雪旺氏细胞源活性物质对周围神经再生影响的实验研究

采用１６４０培养液体外培养ＳＤ乳鼠雪旺氏细胞，吸取其培养液，内含雪旺氏细胞分泌的活性物质。以硅胶管桥接３组ＳＤ大白鼠２ｃｍ有神经缺损，第一组硅胶管内注入雪旺氏细胞培养液，第２组注入１６４０培养液，第３组空白对照，术后４个月第１组，第２组髓鞘直径，动作电位传导速率比较差异有极显著性（Ｐ〈０．０１），实验结果显示雪旺氏细胞泊活性物质对周围神经再生有益。     

低氧对鼠雪旺氏细胞增殖的影响

目的观察低氧对鼠雪旺氏细胞体外增殖的影响,为雪旺氏细胞扩增培养探索新方法。方法原代分离培养雪旺氏细胞并鉴定,将培养至第三代的细胞分为3组,分别为对照组,10%02组和3%O2组。对各组细胞记数;测定培养液中氧含量和乳酸浓度及各组细胞的增殖指数。结果随着环境氧浓度的下降,细胞培养液中的氧含量也逐渐下降（P〈0.05）,而乳酸浓度逐渐升高（P〈0.05）。低氧组雪旺氏细胞数目比常氧组明显增加,尤以10%O2组更为明显（P〈0.05）,3%O2组在低氧1d和2d时增殖指数低于常氧组,低氧4时,增殖指数增加;而10%O2组增殖指数一直高于常氧组（P〈0.05）。结论轻中度低氧有利于鼠雪旺氏细胞的体外增殖。     

低氧对鼠雪旺氏细胞增殖的影响

目的观察低氧对鼠雪旺氏细胞体外增殖的影响，为雪旺氏细胞扩增培养探索新方法。方法原代分离培养雪旺氏细胞并鉴定，将培养至第三代的细胞分为3组，分别为对照组，10组和3%O2组。对各组细胞记数；测定培养液中氧含量和乳酸浓度及各组细胞的增殖指数。结果随着环境氧浓度的下降，细胞培养液中的氧含量也逐渐下降（P〈0.05），而乳酸浓度逐渐升高（P〈0.05）。低氧组雪旺氏细胞数目比常氧组明显增加，尤以10%O2组更为明显（P〈0.05），3%O2组在低氧1d和2d时增殖指数低于常氧组，低氧4时，增殖指数增加；而10%O2组增殖指数一直高于常氧组（P〈0.05）。结论轻中度低氧有利于鼠雪旺氏细胞的体外增殖。     

低氧对鼠雪旺氏细胞增殖的影响

目的观察低氧对鼠雪旺氏细胞体外增殖的影响,为雪旺氏细胞扩增培养探索新方法。方法原代分离培养雪旺氏细胞并鉴定,将培养至第三代的细胞分为3组,分别为对照组,10%02组和3%O2组。对各组细胞记数;测定培养液中氧含量和乳酸浓度及各组细胞的增殖指数。结果随着环境氧浓度的下降,细胞培养液中的氧含量也逐渐下降(P<0.05),而乳酸浓度逐渐升高(P<0.05)。低氧组雪旺氏细胞数目比常氧组明显增加,尤以10%O2组更为明显(P<0.05),3%O2组在低氧1d和2d时增殖指数低于常氧组,低氧4时,增殖指数增加;而10%O2组增殖指数一直高于常氧组(P<0.05)。结论轻中度低氧有利于鼠雪旺氏细胞的体外增殖。     

脑组织提取液对体外培养雪旺氏细胞影响的观察

目的：了解脑组织提取液对体外培养雪旺氏细胞的影响。方法：酶消化法培养的雪旺氏细胞分烃 加脑组织提取液组,对细胞形态和数量进行观察比较。结果：体外培养的五氏细胞在加入脑组织提取液后细胞增殖加快,并出现细胞突出起细长（为对照组的２－３倍）,互相延伸等形态学改变。结论：雪旺氏细胞在接触脑组织提取液后,表现为细胞增殖加快,突起生长明显的功能活跃状态。     

人体正中神经雪旺氏细胞培养

目的：对引产的28周死亡胎儿的正中神经的雪旺氏细胞（Schwann Cell SC)培养，获得增殖的SC。方法：组织块反复种植法。结果：正中神经SC培养能良好的生长存活。结论：人体SC培养获得成功。     

