏秋季江苏省苏北某地及其接壤地区出现感染性腹泻患者,且有肾功能衰竭（肾衰）发生,病死率高,经检验证实该组病例系由大肠埃希菌（Escherichia coli）O157：H7引起的出血性肠炎（HC）和溶血性尿毒综合征（HUS）。该菌又称肠出血性大肠埃希菌（EHEC）O157：H7,简称大肠杆菌O157：H7,我们就该病流行期间76例临床诊断患者的临床表现作一分析。     

应用酶联免疫吸附实验检测肠出血性大肠杆菌O157:H7

目的:制备和纯化O157:H7抗原,免疫家兔和豚鼠,获得高效价的抗O157:H7免疫血清并进行纯化及酶标记.建立对O157:H7感染患者快速诊断方法,做到早期发现及时治疗,有效控制疫情的蔓延. 方法ELISA双抗体夹心法检测O157:H7抗原.步骤:包被特异性抗体,加处理后的粪便等标本,然后加入抗O157:H7酶结合物,最后加入底物显色.结果本课题所研制的抗O157:H7酶结合物只对O157:H7呈阳性反应,而与其他相关细菌无交叉反应.结论应用酶联免疫吸附试验(即双抗体夹心法)对肠出血大肠杆菌O157:H7抗原的检测较常规法实验程序简捷、快速、敏感.临床和现场验证结果表明,其方法具有灵敏度高,特异性强操作简单等特点,为肠出血性大肠杆菌O157:H7的鉴定及快速诊断提供了一种新的检测手段.     

肠出血性大肠杆菌O157：H7的快速可视化检测

目的应用环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术和羟基萘酚蓝（Hydroxynaphthol blue,HNB）指示剂建立肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157∶H7快速可视化检测方法。方法针对EHEC O157∶H7脂多糖编码基因rfbE保守区设计LAMP引物及环引物,反应体系加入染料HNB作为LAMP扩增的指示剂,结合LAMP浊度仪优化扩增条件,根据HNB的颜色变化进行结果判定,并评价检测方法的特异性和灵敏度。结果本方法最低检出限约为100拷贝/反应管,高于普通PCR;检测特异性高,仅EHEC O157∶H7反应管HNB颜色由紫罗兰变成天蓝色,而肠产毒性大肠杆菌（ETEC）、肠致病性大肠杆菌（EPEC）、肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）、肠聚集性大肠杆菌（EAEC）、宋内志贺菌、福氏志贺菌均不发生变色反应;体系的扩增效率高于普通PCR,40 min内出结果。结论建立的基于颜色判定的EHEC O157∶H7 LAMP检测方法具有特异、灵敏、设备要求简单等特点,适用于EHEC O157∶H7现场快速检测。     

肠出血性大肠杆菌O104:H4型感染研究进展

肠出血性大肠埃希菌感染(肠出血性大肠埃希菌肠炎)又名肠出血性大肠杆菌感染性腹泻或产志贺毒素大肠埃希菌性胃肠炎[1](以下称本病),系由肠出血性大肠杆菌(EHEC)引起的肠道传染病. 1历史 Riley等人首次从患者粪便中分离到O157:H7大肠杆菌,同时还从患者曾经就餐的汉堡包连锁店的冷冻的生牛肉馅中也分离到O157:H7大肠杆菌,从而确认O157:H7大肠杆菌是当时感染性腹泻暴发的原因,而O157:H7大肠杆菌也被称之为肠出血性大肠埃希杆菌.1999年我国部分地区发生了EHEC O157:H7感染性腹泻的暴发.EHEC可引起出血性肠炎和病死率较高的溶血性尿毒综合征(HUS)、血栓性血小板减少性紫癜(TTP)等并发症.     

O157:H7大肠杆菌感染及预防

O157:H7大肠杆菌感染是近年新发现的传染病。其病原是O157:H7大肠杆菌,传染源是带菌的畜(主要是牛羊猪)、禽(鸡鸭)。传播途径有三:一是以食源性传播为主,即通过牛肉、牛奶、酸奶和受污染的蔬菜、果汁等传播;二是饮水污染,通过游泳池污染也可感染发病;三是人与人之间的接触而感染。     

大肠杆菌O157：H7实验感染动物排菌动态检测

目的检验大肠杆菌O157：H7胶体金免疫层析检测试纸条在感染动物排菌中的应用效果。方法将牛和小鼠采用灌胃攻毒方式实验感染大肠杆菌O157：H7,用大肠杆菌O157：H7胶体金免疫层析检测试纸条与细菌鉴别培养基分别培养检测感染动物粪便中的O157：H7的排菌量和持续时间。结果牛在感染大肠杆菌O157：H7后的第2天开始从粪便排菌,第4～6天达到峰值,排菌时间可持续28 d;小鼠在感染O157：H7后的第4小时开始从粪便排菌,第6小时达到峰值,排菌时间可持续15 d。结论大肠杆菌O157：H7胶体金免疫层析检测试纸条与细菌鉴别培养基培养计数的检测结果一致,试纸条更简便、快捷、直观,在1～5 min内可得出检测结果。     

