哈巴苷对H2O2诱导的大鼠心肌细胞H9c2氧化应激损伤的保护作用

目的探究哈巴苷(HG)对大鼠心肌细胞氧化应激损伤的作用。方法将H9c2细胞随机分为对照组(H9c2组)、哈巴苷组、H2O2组和H2O2+哈巴苷组,用H2O2处理细胞,复制氧化损伤模型。用哈巴苷(4μmoL)处理细胞,CCK8检测细胞增殖,Hoechst染色检测细胞凋亡,二氯荧光乙酰乙酸盐(DCF)法检测细胞内活性氧(ROS),根据试剂盒说明书检测上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)浓度,Westernblot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达。结果与H9c2组比较,H2O2组心肌细胞增殖倍数明显降低,哈巴苷作用细胞4d后,H2O2+哈巴苷组心肌细胞增殖倍数明显高于H2O2组;同时,与H9c2组比较,H2O2组细胞凋亡率明显升高;与H2O2组比较,H2O2+哈巴苷组细胞凋亡率显著降低;H2O2还能显著诱导H9c2细胞Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达,抑制Bcl-2表达;HG能显著减弱H2O2诱导Caspase-3和Caspase-9表达和抑制Bcl-2表达的作用;此外,H2O2组细胞内ROS活性及上清液中SOD和GSH浓度明显低于H9c2组,MDA浓度明显高于H9c2组,H2O2+哈巴苷组细胞内ROS活性及SOD和GSH浓度明显高于H2O2组,MDA浓度明显低于H2O2组。结论哈巴苷能通过抑制氧化应激抑制心肌细胞H9c2凋亡。     

人参皂苷素Rb1通过减轻氧化应激改善大鼠机械创伤诱发的迟发性心脏功能下降

目的 探讨人参皂苷素Rb1（GRb1）对大鼠机械创伤（MT）所致的迟发性心脏功能下降的保护作用。 方法 利用Nobel-Collip创伤仪制备大鼠MT模型,将大鼠随机分为假手术组（Sham）、创伤模型（MT+Vehicle,MT+V）组、创伤GRb1治疗（MT+GRb1）组,检测各组心脏功能、超氧化物歧化酶（SOD）以及丙二醛（MDA）含量的变化;分离培养大鼠乳鼠心肌细胞,将心肌细胞与各组大鼠血清孵育24 h并给予GRb1或超氧阴离子清除剂（TEMPOL）处理,分为对照（SS）组、创伤血清（TS）组、创伤血清+GRb1处理（TS+GRb1）组、创伤血清+TEMPOL处理（TS+TEMPOL）组,检测细胞存活率以及活性氧（ROS）、乳酸脱氢酶（LDH）和MDA含量的变化。 结果 与Sham组相比,MT后2 h大鼠心肌组织中SOD活性显著下降（P<0.01）、MDA水平升高（P<0.01）;MT后24 h心脏功能明显受损,表现为LVDP、±dP/dt_max均显著下降（P<0.01）。给予GRb1治疗可增强心肌组织中SOD活性（P<0.01）、降低MDA水平（P<0.01）,进而改善心脏功能（P<0.05）。对于离体分离培养的大鼠心肌细胞,创伤大鼠血清处理24 h显著增加细胞内ROS和MDA的含量（P<0.01）;利用TEMPOL或者GRb1处理均可减轻（P<0.05）创伤大鼠血清诱导的氧化应激并促进心肌细胞存活。 结论 GRb1通过减轻MT早期诱发的心肌细胞氧化应激保护心肌细胞,进而改善MT导致的迟发性心脏功能下降。     

