牙周炎部位牙龈成纤维细胞的生化机制——DNA单链断裂和DNA损伤修复系统功能减弱

牙周炎症的牙龈组织中存在的超氧离子可引起细胞 DNA 单链断裂,正常细胞 DNA 单链断裂能及时修复,如果大量 DNA 单链断裂不能很快修复,则可导致局部基因表达和调节异常。作者对牙周炎症部位和健康部位成纤维细胞 DNA 单链断裂状况,DNA 损伤修复的重要酶——DNA 连接酶和多聚腺嘌呤二磷酸核糖(PADPR)合成酶的活性进行了研究,结果表明,牙周炎症部位牙龈成纤维细胞的 DNA 单链断裂数目明显高于健康部位者(P<0.01);其 DNA 连接酶活性及 PADPR 合成酶活性均显著低于健康部位的酶活性(P<0.01);作者对实验结果的可能机制进行了分析讨论。     

补体C1q对牙龈成纤维细胞作用的研究

牙龈成纤维细胞可因补体Ｃ１ｑ受体的特征分为两个亚群,一群成纤维细胞表面含高密度、高亲和力的Ｃ１ｑ受体,另一群成纤维细胞则只含少数低亲和力的Ｃ１ｑ受体。为了阐明Ｃ１ｑ与牙龈成纤维细胞相互作用的本质和意义,研究了Ｃ１ｑ对健康部位、龈炎部位和牙周炎部位牙龈成纤维细胞生长和胶原合成的影响,发现Ｃ１ｑ能促进上述部位牙龈成纤维细胞的生长和胶原合成,尤对牙周炎部位的牙龈成纤维细胞的作用是为明显。说明Ｃ１ｑ通过与     

不同来源人牙龈成纤维细胞体外降解胶原能力研究

目的 :体外培养条件下比较健康人及侵袭性牙周炎患者的牙龈成纤维细胞对鼠I型胶原降解的影响和差异。方法 :在 6孔板底制备胶原膜 ,取固定数量的对数生长期健康人及侵袭性牙周炎患者的牙龈成纤维细胞接种于胶原膜中央 ,分别于孵育 2 4、48、72h后消化弃去细胞 ,考马斯亮兰液染色胶原膜 ,显微镜下测定降解区和非降解区的光密度来比较不同时间段各组细胞的胶原降解量。结果 :健康人和侵袭性牙周炎各 3例标本来源细胞的结果基本一致 ,表现为随时间的延长 ,胶原降解量相应增加 ;而各时间段病变组的胶原降解量较健康组明显增加(P <0 .0 5 )。结论 :健康人和侵袭性牙周炎的牙龈成纤维细胞对鼠I型胶原均有降解作用并呈现出时间效应 ,而且病变组的作用更强。     

人纤维增生性牙龈成纤维细胞自分泌TGF-β对其细胞外基质合成的影响

遗传性牙龈纤维瘤病(HGF)是以牙龈组织的纤维性增生为主要特征的一种家族遗传性疾病。体外实验结果表明,HGF来源的牙龈成纤维细胞比正常人细胞能产生更多的Ⅰ型胶原和FN等细胞外基质分子。转化生长因子β(TGF-β)是一族具有重要生物学功能的细胞因子,至少有5种类型,分别为TGF-β_(1-5),能刺激成纤维细胞增生和FN以及胶原的产生,促进损伤的修复过程。本实验目的在于测定HGF的牙龈成纤维细胞是否存在自分泌TGF-β,以及细胞产FN和Ⅰ型胶原是否受自分泌TGF-β的调节。     

糖基化终产物对牙龈成纤维细胞增殖和Ⅰ型胶原合成的影响

目的 观察糖基化终产物对牙龈成纤维细胞增殖能力和Ⅰ型胶原合成的影响,探讨糖基化终产物对牙周组织修复功能的作用及在伴有糖尿病牙周炎中的致病机制.方法 采用组织块法培养牙龈成纤维细胞,培养基中加入体外合成的不同浓度的糖基化终产物,甲基噻唑基四唑(MTT)法检测在不同时间段下牙龈成纤维细胞增殖水平的变化,酶联免疫吸附测定法和实时定量反转录聚合酶链法(RT-PCR)分别测定牙龈成纤维细胞合成Ⅰ型胶原的量和表达Ⅰ型胶原mRNA的水平.结果 200 mg/L糖基化终产物作用于牙龈成纤维细胞48、74 h的A值分别为0.016±0.023、0.035±0.008,比其他组A值低(P＜0.05),并且细胞形态发生了改变,细胞由均一的梭形变成圆形、椭圆形、细长不规则条状等,胞质浓缩,细胞间隙增大;糖基化终产物作用72 h后,牙龈成纤维细胞上清液中和胞内Ⅰ型胶原的含量减少(P＜0.05),Ⅰ型胶原mRNA表达下调(P＜0.05).结论 糖基化终产物能抑制牙龈成纤维细胞的增殖、降低其合成Ⅰ型胶原蛋白和表达Ⅰ型胶原mRNA,从而可能削弱了牙周组织的愈合能力.     

