转化生长因子-β1及其Ⅱ型受体在肝细胞癌中的基因表达

目的 探讨转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）及其Ⅱ型受体（ＴＧＦ－βＲⅡ）在肝细胞癌中的基因表达。方法 用ＲＴ－ＰＣＲ和免疫组化技术,分别检测３０例肝癌组织和癌旁肝组织中ＴＧＦ－β１及ＴＧＦ－βＲⅡ在ｍＲＮＡ和蛋白水平的表达。结果 （１）ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ阳性表达,在肝癌组织中为２４／３０,癌旁肝组织中为２６／３０,Ｐ〉０．０５;但ＴＧＦ－β１蛋白水平在肝癌组织阳性表达低于癌旁肝组织（Ｐ〈０．０     

饰胶蛋白聚糖基因转染对大鼠肾系膜细胞转化生长因子βⅠ、βⅡ型受体表达的影响

目的探讨饰胶蛋白聚糖(DCN)拮抗肾小球硬化进展的作用是否与其抑制系膜细胞(MsC)转化生长因子βⅠ、βⅡ型受体(TGF-βRⅠ、TGF—βRⅡ)表达有关。方法经外源性TGF-βⅠ刺激培养的大鼠肾MsC，采用RT—PCR、Western印迹法检测其TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ的表达。用脂质体介导法将DCN基因转染MsC，经筛选和鉴定，用RT—PCR、Western印迹法和免疫荧光法分别观察DCN基因转染对TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ表达的影响。结果经外源性TGF-βⅠ刺激的正常MsC，其TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ基因转录及蛋白表达均明显升高，且呈时间依赖性，于作用24h达高峰。与转染空载体的MsC(1P-1)相比，转染。DCN基因的MsC克隆(3D-5，7D-1)的TGF-βRⅠmRNA表达分别为对照组的20％和32％，TGF-βRⅡmRNA表达分别为对照组的64％和59％；TGF-βRⅠ蛋白表达分别为对照组的34％和25％，TGF-βRⅡ蛋白表达分别为对照组的49％和57％。同时转染DCN基因也能阻止MsC对外源性TGF-βⅠ刺激所致的两种受体表达升高作用。结论过表达DCN基因的MsC，其TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ和蛋白表达水平均明显降低，这可能是DCN拮抗由TGF-β介导的肾小球硬化发生的重要机制之一。     

蛋白激酶A、信号转导分子和转录激动子3调节转化生长因子-β1诱导的细胞凋亡和上皮细胞间质转化

细胞凋亡和上皮细胞间质转化（EMT）对于正常发育和机体自稳非常重要。凋亡和上皮细胞间质转化这些事件的改变常与一些病理过程相关，比如肿瘤形成和转移、肝脏与肾脏的纤维化疾病、胚胎发育异常等。TGF-β1诱导凋亡和EMT同时发生的机制尚未完全明了。作研究了TGF—G1诱导细胞凋亡和EMT的潜在机制。TGF—β1诱导细胞凋亡和EMT与蛋白激酶A、信号转导分子、转录激活子3（STAT3）的活化相关。     

外源性转化生长因子-β1对骨髓间充质干细胞TβRⅠ、TβRⅡ表达的影响

目的探讨体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中转化生长因子(TGF)β1受体的表达情况和外源性TGFβ1对MSCsTGFβ1受体表达的影响。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法法检测不同浓度TGFβ1对MSCs增殖的影响,对硝基苯磷酸盐(PNP)法检测不同浓度TGFβ1以及同一浓度不同作用时间对MSCs碱性磷酸酶(ALP)活性的影响,免疫细胞化学染色观察MSCs中TGFβ1受体表达情况,Westernblot检测TGFβ1作用早期TβRⅠ、TβRⅡ蛋白表达的变化。结果外源性TGFβ1对MSCs增殖的抑制、ALP活性的促进具有剂量依赖性,在5μg/L时达到平台期;在5μg/LTGFβ1刺激下,随着刺激时间延长,ALP表达量逐渐增加,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);MSCs同时表达TβRⅠ、TβRⅡ,在TGFβ1刺激早期TβRⅡ蛋白表达量无明显变化(P>0.05),TβRⅠ随TGFβ1刺激时间延长,蛋白表达量逐渐增加(P<0.05),TβRⅠ/TβRⅡ比例增加,与ALP的表达变化呈正相关。结论在TGFβ1刺激早期,MSCs通过TβRⅠ、TβRⅡ表达量和TβRⅠ/TβRⅡ相对比例的阶段性、适应性的改变来调节自身对TGFβ1的反应性,启动成骨分化。在此过程中,TβRⅠ作为一限制性因子发挥着重要的作用。     