山楂酸减少高糖介导的心肌细胞损伤和凋亡及其机制

目的 探讨山楂酸处理对高糖介导大鼠心肌细胞H9c2损伤和凋亡分子机制影响。 方法 以高糖诱导大鼠心肌细胞 H9c2为模型,采用乳酸脱氢酶（LDH）法检测细胞损伤情况,TUNEL化学染色检测细胞凋亡率,Western blot检测AMPK的磷酸化水平以及Bcl-2、Bax的表达水平,免疫荧光检测细胞活性氧（ROS）的生成。 结果 ①与对照组相比,高糖组细胞LDH活性和细胞凋亡比率显著增高（P<0.05）,山楂酸处理却能抑制高糖诱导的H9c2细胞LDH的积累,降低细胞凋亡（P<0.05）。②Western blot检测显示,与对照组相比,高糖组p-AMPK、Bcl-2下调（P<0.05）,Bax上调（P<0.05）;与高糖组相比,山楂酸处理组p-AMPK、Bcl-2上调（P<0.05）,Bax下调（P<0.05）,给予AMPK阻断剂 Compound C后可以抑制山楂酸诱发的这些效应（P<0.05）。③ROS检测显示,山楂酸能够抑制高糖刺激的ROS的产生（P<0.05）,而AMPK拮抗剂compound c却能够拮抗山楂酸对ROS的抑制（P<0.05）。 结论 山楂酸能通过激活AMPK信号通路,从而增强BCl-2表达、抑制Bax和ROS生成,拮抗高糖诱导的大鼠心肌细胞H9c2凋亡,对心肌细胞起保护作用。     

依达拉奉保护H9c2心肌细胞对抗化学性低氧引起的损伤

目的探讨新型的自由基清除剂依达拉奉(EDA)能否保护H9c2心肌细胞对抗化学性低氧引起的损伤。方法应用化学性低氧模拟剂氯化钴(CoCl2)处理H9c2心肌细胞以建立化学性低氧损伤模型。应用CCK-8比色法检测细胞存活率;Hoechst 33258核染色法检测凋亡细胞的形态学及数量变化;双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照像测定细胞内活性氧(ROS)水平;JC-1染色荧光显微镜照像检测线粒体膜电位(MMP)。结果应用100～1000μmol/L CoCl2处理H9c2心肌细胞24 h,呈浓度依赖性地降低细胞存活率;在12～36 h范围内,800μmol/L CoCl2呈时间依赖性地抑制细胞存活率;10～40μmol/L EDA或500～2000μmol/L N-乙酰半胱氨酸(NAC,为ROS的清除剂)预处理H9c2心肌细胞1 h呈浓度依赖性地对抗CoCl2对细胞存活率的抑制作用;在800μmol/LCoCl2处理H9c2心肌细胞前1 h,应用40μmol/L EDA预处理细胞不仅可明显的抑制CoCl2诱导的细胞内ROS生成增多,还能抑制CoCl2的致细胞凋亡作用及MMP的损伤作用。结论 EDA能保护心肌细胞对抗CoCl2诱导的损伤作用,此心肌细胞保护作用可能与其抗氧化作用及保护MMP有关。     

人参皂苷Rb1对H9c2细胞缺氧复氧的作用

目的观察人参皂苷Rb1对H9c2细胞缺氧复氧的作用。方法采用人参皂苷Rb1对H9c2细胞缺氧复氧进行预处理,通过检测氧化应激、凋亡指标观察人参皂苷Rb1的作用。将细胞随机分为对照组、缺氧复氧组、缺氧复氧加人参皂苷Rb1(50、100、200μmol/L),按实验设计因素处理后,通过蛋白电泳检测凋亡相关蛋白caspase-3,检测氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS),TUNEL法检测细胞凋亡。结果缺氧复氧处理可使H9c2心肌细胞的ROS和MDA水平显著增加,SOD活性显著下降,上调caspase-3的表达,增加H9c2心肌细胞的凋亡。人参皂苷Rb1预处理可减少缺氧复氧H9c2细胞MDA表达量,增加SOD活性,降低ROS水平,且人参皂苷Rb1预处理可减少缺氧复氧H9c2细胞caspase-3的表达量及凋亡细胞数量。结论人参皂苷Rb1可降低缺氧复氧对H9c2心肌细胞的氧化应激损伤及凋亡,从而对缺氧复氧H9c2心肌细胞起保护作用。     

柚皮素对高糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡及Nrf2/ARE信号通路的影响

[目的]探讨柚皮素(NAR)对高糖(HG)诱导的大鼠心肌细胞(H9c2)凋亡及核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路的影响。[方法]将培养的H9c2细胞分为对照组(正常糖量)、HG组(35.5 mmol/L葡萄糖)、HG+NAR低、中、高浓度组(35.5 mmol/L葡萄糖+6.25、12.5、25.0μmol/L NAR)。用噻唑蓝法检测H9c2细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针染色法检测细胞内活性氧(ROS)水平;Western blot法检测Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)、Bax、Caspase-3、Bcl-2蛋白表达水平。[结果]经HG处理的H9c2细胞增殖活性、Nrf2、HO-1、Bcl-2蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率、ROS水平、Bax、Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。经HG与NAR共同处理H9c2细胞后,NAR低、中、高浓度组H9c2细胞增殖活性、Nrf2、HO-1、Bcl-2蛋白表达水平显著升高,细胞凋亡率、ROS水平、Bax、Caspase-3蛋白表达水平显著降低(P...     

