兔坐骨神经电损伤后区域雪旺氏细胞增殖变化及分析

目的 比较成年兔坐骨神经分别受到75V电压损伤和横断伤后雪旺氏细胞增殖变化情况.方法 建立兔坐骨神经电损伤和横断伤实验模型,选择损伤后第3、7、10天作为观察点.应用双酶消化法分离神经受损区域神经雪旺氏细胞并计数.结果 75V电损伤后雪旺氏细胞数量明显要多于横断伤后的雪旺氏细胞数量.结论 75V电损伤不能损伤雪旺氏细胞正常功能,电损伤后坐骨神经Wallerian变性比较快而全面是雪旺氏细胞数量增多的原因.     

佛波酯慢性处理对大鼠血管平滑肌细胞各亚型蛋白激酶C表达的影响

目的观察佛波酯（PMA）慢性处理大鼠血管平滑肌细胞各亚型蛋白激酶C（PKCs）表达的影响。方法原代培养大鼠m管平滑肌细胞,①按照PMA处理浓度将细胞随机分为空白组、0．25％eDMSO组和PMAI、5、10μmol／L组,各组细胞均处理4h;②按照PMA处理时间将细胞随机分为空白组、0．25％eDMSO组和PMA1、4和24h组,PMA组的药物浓度均为10μmol／L。采用Western blotting技术榆测各亚型PKCs蛋白的表达。结果PMA浓度〈10μmol／L处理细胞时间〈4h不影响PKC—α的表达（P〉0．05）,10pmlol／LPMA处理24h能抑制PKC—α的表达（P〈0．05）;PMA浓度〉5μmol／L处理细胞时间〉4h可明显抑制PKC-δ的表达（P〈0．01）,PMA浓度〈5μmlol／L处理细胞时间〈4h对PKC-δ的表达无显著影响（P〉0．05）,10μmol／LPMA处理细胞1h即可明显抑制PKC-δ的表达（P〈0．01）;PMA浓度〉5pμmol／L处理细胞时间〉4h可以明显抑制PKC-θ的表达（P〈0．01）;10μmol／L的PMA处理细胞24h对PKC．∈的表达无明显影响（P〉0．05）。结论PMA慢性处理大鼠血管平滑肌细胞可抑制传统型PKC—α和新型PKC-δ、ε、θ的表达,对非典型PKC-ζ的表达没有影响。     

醛固酮与螺内酯对肝星状细胞增殖及胶原合成的影响

目的　探讨醛固酮 (ALD)、螺内酯对大鼠肝星状细胞 (HSC)增殖、胶原合成的影响。方法　大鼠HSC培养 ,在不同浓度的ALD、螺内酯作用下 ,采用3 H 胸腺嘧啶核苷 (3 H TdR)、3 H 脯氨酸 (3 H Pro)掺入法及流式细胞技术观察ALD、螺内酯对HSC增殖及胶原合成的影响。结果　ALD在 10 -4mol/L高浓度时3 H TdR、3 H Pro掺入量与对照组相比明显增多 (P <0 .0 5 ) ,螺内酯在浓度高于 10 -6mol/L时 ,HSC3 H TdR、3 H Pro掺入量明显减少 ,螺内酯阻止HSC于G1期 ,ALD +螺内酯组与对照组相比差异无显著意义 (P >0 .0 5 )。结论　高浓度ALD可以促使HSC增殖 ,其拮抗剂螺内酯明显抑制HSC的增殖及合成胶原。     

阿伐他汀对幼年大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其意义

目的　探讨阿伐他汀对幼年大鼠心肌成纤维细胞 (CF)增殖和胶原合成的影响。方法　用消化法培养新生SD大鼠的CF ,采用3H 胸腺嘧啶核苷 ( 3H TdR)掺入法测定CF的DNA合成功能 ,四氮唑蓝 (MTT)比色法测定细胞增殖 ,流式细胞分析仪技术检测细胞周期 ,3H 脯氨酸掺入法测定胶原合成 ,分别观察不同浓度阿伐他汀对CF增殖和胶原合成的影响。结果　 ( 1)阿伐他汀以浓度依赖的方式抑制CF的3H TdR掺入率。其中 ,10 -7、10 -6、10 -5和 10 -4 mol/L组的3H TdR掺入率分别为(cpm/ 5 0 0 0细胞 ) 314± 6 8、2 5 3± 5 2、2 0 1± 5 3和 170± 48,显著低于对照组 ( 378± 6 5 ) (F =16 912 ,P <0 0 0 1)。 ( 2 )随着阿伐他汀浓度的增高 ,CF的MTT比色法A4 90 值呈明显的递减趋势 ,其中 10 -7、10 -6、10 -5和 10 -4 mol/L组的A4 90 值分别为 0 2 88± 0 0 0 8、0 2 5 2± 0 0 0 7、0 2 2 5± 0 0 0 8和 0 2 16± 0 0 13,与对照组 ( 0 311± 0 0 0 5 )相比 ,差异有非常显著意义 (P均 <0 0 1)。 ( 3)G0 /G1期细胞百分率随阿伐他汀浓度的增高而呈递增趋势 ,S期G2 /M期细胞百分率和增殖指数呈递减趋势 ,其中 10 -7、10 -6、10 -5和10 -4 mol/L组与对照组比较 ,差异有非常显著意义 (P均 <0 0 1)。 ( 4)CF的3H 脯     

