胎肌液生物效应系列研究(二)——体外抗物理损伤的效应

在CFU-GM培养过程中,事先对骨髓细胞施加:①3.5Gy射线照射;②44℃60min热处理;③-20℃16min冷处理,都能使CFU-GM产率下降。在培养前用胎肌液(FME)处理骨髓细胞,可以使CFU-GM产率增高。证明FME有非特异性的减弱物理因子对CFU-GM的损伤作用的能力。     

胎肌液生物效应系列研究(三)—有效成分理化特性初探

以前的实验证明,胎肌液(FME)可以在体外培养中保护CFU-GM活力,减轻细胞毒药物与物理损伤对其抑制作用。FME中具有这种保护效应的成分不明,本实验证明该成分是耐酸、耐碱、耐DNA酶的,但85℃和胰蛋白酶均可使之灭活,初步认为该成分可能是蛋白质。通过透析膜的透析处理,FME的保护效应可部分地降低而非完全消失,这一现象的意义尚不明。     

四氧嘧啶所致的糖尿病对大鼠CFU-GM产率的影响

本文观察到四氧嘧啶所致的糖尿病小鼠CFU-GM 产率降低,胰岛素治疗可使之部分恢复。胰岛素能直接提高扩散盒及体外培养中CFU-GM 产率,其在体外的作用与浓度有一定关系。在一定范围内高葡萄糖浓度可促进体外培养中CFU-GM 产率。     

二羧乙基锗三氧化物体外对正常人CFU—GM产率的影响

利用CFU-GM培养技术,探讨了Ge-132在体外对正常人CFU-GM产率的影响.结果表明,Ge-132在体外能显著增加CFU-GM产率,而且有效剂量范围大;去除贴壁细胞对Ge-132的造血刺激作用无明显影响,但除去T淋巴细胞,这种促进作用消失.把Ce-132直接加入无集落刺激活性(CSA)的培养体系中,未见集落生长.这些结果表明,Ge-132并非直接作用于粒-单祖细胞.     

在人胎盘条件培养液中白细胞介素2对粒-巨噬系祖细胞生长的影响

在正常骨髓粒-巨噬系祖细胞(CFU-GM)常规培养体系中加入白细胞介索2(IL-2),所有18例CFU-GM的集落产率明显上升,平均上升46.37％,t=11.152,P<0.001。结果提示IL-2和人胎盘条件培养液(HPCM)之间具有协同作用,但IL-2单独并无刺激CFU-GM生长的作用。     

Ⅱ型登革病毒对人骨髓造血细胞抑制机制的初步探讨

用Ⅱ型登革病毒(D_2 V)与人骨髓细胞混合培养48小时后,测定上清液中干扰素的浓度,发现D_2 V感染组的干扰素浓度明显高于空白对照组(P<0.001)。在骨髓CFU-GM培养中,加入D_2 V及抗γ-干扰素后,CFU-GM集落产率明显高于只加D_2 V而不加抗γ-干扰素组(P0.05)。实验研究结果提示D_2 V对人骨髓的抑制与免疫及体液因素有关。     

人内皮细胞和4种细胞因子对正常人和再生障碍性贫血患者粒系造血的影响

通过人脐静脉内皮细胞为铺层的双层细胞培养,观察内皮细胞和几种细胞因子对正常人和再障患者粒系造血的影响。方法以人内皮细胞作铺层,作体外骨髓CFU-GM半固体双层培养,并在培养体系中加入细胞因子GM-CSF、IL-2、IL-6和LAK细胞上清,观察内皮细胞和细胞因子对正常人和再障患者粒系造血的影响。结果在有内皮细胞的培养体系中CFU-GM的产率均显著高于无内皮细胞的相应培养体系。在无内皮细胞时,IL-6和LAK上清显示出与GM-CSF相似的粒系造血刺激作用。对15例初诊慢性再障患者骨髓粒系祖细胞培养结果表明,无内皮细胞存在时,无论向培养体系中加入何种细胞因子,均无集落生成,而在有内皮细胞的双层培养中,部分患者骨髓可见CFU-GM集落生成。结论内皮细胞对正常和再障粒系造血均有明显影响,并提示再障造血障碍有微环境因素。     

