Shh在鼠磨牙牙胚发育晚期的基因表达

目的：观察信号分子Sonic hedgehog(Shh)在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育晚期的基因表达，探讨其在成釉细胞、成牙本质细胞分化中的作用。方法：制备昆明小鼠磨牙牙胚发育晚期(E16．5—P1．5)标本，用原位杂交法分析Shh mRNA在牙胚中的表达和分布。结果：Shh mRNA在牙胚发育晚期的前成釉细胞和中间层细胞呈阳性表达，在成牙本质细胞层表达较弱。结论：在牙胚发育晚期，Shh可能通过自分泌途径和旁分泌途径，参与了成釉细胞和成牙本质细胞分化。     

核心结合因子a1在小鼠牙齿发育过程中的表达

目的：观察Cbfal蛋白在小鼠牙胚发育过程中的表达情况。方法：用自制的Cbfal多克隆抗体，采用免疫组化染色观察其时空表达特性。结果：Cbfal蛋白在帽状期牙胚中表达较广泛，在钟状早、中期牙胚表达于内釉细胞、成釉细胞以及紧靠成牙本质细胞层的牙乳头细胞，而在钟状晚期，Cbfal在牙乳头表达为阴性，成牙本质细胞层弱阳性，成釉细胞为阳性或强阳性。结论：Cbfal可能在小鼠牙胚发育，尤其是在成牙本质细胞和成釉细胞分化过程中具有重要作用。     

原癌基因c-jun、c-fos在大鼠牙胚发育过程中的表达

目的：通过观察原癌基因c—jun、c—fos在大鼠牙胚发育过程中时空表达的特点，探讨它在牙胚发育中的作用。方法：制备大鼠牙胚发育各期组织标本，采用免疫组化的方法观察c-jun、c-fos在大鼠牙胚发育不同阶段的表达情况，并对结果进行图像分析和统计学分析。结果：c-jun在大鼠牙胚的蕾状期、帽状期呈阴性表达，在钟状晚期牙胚的成牙本质细胞中呈阳性表达，成釉细胞中亦有表达；c-fos在大鼠牙胚的蕾状期呈阴性表达，帽状期表达于内釉、外釉上皮和星网层，以内釉上皮层表达最强。钟状期表达于成熟的成牙本质细胞，且随着硬组织的形成、矿化，表达逐渐减弱。结论：观察到c-jun、c-fos在大鼠牙胚发育不同时期的表达和表达变化，提示其可能参与成牙本质细胞、成釉细胞的分化和牙本质形成的过程。     

PHEX蛋白在小鼠成牙本质细胞分化过程中的定量表达

目的:探讨PHEX在小鼠成牙本质细胞分化过程中的定量表达及其可能的生物学作用.方法:制备小鼠牙胚发育各阶段标本,免疫组织化学方法检测PHEX蛋白在小鼠磨牙牙胚发育各时期成牙本质细胞中的表达情况.对成牙本质细胞中的阳性信号进行定量,并进行统计分析.结果:PHEX蛋白主要表达于分化成熟的成牙本质细胞.在时间上,牙胚帽状期(E16)中未分化的牙乳头细胞无明显表达,钟状期(E18)靠近基底膜处的牙乳头细胞有弱阳性表达,硬组织形成期(P5)可见到成熟的成牙本质细胞中有强烈表达;在硬组织形成期(P5)的空间分布上,颈环处未分化的牙乳头细胞中无明显表达,而未来牙尖处分化成熟的成牙本质细胞则有强烈表达.结论:PHEX蛋白表达具有特定的时间-空间分布特征,PHEX参与了小鼠成牙本质细胞的分化过程,可能在牙本质矿化过程发挥重要的作用.     

氯离子通道CLC-7在小鼠牙胚中的表达

目的:研究氯离子通道CLC-7在小鼠牙胚发育过程中的表达及分布,探讨其在牙齿发育过程中的作用.方法:提取小鼠牙胚中的总RNA并制备不同发育阶段的小鼠牙胚标本,应用RT-PCR和免疫荧光染色方法检测CLC-7在小鼠牙胚中的表达及分布.结果:RT-PCR检测发现新生小鼠牙胚有Clcn7 mRNA的表达.免疫荧光染色发现E18小鼠牙胚开始有CLC-7的表达,CLC-7存在于牙胚多种细胞,如内釉上皮层细胞、中间层细胞、星网状层细胞、牙乳头细胞、成釉细胞、成牙本质细胞.结论:CLC-7在小鼠牙胚中呈特异性空间分布,可能参与牙胚发育过程的调节.     

