乙苯致大鼠肾小管上皮细胞氧化损伤及核因子E2相关因子2和血红素加氧酶Ⅰ蛋白的表达

目的 探讨乙苯对大鼠肾小管上皮细胞氧化损伤及转录调控因子核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶Ⅰ型(HO-1)表达的影响.方法 NRK-52e细胞分别用0、30、60、90 μmol/L乙苯染毒24 h,染毒结束后分别测定细胞外乳酸脱氢酶(LDH)活力和细胞内活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量及过氧化氢酶(CAT)活力,以Western blot检测NRK-52e细胞Nrf2、HO-1的表达.结果 与对照组相比,60、90 μmol/L剂量组细胞外LDH和细胞内CAT活力均增高(P＜0.05),90 μmol/L剂量组细胞内MDA含量高于对照组(P＜0.05),各剂量组细胞内二氯荧光黄(DCF)荧光强度升高(P＜0.05),60及90 μ,mol/L剂量组HO-1和Nrf2表达水平高于对照组和30 μmol/L剂量组(P＜0.05).结论 乙苯可导致细胞氧化损伤,并且通过激活Nrf2,诱导HO-1表达.     

姜黄素对H2O2诱导A549细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的 探究姜黄素对H2O2诱导A549细胞氧化损伤的保护作用及其作用机制。方法 使用不同浓度的H2O2对A549细胞进行不同时长的刺激,使用CCK-8法筛选A549细胞存活率约为50%时的H2O2浓度及刺激时间作为建模条件;通过Hoechst 33258染色及Western blot对模型进行验证;实验分为模型组（Model）、VC组（VC）和姜黄素组（CCM）;采用流式细胞术对细胞凋亡情况进行检测,采用Western blot法对凋亡及氧化应激信号通路相关蛋白进行检测。结果 CCK-8实验结果显示,采用600μmol/L的H2O2对A549细胞进行24h刺激,其存活率为56.45±5.33%,Hoechst 33258染色及Western blot结果证实了模型的可靠性。流式细胞术结果显示,VC组和CCM组细胞的凋亡率与Model组相比均降低（P＜0.05,P＜0.01）,且CCM组降低更加明显（P＜0.01）。Western blot结果显示,与Model组相比,VC组和CCM组Bax、Caspase-3和Keap1表达降低,Bcl-2和Nrf2表达升高,且CCM组较VC组改变更加明显,差异均有统计学意义（P＜0.01）。结论 姜黄素对H2O2诱导的A549细胞急性损伤具有保护作用,可能与其激活Keap1-Nrf2/ARE信号通路,抑制细胞凋亡有关。     

柚皮苷对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞损伤保护作用

目的探讨柚皮苷对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞凋亡的保护作用及机制。方法体外培养H9c2心肌细胞,用H_2O_2诱导建立细胞凋亡模型。实验设对照组、模型组、柚皮苷低、中、高剂量组(10、20、40μmol/L),噻唑蓝法检测细胞活力并用显微镜观察各组细胞形态;原位末端标记法检测H9c2心肌细胞凋亡情况;RT-PCR及Western blot法检测凋亡相关因子Bcl-2、Bax、caspase-3 m RNA及蛋白表达。结果与对照组比较,模型组细胞凋亡率[(17.2±2.1)%]明显升高(P<0.01);与模型组比较,10、20、40μmol/L柚皮苷组细胞凋亡率[分别为(10.7±1.9)%、(5.7±1.2)%、(6.4±1.5)%]均下降(均P<0.05)。与对照组比较,模型组H9c2心肌细胞Bcl-2蛋白表达水平(0.76±0.16)明显下调,Bax、caspase-3蛋白表达水平[分别为(5.42±0.52)、(1.09±0.11)]均上调(均P<0.01);与模型组比较,10、20、40μmol/L柚皮苷组H9c2心肌细胞Bcl-2蛋白表达水平[分别为(1.37±0.11)、(1.65±0.09)、(1.65±0.15)]均上调,Bax、caspase-3蛋白表达水平[分别为(2.78±0.55)、(3.43±0.15)、(2.69±0.26)和(0.59±0.08)、(0.77±0.06)、(0.82±0.05)]均下调(均P<0.05)。结论柚皮苷对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞损伤具有一定保护作用,其机制可能与其对凋亡信号途径的抑制作用有关。     

血红素加氧酶-1对H9c2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用研究

目的:探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对H9c2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用及其作用机制。方法:建立过氧化氢(H2O2)诱导的H9c2心肌细胞氧化应激损伤模型,给予HO-1诱导剂氯化血红素(Hemin)预处理,或给予HO-1抑制剂锌原卟啉(Znpp-IX)共孵育。双波长法检测HO-1活性;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率;Hoechst33342染色和Caspase-3活性检测评估细胞凋亡;硫代巴比妥酸显色法检测丙二醛(MDA)含量,氮蓝四唑显色法检测总超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western Blot法检测NF-κB蛋白表达水平。结果:与H2O2组相比,Hemin显著增加细胞HO-1活性,且该作用能被Znpp-IX阻断。与H2O2组相比,HO-1活性增加能够显著下调细胞凋亡率和Caspase-3活性,降低细胞MDA含量,增加总SOD活性,且上述作用能被Znpp-IX逆转。此外,HO-1活性增加能够显著抑制H2O2诱导的NF-κB激活,且该作用能被Znpp-IX逆转。结论:Hemin诱导的HO-1活性增加可能通过抑制NF-κB激活,维持细胞氧化还原平衡状态,抑制H2O2诱导的H9c2心肌细胞氧化应激损伤。     