卡维地洛通过PI3K/AKT/GSK3β信号通路对H9c2缺氧/复氧损伤的保护

目的:研究卡维地洛预处理对缺氧/复氧诱导的大鼠心肌细胞保护作用及其机制。方法:对大鼠心肌细胞株(H9c2)进行缺氧/复氧(6h/2h),模拟大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,将H9c2细胞随机分成四组:正常对照组(control组)、缺氧/复氧组(H/R组)、缺氧/复氧+卡维地洛预处理组(H/R+CAR组)、缺氧/复氧+卡维地洛+PI3K/AKT阻滞剂LY294002组(H/R+CAR+LY294002组);分别采用MTT法检测心肌细胞活力,流式细胞仪法检测心肌细胞活性氧(ROS)水平,Western免疫印迹法检测心肌细胞Caspase-3、p-AKT、p-GSK3β蛋白表达情况。结果:与正常组相比,H/R组细胞活力下降,ROS水平升高,Caspase-3表达明显增多;经卡维地洛预处理后,细胞活力明显提高、p-AKT、p-GSK3β磷酸化水平较H/R组显著增加,ROS水平明显降低,而加入PI3K/AKT阻滞剂LY294002后卡维地洛的上述作用显著减弱。结论:卡维地洛预处理能显著减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤,对心肌细胞具有明显的保护作用,其可能的作用机制是通过激活PI3K/AKT/GSK3β通路而提高AKT、GSK3β磷酸化水平,减少ROS产生,增加细胞的活性而实现的。     

石蒜碱上调Notch1信号通路并减轻心肌细胞缺氧/复氧诱导的损伤

目的 研究石蒜碱对H9c2心肌细胞缺氧/复氧（H/R）损伤的保护作用及机制。方法 将H9c2心肌细胞随机分为4组：对照组、H/R组、H/R+石蒜碱低剂量组、H/R+石蒜碱高剂量组；使用CCK-8分析H9c2心肌细胞活力；用试剂盒测定乳酸脱氢酶（LDH）释放量，丙二醛（MDA）和活性氧簇（ROS）的含量，超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性；用流式细胞仪检测细胞凋亡率；Western blot检测Notch1蛋白水平；用Realtime聚合酶链反应检测HES-1、HES-5和Hey-1 mRNA水平。结果 与对照组比较，H/R组H9c2心肌细胞的活力减弱（P<0.05）,SOD和GSH-Px的活性减弱（P<0.05），细胞凋亡率，LDH释放量，MDA和ROS含量，Notch1蛋白水平，HES-1、HES-5和Hey-1 mRNA水平均增加（P<0.05）；与H/R组相比，石蒜碱低、高剂量组H9c2心肌细胞的活力增强（P<0.05）,SOD和GSH-Px的活性增强（P<0.05），细胞凋亡率，LDH释放量，MDA和ROS含量均降低（...     

miR-141-3p靶向调控Keap1对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡、氧化应激和Nrf2/HO-1通路的影响

目的:探讨miR-141-3p通过靶向调控Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞氧化应激、凋亡和Nrf2/血红素氧合酶1(HO-1)通路的影响。方法:体外培养大鼠胚胎心肌细胞H9c2,构建心肌细胞H/R损伤模型。将H9c2细胞随机分为control组(正常培养的H9c2细胞)、H/R组(H9c2细胞经H/R处理)、H/R+miR-NC组(H9c2细胞NC转染经H/R处理)和H/R+miR-141-3p组(H9c2细胞转染miR-141-3p经H/R处理),每组设3个复孔。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测不同组别心肌细胞中miR-141-3p和Keap1表达水平,细胞毒性试验(CCK-8)法检测心肌细胞存活率,流式细胞术检测心肌细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组心肌细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)表达水平,化学荧光法检测各组心肌细胞活性氧(ROS)含量,蛋白免疫印迹法(Western Blotting)检测Nrf2、HO-1蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验和Western Blo...     