兔坐骨神经电损伤后区域雪旺氏细胞增殖变化及分析

目的 比较成年兔坐骨神经分别受到75V电压损伤和横断伤后雪旺氏细胞增殖变化情况.方法 建立兔坐骨神经电损伤和横断伤实验模型,选择损伤后第3、7、10天作为观察点.应用双酶消化法分离神经受损区域神经雪旺氏细胞并计数.结果 75V电损伤后雪旺氏细胞数量明显要多于横断伤后的雪旺氏细胞数量.结论 75V电损伤不能损伤雪旺氏细胞正常功能,电损伤后坐骨神经Wallerian变性比较快而全面是雪旺氏细胞数量增多的原因.     

雪旺氏细胞促进中枢神经系统修复和再生

<正>当周围神经(Peripheral Nerve,PN)损伤和再连接时,轴突可以成功地长入远侧残端,最终使神经功能在相当程度上得到恢复,而成年哺乳动物中枢神经系统(Central Nervous System,CNS)的轴突损伤后的再生往往失败。     

雪旺氏细胞的体外培养及鉴定

采用分散培养法对新生SD大鼠的坐骨神经进行体外培养，成功地培养出了细胞．用抗S-100、抗Fibronectin抗体进行了免疫学鉴定，证实所培养的细胞为雪旺氏细胞。并对雪旺氏细胞的形态进行了观察。     

人胚胎脊髓背根雪旺氏细胞的培养

目的探索人胚胎雪旺氏细胞的分离、培养和纯化的方法,为将来雪旺氏细胞移植奠定基础。方法从胎儿脊髓背根中分离培养雪旺氏细胞,利用雪旺氏细胞与纤维母细胞的不同贴壁特性,综合利用酶消化、时间差和阿糖胞苷抑制等方法,达到分离和纯化人雪旺氏细胞的目的。结果雪旺氏细胞大部份呈梭形,两端有突起,少数呈多角形。免疫组化示这些细胞呈S-100抗原阳性,细胞纯度达99%。结论本方法分离、培养的人雪旺氏细胞纯度高,是一种有效的培养方法。     

胰岛素样生长因子1促许旺细胞生长的实验研究

目的 探索促进许旺细胞增殖的方法。方法 将原代大鼠许旺细胞进行体外培养，并在培养基中加入不同浓度的胰岛素样生长因子１（ＩＧＦ－１）。通过绘制细胞生长曲线及＾３Ｈ－ＴｄＲ渗入等方法，观察ＩＧＦ－１对许旺细胞的作用。结果 ＩＧＦ－１能使培养的许旺细胞增殖加快，提前进入平台期。许旺细胞的增殖与ＩＧＦ－１的浓度在一定范围内呈现量效关系，同时ＩＧＦ－１的作用并不导致许旺细胞的肥大。结论 ＩＧＦ－１对许旺细胞     

新生SD大鼠坐骨神经Wallerian变性规律及其S-100蛋白表达和雪旺细胞增殖研究

目的:了解新生SD大鼠周围神经Wallerian变性不同时间点S-100蛋白表达变化及对雪旺细胞增殖的影响.方法:10 d龄SD大鼠坐骨神经进行结扎预变性,分别于术后24 h、3 d、5 d、7 d和9 d,进行雪旺细胞培养和S-100免疫组织化学染色观察.结果:在损伤周围神经的近端发生可逆性变性,远端则发生永久性Wallerian变性.实验组雪旺细胞增殖速率与S-100蛋白阳性染色率均优于对照组,7 d组增殖能力达到高峰,S-100蛋白阳性染色率约51%～56%,与对照组比较差异有显著性.结论:新生SD大鼠周围神经受损后变性过程类似于经典的Wallerian变性,且能在变性中期获得活力较强及倍增时间较短的雪旺细胞.     