缬沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导的牛主动脉血管平滑肌增殖及迁移的影响

目的 :观察血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )及缬沙坦对培养的牛主动脉血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖、迁移的作用。方法 :取新生小牛胸主动脉采用贴块法培养平滑肌细胞 ,分成对照组、AngⅡ组、缬沙坦组、缬沙坦加AngⅡ组 ,干预后分别测定3 H 胸腺嘧啶 (3 H TdR)掺入量和计数迁移的细胞。结果 :AngⅡ (1μmol/L)作用 2 4h能使VSMC的3 H TdR的掺入量、细胞迁移数较对照组增多 ;与AngⅡ组相比 ,AngⅡ加用缬沙坦 (10 0 μmol/L)使3 H TdR的掺入量与细胞迁移数明显减少 ;与对照组相比 ,单用缬沙坦使3 H TdR的掺入量亦明显减少。结论 :AngⅡ对VSMC有促增殖、迁移作用 ,能被缬沙坦拮抗 ,而且缬沙坦在没有AngⅡ作用时亦能单独发挥抗增殖作用     

β-1,4半乳糖基转移酶-I对雪旺氏细胞增殖的影响

目的 :探讨周围神经雪旺氏细胞表达 β -1,4-半乳糖基转移酶 -Ⅰ (β -1,4-galactosyltransferaseⅠ ,β -1,4-GalT -Ⅰ )对其增殖的影响。方法 :构建正、反义 β -1,4-GalT -Ⅰ表达质粒 ,将其转染到分离培养的雪旺氏细胞中 ;运用细胞计数分析转染细胞倍增时间、培养细胞 3H -TdR掺入检测转染细胞增殖程度 ;应用流式细胞仪分析转染细胞的细胞周期变化。结果 :转染正义 β -1,4-GalT -Ⅰ后雪旺氏细胞的增殖受到抑制 ,且这种抑制作用随转染浓度增大而增强。而转染反义 β -1,4-GalT -Ⅰ有相反的作用。转染正义 β -1,4-GalT -Ⅰ后 ,雪旺氏细胞周期主要被阻滞在G1/G0期。 结论 :β -1,4-GalT -Ⅰ对雪旺氏细胞的增殖有抑制作用 ,可能在周围神经雪旺氏细胞的有序增殖过程中发挥重要作用     

睾酮的快速非基因组效应对3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性的影响

目的 探讨睾酮的快速非基因组效应对3T3-L1成熟脂肪细胞胰岛素敏感性的影响及分子机制.方法 将3T3-L1前脂肪细胞诱导成熟,用10-9～10-5moL/L睾酮分别预处理0～30 min及24 h,[3H]-2-脱氧葡萄糖掺入法检测葡萄糖摄取率;通过免疫印迹检测胰岛素受体(InsR)/蛋白激酶(Akt)/糖原合成激酶(GSK3B)的活性及表达.结果 有胰岛素刺激时,睾酮预处理30 min的胰岛素促葡萄糖摄取率随睾酮浓度增高而下降,10-5moL/L睾酮组的摄取率的升高倍数(4.2±0.4)显著低于无睾酮组(5.5±0.4),P<0.05;10-6mol/L睾酮预处理3～30 min的InsR/Akt/GSK3β的磷酸化水平较无睾酮组均明显下降(均P<0.05).有胰岛索刺激时,睾酮预处理24 h的胰岛素促葡萄糖摄取率也随睾酮浓度增高而下降,10-5moL/L睾舀耐组的摄取率的升高倍数(4.0±1.0)显著低于无睾酮组(4.5±1.O),P<0.05;10-7～10-6mol/L睾酮预处理24 h的InsR/Akt/GSK3β的活性均明显下降(均P<0.05),但InsR/Akt/GSK3β的表达水平均不受睾酮影响(均P>0.05).结论 高浓度睾酮的快速非基因组效应可能通过抑制胰岛素信号分子InsR/Akt/GSK3β的活性从而在诱导成熟脂肪细胞产生胰岛素抵抗中起重要作用.     