卵黄囊干细胞向粒-单系造血祖细胞的定向诱导分化

目的：观察卵黄囊干细胞向粒-单系造血祖细胞（CFU-GM）的定向诱导分化,稳定和优化检测卵黄囊CFU-GM的方法。方法：应用体外琼脂培养法,观察多种因素对小鼠卵黄囊干细胞形成粒-单系造血祖细胞集落形成单位的影响;应用染色压片法对所生成的集落性质作鉴定。结果：植入不同数量的E7.5~8.5 d的卵黄囊干细胞与CFU-GM生成数量之间呈高度正相关;在接种相同数量的卵黄囊细胞数的情况下,DMEM培养体系生成的CFU-GM数明显多于IMDM培养体系生成的集落数（P<0.01）;马血清（HS）组优于胎牛血清（FBS）组（P<0.01）;与GM-CSF相比,WEHI-3条件培养液（W3-CM）能明显促进卵黄囊CFU-GM的生成（P<0.01）。采用完整琼脂凝块压片法对卵黄囊细胞所形成的集落进行鉴定表明为粒-单系细胞集落。结论：卵黄囊干细胞具有向CFU-GM分化的能力;卵黄囊干细胞CFU-GM诱导体系中各组分变化均可影响CFU-GM的集落生成率;以DMEM,GM-CSF或W3-CM,HS为组分的体系可稳定地检测卵黄囊细胞CFU-GM的集落生成率。     

胆碱能受体激动剂和拮抗剂对体外CFU-GM增殖和分化的影响

用体外琼脂培养法研究胆碱能受体激动剂和拮抗剂对粒、单造血祖细胞(CFU-GM)增殖和分化的影响。结果显示,10~(-10)-10~(-6)氨甲酰胆碱均能增加CFU-GM的产率,阿托品可以阻断这种效应;氨甲酰胆碱亦能增加CFU*GM的自杀率及培养基中粒细胞集落的比例。文中讨论了CFU-GM上胆碱能受体的功能特征。     

神经生长因子对正常和放化疗复合损伤小鼠粒-巨噬系血发生的影响

目的 探讨神经生长因子(NGF)对小鼠粒-巨噬系血细胞发生的影响.方法 采用流式细胞术、祖细胞集落分析、血细胞计数、实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附分析法(ELISA),检测注射NGF对正常和经60Coγ射线照射 腹腔注射环磷酰胺(放化疗复合损伤)小鼠骨髓细胞(BMC)增殖周期、粒-巨噬系祖细胞集落(CFU-GM)产率、外周白细胞总数、骨髓细胞粒-巨噬系集落刺激因子(GM-CSF)mRNA的表达及血清中GM-CSF和IL-3浓度的影响.并观察在体外培养体系中加入不同浓度的NGF时CFU-GM集落产率的变化及与GM-CSF的关系.结果 在体外CFU-GM培养中,加入重组小鼠GM-CSF (rmGM-CSF)时,NGF剂量依赖性地提高集落产率.注射NGF[7.5 μg/(kg·d)或10 μg/(kg·d)]持续7 d,正常和放化疗复合损伤小鼠外周血白细胞总数、小鼠骨髓细胞中S G2/M期细胞比例、CFU-GM集落产率显著高于注射生理盐水的对照组;放化疗复合伤小鼠血清中的GM-CSF和IL-3也显著升高.结论 NGF可与体外培养体系中的造血刺激因子协同作用,促进正常和放化疗复合损伤小鼠CFU-GM的形成.NGF在体内可促进正常和放化复合损伤小鼠骨髓细胞进入有丝分裂,促进造血干细胞向粒-巨噬系方向分化,促进CFU-GM的形成,提高外周血白细胞数;NGF还可刺激放化疗复合损伤小鼠体内GM-CSF和IL-3的分泌,这可能是NGF促进放化疗复合损伤后粒-巨噬系造血恢复的途径之一.     

