氧化砷诱导早幼粒细胞白血病细胞凋亡的体内研究

细胞凋亡已成为当前肿瘤研究的热点之一［１］,氧化砷和硫化砷等砷化合物治疗急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）为促进凋亡治疗恶性肿瘤这一新的治疗途径提供了成功的范例［２］。我院自１９９４年１２月起应用三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）治疗了３６例ＡＰＬ复发的患者,其中...     

四硫化四砷对急性早幼粒细胞白血病细胞凋亡及Caspase-3活性的影响

目的:探讨四硫化四砷(As4S4)对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞内Caspase-3活性的影响.方法:2例APL患者给予As4S4(2.5 g/d,分3次口服)治疗,治疗前、治疗后7 d及14 d,分离外周血单个核细胞(PBMNC).NB4细胞与2μmol/L的As4S4共同培养24 h.取APL患者的PBMNC和处理前后的NB4细胞,用流式细胞仪分析亚二倍体细胞数,用荧光分析法检测Caspase-3活性.结果:经As4S4处理的NB4细胞,亚二倍体细胞数(58.9±5.2)%,高于处理前的(1.2±0.5)%(t=23.616,P＜0.05);Caspase-3活性为(21.5±3.1)×106s-1,高于处理前的(8.7±1.2)×106s-1.治疗后APL患者的PBMNC内Caspase-3活性较治疗前升高,2例患者均获血液学缓解.结论:As4S4通过激活Caspase-3诱导NB4细胞凋亡,这可能是As4S4治疗APL的主要机制之一.     

柠檬醛抑制急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4增殖并诱导其凋亡的作用

目的 探讨柠檬醛(citral)对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4的生长抑制及诱导凋亡作用.方法 采用CCK-8比色法检测citrall对细胞生长的抑制作用;光学显微镜观察citral作用后细胞形态的变化;DNA Ladder检测药物作用后NB4-细胞有无断裂DNA;应用流式细胞术(FCM)检测不同浓度citral作用后细胞凋亡的比例.结果 Citral对NB4细胞的生长抑制作用呈现时间和剂量依赖性.NB4细胞经10～20 μg/ml citral作用16 h后,细胞呈现典型的凋亡形态特征,光学显微镜下可见凋亡细胞胞体固缩、核固缩、核碎裂及凋亡小体;流式细胞术结果 表明,细胞凋亡率在citral作用16 h时随着药物浓度的增加而逐步增高.结论 Citral抑制NB4细胞增殖呈时间和剂量依赖性,并诱导NB4细胞凋亡.     

三硫化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病首例报告

急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)亦称急性髓性白血病M3型(AML-M3),如果不经合理治疗,其病程十分凶险.患者常因急性播散性血管内凝血和血小板减少而引起严重出血.近年来APL的缓解率因全反式维甲酸、三氧化二砷、雄黄和四硫化四砷的应用而得到明显提高.但是目前仍存在不少问题.作者在先经细胞株NB4及NB4动物实验有效的基础上,单纯应用化学纯品的三硫化二砷(Di-arsenic trisulfide,DATS)治疗1例未曾接受任何治疗的APL患者,取得血液学、遗传学与分子生物学意义上的完全缓解,副作用轻微,至报告时患者已存活16个月以上.诊治过程如下.     

急性早幼粒细胞白血病的治疗进展

维甲酸和砷剂对急性早幼粒细胞白血病进行诱导分化和凋亡治疗的成功,成为分子靶向性治疗的典范。本文对急性早幼粒细白血病的治疗进展进行综述。     

不同锑剂对早幼粒细胞白血病凋亡诱导作用比较

目的：通过不同锑剂对早幼粒白血病细胞株NB4细胞的凋亡诱导作用的比较，力求找到有效治疗早幼粒细胞白血病锑剂药物。方法：采用细胞生长曲线、形态学及NBT（硝基四氮唑蓝）还原试验判定NB4细胞的生长、分化及功能；细胞周期分析和DNA电泳研究细胞凋亡。结果：三价锑剂能够诱导早幼粒白血病细胞凋亡，且具有时间剂量依赖性，而五价锑剂对早幼粒白血病细胞没有凋亡诱导作用。结论：三价锑剂能够有效地诱导早幼粒白血病细胞凋亡，提示酒石酸锑钾作为临床治疗寄生虫病有效药物，可以老药新用，有望用于临床治疗早幼粒细胞白血病。     

急性早幼粒细胞白血病维甲酸及砷剂治疗期间止、凝血改变的初步研究

目的 观察急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）患者发病时、全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）和三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）治疗期间的止、凝血改变。方法 运用ＥＬＩＳＡ或发色底物法对２３例ＡＰＬ患者血浆一系列止、凝血指标进行动态检测。结果 治疗前血浆血栓调节蛋白（ＴＭ）、血小板α颗粒膜蛋白（ＧＭＰ－１４０）、可溶性纤维蛋白单位复合物、组织历子途径抑制物、组织纤溶酶原激活物活性（ｔ－ＰＡ）和Ｄ－二聚体较正常组显著升高;纤     