血小板激活因子对小鼠脾细胞增殖以及产生IL—2,NKCF和CSF的影响

本文研究了PAF对BALB/c小鼠脾细胞增殖以及产生IL-2,NKCF和CSF的影响。[~3H]TdR掺入法检测脾细胞增殖结果表明PAF在10~(-10)～10~(-7)mol/L范围内显著抑制ConA诱导的脾细胞增殖。用CTLL-2细胞测定IL-2,YAC-1细胞检测NKCF,小鼠骨髓细胞测定CSF,结果表明当PAF浓度为10~(-7)mol/L时,三种因子的产生均被明显抑制。PAF对小鼠脾细胞功能的抑制可能与其广泛的病理生理作用有关。     

ET—1对系膜细胞增殖和前胶原mRNA表达的影响

目的利用已构建的体外肾小球系膜细胞（MC）三维立体培养系统，研究内皮素（ET－1）是否具有刺激MC增殖和表达Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型前胶原mRNA作用。方法3H－TdR掺入法和斑点杂交方法。结果在0．5％小牛血清存在下，10－7mol／LET－1作用12h后，MC对3H－TdR摄入增加（＜0．01），呈剂量依赖方式，＜10－10mol／LET－1对MC无促增殖作用，ET－1≥10-10mol／L时，随着ET－1浓度增加。MC对3H－TdR摄人也增加；在1％小牛血清存在下，10-7mol／LET－1明显促进MC表达Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型前胶原mRNA，而10-12mol／LET－1无此作用。结论ET－1可通过刺激MC增殖和产生细胞外基质促进慢性肾小球疾病病程进展。     

吡咯喹啉醌对大鼠雪旺细胞形态及增殖细胞核抗原表达的影响

目的:观察吡咯喹啉醌(PQQ)对体外培养雪旺细胞的形态、细胞数量及雪旺细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法:从出生3-5dSD大鼠坐骨神经分离培养雪旺细胞,纯化并经S-100免疫荧光标记鉴定;设立对照组和实验组,分别加入100nmol/LPQQ和等量PBS培养48h后倒置显微镜下观察细胞形态并进行细胞计数;将不同浓度的PQQ(0,10,50,100,500nmol/L)加入雪旺细胞培养基中,培养48h后提取总mRNA及总蛋白进行PCNA的RT-PCR和Western blotting检测。结果:100nmol/LPQQ干预雪旺细胞48h可以使细胞的形态发生变化并使细胞数量增加,细胞数量较对照组增加13.6%;RT-PCR及Western blotting检测结果表明:PQQ浓度在10-500nmol/L浓度范围内可增加雪旺细胞内PCNA的表达,且当PQQ浓度为100nmol/L时该上调效应最明显,分别是对照组的2.0倍和3.4倍。结论:PQQ可增加体外培养雪旺细胞的数量;并可使体外培养雪旺细胞内PCNA表达上调。     

Effects of angiotensin II and losartan on the growth and proliferation of hepatic stellate cells.

OBJECTIVE: To investigate the effects of angiotensin II (AngII) and AT1a blocker losartan on growth and proliferation of rat hepatic stellate cells (HSCs). METHODS: Rat HSCs were isolated, cultured and identified, followed by incubation with AngII or losartan at different concentrations. The cell growth and proliferation were assessed via cell counting and MTT assay, and the effects of the agents on HSC DNA synthesis evaluated by way of (3)H-thymidine incorporation ((3)H-TDR). RESULTS: AngII (1 x 10(-9) to 1 x 10(-7) mol/L) stimulated HSC proliferation as demonstrated by cell counting, MTT assay and thymidine incorporation test (P < 0.05), but such effect was not observed at lower doses (<1 x 10(-9) mol/L). Losartan had significant inhibitory effect on HSC growth at the concentration of 1 x 10(-8) to 1 x 10(-6) mol/L (P < 0.05), but not at lower doses (<1 x 10(-8) mol/L). Co-stimulation of the cells with losartan and AngII did not result in a significant increase in cell number as compared with the control group (P > 0.05). CONCLUSION: Rapid proliferation of rat HSCs occurs in response to AngII treatment, but is inhibited after AT1a receptor is blocked with the antagonist losartan.     