Ⅰ、Ⅲ型胶原在牙龈成纤维细胞和牙周韧带细胞中表达的比较研究

目的比较人牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞在胶原基质合成方面的差别,并探讨其意义。方法采用组织块法体外培养人牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞,利用免疫细胞化学技术检测Ⅰ、Ⅲ型胶原在两种细胞中的表达,通过图像分析探讨其表达的差异。结果Ⅰ、Ⅲ型胶原在牙周韧带细胞中表达阳性,在牙龈成纤维细胞中染色较弱。统计学分析显示,Ⅰ、Ⅲ型胶原在牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞的免疫细胞化学染色结果具有显著性差异(P<0.01)。结论牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞胶原基质的合成或分泌存在差异,这种差异可作为鉴别两种细胞的标志之一。     

白细胞介素1对牙龈成纤维细胞增殖和前列腺素E_2产生的影响

本研究采用外用血单核细胞,以SiO_2作为刺激因子,经培养后,Sephadex G—75凝胶柱层析分离IL—1,观察IL—1对牙龈成纤维细胞PGE_2的产生和细胞增殖的影响,PGE_2的测定采用放免分析,以~3H—TdR掺入反映增殖情况。发现IL—1明显促进牙龈成纤维细胞PGE_2的产生,也明显促进牙龈成纤维细胞增殖,说明IL—1能通过促进PGE_2的产生而介导一系列牙周组织的病理过程,另外,还能通过促进牙龈成纤维细胞的增殖而在牙周组织修复中而起着重要作用。     

破骨细胞分化因子和破骨细胞生长抑制因子在牙周组织细胞中的表达

目的:检测炎症前细胞因子IL- 1β和骨成熟因子PGE2 对人牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞破骨细胞分化因子(osteoclast differentiation factor,ODF)和破骨细胞生长抑制因子(osteoclastogenesis inhibitory factor,OCIF)表达的影响.方法:用RT- PCR和Southern- blot对该2 种细胞在IL- 1β或PGE2作用下细胞中ODF和OCIF mRNA的表达进行半定量.结果:上述2 种细胞在IL- 1β或PGE2作用下,ODF和OCIF的合成均有升高,各细胞合成ODF和OCIF的峰值随IL- 1β或PGE2作用时间和浓度的不同而发生变化.结论:牙周组织中ODF和OCIF可能同时参与炎症反应,并受致炎因子IL- 1β和骨代谢因子PGE2调节.     

老年人牙周炎牙龈组织中凋亡细胞免疫组织化学研究

目的 :观察老年人牙周炎牙龈组织中凋亡细胞分布特点。方法 :采用特异性凋亡细胞免疫组织化学染色法 (TUNEL染色 ) ,对 15例老年人牙周炎患者 ,10例慢性成人牙周炎患者 ,10例青少年牙周炎患者和 11例健康老年人牙龈组织中阳性凋亡细胞的分布及计数进行比较研究。结果 :老年人牙周炎组阳性凋亡细胞总例数明显高于健康老年人组和慢性成人牙周炎组 (P <0 .0 5 ) ;慢性成人牙周炎组和青少年牙周炎组阳性凋亡细胞总例数也明显高于健康老年人组 (P <0 .0 5 ) ;老年人牙周炎组阳性凋亡细胞计数明显高于慢性成人牙周炎组、青少年牙周炎组和健康老年人组 (P <0 .0 5 )。结论 :感染性炎症因素和衰老因素均能促进老年人牙周炎时牙龈组织细胞凋亡 ,这两个因素的双重协同作用造成了老年人牙周炎患者局部牙龈组织对刺激做出过强的细胞凋亡反应。     

人牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞生物学活性的研究

目的:体外原代培养人牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞,并对其生物学活性作初步探讨.方法:采用组织块法原代培养牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞,绘制生长曲线,测定二者碱性磷酸酶活性;流式细胞术和免疫组化染色法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原、骨形成蛋白的表达情况,观察对比两种细胞的生物学特性的异同.结果:牙龈成纤维细胞原代培养成功率及细胞增殖活性明显高于牙周膜细胞.在牙周膜细胞中,Ⅰ、Ⅲ型胶原均为阳性表达,棕黄色颗粒克满整个胞浆内.在牙龈成纤维细胞中Ⅰ型胶原为弱阳性表达,Ⅲ型胶原阳性表达更弱.牙周膜细胞的ALP水平明显高于牙龈成纤维细胞.牙周膜细胞BMP2表达为强阳性,而牙龈成纤维细胞表达弱阳性.结论:牙周膜细胞具有较强的成骨能力,是理想的牙周组织工程的种子细胞.牙龈成纤维细胞易于培养成活,增殖力强,具有牙周膜细胞的一些特点,组织取材方便,也可作为牙周组织工程的种子细胞.     

尼古丁对牙周炎相关细胞影响的研究

牙周炎是以菌斑微生物为始动因子,宿主和其它因素共同作用导致的牙周支持组织广泛破坏的疾病。牙周膜成纤维细胞、牙龈成纤维细胞、成/破骨细胞对维持牙周组织的健康至关重要,而上述细胞功能的异常都可能导致牙周炎的发生。此外,中性粒细胞等免疫细胞也在牙周炎的发生发展中也扮演着重要的角色。     

整合素在药物性牙龈增生中的表达研究

目的:检测整合素α1、α2和β1在来源于药物性牙龈增生(drug-induced gingival overgrowth,DIGO)患者的牙龈成纤维细胞中的表达水平变化,探讨其与DIGO胶原聚集的相关性.方法:采用免疫组织化学法和实时定量PCR分别检测整合素α1、α2和β1在来源于DIGO和正常人群牙龈组织和成纤维细胞中的表达水平.结果:整合素α1在DIGO牙龈成纤维细胞中的表达水平显著性低于其在正常牙龈成纤维细胞中的表达水平(P＜0.01).而整合索α2和β1在2组牙龈成纤维细胞中的表达水平无显著性差异.结论:整合素α1在DIGO牙龈成纤维细胞中的低表达可能与胶原聚集相关.     

黄芩苷对牙龈成纤维细胞和牙周膜细胞上ICAM-1表达调节的研究

目的 :观察黄芩苷对IL - 1β诱导的牙龈成纤维细胞 (humangingivalfibrobl -asts ,HGF)和牙周膜细胞 (peri odontalligamentcells ,PDLcells)上细胞间粘附分子 - 1表达的影响。方法 :应用体外细胞培养和细胞免疫组化及图像分析方法。结果 :正常牙龈成纤维细胞和牙周膜细胞上细胞间粘附分子 - 1表达阴性或弱阳性 ;1μg/mLIL - 1β能诱导细胞间粘附分子 - 1在牙龈成纤维细胞和牙周膜细胞上强阳性表达 ;0 .1μg/mL黄芩苷对IL - 1β诱导的牙龈成纤维细胞和牙周膜细胞上细胞间粘附分子 - 1的表达有显著抑制作用 (P <0 .0 1)。结论 :黄芩苷可抑制IL -1β诱导的细胞间粘附分子 - 1在牙龈成纤维细胞和牙周膜细胞上表达 ,提示黄芩苷具有抗细胞粘附的作用     

西格列汀通过阻断核因子-κB信号通路抑制脂多糖诱导的人牙龈成纤维细胞炎症反应

目的 明确西格列汀对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(HGF)炎症反应的影响,并探讨其发挥作用的分子学机制,为未来西格列汀在牙周炎治疗中的应用提供初步的实验依据.方法 收集临床患者健康牙龈组织标本,利用酶消化法分离培养HGF并进行细胞来源鉴定;采用细胞增殖-毒性检测试剂盒检测LPS和西格列汀与HGF...     

趋化因子与口腔疾病

趋化因子 (chemokine)是一组 70～ 90个氨基酸组成的小分子量 (Mr 8× 1 0 3～ 1 0× 1 0 3)蛋白质 ,它们具有 4个保守的半胱氨酸 (cysteine,c)残基。趋化因子能特异地趋化白细胞 ,还参与免疫、造血及血管形成过程 ,与某些器官的发育也有关系。口腔中多种组织和细胞 ,如牙龈上皮细胞、牙龈成纤维细胞、成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞、口腔黏膜细胞等都能表达和分泌多种趋化因子。趋化因子通过趋化激活白细胞、促进血管生长等作用方式参与口腔组织的多种疾病 ,如牙髓炎、牙周炎、口腔黏膜扁平苔藓等疾病的病变过程     