微小RNA-34a调控高糖诱导H9c2心肌细胞凋亡的初步研究

目的探讨微小RNA-34a(miR-34a)对高糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响。方法将培养的H9c2心肌细胞随机分为3组:正常组(葡萄糖浓度5.5mmol/L)、高糖组(葡萄糖浓度33mmol/L),抑制剂组(miR-34a抑制剂浓度50nmol/L+葡萄糖33mmol/L)。采用定量PCR检测miR-34a和凋亡相关基因Bcl-2基因表达的变化,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2表达的变化;采用流式细胞术检测细胞凋亡。结果与正常组比较,高糖组心肌H9c2细胞凋亡率明显升高(P<0.05),H9c2细胞miR-34a表达显著上调(P<0.05),H9c2细胞Bcl-2mRNA和蛋白表达减少(P<0.05)。与高糖组比较,抑制剂组H9c2细胞凋亡明显下降(P<0.05),H9c2细胞Bcl-2mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论 miR-34a能调控高糖所致的H9c2心肌细胞凋亡,可能是通过直接抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达而实现的。     

褪黑素对心肌细胞抗过氧化氢损伤的实验研究

目的 :观察 H2 O2 对心肌细胞内活性氧 （ROS）和游离钙 （[Ca2 + ]i）的影响及褪黑素 （MT）的保护作用。方法 :酶消化法原代分离培养乳鼠心肌细胞 ,分别用荧光探针 DCFH- DA和 Fluo- 3- AM标记 ,H2 O2 和 MT处理后 ,流式细胞仪检测细胞荧光强度的变化。结果 :低浓度的 H2 O2 （10 0 μm ol/ L）随着时间的延长可使心肌细胞内的 ROS呈上升趋势 ,30 m in,6 0 m in与 0 min或对照组相比均明显增高 （P<0 .0 1） ;MT干预后上升趋势均明显减弱 ,在 30 ,6 0 min两组均差异显著 （P<0 .0 1）。 [Ca2 + ]i 亦呈显著上升趋势 ,30 min时与 0 min或对照组相比有差异 （P<0 .0 5 ） ,6 0min时与 30 m in,0 min或对照组相比差异显著 （P<0 .0 1） ;MT干预后其上升明显减少 ,两者差异显著 （P<0 .0 1）。结论 :MT有很好的抗氧化效果 ,能起到保护心肌的作用。     

桑葚提取物对脂多糖诱导的心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的影响

目的探讨桑葚提取物(ME)对脂多糖(LPS)致心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的影响及分子机制。方法以正常培养的H9c2细胞作为对照组;用10 mg/L LPS处理的H9c2细胞作为LPS组;分别用50、100、200 mg/L的ME处理H9c2细胞,再用10 mg/L LPS处理,作为ME低、中、高浓度组。将si-NC、si-S100B转染至H9c2细胞中,再用10 mg/L LPS处理,作为LPS+si-NC组、LPS+si-S100B组;将pcDNA、pcDNA-S100B转染至H9c2细胞中,用200 mg/L ME处理,再用10 mg/L LPS处理,作为LPS+ME+pcDNA组、LPS+ME+pcDNA-S100B组。酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平;流式细胞术检测心肌细胞凋亡;Western blot检测Bcl-2、Bax、S100钙结合蛋白B(S100B)的蛋白表达;实时荧光定量PCR检测S100B mRNA表达水平。结果不同浓度ME处理的心肌细胞中TNF-α、IL-6的分泌水平降低,细胞凋亡率显著降低,Bcl-2表达水平显著升高,Bax和S100B表达水平均显著降低,且呈浓度依赖性。干扰S100B表达能抑制LPS诱导的心肌细胞炎症反应和细胞凋亡,S100B过表达则逆转了ME对LPS诱导的心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的抑制作用。结论ME可抑制LPS诱导的心肌细胞炎症反应和细胞凋亡,其机制可能与下调S100B有关。     

