粤东地区喘息性疾病患儿中人偏肺病毒的检出与病原学初步研究

目的 了解人类偏肺病毒(hMPV)在粤东地区的感染情况与小儿感染的临床特征.方法 采用逆转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR)对粤东地区喘息性疾病儿童和健康体检儿童共323例的鼻咽抽吸物及咽拭子进行hMPV基因筛查,然后随机挑选6份RT-PCR扩增阳性产物进行纯化测序,将测序结果与Genbank中的多株hMPV N 蛋白基因序列进行比较和进化树分析.分析hMPV感染患儿的临床资料.结果 240份小儿喘息性疾病呼吸道标本中,检测到hMPV病毒阳性12例(阳性率5%),3、4月份为发病高峰.阳性均为年龄较小患儿.6份hMPV阳性标本目标基因部分核苷酸序列与 GenBank中公布的多株hMPV N基因同源性达80.8%～98.4%.核苷酸序列基因进化树分析显示存在2种不同的基因型.12例hMPV阳性患儿均表现咳嗽、低热、及喘息等临床症状;临床诊断为毛细支气管炎8例、喘息型肺炎4例.83份健康体检儿童的呼吸道标本中均未检测到hMPV特异性基因片段.结论 hMPV是粤东地区婴幼儿喘息性疾病的重要病毒性病原体之一.粤东地区流行的hMPV株存在2种不同的基因型.     

人类偏肺病毒与呼吸道合胞病毒呼吸道感染的临床研究

目的 了解福州地区人类偏肺病毒(HMPV)感染情况,比较HMPV与呼吸道合胞病毒(RSV)引起呼吸道感染的临床特征及流行特点.方法 采集2005年至2007年连续两个冬春季节153份福建省立医院就诊呼吸道感染患者痰标本或咽拭子标本,RT-PCR和套式RT-PCR分别检测RSV和HMPV,部分阳性PCR产物测序,DNAMAN软件分析;结合临床资料,比较两种病毒所引起的呼吸道感染临床症状、体征和流行特点.结果 153份鼻咽分泌物标本中,32份HMPV阳性,阳性率为20.9%;26份RSV阳性,阳性率为17.0%,8份HMPV和RSV均阳性.随机抽取3份标本,HMPV核苷酸序列一致,登载NCBI基因库(序列号DQ887758),基因进化树分析为单一基因型,属A基因型,但发生部分变异.2005年至2006年冬春HMPV阳性26份,阳性率为26.7%,2006年至2007年冬春HMPV阳性6份,阳性率为10.7%,而RSV检出情况与HMPV相反.儿童RSV感染平均年龄为(2.65±2.65)岁,HMPV为(4.58±3.35)岁.两种病毒引起呼吸道感染症状均以咳嗽、咽痛,发热为主.结论 HMPV与RSV均是福州地区冬春季节呼吸道病毒感染的主要病原体,两者可合并感染;HMPV主要感染年龄较大儿童,HMPV与RSV的临床特征相似.本研究期间福州地区发现的HMPV为单一基因型.     

广东地区急性呼吸道感染儿童人类博卡病毒的流行状况

目的 了解广东地区急性呼吸道感染患儿人类博卡病毒(HBoV)的感染情况.方法 收集广东地区2007年6月至2008年5月期间呼吸道感染患儿的鼻咽分泌物447份,采用PCR法检测HBoV衣壳蛋白(VP)基因片段,阳性标本作核酸序列测定,并与基冈库中的已知序列进行序列比对和系统进化树分析.结果 447例呼吸道感染患儿标本中HBoV阳件率为5.1%.其中10例患儿与其他病毒混合感染,占阳性标本的43.5%.阳件患儿的主要临床诊断为喘息性肺炎、毛细支气管炎和支气管肺炎,年龄分布从42 d到6岁,主要集中在1岁以内,HBoV感染的季节分布偏向夏、秋及晚春.经序列比对和进化树分析.阳性株的VP基因片段与瑞典株ST1的核酸及氨基酸序列同源性分别为97.8%～98.8%及99.3%～100.0%.结论 HBoV是广东地区儿童下呼吸道感染的重要病原之一,且在1岁以内患儿中高发.该地区HBoV流行株的VP基因片段较为保守,但也存在导致氨基酸改变的突变株.     