Notch 1信号蛋白在大鼠牙胚发育中的免疫组化表达研究

目的通过检测大鼠牙胚发育不同阶段Notch1信号的表达情况，探讨其在牙齿发育过程中的作用。方法采用免疫组织化学染色技术观测大鼠孕期12、14、16、17、18、19d和出生后1、3、5、7、9d牙胚中Notch1的表达。结果Notch1的表达始于钟状中期。在钟状中晚期，Notch1的表达在牙乳头间充质、成牙本质细胞层呈弱阳性。在内釉细胞层呈阳性。牙体组织形成开始，Notch1则在成釉细胞的中间层有反复表达，在成牙本质细胞层中有一过性表达。牙齿萌出后，该信号在成牙本质细胞和成釉细胞表达均为阴性。结论Notch1在牙胚发育过程中与成釉细胞分化有关，它可能在牙齿发育早期基质触发前成釉细胞向成釉细胞分化中起重要作用。     

胶质源性神经营养因子在人牙胚和体外培养的人牙乳头间充质细胞中表达的实验研究

目的：观察胶质源性神经营养因子（GDNF）在人牙胚和体外培养的人牙乳头间充质细胞中表达部位及其表达变化。方法：应用免疫组织化学和免疫细胞化学技术。结果：GDNF在人牙乳头间充质细胞和人牙胚免疫组化染色呈阳性结果，表达位于人牙乳是充质细胞以及牙胚的成牙本质细胞和前期牙本质细胞层，为胞浆内着色，呈黄褐色。结论：GDNF可能参与促成牙本质细胞分化，对牙齿硬组织发育起非神经源性调节作用。     

人牙本质涎蛋白在人牙胚发育过程中的表达和意义

目的：探讨人牙本质涎蛋白(human dentin sialoprotein，hDSP)在人牙胚发育过程中的表达和意义。方法：用免疫组化方法检测人牙本质涎蛋白在人牙胚不同发育阶段中的表达。结果：hDSP在蕾状期、帽状期釉上皮以及钟状早期内釉上皮有弱阳性表达，钟状中期正在分泌基质的成牙本质细胞、牙本质小管有强阳性表达，钟状晚期，牙本质小管仍有强阳性表达，而成牙本质细胞转为弱阳性表达。前成釉细胞、成釉细胞有一过性表达。前期牙本质始终无阳性表达。牙胚周围骨组织、软骨组织和口腔软组织无阳性表达。结论：提示hDSP可能参与了牙本质的形成。另外前期牙本质阴性表达，表明hDSP蛋白由成牙本质细胞分泌后，可能通过成牙本质细胞突起穿过前期牙本质分泌至矿化前沿，参与牙本质的形成。     

转化生长因子—β超家族成员及其受体在牙胚发育中的作用

牙胚的发育受多种生长因子的调控，近年来对转化生长在子β超家族成员在牙胚发育中的生物学作用研究颇多，如诱导早期牙形态发生，成牙本质细胞分化，胸外基持形成等。本文综述了转化生长在子－β超家族成员及其受 牙胚发育中的表达及可能的作用机理。     

牙胚细胞条件培养液诱导大鼠胚胎面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化

目的：探讨牙胚细胞条件培养液（TGC—CM）在诱导面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化中的作用。方法：取妊娠12．5d SD大鼠胎鼠第4代下颌突外胚间充质细胞,在牙胚细胞条件培养液（TGC—CM）的诱导下,通过形态学观察、免疫组化、RT—PCR等方法,探索牙胚细胞条件培养液诱导面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化的可能。结果：面突外胚间充质细胞在诱导培养基中生长良好。培养7d,在诱导组中细胞出现核极化,有很长的突起,细胞平行排列。抗牙本质涎蛋白（DSP）呈阳性反应。RT—PCR显示mRNA水平表达成牙本质细胞特异的牙本质涎磷蛋白（DSPP）和牙本质基质蛋白-1（DMP-1）。结论：面突外胚间充质细胞在含有多种细胞因子的TGC—CM的作用下能分化为成牙本质样细胞,能为研究牙齿的分化和发育提供良好的模型和实验依据。     