砷剂治疗13例复发或难治性急性早幼粒细胞白血病

砷是一种重金属，近年发现三氧化二砷和雄黄对急性早幼粒细胞白血病有极好的治疗效果。我院共收治13例复发及难治性急性早幼粒细胞白血病(APL)，其中复发病例8例，难治病例5例。缓解率占92．3％，无效7．7％。砷剂毒副作用较少，且与全反式维甲酸(ATRA)等药无交叉耐药。细菌形态研究表明，砷剂对APL有诱导分化作用，是一种较理想的诱导分化剂。     

全反式维甲酸、砷剂、化疗序贯治疗急性早幼粒细胞白血病临床分析

目的：观察全反式维甲酸（ATRA）、砷剂、化疗序贯治疗急性早幼粒细胞白血病（APL）的疗效.方法：ATRA或砷剂诱导缓解后予化疗、砷剂、ATRA序贯治疗.结果：初治18例完全缓解,3例复发,2例死亡,至今无病生存率：80.9%.结论：ATRA的诱导缓解率高,砷剂能提高长期存活率.     

急性早幼粒细胞白血病缓解后治疗方案的选择

目的 寻求一种有效的急性早幼粒细胞白血病（APL）缓解后的治疗方案. 方法 32例APL患者经全反式维甲酸（ATRA）诱导分化达完全缓解后,14例采用ATRA、联合化疗交替治疗,18例采用ATRP、联合化疗及As2O3序贯治疗,分析两种治疗方案的疗效、不良反应及对PML/RARα融合基因的影响. 结果 序贯组、交替组3年累计CCR率分别为87.3%和52.6%,两组PML/RARα融合基因阳性率同期比较差异无显著性;联用As2O3序贯治疗不良反应轻微. 结论 APL患者CR后,采用ATRA、联合化疗及As2O3序贯治疗,持续缓解率高,不良反应轻微.     

塞来昔布诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株MR2凋亡及机制的研究

目的:探讨塞来昔布诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株MR2细胞凋亡作用及其可能机制。方法:应用MTT法分析塞来昔布对细胞增殖的影响;琼脂糖凝胶电泳进行DNA片段化分析;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;PCR检测融合基因PML/RARα和凋亡相关基因Survivin表达;免疫印迹检测caspase-3、9和PARP蛋白表达。结果:MTT示塞来昔布对MR2细胞具有明显的增殖抑制作用,并具有时间和剂量依赖性。琼脂糖凝胶电泳见DNA片段化,形成典型梯状条带。流式细胞仪检测发现塞来昔布处理24 h后,随着作用浓度增加,MR2细胞早期凋亡率从5.06%增至36.1%,细胞内Survivin表达降低而PML/RARα无明显变化。同时伴有caspase-3、9和PARP蛋白的激活。结论:塞来昔布能够通过诱导凋亡抑制MR2细胞增殖,其机制可能与抑制Survivin表达有关,但与融合基因PML/RARα无明显关系。     

中国急性早幼粒细胞白血病的治疗进展

天然四硫化四砷(As4S4)和三硫化二砷(As2S3)是中药雄黄和雌黄的主要成分, 未提纯的雄黄和雌黄含有相当量的三氧化二砷(As2O3),以及亚砷酸钙、亚砷酸镁等有毒物质 .直接使用雄黄矿可以引起死亡.我们应用高纯度晶体As4S4和化学合成的纯化As2S3进行体外试验和动物试验,结果显示NB4细胞株和移植人APL腹水瘤的SCID小鼠对As4S4和As2S3 敏感.小鼠药代动力学和人体药代动力学研究证实柏子仁作为离散剂与As4S4同时应用可以有效提高血砷浓度.在对130例t(15;17)的急性早幼粒细胞白血病(APL)患者的临床研究中, 我们进一步证实As4S4和As2S3 单药治疗可以有效地诱导完全缓解,包括细胞遗传学和分子生物学完全缓解,但As4S4 单药治疗组的复发率高于同时或曾接受化疗药物组.接受化疗药物组的1年和6年无病生存率( DFS)为96.7%和87.4%,1年和6年总生存率为98.9%和93.9%.我们认为对APL患者进行大剂量化疗既不安全,又不必要.伴中性粒细胞减少的初治APL患者接受口服As4S4治疗, 获得完全缓解.治疗中如果出现白细胞增多,可应用小剂量化疗药物,例如:羟基脲、三尖杉酯碱.获得完全缓解后间断给予化疗药物以防复发.服用As4S4后复发的原因有:出现t(15;17)以外的其他染色体异常的耐药细胞克隆;血砷浓度降低.对耐药的APL患者可采用As4S4和ATRA联合用药,异基因骨髓移植是治疗复发或耐药APL患者的最后一项治疗选择.     