不同方式损伤周围神经后许旺细胞钾通道基因的表达

目的:观察不同方式损伤兔坐骨神经电后受损区域神经许旺细胞Kv1.5钾通道基因的表达水平。方法:随机将实验动物分为3组:50V电损伤组、100V电损伤组、神经切割伤组,双酶消化法分离受损区域坐骨神经许旺细胞并体外培养,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术比较各组许旺细胞Kv1.5 mRNA的表达水平。结果:3组动物损伤区域神经许旺细胞均有Kv1.5基因的表达,其中损伤后3～7dKv1.5基因的表达最为显著;50V组及神经切割伤组两组之间比较无显著性差异(P>0.05);而100V组Kv1.5基因的表达水平较低,与其他两组有显著性差异(P<0.05)。结论:坐骨神经损伤后许旺细胞Kv1.5基因的表达与损伤后时间及损伤电压大小有关,可能与许旺细胞的增殖有密切关系。     

尼可地尔在抑制内皮素诱导的血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的：探讨丝裂素活化的蛋白激酶（ＭＡＰＫ）,在ＡＴＰ敏感钾通道开放剂尼可地尔抑制内皮素（ＥＴ－１）诱导的培养大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用。方法：将１０~（－７）～１０~（－５）ｍｏｌ／Ｌ的尼可地尔导于培养血管平滑肌细胞,ＥＴ－１诱导培养大鼠血管平滑肌细胞增殖。用Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ法测定磷酸化 ＭＡＰＫ蛋白表达。［~３ Ｈ］胸腺嘧啶核苷酸掺入测定平滑肌细胞 ＤＮＡ合成。结果：ＡＴＰ敏感钾通道开放剂尼可地尔抑制ＥＴ－１诱导的培养大鼠血管平滑肌细胞［~３Ｈ］胸腺嘧啶核苷酸掺入并同时剂量依赖性下调 ＭＡＰＫ蛋白表达。结论： ＡＴＰ敏感钾通道开放剂尼可地尔可通过下调ＭＡＰＫ的表达从而抑制ＥＴ－１诱导的培养大鼠血管平滑肌细胞增殖。     

大鼠坐骨神经缺损后损伤近端神经TNC表达变化及功能分析

目的:研究大鼠坐骨神经缺损后损伤近端神经组织中胞外基质分子TNC(tenascin-C)的表达变化及初步功能分析。方法:采用冰冻切片和免疫荧光染色法,检测神经缺损0d(对照组),4d(实验组)损伤近端神经组织TNC的表达变化及表达位置;并利用体外共培养施万细胞/成纤维细胞及细胞划痕实验初步研究TNC的作用。结果:免疫荧光染色发现TNC在损伤后4d处于高表达状态,并在神经外膜处与波形蛋白(Vimentin)共定位状况良好;体外细胞共培养实验发现下调成纤维细胞中的TNC可以降低与之共培养的施万细胞的迁移速度。结论:在神经损伤后成纤维细胞分泌TNC并比对照组表达大幅上调,且体外实验发现TNC可促进施万细胞的迁移速度。     

地塞米松对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖及细胞周期的影响

目的:观察不同浓度的地塞米松(Dex) 对人乳腺癌细胞系(MCF-7) 细胞增殖、细胞周期分布及P21/WAF1表达的影响.方法:以不同浓度Dex(10-10～10-6 mol/L)处理细胞,采用活细胞计数法观察细胞增殖情况;测定碱性磷酸酶(AKP)活性;通过流式细胞仪技术,测定Dex作用后其细胞周期分布;通过蛋白印迹分析的方法检测Dex对p21/WAF1表达的影响.结果:Dex对MCF-7细胞的增殖有明显抑制作用, 10-7mol/L Dex作用5 d后活细胞计数为对照组的70%,细胞在G0/G1期停滞; Dex还可使MCF-7 细胞AKP活性增高,这种作用具有时间和剂量依赖性;Dex对p21/WAF1表达无明显影响.结论:Dex对MCF-7细胞有明显的增殖抑制作用,细胞在G0/G1期停滞.     