瘢痕疙瘩TβRⅡ数量和亚细胞分布的研究

目的:通过对瘢痕疙瘩(K)TGFβ1及其Ⅱ型受体(TβRⅡ)数量、亚细胞分布研究,探讨K发生的病理机制。方法:应用组织切片免疫组织化学、流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测20例K、8例正常皮肤组织及其体外培养的成纤维细胞中TβRⅡ的表达状况,比较K与正常皮肤TβRⅡ表达数量和亚细胞分布的差异。结果:免疫组化显示TβRⅡ在正常皮肤组织中主要表达于表皮的基底层、角质层、汗腺、毛囊及小血管内皮细胞、成纤维细胞的细胞膜和细胞浆,在K组织中主要表达于角质层、基底层细胞和成纤维细胞的细胞膜、细胞浆与细胞核。流式细胞仪及激光共聚焦显微镜检测显示体外培养的成纤维细胞TβRⅡ荧光表达强度K明显高于正常皮肤,TβRⅡ在正常皮肤成纤维细胞非连续表达于细胞膜和细胞浆,在K成纤维细胞中连续表达于细胞膜,弥散表达于细胞浆和细胞核。结论:K中TβRⅡ的数量和亚细胞分布与正常皮肤存在差异,可能为K重要的发病机制。     

转化生长因子β1及其Ⅱ型受体在慢性胰腺炎大鼠中的表达

目的 建立大鼠慢性胰腺炎模型,检测模型大鼠胰腺组织转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGFβ1)及转化生长因子β1Ⅱ型受体(transforming growth factor-β1 type Ⅱ receptor,TβRⅡ)mRNA的表达.方法 24只健康雄性Wistar大鼠,随机分为2组:模型组大鼠尾静脉注射二丁基二氯化物(dibutyltin dichlo-ride,DBTC)溶液7 mg/ks,对照组仅注射相同体积的溶剂,28 d时剖杀动物,采用HE染色和Masson染色观察两组大鼠胰腺组织病理变化,采用荧光定量PCR检测TGFβ1和TβRⅢmRNA在胰腺组织的表达.结果 模型组大鼠胰腺组织镜下可见纤维组织增生明显,胰腺小叶结构破坏或消失,腺泡萎缩;与对照组相比,模型组大鼠胰腺组织TGFβ1和TBRⅡmRNA表达均升高(P<0.05).结论 TGFlβ1和TβRⅡ在DBTC诱导的大鼠慢性胰腺炎胰腺组织表达升高.     

转化生长因子βRⅡ抗体对皮肤成纤维细胞抑制作用的研究

目的探讨转化生长因子Ⅱ型受体(TGF-βRⅡ)抗体对皮肤成纤维细胞的影响,以期寻找利用生长因子控制瘢痕的途径.方法①测定培养细胞液中羟脯氨酸含量.②活细胞四甲基偶氮唑(MTT)增殖实验.③流式细胞仪测定细胞周期.④光学显微镜及电子显微镜形态学观察.结果①实验组中羟脯氨酸含量较对照组明显降低(P＜0.01).②抗体作用下细胞增殖受到抑制(P＜0.01).③抗体抑制细胞周期的G0-G1期,导致细胞无法完成正常有丝分裂.④抗体作用下,细胞外合成的纤维素样物质明显减少,细胞生长受到抑制.结论应用外源性TGF-βⅡ型受体抗体能阻断TGF-β的信号传导,有效地抑制培养成纤维细胞的增殖,降低其细胞外胶原基质的分泌.     

Snail和LEF-1转录因子的相互作用是TGF-β1诱导的上皮细胞间质转化（EMT）的必须因素

转化生长因子beta-1（TGF-β1）已被证实在胚胎起源各个阶段、进展性疾病的各个时期都有诱导上皮细胞间质转化（EMT）的作用。细胞极性变化及粘连蛋白（如E-钙粘蛋白）丢失的典型表现就是细胞形态的改变。此项研究揭示了TGF—β1作用于MDCK细胞72h内，EMT与claudin-1、claudin-2、occludin以及E-钙粘蛋白表达丢失的关系。已有证据表明，这种粘连蛋白表达丢失是通过非依赖Smad机制包括MEK和PI3通路产生的，     