AKAP1过表达腺病毒载体构建及其在心肌细胞中的功能初步研究

目的 利用AdEasy腺病毒载体系统构建A激酶锚定蛋白（AKAP）1重组腺病毒载体,初步探索AKAP1在心肌细胞中的功能。 方法 以正常小鼠心肌细胞cDNA为模板,利用PCR获取AKAP1基因,构建腺病毒重组质粒pAdEasy-AKAP1。用293A细胞,包装重组腺病毒Ad-AKAP1颗粒,并用荧光蛋白标记法测定其滴度。用Western blot检测重组腺病毒感染原代小鼠心肌细胞和糖尿病心肌病细胞模型后AKAP1、Caspase-3的表达情况,用流式细胞仪检测原代小鼠心肌细胞内ROS生成水平及AKAP1对高糖状态下心肌细胞凋亡的影响。 结果 构建了携带AKAP1基因的过表达腺病毒载体,并获得5×1010 pfu/ml的高滴度重组腺病毒。重组腺病毒可感染原代心肌细胞和糖尿病心肌病模型H9c2细胞并介导AKAP1过表达（P<0.05）。与阴性对照组相比,过表达AKAP1可抑制高糖高脂状态下心肌细胞内ROS的生成（P<0.05）,可抑制高糖状态下心肌细胞的凋亡和Caspase-3活化（P<0.01）。 结论 过表达AKAP1对高糖高脂状态下的心肌细胞具有潜在保护作用,对心肌功能发挥具有重要作用。其机制可能与AKAP1抑制心肌细胞内ROS生成、抑制Caspase-3活化、抑制细胞凋亡有关。     

OPA1在缺氧心肌细胞凋亡中的保护作用

目的：探讨线粒体融合蛋白OPA1在缺氧环境下心肌细胞凋亡中的保护作用。方法：利用小干扰RNA(siRNA)在体外下调OPA1表达后,用流式检测对缺氧环境下心肌细胞凋亡的影响;用Western blot检测对缺氧环境下心肌细胞线粒体细胞色素c释放及Caspase-3与Caspase-9活性的影响;用流式分析对缺氧环境下心肌细胞活性氧ROS产生的影响。结果：下调OPA1可明显加重缺氧诱导的心肌细胞凋亡;下调OPA1可诱导线粒体细胞色素c释放并同时激活Caspase-3与Caspase-9的活性;下调OPA1可诱导心肌细胞中ROS产生。     

RNA干扰程序性细胞死亡因子4表达对缺氧/复氧H9C2心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨RNA干扰程序性细胞死亡因子4（PDCD4）表达对缺氧/复氧（H/R）H9C2心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法 将H9C2心肌细胞分为对照组、H/R组、H/R+NC组和H/R+siPDCD4组。采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）分别检测4组H9C2心肌细胞中PDCD4 mRNA和蛋白水平,流式细胞仪检测其凋亡率,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测其上清液中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脱氢酶（LDH）水平,Western blot检测磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信号通路相关蛋白水平。结果H/R组H9C2心肌细胞PDCD4 mRNA和蛋白、活化的Caspase-3、Bcl-2相关X(Bax)蛋白、上清液中LDH、MDA水平及凋亡率均高于对照组,而上清液中SOD水平、H9C2心肌细胞Bcl-2和p-AKT蛋白水平均低于对照组（P<0.05）。H/R+siPDCD4组H9C2心肌细胞PDCD4 mRNA和蛋白、活化的Caspase-3、Bax蛋白、上清液中LDH、MDA水平及凋亡率均低于H/R组,而上清液中SOD、H9C2心肌细胞Bcl-2和p-AKT蛋白水平均高于H/R组（P<0.05）。结论 RNA干扰PDCD4表达可抑制H/R引起的H9C2心肌细胞凋亡,其作用机制可能与激活PI3K/AKT信号通路进而降低氧化应激反应有关。     

沙库巴曲缬沙坦对缺氧心肌细胞线粒体动力系统和细胞凋亡的影响

目的 验证沙库巴曲缬沙坦(S/V)能否通过调节线粒体动力系统改善缺氧大鼠胚胎心肌细胞(H9c2)凋亡水平,发挥心脏保护作用。方法 培养H9c2心肌细胞,建立糖氧剥夺模型(OGD),将细胞分为对照组、造模组、药物组。对照组正常培养心肌细胞,造模组采用OGD建模,药物组采用OGD建模后加用S/V 20μmol/L干预处理,每组重复5遍。采用流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧(ROS),JC-1检测线粒体膜电位,蛋白质免疫印迹法(WB)检测线粒体融合蛋白1(Mfn1)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)、动力相关蛋白1(Drp1)、线粒体分裂蛋白1(Fis1)、细胞色素C(CytC)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)及含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)表达情况。采用GraphPad Prism 8统计软件进行数据分析,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。结果 H9c2心肌细胞建立OGD模型,经S/V处理后,光镜下心肌细胞形态学明显改善;流式细胞技术分析结果显示S/V明显降低细胞内ROS水平,抑制心肌细胞凋亡(P＜0.05);荧光显微镜分析结果显示S/V明显改善线粒体膜电位水平(P＜0.05);WB结果显示S/V可明显提升Mfn2、Mfn1、Bcl2蛋白表达水平,降低Drp1、Fis1、CytC、Bax及Caspase-3蛋白表达水平(P＜0.05)。结论 S/V可能通过促进线粒体融合、抑制线粒体分裂调节线粒体稳态,减少ROS生成,减轻心肌细胞凋亡。     

