缺氧对自然调节性T细胞的影响

目的:探讨体外缺氧环境对自然调节T细胞的影响.方法:用1％氧浓度培养箱模拟缺氧环境,分别进行0分钟、15分钟、30分钟、1小时、3小时、6小时和12小时的缺氧处理后,使用流式细胞术和蛋白质免疫印迹检测自然调节性T细胞的表面抗原和胞内关键转录因子的表达.将经过不同时间缺氧处理的自然调节性T细胞与辅助性T细胞共培养,观察缺...     

不同细胞刺激剂对小鼠调节性T细胞功能活化的影响

目的研究体外实验中不同细胞刺激剂对小鼠调节性T细胞(Treg)表面T淋巴细胞毒性相关抗原-4(CTLA-4)及叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)表达的影响,并对不同细胞刺激剂在Treg抑制活性发挥中的作用进行比较。方法免疫磁珠法分离健康清洁级BALB/c小鼠脾脏CD4 CD25 Treg。采用植物凝集素(PHA,20 mg/L)、刀豆蛋白A(ConA,5 g/L)及固相包被抗CD3(1 mg/L)刺激Treg,观察刺激后24、48和72 h CTLA-4及Foxp3表达的时间-效应关系。结果PHA刺激对小鼠Treg细胞表面CTLA-4及Foxp3表达均无显著影响(P均>0.05);而ConA表现出一过性的Treg活化作用,24 h CTLA-4表达明显上调(P<0.01),但随刺激时间延长作用减弱,48 h和72 h后其表达已接近未刺激前的范围,同时ConA未能明显诱导Foxp3表达(P>0.05);抗CD3可有效刺激Treg活化,在24、48和72 h CTLA-4及Foxp3表达均明显上调(P<0.05或P<0.01),其中以作用24 h和48 h表达上调尤为显著(P均<0.01)。结论抗CD3在体外实验中能明显刺激Treg活化并诱导其抑制性相关分子CTLA-4及Foxp3的表达,为进一步探讨CD4 CD25 Treg的免疫调节效应提供了可能。     

高迁移率族蛋白B1对小鼠调节性T细胞抑制功能的影响

目的 观察高迁移率族蛋-B1(HMGB1)对调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)免疫抑制功能的影响,并对其机制进行初步探讨.方法 免疫磁珠法分离正常BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+Treg.采用固相包被抗CD3/可溶性抗CD28及HMGB1刺激的方法,流式细胞术观察HMGB1对抑制性细胞因子T淋巴细胞毒性相关抗原4(CTLA-4)表达的影响,并通过MTF比色试验观察HMGB1刺激对Treg抑制功能的影响.结果 经抗CD3/CD28刺激活化的CD4+CD25+Treg在1000 ng/ml HMGB1作用72 h时CTLA-4表达下降最明显(P＜0.01).CD+CD25+Treg与CD4+CD25-Treg细胞比值达1:1时抑制效率达到90%以上,而HMGB1刺激后的CD4+CD25+Treg对CD4+CD25-T细胞的抑制功能明显减弱.结论 HMGB1可以通过诱导Treg CTLA-4表达下调,从而影响Treg免疫抑制活性.     

药物对调节性T细胞的影响

调节性T细胞是一种具有免疫抑制活性的T细胞,其数量减少和（或）功能下降与自身免疫、变态反应疾病有关,其数量的增加和（或）功能增强则与慢性感染、肿瘤等有关。近年研究发现,肾上腺糖皮质激素（激素）、雷帕霉素、维A酸、维生素D,类似物、组蛋白脱乙酰基酶抑制剂等可上调或不影响调节性T细胞的数量和（或）功能,而钙调磷酸酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、抗CD25单抗等均可下调调节性T细胞的数量和（或）功能。了解这些药物对调节性T细胞的影响,有利于上述药物在自身免疫、变态反应、肿瘤、慢性感染等疾病中的应用。     