急性下呼吸道感染住院儿童病原及临床流行病学分析

目的 了解上海部分地区全年儿童急性下呼吸道感染(ALRTI)的病原谱及临床流行病学特征,为临床抗感染及病原检测提供依据.方法 933例复旦大学附属儿科医院2007年1月至12月ALRTI住院患儿,负压吸取咽部以下深部痰液1～2 mL,作细菌培养,并检测呼吸道合胞病毒(RSV),腺病毒(ADV),A、B型流感病毒(IFV),1、2及3型副流感病毒(PIV)等7种常见呼吸道病毒抗原,实时荧光定量PCR检测人偏肺病毒(hMPV)RNA及支原体和衣原体DNA.结果 992份ALRTI儿童痰标本中,细菌培养阳性225份,病毒检测阳性316份,支原体和衣原体阳性分别是74份与31份,混合感染标本118份,总标本病原学检出率为53.9%.RSV阳性标本268份,为最重要的感染病原,冬季为RSV感染高峰,3月龄以下儿童检出率为36.4%,3足月到6月龄以下儿童检出率为49.5%,2岁以下儿童占92.5%.RSV阳性标本中,79.5%的患儿有喘息表现.330份7种常见病毒检测阴性标本中,hMPV检出率为2.1%,患儿均无喘息表现.检出大肠埃希菌40株、肺炎克雷伯菌33株、肺炎链球菌32株、金黄色葡萄球菌20株、凝固酶阴性葡萄球菌19株、流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌分别为17株和16株、卡他莫拉菌布兰汉亚种16株、铜绿假单胞菌15株,为主要的致病菌.975份标本中支原体和衣原体检出率分别为7.6%和3.2%.结论 RSV仍为儿童ALRTI最主要的病原,尤其在2岁以下儿童.RSV感染易表现为儿童喘息发作,冬季为流行高峰.2007年hMPV流行强度较弱.上海部分地区仍有40%以上ALRTI患儿感染病原未明.     

游泳池水引起的聚集性感染人腺病毒基因特征分析北大核心CSCD

目的了解淮安市一游泳池聚集性感染人腺病毒的hexon基因特征。方法采用实时荧光定量RT-PCR方法对12例游泳后出现呼吸道感染患儿咽拭子标本和2份游泳池水样进行呼吸道多病原体的快速筛查,对核酸阳性的标本进行hexon基因的部分序列扩增、测序并构建系统发生树,分析hexon基因特征及人腺病毒遗传多样性确定腺病毒的型别。结果 12例患儿中有9份咽拭子标本和1份儿童池游泳水样扩增出人腺病毒hexon基因片段,测序分析该毒株(淮安株)与我国GZ01株、日本J1007、美国株(USA27440、USA 5497、USA NHR3)核苷酸同源性及推导的氨基酸同源性均为99.9%。系统进化树分析显示,淮安株属于人腺病毒E亚属4基因型的进化谱系枝。结论该起聚集性呼吸道感染疫情可能由E亚属4基因型人腺病毒污染游泳池水引起。     

游泳池水引起的聚集性感染人腺病毒基因特征分析

目的了解淮安市一游泳池聚集性感染人腺病毒的hexon基因特征。方法采用实时荧光定量RT-PCR方法对12例游泳后出现呼吸道感染患儿咽拭子标本和2份游泳池水样进行呼吸道多病原体的快速筛查,对核酸阳性的标本进行hexon基因的部分序列扩增、测序并构建系统发生树,分析hexon基因特征及人腺病毒遗传多样性确定腺病毒的型别。结果 12例患儿中有9份咽拭子标本和1份儿童池游泳水样扩增出人腺病毒hexon基因片段,测序分析该毒株(淮安株)与我国GZ01株、日本J1007、美国株(USA27440、USA 5497、USA NHR3)核苷酸同源性及推导的氨基酸同源性均为99.9%。系统进化树分析显示,淮安株属于人腺病毒E亚属4基因型的进化谱系枝。结论该起聚集性呼吸道感染疫情可能由E亚属4基因型人腺病毒污染游泳池水引起。     