他克莫司和环孢素A对大鼠肾脏转化生长因子及其受体表达影响的比较

目的比较他克莫司（FK506）和环孢素A（CsA）所致慢性肾毒性大鼠模型肾组织转化生长因子目（TGF-1β）及其受体（TβRⅡ）的表达。方法分别以FK506和CsA灌胃复制大鼠FK506和CsA慢性肾毒性模型，观察大鼠的一般情况，计算肌酐清除率，观察大鼠肾组织病理变化，以免疫组织化学法检测肾组织中TGF-1β、TβR Ⅰ、TBRⅡ蛋白表达的变化，原位杂交法检测肾组织中TβR Ⅰ mRNA及TβR Ⅱ mRNA表达的变化。结果CsA组和FK506组的肾小管、小管间质和人球小动脉均有损伤，但CsA组的损伤明显较FK506组重（P〈0．05）。正常对照组大鼠肾组织中仅见少量TGF-[3，、TβR I和T13RⅡ表达，CsA组和FK506组的TGF-β，、TβR I和TβR Ⅱ表达均明显增加，但FK506组稍轻；正常对照组大鼠肾组织中仅见少量TβR I mRNA、TβR Ⅱ mRNA表达，CsA组和FK506组TβR I mRNA、TβR Ⅱ mRNA明显表达，但FK506组较CsA组为轻。结论FK506的慢性肾毒性弱于CsA，它所诱导的大鼠肾组织中TGF-β，及其受体TβR I和TβR Ⅱ的表达均低于CsA。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞中转化生长因子 -βⅠ、Ⅱ型受体的表达及调控

目的：了解瘢痕疙瘩成纤维细胞中转化生长因子(Transforming growth factor,TGF)－βⅠ、Ⅱ型受体的表达及TGF－β1,β3对其的影响。方法；体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞（KFB）和正常皮肤成纤维细胞（NFB），利用免疫组化及计算机图像分析系统测定TGF-βⅠ、Ⅱ型受体含量。结果：KFB胞浆内阳性信号明显强于NFB（P＜0．05）；经TGF－β1,β3处理组胞浆内阳性信号差别均不明显（P＞0．05）。结论：KFB存在高表达的TGF－βⅠ、Ⅱ型受体；TGF－β1,β3均能促进KFB TGF－βⅠ、Ⅱ型受体的表达。     

转化生长因子-β1基因转染骨髓基质细胞的瞬时表达与稳定表达

目的 探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）基因转染骨髓基质细胞（BMSCs）的表达能力。方法 取6周龄新西兰白兔BMSCs,传代培养后以3μl阳离子脂质体（Lipofectamine):1μg pcD-NA3J-TGF-β1的比例转染,通过免疫组织化学染色及图像分析对3组15份样本检测TGF-β1表达水平;利用水貂肺上皮细胞生长抑制法检测TGF-β1生物活性,分析转染的量效关系和时效关系。结果 瞬时表达组转染后48h免疫组织化学染色部分细胞呈强阳性,稳定表达组全部细胞呈强阳性表达持续4周以上。图像分析显示转染细胞TGF-β1表达显著增强,与对照组比较差异有非常显著性（P＜0．01）。量效关系显示,在转染体系中pcDNA3-TGF--β1(μg）：阳离子脂质体（μl）为1：3时,TGF-β1表达效率最高;时效关系显示,稳定表达组TGF-β1表达活性较瞬时表达组更强。结论 TGF-β1基因转染可使BMSCs有效地表达活性TGF-β1而产生生物效应。     

肝癌患者转化生长因子—β1及其受体的表达和意义

目的 探讨肝癌患者转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）及其受体的表达情况和意义。方法 酶联免疫吸附法检测２７例行胆囊切除术者（对照组）和３６例肝癌患者（肝切除组）肝切除手术前后血清ＴＧＦ－β１浓度;免疫组织化学法检测３６例肝癌和癌周组织标本中相关受体的表达情况。结果 肝癌患者血清ＴＧＦ－β１浓度较对照组显著升高（Ｐ〈０．０５）;患者肝切除术后血清ＴＧＦ－β１浓度较术前有显著升高（Ｐ〈０．０１）,而胆     