产志贺毒素大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶基因型的研究

目的 探讨产志贺毒索大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶（extended spectrum β-lactamases，ESBLs）类型及耐药机制。方法采用纸片琼脂扩散法筛选36株产志贺毒素大肠埃希菌产ESBLs菌株，接合传递实验、质粒谱分析、PCR检测耐药基因和DNA序列分析产ESBLs菌株的表型和基因型。结果双纸片扩散法证明有2株产志贺毒素大肠埃希菌产ESBLs，美国株E．coli 5 nonO157：H7和中国株E．coli 27O157：H7对头孢他啶等第三、第四代头孢菌素和氨基糖苷类抗生素耐药。并能通过5．8kb的质粒传递给受体菌。PCR检测含有blaTEM基因。DNA同源分析表明861bp的blaTEM DNA片段与blaTEM-1 DNA片段同源。结论产志贺毒索大肠埃希菌美国株和中国株产生相同类型的ESBLs。表现出对第三、第四代β-内酰胺酶类抗生素耐药。     

肠出血性大肠杆菌O157∶H7研究进展

大肠杆菌是寄居肠道的优势菌丛之一 ,大多数对人体无害 ,但如远离肠道 ,侵入其他组织和血液 ,就可引起化脓性炎症或败血症等 ,但对其肠道致病性的认识相对较晚。上世纪 4 0年代有人发现某些血清型大肠杆菌是爆发性婴儿腹泻的病因[1] 。1982年美国首次报道了由肠出血性大肠杆菌O15 7∶H7(ECHC∶O15 7∶H7)引起的出血性肠炎[2 ] 。我国1988年也有关于肠出血性大肠杆菌O15 7∶H7引起肠道感染的报道[3] ,肠出血性大肠杆菌O15 7∶H7才日益成为全世界关注的问题。现将有关研究进展综述如下 :1　微生物学特性及发病机制O15 7∶H7大肠杆菌属于…     

用多糖间接血凝试验检测肠出血性大肠杆菌O157抗体的初步研究

目的：探讨多糖间接血凝（IHA）检测感染肠出血性大肠杆菌（EHEL）O157：H7患血清中抗O157抗体的价值。方法：用酚－水法提取O157：H7脂多糖和醋酸水解法制备多糖抗原，致敏绵羊红细胞后以IHA检测各种肠道致病菌抗血清及健康人和非腹泻患血清的抗体反应。结果：制备的多糖抗原糖含量为33％，不含核酸，蛋白质＜0．3％，具有鲎试剂凝集活性。以O157多糖IHA检测O157单克隆抗体呈高效价凝集（1：1280），H7多克隆抗体呈低效价凝集（1：8），其它各种肠道致病菌抗血清的凝集效价均小于1：2，从30名健康人和30名非腹泻患儿的血清中未查出O157抗体；204名非腹泻成人患中，有1人的凝集效价为1：8，其余的均小于1：2，吸收抑制试验表明凝集反应为特异性。结论：以多糖IHA检测抗O157抗体可试用于人群O157：H7感染的抗O157抗体流行率调查及肾溶血性尿毒综合征的免疫诊断。     

某市市售食品食源性致病菌监测分析

目的了解乌鲁木齐市食源性致病菌在食品中的污染状况,提高食品卫生监测和危险性评估能力。方法采集8类食品,共226份样品按2010年食源性疾病监测网络工作手册分别进行了沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157:H7、副溶血性弧菌、空肠弯曲菌6种致病菌检测。结果 2010年乌鲁木齐市生肉制品中单核细胞增生性李斯特菌污染较为严重,检出率达31.1%。结论乌鲁木齐市食品中存在食源性致病菌的污染,生畜肉、生禽肉、动物性水产品、凉拌菜品和非发酵豆制品受到的污染最为严重。单增李斯特菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌是乌鲁木齐市食源性疾病发生的危险因素。     

麦康凯山梨醇琼脂培养基的验证试验

目的 对制订的麦康凯山梨醇琼脂培养基行业标准的可行性进行试验验证.方法 取不同厂家生产的培养基,按照说明书配制待检培养基,根据行业标准要求,进行理化测定和微生物试验.结果 待验证的麦康凯山梨醇琼脂培养基的pH值和水分等理化性质均在标准规定的范围内,且质控菌株生长情况符合相应要求.结论 制订的麦康凯山梨醇琼脂培养基行业标准具有可操作性,可作为推荐性的行业标准.     