骨髓源性而非脾源性树突状细胞能够诱导产生调节性T细胞

越来越多的证据表明,树突状细胞(DC)能够通过刺激CD4+T细胞产生调节性T细胞(Treg)而参与免疫耐受。本研究旨在探索骨髓源性DC(bone marrow-derived DC,BM-DC)或脾源性DC(spleen derived DC,spDC)诱导CD4+CD25+FOXP3+Treg产生的可能性。以GM-CSF和IL-4从C57BL/6小鼠骨髓前体细胞诱导产生骨髓未成熟DC(immature DC,imDC);6 d后,imDC经脂多糖(LPS)进一步刺激16 h得到成熟树突状细胞(mature DC,mDC);同时用免疫磁珠从小鼠脾脏分选得到spDC,以这3种DC分别与新鲜分离的BALB/c小鼠脾CD4+T细胞混合培养,诱导CD4+CD25+FOXP3+Treg的产生;用流式细胞仪检测CD4+T细胞中FOXP3的表达,对比分析3种DC诱导产生CD4+CD25+FOXP3+Treg的能力。结果表明:经C57BL/6小鼠骨髓imDC、mDC的刺激,BALB/c小鼠CD4+T细胞中的FOXP3表达率从(8.57±1.14)%分别提高到(15.80±1.35)%、(17.93±1.45)%(P<0.01);经spDC的刺激,BALB/c小鼠的CD4+T细胞中的FOXP3表达率则从(8.57±1.14)%下降到(3.95±0.79)%(P<0.05)。结论:体外诱导的BM-DC而非spDC能够诱导Treg的产生,具有介导免疫耐受的作用。     

钙通道与调节性T细胞效应功能的研究进展

调节性T细胞(Treg)为一类具有免疫抑制作用的T细胞,在维持免疫系统正常的外周耐受中发挥了重要作用,其中经典的CD4+CD25+Foxp3+Treg,无论是其数量还是抑制功能异常均可导致自身免疫性疾病。钙离子通道在免疫细胞发挥功能效应中是必不可少的,同样在Treg的发展和效应功能中也起着重要的作用,特别是STIM,ORAI,calcineurin-NFAT通路。现对钙离子通道在Treg的作用作一归纳总结。     

自体调节性T细胞可抑制恶性淋巴瘤细胞的增殖

本研究探讨自体调节性T细胞对T细胞淋巴瘤细胞系EIA的作用及其机制。应用免疫磁珠分离法（MACS）分选获得C57BL／6小鼠CD4＋CD25＋T细胞（Treg细胞）,流式细胞术检测细胞纯度及Foxp3表达情况,MTY比色法检测分选的Treg细胞对T细胞淋巴瘤细胞系EL4的体外抑制作用,应用ELISA方法检测TGF—B1和IL-10的含量。结果表明：MACS分选获得CIM＋CD25＋T细胞纯度达91．6％,活细胞比例〉95％,Foxp3表达率为78．9％。MTT比色法证实自体Treg细胞在体外能够明显抑制EIA细胞的增殖（P〈0．05）,且呈细胞因子非依赖性。作者首次证明,自体Treg细胞体外有明显抑制T细胞淋巴瘤细胞系EIA增殖的作用。     

LY294002对Jeko-1细胞的增殖抑制及作用机制研究

本研究旨在探讨磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶（PI3K/Akt）特异性抑制剂LY294002对人套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞生长、细胞凋亡的影响及其作用机制.四甲基偶氮唑盐（MTT）方法检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞凋亡水平;Western blot检测凋亡相关蛋白Cyclin D1、Bcl-2、procaspase-3及PI3 K/Akt信号通路相关蛋白p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K的变化.结果表明,LY294002能抑制Jeko-1细胞的增殖.Jeko-1细胞经LY294002 0、5、10和20 μmol/L作用24 h后,凋亡率分别为（3.25±1.27）％、（11.34±2.35）％、（22.81±2.74）％和（43.61±3.48）％,差异有统计学意义（P＜0.01）;Westem blot检测发现,凋亡相关蛋白Cyclin D1、Bcl-2、procaspase-3表达下降,PI3K/Akt信号通路相关蛋白p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K磷酸化水平降低.结论：LY294002可明显抑制Jeko-1细胞增殖,其机制可能通过下调PI3K/Akt信号通路中的p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K磷酸化水平,抑制PI3K/Akt信号通路,促进细胞凋亡.     