含胎肌条件培养液的DMD原代肌组织培养体系的建立

应用含胎肌条件培养液的培养体系对 DMD 和正常肌组织进行原代培养。经倒置相差显微镜、透射电镜和 Desmin 免疫细胞化学技术鉴定,显示该培养体系能使肌组织成肌细胞生长并大量繁殖,分化良好,全部形成肌管。提示含胎肌条件培养液的培养体系能激活正常人及患者的肌卫星细胞,具有良好定向培养肌细胞的能力。     

MIP—1β对长期培养体系中造血祖细胞增殖的影响

目的探讨MIP-1β对长期培养体系中造血祖细胞增殖的影响。方法在骨髓长期培养的第3、4、5周,分别加入MIP-1β,每周半换液时换出上清进行细胞计数,做CFU-GM培养。第6周做     

电离辐射对胎鼠皮肤间充质干细胞支持骨髓粒系造血作用的影响

目的：观察不同剂量的X射线照射对体外培养的胎鼠皮肤间充质干细胞(MSCs)支持造血细胞增殖作用的影响,为提高造血干细胞体外扩增效率提供一种更为有效的方法,进而为造血干细胞移植提供一个新的途径。 方法：分别用不同剂量的X射线照射培养的胎鼠皮肤MSCs层,然后将骨髓细胞种植于该细胞层上,扩增后不同时间(0~12 d)进行骨髓CFU-GM集落培养,同时取经X射线照射的皮肤MSCs的上清液进行骨髓CFU-GM、CFU-E及BFU-E培养,观察射线对胎鼠皮肤MSCs造血支持作用的影响。 结果：6、8和10 Gy剂量X射线照射胎鼠皮肤MSCs与骨髓细胞共同作用7 d时,骨髓祖细胞集落显著增加,其中6 Gy组增加最为明显,CFU-GM是0 Gy组的2.17倍。6、8和10 Gy剂量X射线照射培养皮肤的上清液体外亦可刺激骨髓CFU-GM、CFU-E、BFU-E的生长,与0 Gy组比较差异均有显著性(P<0.05)。其中6 Gy组增加最为明显,分别达0 Gy组的1.81倍、3.94倍和3.51倍,集落亦明显加大。 结论：一定剂量X射线照射胎鼠皮肤MSCs,其体外支持造血的作用增强,无论照射后的单纯MSCs细胞层还是上清液都可使骨髓细胞集落数增多。     

内皮生长因子和胎盘生长因子对小鼠胎肝造血干细胞髓系分化的作用

【目的】观察VEGF(内皮生长因子)和PlGF(胎盘生长因子)对小鼠胎肝造血干细胞髓系分化的影响,并探讨其调控机制;【方法】体外培养E13胎肝造血细胞,培养造血集落CFU-GM,观察VEGF和PlGF对胎肝造血干细胞髓系分化的作用,应用Western-Blot检测不同处理条件对胎肝造血细胞Akt蛋白以及p-Akt蛋白表达水平的影响,用MTT法来评估不同浓度的LY294002(PI3K/Akt抑制剂)对胎肝造血细胞增殖的影响,通过CFU-GM观察LY294002对VEGF和PlGF调控胎肝造血作用的影响;【结果】VEGF和PlGF均可促进胎肝造血干细胞髓系分化,集落数分别为对照组的141%(P < 0.01)和123%(P < 0.05); PlGF可上调胎肝造血细胞p-Akt蛋白表达,其表达水平为对照组的143%(P < 0.05);VEGF及其与PlGF联合应用对胎肝造血细胞p-Akt蛋白表达水平无明显影响;LY294002可抑制胎肝造血细胞的增殖,并具有明显的剂量依赖关系(r = 0.9647,P < 0.01),在LY294002存在的条件下加入VEGF或PlGF,其CFU-GM产率与单独应用LY294002相比无明显差异(P > 0.05);【结论】VEGF和PlGF均能促进胎肝造血干细胞的髓系分化;PlGF可通过上调胎肝造血细胞Akt的磷酸化水平调节胎肝造血细胞的髓系分化;LY294002可通过抑制PI3K/Akt信号通路抑制VEGF和PlGF对胎肝造血干祖细胞髓系分化的调控作用;     