阻遏蛋白β-TrCP在小鼠牙胚不同发育时期的表达与意义

目的观察Sonic hedgehog（shh）信号转导通路的阻遏蛋白β- TrCP在小鼠牙胚发育不同时期的表达情况，探讨β- TrCP在晚期牙胚发育中的作用与意义。方法取不同发育时期的鼠胚、乳鼠鼠头标本，用标记生物素链亲和素LsAB法观察β- TrCP蛋白在不同发育时期牙胚组织的表达情况。结果β- TrCP在胚胎10.5、13.5、14.5、16.5、18.5 d的小鼠牙胚上皮层与间充质层，以及出生后0、3、6 d的小鼠成釉细胞与成牙本质细胞胞浆呈特征性表达。结论β- TrCP在正常发育小鼠牙胚及成釉细胞与成牙本质细胞特征性表达，提示β- TrCP在牙胚发育中维持/限定shh信号通路的正常信号转导具有重要意义。     

小鼠牙胚的鸡胚培养模型的建立

目的　采用鸡胚建立一种新的小鼠牙胚体内培养模型。方法　取15 d龄的昆明胎鼠下颌第一磨牙牙胚, 将其用钨丝固定于孵化4~5 d(翼芽期)的鸡胚内,继续孵化10 d后,终止培养并取材,进行苏木精-伊红染色,常规组织学观察。结果　小鼠牙胚在鸡胚内可继续生长发育,从帽状期进入到钟状末期,镜下可见分化成熟的成牙本质细胞、成釉细胞和分泌的基质。结论　以翼芽期鸡胚作为小鼠牙胚体内培养的宿主,可以保持其发育,再现牙齿形成过程中的细胞分化、形态发生的生理过程。     

In vitro inhibition of mouse odontoblast differentiation by vitamin A

An excess of vitamin A prevented tooth morphogenesis and odontoblast differentiation in cultured embryonic mouse molar tooth germs. If the vitamin A was added after the onset of odontoblast differentiation, it did not affect the secretion of predentine or the polarization of ameloblasts but it reduced the epithelial component and impaired keratinization. The effects were reversible. Autoradiographically, in control germs the highest incorporation of ³⁵SO₄ was observed at the epithelio-mesenchymal interface. Vitamin A decreased this incorporation. The ultrastructure of the epithelio-mesenchymal interface was examined in expiants in which the epithelial and mesenchymal components of the tooth germ were separated enzymically and then cultured as recombinants. The basement membrane was restored after 2 days in the control medium but not in the presence of vitamin A. The results support the hypothesis that a cell-matrix type of interaction is involved in the differentiation of odontoblasts and suggest that extracellular matrix and cell surface macromolecules, such as sulphated glycos-aminoglycans, are necessary in odontoblast differentiation.     

透明质酸在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同发育时期的表达

目的:检测透明质酸在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同发育时期的表达,探讨其在小鼠牙胚发育过程中的作用。方法:取不同胎龄的ICR胎鼠,制备小鼠下颌第一磨牙不同发育时期切片,用免疫组织化学实验方法检测透明质酸在下颌第一磨牙牙胚组织中的表达情况。结果:透明质酸在小鼠下颌第一磨牙牙胚的不同发育阶段表达各异。在小鼠磨牙开始发生时,透明质酸即在增厚的牙板上皮中表达,随后在蕾状期牙蕾中央的上皮细胞间可见透明质酸的表达,而在深层的牙源性间充质表达则不明显。自帽状期至钟状晚期,透明质酸在牙胚星网状层细胞间以及牙源性间充质细胞的表达逐渐增强,而在基底膜、内外釉上皮细胞、成釉细胞以及成牙本质细胞所在区域不表达。结论:透明质酸在牙胚发育过程中呈现时间-空间特异性表达。特别是其在星网状层细胞以及牙乳头间充质细胞中的表达随着牙胚的发育逐渐增强提示其可能与牙胚的形态发生密切相关。     