急性喘息性疾病患儿呼吸道病毒感染特点

目的 调查急性喘息性疾病患儿的呼吸道病毒感染特点.方法 163例急性喘息性疾病患儿,采用RT-PCR方法对患儿鼻咽分泌物进行呼吸道病毒包括呼吸道合胞病毒(RSV)、鼻病毒(HRV)、偏肺病毒(hMPV)、流感病毒A、B型、副流感病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和腺病毒的检测,检出的阳性病例入选,分析其与年龄、季节、喘息史及疾病类型的相关性.结果 163例份标本中检出呼吸道病毒阳性132例份,阳性检出率为80.9％,其中RSV单独感染、HRV单独感染及RSV+ HRV混合感染检出率分别为37.4％、25.1％及12.9％.≤1岁儿童RSV感染检出率为58.3％,1～3岁儿童HRV感染检出率为32.8％;冬春季RSV病毒阳性检出率分别为45.6％、50.8％,HRV病毒阳性检出率分别为31.7％、26.2％;有喘息史儿童RSV感染检出率为46.1％,无喘息史儿童HRV感染检出率为39.3％;毛细支气管炎及喘息性支气管炎儿童RSV病毒感染检出率分别为48.1％、33.3％,婴幼儿哮喘儿童HRV感染检出率为35.2％.结论 急性喘息性疾病患儿的呼吸道病毒感染率高.RSV是儿童急性喘息性疾病的首位病毒,其次是HRV.≤1岁儿童主要为RSV感染,1～3岁儿童主要为HRV感染;冬春季RSV及HRV病毒阳性率检出较高;无喘息史儿童更易被RSV病毒感染,有喘息史儿童则易被HRV感染;毛细支气管炎及喘息性支气管炎儿童更易被RSV病毒单独感染,婴幼儿哮喘儿童则更易被HRV单独感染.     

上海地区2009年上半年手足口病患儿肠道病毒71病毒壳体蛋白VP1基因的检测与亚型分析

目的 了解2009年4月至5月肠道病毒(EV)71在上海地区儿童手足口病(HFMD)中的分子流行病学特点.方法 收集2009年4月至5月在复旦大学附属儿科医院临床诊断为HFMD的95例住院患儿咽拭子标本73份与粪便标本38份,采用TaqMan实时RT-PCR及套式RT-PCR进行EV71病毒壳体蛋白VP1基因检测,并进行基因测序分析.结果 73份咽拭子标本中,EV71阳性6份,检出率为8.2%;38份粪便标本中,EV71阳性24份,检出率为63.2%.28份套式RT-PCR阳性标本基因测序分析结果显示,27株为C4亚型,为绝对优势流行株,另有一株为C2亚型株;1例死亡患儿分离株为C4亚型,其VP1基因序列未见明显变异.结论 EV71是上海地区2009年4月至5月儿童HFMD的重要病原体,C4亚型株占绝对优势地位,同时伴有C2亚型株的流行.     

人冠状病毒HKU1 N和S蛋白基因序列及进化分析

目的 了解人冠状病毒HCoV-HKU1在我国福州急性重症下呼吸道感染患儿中的感染情况以及病毒N基因和S基因的系统进化特征。方法 通过RT-PCR法对2007年11月至2015年1月因呼吸道感染住进医院儿科重症监护病房的266例小儿鼻咽抽取物标本进行4种人冠状病毒的检测和人冠状病毒HCoV-HKU1的确认检测,测序并BLAST比对分析8份人冠状病毒阳性产物。结果 在266例标本中检出2例HCoV-HKU1感染阳性病例,检出率为0.75%(2/266)。这两例患儿一例诊断为支气管炎、一例诊断为急性重症肺炎。通过检测都发现混合感染了人副流感病毒3型(HPIV-3)。对这两株病毒FZ90和FZ96的N和S蛋白基因进行序列测定、拼接和系统进化分析;结果表明这2株HCoV-HKU1都属于HKU1基因型A。结论 人冠状病毒HCoV-HKU1可能是儿童下呼吸道感染中较为重要的一种病原,混合感染导致儿童病情加重。     