G肽对血管紧张素Ⅱ诱导人肾小管上皮细胞转化生长因子β1活化的影响

目的观察根据血小板反应蛋白1（TSP1）分子WSHW序列人工合成的六肽（GGWSHW，G肽）对由血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的肾小管上皮细胞TGF-β1过度活化的抑制作用。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞系（HK-2），以未处理HK-2细胞为正常对照，以AⅡ刺激HK-2细胞（AngⅡ组），选择合成TSP1和TGF-β1最佳刺激浓度和时间。刺激前加入10μmol／LG肽进行干预（G肽组），并以AngⅡ受体阻断剂洛沙坦（losartan）为抑制对照（ losartan组）。分别用RT-PCR和Western印迹检测TSP1和TGF-β1以及细胞外基质纤连蛋白（FN）和纤溶酶原活化物抑制剂-1（PAI-1）mRNA转录和蛋白表达。共聚焦显微镜和流式细胞仪观察TSP1和TGF-β1的表达以及两者共表达。ELISA法检测培养细胞上清液中活性TGF-β1、总TGF-β1、FN和PAI-1的分泌含量。Western印迹检测TGF-β1信号转导蛋白Smad2及磷酸化Smad2（p-Smad2）表达水平。结果AngⅡ以时间和剂量依赖方式促进HK-2细胞合成TSP1和TGF-β1（优化后分别为6h的1μmol／L，12h的0．1μmol／L）。与正常对照组比较，AngⅡ组TSP1与TGF-β1阳性共表达的细胞数上调5．4倍；总TGF-β1和活性TGF-β1水平分别增加1．8和2．0倍；p-Smad2蛋白水平明显上调；FN和PAI-1 mRNA转录水平分别上调3和1．5倍，且细胞上清液中两者含量分别增加2和1．9倍。G肽对TSP1和TGF-β1 mRNA转录和蛋白表达水平均无显著性影响，且对总TGF-β1分泌无明显抑制作用，但可显著抑制活性TGF-β1的水平。此外与losartan组比较，G肽组p-Smad2蛋白表达减少28．9％。FN和PAI-1 mRNA转录水平分别下调34．5％和26％，且细胞上清液中两者含量分别减少11％和8．9％。结论TSP1肽抑制物体外能通过有效竞争抑制TSP1致HK-2细胞的TGF-β1活化作用，并可相应下调FN和PAI-1的合成分泌。     

肺癌组织分型与转化生长因子-βⅡ型受体和肿瘤相关性巨噬细胞计数的关系

目的 检测肺腺癌和肺鳞状细胞癌中转化生长因子-βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)和肿瘤相关性巨噬细胞(TAMs)计数,探讨两者与肺腺癌和肺鳞状细胞癌的关系.方法 应用免疫组织化学法检测TGF-βRⅡ蛋白和TAMs在肺腺癌和肺鳞状细胞癌组织中的表达,并与癌旁正常肺组织中的表达进行比较.结果 (1)TGF-βRⅡ蛋白的表达在肿瘤组织中明显降低(P＜0.01),其表达下调与肺癌的组织学类型、淋巴结转移、临床分期相关(P＜0.05).(2)TAMs在肿瘤间质内浸润数量明显增多(P＜0.01),并与肺癌的组织学类型、肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期密切相关(P＜0.05).结论 TGF-βRⅡ蛋白表达水平降低可促进肺癌的发生、浸润和转移,对肺腺癌发生或进展影响很大,并可能通过下调TGF-βRⅡ的表达、诱导TAMs至肿瘤间质,从而促进肿瘤的发生、发展,且这种作用在非小细胞肺癌中具有较普遍的意义.     

反义转化生长因子-βⅡ型受体对支气管成形术后吻合口狭窄的影响

目的评价反义转化生长因子(TGF)-βⅡ型受体腺病毒表达系统对支气管成形动物模型吻合口胶原合成的影响。方法将行左上肺支气管成形术的试验犬分为3组,A组雾化吸入蒸馏水,B组吸入腺病毒空白载体,C组吸入反义TGFβⅡ型受体腺病毒各1周,4周后取吻合口组织检测TGFβⅡRmRNA和I型胶原的合成量。结果C组的TGFβⅡRmRNA合成量(0.75±0.13)和I型胶原的合成量(829.50±78.30)较A(1.96±0.20和1167.20±94.10)B(1.89±0.17和1291.30±103.50)两组均减少,差异有统计学意义(P<0.05);AB两组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论应用反义TGFβⅡ型受体腺病毒表达系统阻断TGFβ的作用可以减少细胞外胶原的合成,从而发挥抑制吻合口瘢痕增生的作用。     