PI3K抑制剂LY294002对弥漫大B细胞性淋巴瘤细胞株化疗增敏作用的研究

目的 研究PI3K抑制剂LY294002对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞株ly1、ly8、ly10的化疗增敏作用.方法 采用LY294002、阿霉素及两者联合、序贯使用分别作用于ly1、ly8、ly10细胞;采用Western blot法观察LY294002处理后ly1、ly8、ly10细胞中磷酸化AKT/PKB(pAKT)的改变;采用流式细胞术结合Brdu法分析LY294002对细胞增殖和细胞周期分布的影响,采用流式细胞术结合AnnexinV-FITC染色检测各组细胞凋亡率.结果 LY294002可显著降低DLBCL细胞中磷酸化AKT的表达水平;并导致S期细胞比例显著降低(P＜0.05);LY294002预处理序贯使用阿霉素组中细胞凋亡的发生率比单独使用LY294002、阿霉素或同时联合使用LY294002、阿霉素组均明显提高,在24、48、72 h(ly1)或48、72 h(ly8)或24 h(ly10)差异均有统计学意义(P值均＜0.05).结论 PI3K抑制剂LY294002对阿霉素诱导DLBCL细胞凋亡的促进作用提示其可能是DLBCL治疗中潜在的具有较好化疗增敏作用的分子靶向药物.     

Inhibition of PI3K signaling triggered apoptotic potential of curcumin which is hindered by Bcl-2 through activation of autophagy in MCF-7 cells

Curcumin is a natural anti-cancer agent derived from turmeric (Curcuma longa). Curcumin triggers intrinsic apoptotic cell death by activating mitochondrial permeabilization due to the altered expression of pro- and anti-apoptotic Bcl-2 family members. Phosphoinositol-3-kinase (PI3K) and Akt, key molecular players in the survival mechanism, have been shown to be associated with the Bcl-2 signaling cascade; therefore, evaluating the therapeutic efficiency of drugs that target both survival and the apoptosis mechanism has gained importance in cancer therapy. We found that Bcl-2 overexpression is a limiting factor for curcumin-induced apoptosis in highly metastatic MCF-7 breast cancer cells. Forced overexpression of Bcl-2 also blocked curcumin-induced autophagy in MCF-7 cells, through its inhibitory interactions with Beclin-1. Pre-treatment of PI3K inhibitor LY294002 enhanced curcumin-induced cell death, apoptosis, and autophagy via modulating the expression of Bcl-2 family members and autophagosome formation in MCF-7 breast cancer cells. Atg7 silencing further increased apoptotic potential of curcumin in the presence or absence of LY294002 in wt and Bcl-2+ MCF-7 cells. The findings of this study support the hypothesis that blocking the PI3K/Akt pathway may further increased curcumin-induced apoptosis and overcome forced Bcl-2 expression level mediated autophagic responses against curcumin treatment in MCF-7 cells.     

LY367385对谷氨酸钠及缺糖缺氧引起的培养小鼠大脑皮层神经元损伤的保护作用

目的观察LY367385对谷氨酸钠(Glu)及缺糖缺氧(OGD)引起的小鼠大脑皮层神经元损伤的保护作用. 方法以细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出、光镜下细胞形态变化为指标,观察培养液中加入Glu或因OGD引起的神经元损伤,以及LY367385的保护作用;用免疫细胞化学和免疫荧光染色法检测神经元代谢型谷氨酸受体1α(mGluR1α)的表达.结果 OGD 1 h或0.1 mmol/L的Glu可明显造成神经元损伤,使LDH漏出明显增加( P<0.01);LY367385(50 μmol/L)可明显拮抗OGD或Glu引起的神经元损伤,使LDH漏出明显减少( P<0.01);免疫组化检测显示体外培养神经元mGluR1α阳性表达.结论 OGD或Glu可能通过激活皮层神经元mGluR1α引起神经元损伤,LY367385通过拮抗mGluR1α保护神经元.     