雪旺细胞与神经元共培养时NGF、CNTF和GDNF mRNA共表达的计算机成像

目的研究雪旺细胞与背根节神经元共培养条件下多种神经营养因子共表达的计算机数字成像技术.方法运用多色荧光原位杂交技术和计算机图像处理技术, 对相同视野下分别采用绿、红、蓝单色滤光片摄取的NGF(绿)、CNTF(红)和GDNF(蓝)mRNA表达的荧光图像以及明视场细胞图像进行其共表达分布的图像合成.结果在单个雪旺细胞内同时显示出NGF、CNTF和GDNF mRNA表达所对应绿、红、蓝色区域及其在细胞相同部位同时表达所对应的由绿、红、蓝色混合而衍生的白、黄、紫红和浅蓝色区域.结论应用多色荧光原位杂交技术和计算机图像处理技术可对雪旺细胞中多种神经营养因子的共表达进行可视化研究.     

碱性成纤维细胞生长因子缓释微球对雪旺细胞作用的实验研究

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）缓释微球对雪旺细胞的作用。方法 培养雪旺细胞，将bFGF、bFGF-聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球（PLGA微球）和bFGF-聚乳酸-聚乙二醇共聚物微球（PELA微球）分别加入三个组的雪旺细胞培养液中。用细胞计数法测定雪旺细胞的数量，四甲基偶氮唑盐微量反应比色法（MTT法）测定雪旺细胞的活力，流式细胞仪测定雪旺细胞的细胞周期。结果 培养1、2d时，bFGF组的雪旺细胞计数、活力明显高于PLGA微球组和PELA微球组；培养3、4d时，bFGF组和PLGA微球组的雪旺细胞计数、活力明显高于PELA微球组；培养6、8d时．PLGA微球组的雪旺细胞计数、活力明显高于bFGF组和PELA微球组。流式细胞仪检测结果显示，培养2d后，bFGF组的Gz／M＋S期百分数最高；培养4、8d后，PLGA微球组的G2／M＋S期百分数最高，差异具有统计学意义。结论 游离bFGF对雪旺细胞促分裂增殖作用效应期短，而PLGA微球能在较长时期内促进雪旺细胞的分裂增殖，PELA微球虽然达到了缓释的性能要求，但释放出的bFGF的生物活性受到了破坏。     

雪旺细胞无血清条件培养液中的神经营养蛋白活性

目的 :进一步探测雪旺细胞无血清条件培养液中神经营养蛋白活性。方法 :收集成年大鼠坐骨神经雪旺细胞无血清条件培养液 (Schwanncellserum freecondionedmedium ,SC SFCM ) ,通过PM1 0超滤获取 >1 0kD浓缩液 ,再经Disc PAGE分离和Biotrap电洗脱 ,从SC SFCM中分离出A、B、C、D四组蛋白带 ,选择其最佳活性浓度 ,四组蛋白带按照 7种不同组合加入脊髓前角神经元 (SAHN)培养液中 ,通过MTT法进行神经营养活性检测。结果 :含D蛋白带的各组 ,其OD值均显著高于对照组 (P <0 .0 1 ) ,而不含D蛋白带的其它各组 ,其OD值与对照组比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :来自于SC SFCM中的D蛋白带具有促进SAHN体外存活的神经营养活性     

神经生长因子在NCI-H466细胞中的表达及其生物学意义

目的： 探讨神经生长因子（nerve growth factor,NGF）在小细胞肺癌细胞株NCI-H466中的表达及肺癌脑转移的可能机制。方法： 采用免疫荧光标记技术观察人小细胞肺癌NCI-H466细胞中NGF的亚细胞定位表达,并采用MTT试验及Transwell试验观察NGF对NCI-H466细胞增殖及侵袭能力的影响。结果： NGF在NCI H466细胞中亚细胞定位表达存在细胞周期特异性,在分裂间期,NGF主要呈颗粒状分布于细胞核内;在分裂中期,NGF分布于纺锤丝上。加入外源性NGF的NCI-H466细胞增殖明显加速,侵袭能力增强。结论： NGF可以促进NCI-H466细胞增殖和迁移,中枢神经系统内高NGF水平可能是肺癌易于发生脑转移的原因之一。NGF在肺癌细胞内具有亚细胞定位表达的特点,有可能作为一种新的治疗靶点。     

Effect of Rat Schwann Cell Secretion on Proliferation and Differentiation of Human Neural Stem Cells