人参总皂苷体外定向诱导CD34+细胞分化为粒系血细胞的研究

目的研究人参总皂苷(TSPG)协同造血生长因子对CD34 细胞体外定向诱导分化为粒系血细胞的影响。方法应用阴性磁性分选策略,以StemsepTM系统从正常人骨髓细胞中分离CD34 造血干/祖细胞(HSC/HPC),通过甲基纤维素半固体培养法检测TSPG诱导CD34 HSC/HPC向粒系祖细胞集落(CFU-GM)增殖与分化的能力;在SCF IL-3 GM-CSF G-CSF(SIGG)液体培养体系中加入不同剂量的TSPG,检测对CD34 HSC/HPC增殖形成CFU-GM的影响以及CD33 细胞比例的变化。结果TSPG(10～50μg/mL)均能提高CD34 细胞形成CFU-GM的集落产率,以TSPG20μg/mL效果最为明显;不同质量浓度的TSPG协同造血生长因子在液体培养体系中诱导CD34 细胞2周,观察粒系血细胞的分化,TSPG10～70μg/mL均可不同程度地提高细胞总数、CFU-GM扩增倍数及CD33 细胞比例,TSPG20μg/mL是液体培养诱导CD34 细胞向粒系分化的最佳质量浓度。结论TSPG协同造血生长因子能促进CD34 细胞定向诱导分化为粒系血细胞。     

N-2-羟乙基哌嗪-N''''-2-乙磺酸液缓冲的培养基培养CFU-GM的优化选择

研究了标准培养条件下不同浓度Ｎ－２－羟乙基哌嗪－Ｎ’－２－乙磺酸（ＨＥＰＥＳ）液配制的培养体系对在体外温育不同时间的粒细胞单核细胞系统造血祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）增殖和分化的影响。结果表明：随温育时间的延长，培养体系的ｐＨ值增加，ＣＦＵ－ＧＭ产率减少；培养体系中加入适量ＨＥＰＥＳ液可稳定ＣＦＵ－ＧＭ的产率；实验前未调ｐＨ的培养体系中，可提高ＣＦＵ－ＧＭ的产率；ＨＥＰＥＳ液还影响集落的类型，提示配制ＣＦＵ－ＧＭ培养体系以加ＨＥＰＥＳ液者为优。     

24例ANLL患者治疗前骨髓和周围血CFU-GM体外生长方式的比较(摘要)

人类骨髓(BM)和周围血(PB)中,均含有一定数量的粒、单祖细胞(CFU-GM)。为探索急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者BM和PB中CFU-GM在体外软琼脂培养下生长方式间的关系,作者对治疗前ANLL患者24例的BM和PB的CFU-GM同时作配对培养,并以正常骨髓18份,正常人PB26份的CFU-GM培养作对照.     

粒系造血祖细胞液体微培养体系的建立及应用(简报)

传统的粒系造血祖细胞(CFU-GM)培养均采用半固体培养体系,但该体系存在着营养供应不充分、克隆形成率低、结果不稳定、细胞生长差、形态不好和计数不够精确等缺点。本文采用极限稀释法原理建立了一种CFU-GM液体微培养体系。将不同浓度CFU-GM接种在96孔,根据未形成克隆的“阴性     

LAK细胞对粒-单核系祖细胞集落形成的影响

作者研究LAK细胞对粒-单核系祖细胞集落形成(CFU-GM)的影响,发现LAK细胞加骨髓细胞直接或孵育4h进行再培养,对CFU-GM无影响;孵育8,18h后可抑制CFU-GM,抑制率分别为27.4％(P<0.01)和50.5％(P<0.01);未活化的细胞则无影响。孵育4,8,18 h的清液抑制 CFU-GM更显著,分别为39.7％(P<0.01),51.7％(P<0.01)和72.5％(P<0.01)。该清液中还能测得干扰素活性效价,8和     

锂盐对小鼠骨髓粒系造血祖细胞增殖的刺激作用

采用小鼠骨髓细胞体外琼脂单层培养法,在直径30mm培养皿中加入CSF0.1ml,后加入不同浓度的碳酸锂溶液,在37℃恒温培养6天,显微镜下计数CFU—GM集落数量.结果表明,纯碳酸锂浓度在2.0～5.0mEq/L范围内,CFU-GM产率均有不同程度的增长,浓度为3.0mEq/L时,培养的细胞生长最好,为正常对照组产率的155.43％,P<0.01。