孕酮、他莫西芬对子宫内膜癌细胞增殖及雌激素受体相关受体表达的影响

目的探讨孕酮及他莫西芬（tamoxifen,TAM）对子宫内膜癌细胞生长的影响及其对雌激素受体相关受体（ERRα）表达的影响。方法体外培养子宫内膜癌Ishikawa细胞,采用MTT法检测不同浓度孕酮及TAM对子宫内膜癌细胞生长的影响,同时采用Western Blot方法检测细胞中ERRα蛋白水平的变化。结果不同浓度孕酮对Ishikawa细胞体外增殖具有抑制作用,呈剂量-时间依赖性。TAM对Ishikawa细胞体外增殖具有双向作用,在×10-9~×10-7mol/L TAM作用下促进细胞增殖,并呈剂量-时间依赖性;在×10-5mol/L TAM作用下抑制细胞增殖。×10-9~10-6mol/L TAM作用后下调细胞中ERRα蛋白表达,×10-5mol/L TAM及孕酮作用后上调ERRα蛋白表达。结论孕酮及高浓度他莫西芬（×10-5mol/L）可抑制子宫内膜癌细胞的增殖,这种抑制作用可能通过调控细胞中ERRα表达实现;而低浓度他莫西芬则促进子宫内膜癌细胞的增殖。     

阿托伐他汀对骨髓基质细胞增殖及向成骨细胞分化的影响

目的比较不同浓度的阿托伐他汀对小鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化、矿化成骨的影响。方法分别将10^-8、10^-7、10^-6mol／L的阿托伐他汀和空白药物加入传代培养的小鼠骨髓基质细胞，通过细胞形态学观察、细胞增殖率检测、碱性磷酸酶（ALP）检测和钙结节染色，比较药物在成骨细胞分化过程中对细胞增殖和分化的影响。结果阿托伐他汀可以剂量依赖性方式抑制骨髓基质细胞的增殖，10^-7mol／L组和10^-6mol／L组较明显（均P〈0．05）。阿托伐他汀可以提高骨髓基质细胞ALP活性，培养10～22d，10^-7mol／L组和10^-6mol／L组ALP活性高于对照组和10^-8mol／L组（均P〈0．05）。矿化成骨染色显示在培养26d后，10^-6mol／L组染色明显深于其它各组。结论阿托伐他汀可促进骨髓基质细胞来源的成骨细胞的分化，抑制了细胞增殖，促进骨结节钙化。     

吉非替尼通过促进H3K27甲基化水平抑制恶性周围神经鞘瘤细胞的增殖

目的:研究表皮生长因子受体（EGFR）抑制剂吉非替尼（gefitinib）对恶性周围神经鞘瘤（MPNST）细胞增殖、迁移的影响。方法:选择STS26T细胞、ST88-14细胞,分为对照组和给药组（10 μmol/L）,其中药物IC50实验、蛋白印迹实验给药组浓度分为5、10、15 μmol/L。CCK-8法检测吉非替尼对STS26T、ST88-14的半数抑制浓度并绘制药物IC50曲线;平板克隆形成实验检测吉非替尼对细胞增殖能力的影响;划痕实验检测吉非替尼对细胞迁移能力的影响;实时荧光定量PCR检测加药后各组细胞Kras、SUZ12、EED、EZH2 mRNA的表达情况;蛋白印迹实验检测加药后Kras、组蛋白H327位赖氨酸三甲基化蛋白（H3K27me3）的表达。结果:STS26T、ST88-14细胞的药物IC50曲线显示半数抑制浓度均为10 μmol/L（t=11.42、16.51,均P＜0.05）;与对照组比较,吉非替尼给药组（10 μmol/L）STS26T、ST88-14细胞增殖能力显著降低（t=5.48,P＜0.05;t=4.89,P＜0.01）、细胞迁移能力显著降低（t=4.94,P＜0.01;t=4.75,P＜0.01）;与对照组比较,吉非替尼给药组（10 μmol/L）STS26T细胞中Kras mRNA表达显著降低（t=4.87,P<0.01）,SUZ12、EED、EZH2表达显著升高（t=11.36、15.54、13.19,均P＜0.05）;与对照组比较,吉非替尼给药组（10 μmol/L）ST88-14细胞中Kras mRNA表达显著降低（t=13.75,P<0.05）,SUZ12、EED、EZH2表达水平显著升高（t=12.56、7.48,16.33,均P＜0.05）;与对照组比较,吉非替尼给药组（5、10、15 μmol/L）STS26T、ST88-14细胞Kras蛋白表达显著降低（t=13.70、15.21,均P<0.05）;与对照组比较,吉非替尼给药组（5、10、15 μmol/L）STS26T、ST88-14细胞H3K27me3蛋白表达显著增加（t=14.31、12.40,均P<0.05）。结论:EGFR抑制剂吉非替尼通过促进MPNST中PRC2的表达,提高表观遗传学标志物H3K27me3的表达,降低MPNST细胞株增殖、迁移的能力。