生长因子网络调节对骨形成作用的研究Ⅰ、TGF—β对人胚成骨样细胞增殖及分化的影响

在对人胚成骨样细胞分离培养的基础上，进一步探讨不同剂量转化生长因子-β（TGF-β）对人胚成骨样细胞DNA，胶原蛋白和碱性磷酸酶合成的影响。结果表明：TGF-β对体外培养的人胚成髓样细胞DNA合成有抑制作用。对胶原蛋白和碱性磷酸酶合成有促进作用。这两方面的作用在TGF-β0.01-1ng/ml间呈剂量依赖性，1ng/ml时的作用达到最强，本研究提示TGF-β在骨形成中的主要作用可能在于介导机体系统因素对骨细胞的作用。以及调控局部骨生长因子之间的相互作用。     

生长因子网络调节对骨形成作用的研究Ⅲ.bFGF对人胚成骨样细胞增殖及分化的影响

目的：研究不同剂量碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对人胚成骨样细胞ＤＮＡ、胶原蛋白和碱性磷酸酶合成的影响。方法：实验分为４组，每组６孔，每组分别加入浓度为０．１ｎｇ／ｍｌ，１ｎｇ／ｍｌ，１０ｎｇ／ｍｌ，１００ｎｇ／ｍｌ的ｂＦＧＦ，每组均设空白对照，在实验后第１，３，５，７天分别检测人胚成骨样细胞３Ｈ－ＴｄＲ和３Ｈ－脯氨酸的掺入量，以及碱性磷酸酶合成量。结果：ｂＦＧＦ可明显促进人胚成骨样细胞的ＤＮＡ合成，但却抑制其胶原蛋白和碱性磷酸酶的合成，ｂＦＧＦ对人胚成骨样细胞具有双重效应。在含量为０．１～１０ｎｇ／ｍｌ，呈剂量依赖性，１０ｎｇ／ｍｌ时ｂＦＧＦ的作用最强。结论：ｂＦＧＦ在骨形成中有一定作用，但仍需与其他细胞生长因子协同作用     

生长因子网络调节对骨形成作用的研究Ⅳ.PDGF对人胚成骨样细胞增殖及分化的影响

目的：研究不同剂量血小板衍生性生长因子（ＰＤＧＦ）对人胚成骨样细胞增殖与分化的影响。方法：实验分为４组，每组６孔，每组分别加入浓度为０．１ｎｇ／ｍｌ、１ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、１００ｎｇ／ｍｌ的ＰＤＧＦ，每组均设空白对照，在实验后第１、３、５、７天分别检测人胚成骨样细胞３Ｈ－ＴｄＲ和３Ｈ－Ｐｒｏｌｉｎｅ的掺入量，以及碱性磷酸酶合成量。结果：ＰＤＧＦ对人胚成骨样细胞的ＤＮＡ合成有明显的促进作用，０．１～１０ｎｇ／ｍｌＰＤＧＦ刺激成骨样细胞合成ＤＮＡ的作用最强，ＰＤＧＦ对人胚成骨样细胞胶原蛋白和碱性磷酸酶合成没有明显的促进和抑制作用。结论：ＰＤＧＦ在骨形成过程中不起主要作用或需与其它因子共同作用。     

生长因子网络调节对骨形成作用的研究Ⅱ、IGF—Ⅱ对人胚成骨样细胞增殖及分化的影响

利用体外分离培养人胚成骨样细胞，加入不同剂量胰岛素样生长因子-Ⅱ（IGF-Ⅱ），从时间-效应和剂量一效应两个方面考察IGF-Ⅱ对人胚成骨样细胞增殖与分化的影响，研究结果表明，IGF-Ⅱ的促骨形成效应显著，它对体外培养的人胚成骨细胞DNA、胶原蛋白和碱性磷酸酶 合成均有明显的促进作用，其作用亦呈剂量与效应相依赖的关系，在4个含量组中，10ng/mlIGF-Ⅱ对成骨样细胞的作用最强，IGF-Ⅱ是一种对成骨细胞作用较全面的生长因子，对成骨细胞的增殖和分化均有明显的促进作用。     