转化生长因子-β1和血清对人骨髓基质干细胞增殖及向软骨细胞诱导分化的影响

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)和不同浓度胎牛血清对体外培养人骨髓基质干细胞(BMSCs)增殖及向软骨细胞诱导分化的作用,为软骨组织工程提供有用的种子细胞。方法分别采集3例志愿者骨髓各6mL,用Percoll细胞分离液分离,收集单个核细胞,在含10%胎牛血清的低糖DMEM培养液中培养扩增。将第3代细胞分为3组:A组为对照组,B组为含5%胎牛血清的诱导培养基组,C组为含10%胎牛血清的诱导培养基组。倒置显微镜下观察细胞生长状况,免疫组化检测Ⅱ型胶原分泌,原位杂交检测Ⅱ型胶原mRNA表达,3H标记的胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)掺入实验检测细胞的增殖情况。结果经密度梯度离心后,活细胞比例在96%以上。贴壁后的细胞形态均一,由梭形向多角形转变。B组细胞在诱导培养7d后Ⅱ型胶原免疫组化均为阳性,原位杂交可检测到Ⅱ型胶原mRNA的表达,而A、C两组分别为阴性和弱阳性。三组细胞3H-TdR摄入量的大小顺序为C>B>A。结论密度梯度离心法是一种高效、可大量获取人BMSCs的方法,细胞在体外生长稳定;低浓度的胎牛血清和10ng/mL的TGF-β1联合作用既可促进人BMSCs的增殖,又可诱导其向软骨细胞方向分化,而高浓度胎牛血清仅对细胞的增殖有促进作用。     

双黄补和转化生长因子β1对牙周膜细胞的增殖分化的调控作用的比较

目的：探讨传统中药双黄补（黄连，黄岑，骨碎补）和转化生长因子β1对体外培养的人牙周膜细胞增殖和分化功能的影响。方法：本研究通过体外培养人牙周膜细胞（periodontal ligament cell，PDLCs），应用双黄补（黄连，黄芩，骨碎补）提取液作为辅助因子及转化生长因子β1作为生长因子，分成四组（A）双黄补（B）转化生长因子β1（C）双黄补加转化生长因子β1（D）对照组，采用噻唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖情况，羟脯氨酸法测定胶原蛋白占总蛋白比值。结果：双黄补组与对照组及其他各组比较，明显促进人牙周膜细胞增殖，增加胶原蛋白的比值，有显著性差异（P〈O．05）。A，B，c各组组间比较无显著性差异。随着作用时间的延长，细胞的OD值逐渐增大，在第5天达到最大。结论：双黄补水提液对比转化生长因子β1有明显促进人牙周膜细胞增殖，明显提高胶原蛋白在总蛋白中的比值的作用，可作为人牙周膜细胞增殖的理想的辅助因子。     

胃癌组织smad4基因和转化生长因子β1及其受体的表达及意义

目的 研究胃癌组织中smad4 mRNA、转化生长因子β、（TGF－β1）、转化生长因子β1受体（TGF－βR1）的表达特征及其意义。方法 常规石蜡包埋切片行smad4 mRNA原位杂交染色及TGF－β1、TGF－βR1免疫组织化学染色。结果 smad4 mRNA、TGF－β1、TGF－βR1在胃腺癌、黏液腺癌和印戒细胞癌中阳性率无明显差异;组织学分级I组、癌细胞未浸润至深肌层和淋巴结未转移的组织smad4 mRNA、TGF-β1、TGF－βR1阳性率明显高于组织学分级Ⅲ级、癌细胞浸润至深肌层或浆膜层和淋巴结转移组织,差异均有显或非常显性意义;smad4 mRNA、TGF－β1、TGF－βR1在胃癌中表达密切相关。结论 smad4 mRNA、TGF－β1和TGF－βR1 3表达与胃癌发生发展、生物学行为和预后可能有关,可作为重要的生物学标记物。     

肿瘤相关成纤维细胞通过转化生长因子β调节胃癌细胞转移能力的研究

目的 :通过研究肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF)促进胃癌细胞侵袭迁移的能力,探讨胃癌转移机制。方法:从胃癌组织分离CAF。通过transwell小室模型和Western印迹法检测CAF与胃癌细胞共培养对胃癌细胞侵袭迁移能力、上皮细胞间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的影响。使用ELISA和定量PCR分别检测CAF转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)分泌水平和TGFB mRNA表达水平。进一步通过Western印迹法检测共培养后胃癌细胞中TGF-β信号通路标志物Smad2和磷酸化Smad2的表达水平。使用TGF-β拮抗剂阻断TGF-β信号通路,检测CAF对胃癌细胞EMT及侵袭迁移能力影响。结果:CAF促进MKN28侵袭迁移和发生EMT。CAF的TGF-β1分泌量较高于NF。与CAF共培养后,TGF-β信号通路活化。TGF-β拮抗剂抑制CAF诱导胃癌细胞发生EMT和CAF促胃癌细胞侵袭迁移的能力。结论:CAF通过分泌TGF-β诱导胃癌细胞发生EMT,从而促进了胃癌细胞侵袭能力,可能是胃癌转移的重要机制。