硒化壳聚糖诱导急性早幼粒白血病细胞凋亡的研究

目的 研究硒化壳聚糖对体外培养的NB4细胞增殖和凋亡的影响,探讨这种作用与端粒酶活性和survivin蛋白的关系。方法MTT法检测细胞增殖;细胞形态学观察和流式细胞仪检测细胞凋亡;PCR-ELISA法检测端粒酶活性;western blot法检测survivin蛋白含量。结果50~200mg/L硒化壳聚糖可时间剂量依赖性地抑制NB4细胞增殖,诱导其凋亡,降低端粒酶活性和下调survivin蛋白含量。结论 硒化壳聚糖可通过抑制端粒酶活性,下调survivin蛋白含量,诱导细胞凋亡从而抑制体外培养的NB4细胞增殖。     

尿多酸肽诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株凋亡的实验研究

目的探讨尿多酸肽(CDA-Ⅱ)对急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)细胞NB4及耐维甲酸的NB4-R1细胞的凋亡作用。方法以NB4和NB4-R1细胞作为体外模型,观察CDA-Ⅱ作用前后细胞的形态和生长增殖情况。流式细胞术检测细胞凋亡特征。Western印迹法检测凋亡调控蛋白蛋白激酶C(PKCδ)及Caspase-3的水解活化。结果 CDA-Ⅱ作用于NB4和NB4-R1细胞后,细胞生长受到抑制;形态上观察到分化和凋亡现象;Annexin V-PI法发现,用药24 h后NB4和NB4-R1细胞凋亡比例分别上升至(58.7±3.1)%和(87.8±0.5)%;PKCδ和Caspase-3水解活化。结论 CDA-Ⅱ作用于细胞后,水解活化Caspase-3,裂解PKCδ生成活性片段,诱导细胞凋亡。     

PML蛋白参与三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病的分子生物学机制研究

PML蛋白作为一种肿瘤抑制因子,在三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病（APL）的过程中发挥重要作用。绝大多数APL患者的典型特征是细胞内PML基因和RARα基因发生融合,该融合基因所表达的PML-RARα融合蛋白是APL发病的主要原因。三氧化二砷作为临床治疗APL的一线药物,通过直接作用于PML-RARα融合蛋白的PML部分,诱导相关蛋白多聚化,并招募多种功能蛋白,促进PML核小体重构,使PML-RARα蛋白发生小泛素修饰蛋白（SUMO）化和泛素化,最终经蛋白酶体途径降解,达到治疗APL的目的。PML蛋白发生点突变会导致APL复发及三氧化二砷耐药。本文阐述了PML蛋白的结构和功能、PML-RARα融合蛋白诱导APL发病的机制、PML蛋白参与三氧化二砷治疗APL的分子机制以及PML蛋白发生突变导致APL患者发生三氧化二砷耐药的现象,以期为目前治疗方案的优化及针对耐药患者有效治疗手段的开发提供理论指导。     

Berbamine selectively induces apoptosis of human acute promyelocytic leukemia cells via survivin-mediated pathway

Background Currently, resistance and relapse are still major problems in acute promyelocytic leukemia （APL） cases. Thus, new agents that override the resistance are crucial to the development of curative therapies for APL. In this study, we investigated the effects of berbamine on the proliferation of APL cell line NB4 and its possible mechanisms. Methods NB4 cells were treated with berbamine at different concentrations （0-64 μg/ml） for 72 hours. MTT assay was used to determine proliferation inhibition of NB4 cells. Cell apoptosis was evaluated by both flow cytometry （FCM） and morphological examination. PML/RAR-α and survivin mRNAs were measured by nested-RT-PCR and RT-PCR, respectively. Activated-caspase 3 was determined by FCM. Results Berbamine greatly inhibited the proliferation of NB4 cells in dose- and time-dependent manners, and its IC50 value was 3.86 μg/ml at 48 hours. Both morphological observations and FCM results showed that berbamine induced apoptosis of NB4 cells with concomitant increase of activated caspase-3 and decrease of survivin mRNA. After treatment with berbamine at 8 μg/ml for 48 hours, the percentage of apoptotic cells increased from 2.83% to 58.44% （P〈0.01）, and the percentage of cells with activated-caspase 3 elevated from 2.06% to 70.89% （P〈0.01）, whereas, level of survivin mRNA was reduced to 38.24% of control （P〈0.01）. However, no significant change was observed in PML/RAR-α mRNA. Conclusions Berbamine induces caspase-3-dependent apoptosis of leukemia NB4 cells via survivin-mediated pathway, suggesting that berbamine may be a novel potential agent against APL with a mechanism distinct from that of all-trans retinoic acid （ATRA） and arsenic trioxide （ATO）.     

Chromosomal changes in acute promyelocytic leukemia

Summary In this study cytogenetic analysis of 5 cases of acute promyelocytic leukemia (APL) is described and 3 (60%) of them showed t(15; 17) in karyotype. In recent years more than 130 cases of hematological disorders were studied cytogenetically in our laboratory and this kind of translocation has not been found except in APL. As shown in these patients t(l5; l7) might occur in adults as well as in children and likewise in patients with or without DIC. The chromosome study by G-banding technique demonstrated that the breakpoint of chromosome No. 15 was located between q²⁴ and q²⁵, and that of chromosome No. 17 was located at q²¹. The structural rearrangement was reported as rcp(15;17) (q²⁵⁰⁰; q^2102?).