生长因子网络调节对骨形成作用的研究Ⅴ.不同生长因子交互应用对人胚成骨样细胞增殖及分化的影响

目的：考察将转化生长因子β（ＴＧＦ－β）、胰岛素样生长因子Ⅱ（ＩＧＦ－Ⅱ）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）及血小板衍生性生长因子（ＰＤＧＦ）４种生长因子两两交互应用对人胚成骨样细胞增殖与分化的影响。方法：在不同的实验间期检测成骨样细胞３Ｈ－胸腺嘧啶脱氧核苷、３Ｈ－脯氨酸的掺入量和碱性磷酸酶的含量。结果：ＰＤＧＦ、ｂＦＧＦ、ＩＧＦ－Ⅱ和ＴＧＦ－β４种生长因子交互联合应用,均对促进体外培养的人胚成骨样细胞的增殖和分化功能具有协同作用。结论：具有协同作用的生长因子联合应用,可提高其促进骨形成的生物效应。     

联合应用胰岛素样生长因子-Ⅰ和骨形成蛋白-2促小鼠成骨样细胞及成纤维细胞增殖和分化的效应

目的探讨重组人胰岛素样生长因子-Ⅰ(rhGF-Ⅰ)和重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)单独及联合应用对MC 3T3-E1和NIH 3T3细胞增殖和分化的影响.方法单独或联合应用不同浓度rhIGF-Ⅰ和rhBMP-2作用于MC 3T3-E1和NIH 3T3细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞分化情况,放射免疫法检测细胞分泌的骨钙素(OC)水平.结果 1～75 ng/ml rhIGF-Ⅰ与10～100ng/ml rhBMP-2作用于MC 3T3-E1和NIH 3T3细胞后,均能显示明显的促细胞增殖(P＜0.01)及使ALP活性增高(P＜0.05)的作用.各浓度rhIGF-Ⅰ或rhBMP-2对MC 3T3-E1及NIH3T3细胞作用8、24和48h的MTT检测结果相似.rhIGF-Ⅰ和rhBMP-2联合作用后,对两种细胞的促增殖、增强ALP活性的作用均较各自单独作用更为明显(P＜0.05).单独或联合应用不同浓度rhIGF-Ⅰ和rhBMP-2对细胞分泌的OC水平均无显著影响(P＞0.05).结论 rhIGF-Ⅰ和rhBMP-2具有明显的促细胞增殖及早期分化的协同作用,但对成骨末期细胞分化影响不大,其活性主要与使用剂量有关.     

联合应用胰岛素样生长因子-I和骨形成蛋白-2促小鼠成骨样细胞及成纤维细胞增殖和分化的效应

目的探讨重组人胰岛素样生长因子-I(rhIGF-I)和重 组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)单独及联合应用对MC3T3-E1和NIH3T3细胞增殖和分化的影响。方法单独或联合应用不同浓度rhIGF-I 和rhBMP-2作用于MC3T3-E1和NIH3T3细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞分化 情况,放射免疫法检测细胞分泌的骨钙素(OC)水平。结果1～75ng/mlrhIGF-I与10～100ng/mlrhBMP-2作用于MC3T3- E1和NIH3T3细胞后,均能显示明显的促细胞增殖(P<0.01)及使ALP活性增高(P<0.05)的作用。各浓度rhIGF-I或 rhBMP-2对MC3T3-E1及NIH3T3细胞作用8、24和48h的MTT检测结果相似。rhIGF-I和rhBMP-2联合作用后,对两种细胞 的促增殖、增强ALP活性的作用均较各自单独作用更为明显(P<0.05)。单独或联合应用不同浓度rhIGF-I和rhBMP-2对细胞分泌的 OC水平均无显著影响(P>0.05)。结论rhIGF-I和rhBMP-2具有明显的促细胞增殖及早期分化的协同作用,但对成骨末期细胞分化影响 不大,其活性主要与使用剂量有关。     