500例腹泻患者体内大肠埃希菌基因分型及其耐药特征分析

目的:分析腹泻患者体内大肠埃希菌(E.coli)的基因分型及其耐药特征。方法:选取2012年12月—2014年12月间收治的腹泻患者500例,采集其粪便标本培养,检测产志贺毒素E.coli、肠凝聚性E.coli、非典型肠致病性E.coli、肠侵袭性E.coli、肠产毒性E.coli和未分型E.coli菌株,并对致病菌基因的特异性引物进行了多重PCR测定,分离出致泻性大肠杆菌(diarrheagenic E.coli,简称DE.coli)各型菌株;采用微量稀释药敏试验法检测DE.coli对常用抗菌药物的耐药性。结果:500例腹泻患者中,从150例(占30.00%)患者中分离出DE.coli菌株170株,其中肠凝聚性E.coli为115株(占67.65%),肠致病性E.coli为8株(占4.71%),非典型肠致病性E.coli为11株(占6.47%),产志贺毒素E.coli为2株(占1.18%),肠侵袭性E.coli为1株(占0.59%)和未分型为33株(占19.41%);DE.coli对氨苄西林(AMP)和哌拉西林(PIP)的耐药率为最高,分别为70.00%和60.59%以及对亚胺培南(IMP)、哌拉西林-他唑巴坦(TZP)及美罗培南(MER)的耐药率为0。结论:腹泻患者感染的最常见病原菌为肠凝聚性E.coli,其次为非典型肠致病性E.coli;DE.coli对常用抗菌药物的耐药性各不相同,在临床抗菌治疗前需要确定DE.coli的类型,并加强对细菌耐药性的监测,以促进抗菌药物的合理使用。     

餐饮食品中沙门氏菌的危害分析、污染调查与防控

目的调查了解餐饮消费环节熟肉制品和凉拌菜中沙门氏菌的污染状况,分析沙门氏菌的危害和污染分布特点,提出针对性防控措施建议,为餐饮服务环节食品安全的科学监管提供参考。方法采用文献综述、采样检测、结果分析评价并导出结论和建议的方法。结果在调查采集的371份样本中,检出沙门氏菌36株,检出率9.70%（其中,熟肉检出率为14.75%,凉拌菜检出率为7.23%）;在凉拌菜品种中,凉拌荤菜的检出率为8.40%,凉拌素菜的检出率为5.93%,差异无统计学意义（χ2=0.562,P〉0.05）;按被采样单位所属业态比较,小吃店检出率最高,为24.39%,其次是小型餐馆17.57%,快餐店和学校食堂的样本均未检出沙门氏菌,不同业态的检出率有极显著差异（χ2=21.028,P=0.001）;按被采样单位卫生等级比较,C级餐饮服务单位沙门氏菌检出率最高,为28.13%,与A、B级餐饮服务单位的检出率有极显著差异（χ2=24.607,P=0.000）。结论餐饮服务单位的熟肉和凉拌菜存在一定程度的沙门氏菌污染,小吃店、小型餐馆和C级餐饮服务单位熟肉和凉拌菜的污染水平较高;建议监管部门进一步加大监督检查力度,采取持续监测及推进餐饮企业建立食品安全控制体系等综合措施,有效防范沙门氏菌污染导致的食物中毒,保障公众饮食安全。     

注射用阿洛西林钠舒巴坦钠药效学研究

目的考察注射用阿洛西林钠舒巴坦钠[4∶1,ALCL-SBT(4∶1)]的体内抗菌作用。方法分别以金黄色葡萄球菌(S.aureus)、肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)、大肠杆菌(E.coli)作为感染菌对小鼠进行腹腔注射,对已感染的小鼠按不同组别分别静脉注射ALCL-SBT(4∶1)各剂量,计算半数有效量(ED50)。结果 ALCL-SBT(4∶1)、ALCL、SBT对S.aureus感染小鼠的ED50分别为714.8,1 076.1和1 462.3 mg.kg-1,对K.pneumoniae感染小鼠的ED50分别为492.3,681.4和978.5mg.kg-1,对E.coli感染小鼠的ED50分别为941.9,1 141.8和1 427.0 mg.kg-1。结论 ALCL-SBT(4∶1)对S.aureus,K.pneumoniae和E.coli感染的小鼠均有较好的保护作用。     

2～5岁儿童种接大肠杆菌O157O特异性多糖结合疫苗的安全性和免疫原性

大肠杆菌O157：H7可引起严重肠炎和溶血性尿毒病，尤其对幼儿和老年人。与志贺菌的情况相似，血清抗大肠杆菌O特异性多糖IgG抗体能通过裂解肠道细菌而提高免疫力。成人Ⅰ期临床试验显示，大肠杆菌O157O特异性多糖与重组绿脓杆菌外毒素A结合制成的疫苗（O157-rEPA）安全且具有免疫原性。此项Ⅱ期临床试验旨在确认2～5岁儿童接种O157-rEPA的安全性和免疫原性。     

细胞壁结构对沙门氏-志贺氏杂交菌苗接种成功可能是重要的

沙门氏伤寒-志贺氏宋内(Ty-Shig)杂交菌苗(5076-1C)是由插入携带宋内53G 1型菌体抗原基因的伤寒杆菌Ty21a组成。它在麦康凯培养基上发酵乳糖。1982年、1984年和1986年生产的批号分别为2、5和8杂交菌苗口服免疫志愿者后,再用有毒的宋内53G菌口服攻击,发现第2和第5批有保护作用,而第8批没有保护作用。本文比较三批菌苗的各种性状,以确定与人体疫苗接种成功相关的特征。三批疫苗的冻干步骤相同,但第2和第5批的菌种是S.Formal,先经麦康凯琼脂在35℃孵育28～36小时,选取乳糖发酵阳性的菌落接种于脑心浸出液肉汤