维甲酸对小鼠牙胚冠部形态发生的影响

目的探讨维甲酸对早期牙胚形态发生的影响。方法利用体外鼠磨牙牙胚器官培养模型，观察不同剂量维甲酸对１４天胎龄的小鼠下颌第一磨牙牙胚形态发育的影响。结果培养６天后，在不含维甲酸的培养基中牙胚形成明显的牙乳头尖；当培养基中维甲酸的浓度为１×１０－７ｍｏｌ／Ｌ时，牙胚冠部仍形成明显的牙乳头尖；当培养基中维甲酸的浓度为１×１０－６ｍｏｌ／Ｌ时，牙胚冠部无牙乳头尖形成。结论牙胚冠部形态发生与维甲酸剂量有密切关系，过量的维甲酸可抑制牙胚冠部牙乳头尖的形成。     

肝细胞生长因子受体在大鼠牙胚发育中的表达及其意义

目的：研究肝细胞生长因子受体(c—Met)在大鼠牙胚发育过程中的时空表达模式。方法：用免疫组织化学方法，检测c—Met在大鼠牙胚发育不同阶段表达的位置。结果：c—Met在牙胚发育的不同阶段表达于牙胚中特定的部位：帽状期(胚胎15d)，内釉上皮阳性表达，中间层及部分星网状层细胞弱阳性表达；钟状期(胚胎19d)，内、外釉上皮阳性表达，但内釉上皮较外釉上皮表达弱，中间层及星网状层细胞弱阳性表达；矿化期(生后7d)，成牙本质细胞阳性表达。结论：c—Met在大鼠牙胚发育过程中的表达具有时空特异性，在牙齿形态发生的过程中具有重要的作用，还可能与牙齿的矿化有关。     

Biocompatibility testing of a posterior composite and dental cements using a new organ culture model

Mandibular first molars from day 14 and 17 mouse embryos were cultured in vitro for 7 days in chemically defined Pratt's medium in a submerged culture system. Ameloblast and odontoblast polarization and morphogenesis occurred in the control tooth germs. Discs of Occlusin, Silicate, ChemFil, IRM and Dycal were exposed to the culture system as either fresh material, leached discs (by pre-incubation in media) or the leachate from the incubated discs. Their effects on dental differentiation were assessed histologically. Day 17 tooth germs were slightly more sensitive to the effects of the exogenous agents than day 14 tooth germs. In general, silicate and ChemFil were toxic, IRM was slightly less toxic and the major effect was from the leachate. Dycal was toxic but most of this effect resulted from pH changes in the leachate. Occlusin was the most biocompatible material tested. Only a very mild adverse effect was detected, and this appeared to be caused by an agent (not a pH change) released into the leachate.     

Semaphorin 4D inhibits collagen synthesis of rat pulp-derived cells

OBJECTIVE: Semaphorins are a group of secreted and membrane-associated molecules that play important roles in axon navigation. Several semaphorin family molecules are expressed in the pharyngeal arches and tooth germs. We analysed the expression of membrane-associated Semaphorin 4D (Sema4D) in tooth germs, and examined its potential role in regulating the differentiation of rat incisor pulp-derived cells in vitro. DESIGN: mRNA expression was examined by in situ hybridisation. The effects of Sema4D on rat pulp-derived cells were examined by adenovirus-mediated overexpression in vitro. RESULTS: Both epithelial and mesenchymal cells of tooth germs expressed Sema4D at the early bell stage. Later, the odontoblasts predominantly expressed Sema4D, while the epithelial expression greatly decreased. The overexpression of Sema4D in rat incisor pulp-derived cells strongly inhibited mineralisation. This inhibition was preceded by a reduction of collagen fibre production at the level of mRNA synthesis. CONCLUSIONS: These results indicate that Sema4D is expressed in both epithelial and mesenchymal cells of the tooth germs. Sema4D represses collagen synthesis of pulp-derived cells, indicating it might negatively regulate odontoblast differentiation.