rhBMP-2/rhTGF-β1联合应用对兔成骨样细胞增殖及分化的影响

目的：探讨转化生长因子β(trabsfirnubg griwtg factirs beta,TGF—β)、与骨形成蛋白(bone morphogenetic proteins,BMP)联合应用对兔成骨样细胞增殖及分化的影响。方法：体外培养兔成骨样细胞,采用四唑盐比色法和碱性磷酸酶试剂盒检测两种生长因子对兔成骨样细胞增殖及分化的影响。结果：100ng／ml rhBMP-2促进兔成骨样细胞的分化,对增殖无明显作用。不同浓度的rhTGF-β1均可促进成骨样细胞的增殖,对分化无明显作用。二在同时应用时,其作用部分或完全抵消。结论：在本实验条件下,rhBMP-2、rhTGF-β1联合应用时无协同效应。     

rhBMP-2/rhTGF-β_1联合应用对兔成骨样细胞增殖及分化的影响

目的: 探讨转化生长因子β(transforming growth factors beta,TGF-β)、与骨形成蛋白(bone morphogenetic proteins,BMP)联合应用对兔成骨样细胞增殖及分化的影响。方法: 体外培养兔成骨样细胞,采用四唑盐比色法和碱性磷酸酶试剂盒检测两种生长因子对兔成骨样细胞增殖及分化的影响。结果: 100ng/ml rhBMP-2促进兔成骨样细胞的分化,对增殖无明显作用。不同浓度的rhTGF-β1均可促进成骨样细胞的增殖,对分化无明显作用。二者在同时应用时,其作用部分或完全抵消。结论:在本实验条件下,rhBMP-2、rhTGF-β1联合应用时无协同效应。     

机械张力对人成骨样细胞TGF-β表达的影响

目的 观察机械张力对人成骨细胞TGF-β基因表达的影响。方法 通过Flexercell细胞拉伸力学装置对人成骨样细胞MG-63进行6%，12%和24%的拉伸应变加载实验，用RT-PCR反应检测细胞受力后TGF-βmRNA的表达。结果 6%和12%的拉伸率能显著促进MG-63细胞TGF-β的表达，但24%的拉伸率作用对细胞TGF-β基因表达影响不明显。结论 恰当大小的机械张力可以增加成骨细胞TGF-β的表达。过大的应力刺激可能没有这种效应。     

成骨生长肽对纯钛表面成骨细胞样细胞增殖和分化的影响

目的探讨成骨生长肽（osteogenic growth peptide,OGP）涂层对纯钛表面新生大鼠颅盖骨成骨细胞样细胞增殖和分化的影响。方法实验分为纯钛组（Cp-Ti组）、碱-热水陈化处理组（AW-Ti组）和碱热处理-OGP涂层组（OGP-Ti组）,将体外培养的新生大鼠颅盖骨成骨细胞样细胞接种于3组钛片表面,进行细胞培养,第1、3、5、7天通过四甲基偶氮唑盐光密度值检测法测定细胞在材料表面的增值情况,培养第7、11、15天通过检测碱性磷酸酶活性测定细胞在材料表面的分化成熟情况。结果培养第1、3、5、7天,AW-Ti组和OGP-Ti组的细胞光密度值均高于Cp-Ti组（P〈0.05）;培养第1、5、7天,OGP-Ti组细胞光密度值均高于AW-Ti组（P〈0.05）。培养7、11、15 d后,AW-Ti组和OGP-Ti组的ALP活性均高于Cp-Ti组（P〈0.05）;培养7 d时,AW-Ti组和OGP-Ti组ALP活性差异无统计学意义（P〉0.05）;培养11、15 d时,OGP-Ti组的ALP活性均高于AW-Ti组（P〈0.05）。结论钛表面OGP涂层具有良好的生物相容性,能够提高其表面生物学活性。     