上海地区儿童急性下呼吸道感染的鼻病毒基因检测及临床特征

目的 建立套式RT-PCR检测急性下呼吸道感染(ALRTI)患儿临床样本鼻病毒(HRV)基因的方法,了解上海地区ALRTI患儿HRV感染的现状.方法 收集2005年1月至12月住院的342例确诊为ALRTI的患儿的深部鼻咽分泌物(NPS)标本.用套式RT-PCR方法检测NPS中的HRV基因,并进一步对扩增产物进行序列分析.对HRV在ALRTI患儿中所占比例、性别、年龄、季节分布及临床特点进行分析.结果 在342例ALRTI患儿的NPS标本中,套式RT-PCR检测到46例HRV阳性,占13.5%;选取15份HRV阳性样本,用另一对引物扩增并测序,测得的核苷酸序列经BLAST比较,与基因库中已知HRV序列的同源性为83%～97%;15份样本序列之间核苷酸同源性在64.4%～98.4%,核苷酸变异在1.6%～48.3%;15份样本序列在进化树中聚类为两簇;15份样本序列变异度较大,可表现为核苷酸的点突变,也可是邻近几个碱基同时突变,甚至有单个或邻近几个碱基的核苷酸缺失及插入突变.46例阳性患儿中,男33例,女13例,男女之比为2.5∶1.HRV阳性患儿中,3岁以下婴幼儿检出38例,占HRV总检出数的82.6%;1岁以下患儿检出27例,占58.7%.HRV所致ALRTI全年可见,在3～5月为最高峰.本组46例套式RT-PCR检测HRV阳性患儿中,诊断支气管肺炎45例,喘息性支气管炎1例;以中等度以下发热为主;39例患儿末梢血WBC＜10×109/L,占84.8%;37例中性粒细胞＜0.50,占80.4%;36例C反应蛋白＜8 mg/L,占78.3%,均符合病毒性肺炎的特点.合并症较少,绝大部分病情较轻,所有患儿均治愈.结论 套式RT-PCR检测HRV基因快速、简便.HRV基因组有高度变异的特点.HRV感染在本地区小儿ALRTI中占有一定比例.HRV所致ALRTI缺乏特异性,病情相对较轻且预后较好.     

Prevalence of human Metapneumovirus (hMPV) in children with wheezing in Shiraz-Iran

Human metapneumovirus (hMPV) infection plays an important role in the pediatric respiratory infections. The aim of this study was to determine the relationship between asthma and wheezing with hMPV in hospitalized children. Nasal pharyngeal swabs obtained from 120 children aged 1-60 months, hospitalized during a one year period, were tested for the hMPV by RT-PCR. HMPV was detected in 20 (16.6%) of patients suffering from wheezing. Some patients in addition to wheezing had asthma 10.8%. This infection occurred predominantly from October 2008 to September 2009.     

Mannose-binding lectin gene polymorphisms in infants with bronchiolitis and post-bronchiolitis wheezing

BackgroundMannose-binding lectin (MBL) encoded by the MBL2 gene, is an important component of the innate immunity. Low levels have been linked with respiratory infections and both high and low levels with allergy and asthma. The aims of the study were to evaluate the connection between polymorphisms of the MBL2 gene and viral findings, clinical characteristics and subsequent wheezing in young infants with bronchiolitis.MethodsIn all, 129 full-term infants hospitalized for bronchiolitis at age less than 6 months have been followed-up until the mean age of 1.5 years. The genotyping of the MBL2 gene mutations was made by pyrosequencing for a simultaneous detection of three single nucleotide polymorphisms (SNP).ResultsThe MBL genotypes or allele frequencies had no significant associations with clinical characteristics of bronchiolitis. The 41 children with variant genotypes were more often infected by multiple viruses (21.9%, p = 0.047) than children with wild-type A/A genotypes (9.1%). In addition, more children with variant genotypes (31.7%, p = 0.016) had used corticosteroids because of post-bronchiolitis wheezing, compared to those with wild-type A/A genotypes (13.6%). No other significant associations with viral findings or post-bronchiolitis outcomes were found.ConclusionsPreliminary evidence was found that the variant non-A/A genotypes may be associated with susceptibility to multiple viral infections and more severe post-bronchiolitis wheezing requiring treatment with corticosteroids.