Objective:To investigate the effect of rat Schwann cell secretion on the proliferation and differentiation of human embryonic neural stem cells(NSCs).Methods:The samples were divided into three groups.In Group One,NSCs were cultured in DMED/F 12 in which Schwann cells had grown for one day.In Group Two,NSCs and Schwann cells were co-cultured.In Group Three,NSCs were cultured in DMEM/F12.The morphology of NSCs was checked and β-tubulin,GalC,hoechst 33343 and GFAP labellings were detected.Results:In Group One,all neural spheres were attached to the bottom and differentiated.The majority of them were β-tubulin positive while a few of cells were GFAP or GalC positive.In Group Two,neural Spheres remained undifferentiatied and their proliferation was inhibited in places where Schwann cells were robust.In places where there were few Schwann cells,NSCs performed in a similar manner as in Group One.In group Three,the cell growth state deteriorated day after day,On the 7th day,most NSCs died.Conclusion:The secretion of rat Schwann cells has a growth supportive and differentiation-inducing effect on human NSCs.     

雪旺细胞源神经营养因子对端侧吻合后神经再生的影响

目的研究雪旺细胞源神经营养因子对神经端侧吻合后神经再生的影响.方法取SD大鼠24只,随机分为实验组和对照组,每组12只;随机切断一侧腓总神经,与胫神经外膜开窗处行端侧吻合,另一侧作为正常对照.术后于实验组端侧吻合侧小腿外侧肌肉注射雪旺细胞源神经营养因子(10 μg/ml),而于对照组注射等量的生理盐水,隔天一次,共用2周;术后12周,行腓总神经传导速度测定、组织学检查及胫前肌湿重测定.结果实验组再生的腓总神经纤维质量、数目、运动神经传导速度和胫前肌湿重均优于对照组,但不如正常的腓总神经和胫前肌.结论雪旺细胞源神经营养因子对神经端侧吻合后的再生具有一定的促进作用.     

蛋白激酶C四种亚型在宫颈鳞状上皮组织癌变过程中的表达及其意义

目的 探讨蛋白激酶C（protein kinase C,PKC）亚型α、δ、θ和ζ在宫颈鳞状上皮组织癌变中的表达及作用.方法 （1）Western blot法检测PKC在12例宫颈鳞癌及癌旁正常宫颈鳞状上皮组织中的表达差异;⑵免疫组化法检测另外43例宫颈鳞癌、31例上皮内瘤变（CIN）、32例癌旁正常宫颈鳞状上皮组织中PKC α、δ、θ和ζ的表达.结果 （1）PKC蛋白仅在宫颈鳞癌组织中表达,癌旁正常宫颈鳞状上皮组织中PKC蛋白未见表达.（2）PKCα、δ、θ和ζ在癌旁正常宫颈鳞状上皮组织、CIN、宫颈鳞癌组织中的阳性表达率逐渐增高.（3）PKCα在中低分化宫颈鳞癌的阳性表达率比高分化宫颈鳞癌组织高（P＜0.05）.PKC δ在II期宫颈鳞癌组织中的表达较I期高（P＜0.05）.PKC ζ在无淋巴转移的宫颈鳞癌中的阳性表达率比有淋巴转移的宫颈鳞癌高（P ＜0.05）.结论 PKC在宫颈鳞状上皮组织的癌变过程中起了重要的作用,其亚型α、δ、θ和ζ与宫颈鳞癌的临床病理参数有一定的相关性.     

双向电泳技术分析大鼠感觉神经施万细胞与运动神经施万细胞蛋白表达差异

目的:建立正常大鼠感觉神经施万细胞(sensory nerve Schwann cell,snSc)与运动神经施万细胞(mo-tor nerve Schwann cell,mnSc)蛋白质分离的双向电泳(2-DE)技术体系,探讨运动神经施万细胞与感觉神经施万细胞存在的蛋白表达差异。方法:正常SD大鼠(180±20g)深度麻醉后打开椎管,取出运动神经和感觉神经,分别分离感觉与运动的施万细胞总蛋白,进行二维电泳和PDQuest软件分析。对其中表达有差异的蛋白质点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间-串联质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)鉴定。结果:建立了正常大鼠感觉神经施万细胞与运动神经施万细胞的蛋白质二维凝胶电泳图像,通过PD Quest软件分析发现有12个表达差异的蛋白质点,利用MALDI-TOF/TOF-MS成功鉴定了其中3个蛋白质。