Inhibition of phosphatidylinositol 3-kinase causes cell death in rat osteoblasts through inactivation of Akt.

Previous evidences indicated that phosphatidylinositol 3-kinase (PI3-kinase) is an important regulatory molecule that is involved in the cell growth and survival, and inhibition of the PI3-kinase activity enhances apoptotic cell death. However, the relationship between PI3-kinase activity and osteoblasts, capable of new bone formation, remained unknown. In the present study, pharmacological inhibitor of PI3-kinase LY294002 was used to observe the role of the PI3-kinase in the growth of rat osteoblasts. To identify its molecular mechanism, Western blots analysis and immunocytochemistry were applied to examine changes of Akt phosphorylation and its distribution. Our data showed that inhibition of PI3-kinase activity significantly triggered the decrease of cell growth, cell apoptosis and loss of mitochondrial membrane potential (Deltapsi(m)). Osteoblastic dysfunction stimulated by LY294002 was accompanied by inactivation of Akt and its redistribution. In all these results demonstrated that inhibition of PI3-kinase induced apoptotic cell death, which was mediated by inactivation of Akt pathway in rat osteoblasts.     

高迁移率族蛋白B1对小鼠调节性T细胞Toll样受体4表达的影响

目的观察高迁移率族蛋白B1（HMGBl）对调节性T细胞（Treg）Toll样受体4（TLR4）表达的影响，初步探讨其与Treg免疫活性的关系。方法用免疫磁珠法分离正常C3H／HeN（TLR4受体野生型）小鼠脾脏CD4^＋CD25^＋Treg。采用可溶性抗CD3抗体（1mg／L）和抗CD28抗体（1mg／L）辅助活化，观察不同浓度HMGBl（0、10、100、1000μg／L）刺激不同时间（24、48、72h）后Treg TLR4表达的时间-效应关系和剂量-效应关系。结果以100μg／L浓度的HMGBl刺激，Treg TLR4在24、48和72h表达水平均明显受抑（P均〈0．01），但各时间点组间比较差异无统计学意义（P均〉0．05）；不同剂量HMGBl刺激48h可诱导Treg TLR4表达水平下调，其中以100μg／L、1000μg／L HMGBl作用时Treg TLR4表达降低尤为明显（P〈O．05和P〈0．01）。结论HMGBI能显著诱导Treg表达TLR4下调，进而参与调节Treg的免疫活性。     

CD4＋CD25＋调节性T细胞／辅助性T细胞17失衡在急性肺损伤小鼠中的作用

急性肺损伤（acute lung injury,ALI）是感染、创伤等导致的急性难治性呼吸衰竭,尽管呼吸支持治疗已取得显著进步,但其病死率依然高达40％［1］。ALI 的发生和发展涉及到多种病理生理过程,目前认为失控的炎症反应是其发生的根本机制［2］。辅助性 T 细胞17（Th17）和 CD4＋CD25＋调节 T 细胞（Treg 细胞）细胞是近几年才发现的CD4＋T 淋巴细胞亚群,其数量及功能的异常与感染性疾病的发生与发展密切相关［3］。Th17细胞和 Treg 细胞失衡是否与 ALI 的发生与发展相关,目前尚无系统研究报告。本研究以急性肺损伤小鼠模型为基础,观察不同时间段 ALI 小鼠 Th17细胞和 Treg 细胞的变化以及其相关细胞因子在外周血和肺组织局部的表达情况,希望为探讨 ALI 炎症失控的机制提供帮助。