铅对SH-SY5Y细胞的Nrf2转录活性及HO-1和γ-GCSc蛋白表达的影响

[目的]研究铅对人神经母细胞瘤细胞株(SH-SYSY)的细胞核因子E2相关因子2(Nrf2)转录活性以及下游血红素加氧酶1(HO-1)和谷氨酸半胱氨酸合成酶(γ-GCSc)表达的影响. [方法]用不同剂量的醋酸铅溶液(0、5、25、125 μmol/L)对体外培养的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)染毒12、24h后,用四甲基偶氮唑蓝法测细胞存活率;用凝胶迁移试验测细胞核内Nrf2-抗氧化反应元件(ARE)结合能力;用Western blot法检测染毒细胞内HO-1和γ-GCSc的蛋白水平.[结果]与对照组相比,醋酸铅染毒使SH-SY5Y的存活率降低,细胞核内Nrf2-ARE结合能力升高,Nrf2调控的下游基因HO-1和γ-GCSc的蛋白表达水平也明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05). [结论]铅对SH-SY5Y细胞毒性作用具有剂量反应关系.铅可激活SH-SY5Y细胞Nrf2的转录活性,并导致Nrf2介导的抗氧化酶HO-1和γ-GCSc的表达水平升高.     

溴氰菊酯及6-羟基多巴胺对PC12细胞Nrf2/ARE通路影响

目的 探讨溴氰菊酯(DM)与6-羟基多巴胺(6-OHDA)对转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路作用的影响及差异.方法 用10 μmol/L溴氰菊酯处理PC12细胞1 h或用100 μmol/L 6-OHDA处理PC12细胞17 h后,用RT-PCR方法检测细胞Nrf2基因和其驱动的靶基因-γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(GCS,由重亚单位GCSh和轻亚单位GCS1组成)和血红素氧合酶(HO-1)基因mRNA表达水平,蛋白印迹(Western blot)方法检测细胞Nrt2蛋白水平,免疫荧光细胞化学技术检测细胞HO-1蛋白水平.结果 DM染毒诱导转录因子Nrf2 mRNA表达、激活Nrf2,Nrf2可能参与DM对Nrf2下游基因GCSh、GCS1以及HO-1表达的调控;6-OHDA能诱导PC12细胞Nrt2 mRNA和蛋白的表达以及激活Nrf2;6-OHDA也诱导细胞HO-1或GCSh mRNA和蛋白的表达.结论 DM与6-OHDA对Nrf2/ARE通路的作用相似,DM是可干扰Nrf2/ARE通路的神经毒物.     

过氧化氢致H9c2大鼠心肌细胞DNA损伤作用

目的 研究不同浓度过氧化氢(H2O2)对H9c2大鼠心肌细胞DNA损伤及诱导细胞凋亡的作用.方法 H9c2心肌细胞处理组分别暴露于50,100,200,400μmol/L H2O2中1,3,6,12,24 h后,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;采用丫啶橙/溴乙锭(AO/EB)双染技术观察细胞凋亡;利用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)观察细胞DNA损伤.结果 H2O2可以引起H9c2心肌细胞损伤,随时间呈剂量效应关系(P<0.05),其中24 h,400μmol/L剂量组细胞存活率最低达40.6%.H2O2可诱导H9c2心肌细胞出现凋亡并观察到明显的凋亡形态学的改变,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中6 h时,100 μmol/L剂量组细胞凋亡最明显,凋亡率达22.2%.H2O2可引起H9c2心肌细胞DNA损伤,且损伤随剂量增加而增大(P<0.01),以400 μmol/L剂量组最为明显,细胞DNA损伤率可达64.0%.结论 H2O2造成H9c2心肌细胞氧化损伤和DNA损伤,随着其暴露剂量和时间的不同表现为凋亡和坏死.     

萝卜硫素激活Nrf2/HO-1通路对阿霉素急性肝损伤小鼠起保护作用及细胞凋亡的影响

目的 探讨萝卜硫素对阿霉素诱导的急性肝损伤小鼠转录因子NF-E2相关因子2/Ⅱ相酶血红素加氧酶1(Nrf2/HO-1)通路及细胞凋亡的影响。方法 小鼠腹腔注射阿霉素建立急性肝损伤小鼠模型，将小鼠随机分成6组：正常组、模型组、萝卜硫素低剂量、中剂量、高剂量组(20 mg/kg、40 mg/kg、60 mg/kg)、干预组(萝卜硫素15 mg/kg)。以肝匀浆指标超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(NO)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)评价萝卜硫素的抗氧化预保护作用，以Western blot法测定肝组织中Nrf2/HO-1水平，以TUNEL法检测组织凋亡细胞。结果 萝卜硫素抗阿霉素所致急性肝损伤与激活Nrf2,调节下游基因HO-1,活化抗氧化因子，抑制细胞凋亡有关。结论 萝卜硫素对阿霉素所致的肝损伤有保护作用，可能是通过Nrf2/HO-1使肝细胞凋亡减少以及调控氧化应激反应，从而恢复正常的肝细胞功能。