rhbFGF/rhBMP-2对成骨样细胞增殖影响的实验研究

目的 :研究不同浓度rhbFGF、rhBMP 2独立或联合对体外培养兔成骨样细胞增殖的影响 ,探讨两者协同作用的可能最适浓度。方法 :取经矿化诱导第三代兔骨髓基质细胞获得的兔成骨样细胞以 2× 10 6/ml的浓度接种于 96孔板 ,用 3种浓度rhFGF、单一rhBMP 2、不同浓度rhFGF和rhBMP 2的组合等 7种条件培养基进行诱导培养 ,设空白对照组 ,每组 8孔。于 1、4、7、10d后用MTT比色法检测细胞增殖情况。结果 :第 4d ,10ngrhbFGF 10 0ngrhBMP 2 /ml组的MTTOD值与 10ng/mlrhbFGF组无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,但大于 10 0ng/mlrhBMP 2组、1ngrhbFGF 10 0ngrhBMP 2 /ml组和 5 0ngrhbFGF 10 0ngrhBMP 2 /ml组 ,且有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :rhbFGF和rhBMP 2的不同浓度组合对兔成骨样细胞的增殖有不同影响 ,其中 10ngrhbFGF 10 0ngrhBMP 2 /ml组合对细胞的增殖有最强的促进作用。     

孕酮对人牙周膜细胞增殖及成骨分化的调控作用

目的：通过细胞免疫组织化学方法检测人牙周膜细胞（hPDLCs）中孕激素受体（PR）的表达,研究孕酮在hPDLCs增殖及成骨分化过程中的作用。方法：原代培养hPDLCs,取第4～6代细胞用于实验。分为空白对照组,孕酮组,抑制剂组。用含有不同浓度（1,10,100 nM）孕酮的培养液培养hPDLCs 1,2,3,4,5,6,7 d,采用MTT法检测在孕酮作用下hPDLCs生长曲线的变化情况。检测普通培养液和成骨诱导培养液中的各组细胞在孕酮作用后茜素红染色钙化结节面积的变化。结果：PR在hPDLCs的胞质和胞核中均有表达,且在胞核的表达明显高于胞质。孕酮干预hPDLCs后,细胞的增殖高于对照组,孕激素受体抑制剂能明显抑制hPDLCs的生长。孕酮能够促进茜素红染色钙化结节的形成。在成骨诱导液中,孕酮同样有促进成骨的作用。与普通培养组相比较,孕酮对成骨诱导组的成骨促进作用更为明显。结论：人牙周膜细胞中有PR的表达,孕酮能够促进人牙周膜细胞的增殖和成骨分化。     

rhBMP-2和IGF-I联合作用对兔成骨样细胞增殖的影响

目的研究人重组骨形成蛋白(recombinant human bone morphogenetic protein,rhBMP),胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-I)单独及联合应用对兔成骨细胞增殖的影响.方法采用细胞培养技术及噻唑蓝比色法,对2种生长因子对兔成骨样细胞增殖的调节作用进行观察.结果在培养基中含1%胎牛血清(FBS)条件下,100ng/ml rhBMP-2对兔成骨样细胞增殖作用不显著.IGF-I(5,25,50ng/ml)有一定促增殖作用.两者联合应用各浓度组对细胞增殖有促进作用(P＜0.05).结论rhBMP-2和IGF-I联合应用对兔成骨样细胞增殖有协同效应.     

骨形成蛋白-2和碱性成纤维细胞生长因子对人骨髓基质细胞的生物学作用

目的：探讨重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)和碱性成纤维细胞生长因子(b—FGF)单独或联合作用对人骨髓基质细胞(HBMSC)增殖和分化的影响。方法：利用四唑盐比色法(MTT)、碱性磷酸酶(ALP)测定法观察不同浓度的rhBMP-2和b—FGF单独或联合作用时HBMSC的增殖和分化情况。结果：rhBMP-2对HBMSC的增殖和ALP表达均有促进作用；b—FGF促进HBMSC增殖，但抑制ALP表达；rhBMP-2和b—FGF联合作用时HBMSC的增殖和ALP活性较单独作用有显著提高。结论：rhBMP-2和b—FGF联合应用时对HBMSC的增殖和向成骨细胞分化具有协同作用。     

富血小板血浆和浓缩生长因子对人牙周膜细胞增殖和成骨分化影响的研究

目的 研究富血小板血浆(PRP)和浓缩生长因子(CGF)对人牙周膜细胞(hPDLCs)增殖及成骨分化的影响.方法 分离、培养并鉴定hPDLCs;制备人全血、PRP和CGF,分别进行血小板计数;分别将全血(对照组)、PRP(PRP组)和CGF(CGF组)与hPDLCs共培养,CCK-8法检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测...