慢性牙周炎牙龈组织细胞凋亡及凋亡相关蛋白Caspase-3的表达

目的:研究慢性牙周炎牙龈组织中细胞凋亡的发生情况和Caspase-3蛋白的表达,探讨其在慢性牙周炎病变发生中的意义。方法:应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL法)、免疫组织化学方法检测21例慢性牙周炎牙龈组织和21例健康牙龈组织中的细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)及Caspase-3蛋白的表达。结果:慢性牙周炎组牙龈组织中细胞凋亡指数明显高于正常对照组(P<0.05)。与正常组相比,慢性牙周炎组牙龈组织中细胞caspase-3表达明显增强,两组间有显著性差异(P<0.05)。结论:慢性牙周炎病人牙龈组织细胞发生凋亡,且通过激活细胞凋亡信号传导途径中的Caspase-3而导致慢性牙周炎发生。     

五倍子水提取物对LPS抑制人牙龈成纤维细胞DNA合成和对细胞周期改变的影响

目的：研究五倍子水提取物对内毒素(LPS)引起人牙龈成纤维细胞(HGF)DNA合成和细胞周期改变的影响。方法：采用健康人正常牙龈组织原代培养的牙龈成纤维细胞，以25μg／mL LPS作为刺激因子，用流式细胞仪技术观察20μg／mL五倍子水提取物对LPS引起HGF细胞周期改变的影响。结果：LPS作用后，DNA合成前期细胞比例(G1期)明显上升，而DNA合成期细胞比例(S期)及细胞增殖指数下降，五倍子可改善此现象。结论：五倍子水提取物可显著改善LPS抑制HGF增殖，提示五倍子对牙龈组织具有保护作用，有助于牙周病的防治。     

环孢素A与牙龈卟啉菌内毒素对人牙龈成纤维细胞增殖及TGF-β1分泌影响的研究

目的 探讨环孢素A(CsA)与牙龈卟啉菌内毒素(Pg LPS)对人牙龈成纤维细胞增殖及分泌转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响。方法 用组织块法原代培养健康人牙龈成纤维细胞,分别用800 ng/ml CsA、100 ng/ml LPS、800 ng/ml CsA+100 ng/ml LPS作用于生长良好的第4~8代细胞,用MTT法测定作用后第2、3、5天的吸光值。ELISA法检测第3天时细胞上清中的TGF-β1分泌的变化。结果 细胞经CsA或LPS作用后形态无明显变化,CsA能促进细胞增殖和分泌TGF-β1,LPS作用与其相反,二者联合作用能明显促进细胞的生长及TGF-β1分泌,比单纯使用CsA更明显。结论 CsA与LPS在人牙龈成纤维细胞增殖和TGF-β1分泌方面可能有协同作用。     

水蛭素对牙龈成纤维细胞碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子-β1表达的影响

目的 观察水蛭素对人牙龈成纤维细胞（HGFs）碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达变化的规律,探讨水蛭素影响牙龈改建的可能作用机制。方法 体外培养并鉴定HGFs,利用不同浓度的水蛭素分别作用于正常（对照组）和受长期机械外力作用后增生的HGFs（实验组）,通过实时定量聚合酶链反应法和免疫细胞化学法检测TGF-β1及bFGF的表达。结果 未加入水蛭素时,受长期机械外力作用后,实验组促进HGFs增殖胶原合成的TGF-β1表达升高,而抑制胶原合成的bFGF表达降低（P<0.05）。加入水蛭素干预增生的HGFs后,可正向调节bFGF表达,而负向调节TGF-β1的表达（P<0.05）。结论 外力作用干扰了HGFs胶原合成与降解之间的平衡,水蛭素可能通过调节这一平衡而促进牙龈改建过程。     

hBMP2基因转染对人牙龈成纤维细胞生物学特性的影响

目的分析hBMP2基因转染人牙龈成纤维细胞的生物学特性.方法用脂质体转染法将hBMP2基因转入人牙龈成纤维细胞内,经G418筛选后,获得阳性克隆.以原位杂交和免疫组化对转染细胞进行鉴定;进一步观察细胞形态、生长特性、碱性磷酸酶活性、骨钙素合成以及体外形成矿化结节的能力.结果hBMP2基因转染后,人牙龈成纤维细胞有hBMP2 mRNA的转录和蛋白表达;部分细胞由原来的长梭形转化为多角形,碱性磷酸酶活性和骨钙素合成均明显高于对照组(两组均P＜0.01);在矿化液作用下,能形成体外矿化结节.但细胞的增殖特性无明显变化.结论外源性hBMP2基因能够在人牙龈成纤维细胞表达,并促进其向成骨细胞方向转化,而对细胞的生长特性无明显影响.