miR-200c-3p靶向XIAP调控缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡

目的探讨miR-200c-3p对缺氧复氧心肌细胞凋亡的影响及作用机制。方法构建缺氧复氧(H/R)H9c2细胞。运用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞中miR-200c-3p、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)信使核糖核酸(mRNA)的表达。将H9c2细胞分为H/R+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、H/R+anti-miR-200c-3p组(转染anti-miR-200c-3p)、H/R+pcDNA组(转染pcDNA)、H/R+pcDNA-XIAP组(转染pcDNA-XIAP)、H/R+anti-miR-200c-3p+si-NC组(共转染anti-miR-200c-3p和si-NC)、H/R+anti-miR-200c-3p+si-XIAP组(共转染anti-miR-200c-3p和si-XIAP),用脂质体法转染至H9c2细胞,再进行缺氧复氧处理。免疫印迹(Western blot)、噻唑蓝(MTT)、流式细胞术检测细胞中XIAP、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病2 X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)的表达、细胞增殖、细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中miR-200c-3p与XIAP的结合力。结果成功构建缺氧复氧H9c2细胞;与正常培养的H9c2细胞比较,H/R组H9c2细胞中miR-200c-3p表达明显上调,XIAP表达明显下调;抑制miR-200c-3p、过表达XIAP均可抑制H/R H9c2细胞的凋亡,下调cleaved Caspase-3、Bax,上调Bcl-2;miR-200c-3p可显著抑制XIAP 3′UTR野生型报告基因活性,并负向调控XIAP的表达;敲减XIAP可逆转抑制miR-200c-3p对H/R H9c2细胞的凋亡抑制作用。结论 miR-200c-3p可诱导缺氧复氧心肌细胞的凋亡,其机制与靶向XIAP有关,可为心血管疾病的治疗提供新靶点。     

番茄红素减轻H9C2心肌细胞缺氧/复氧致内质网应激的相关机制

目的 探讨番茄红素减轻H9C2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)致内质网应激(ERS)的相关机制。方法 H9C2心肌细胞随机分为:①空白对照组、②番茄红素组、③H/R组、④番茄红素+H/R组、⑤4-苯基丁酸（4-phenyl butyric acid,4-PBA）+H/R组、⑥毒胡萝卜素内酯（thapsigargin,TG）组、⑦番茄红素+TG组。流式细胞术检测H9C2心肌细胞凋亡比例;Western blot检测葡萄糖调节蛋白(glucose-regulated proteins,GRP)78、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun-N-terminal protein kinase,JNK)、磷酸化JNK（p-JNK）及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Casepase)-12的表达。结果 与对照组相比,H/R组及TG组细胞的细胞凋亡比例、GRP78、CHOP、p-JNK和Caspase-12蛋白表达量明显增加（P<0.01）;与H/R组相比,细胞凋亡比例及上述蛋白表达在番茄红素+H/R组与4-PBA+H/R组明显下降（P<0.01）;与TG组相比,细胞凋亡比例及上述蛋白表达在番茄红素+TG组也明显下降（P<0.01）;而番茄红素+H/R组与4-PBA+H/R组相比差异不具有统计学意义。JNK蛋白总量表达无明显变化。结论 番茄红素通过抑制ERS致凋亡的相关信号通路CHOP、p-JNK和Caspase-12对H/R H9C2心肌细胞起到保护作用。     

激活Notch信号途径对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用

目的 观察激动Notch信号途径抗心肌细胞缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）损伤的作用及其可能的机制。 方法 将心肌细胞分为4组:常氧+OP9-GFP（OP9为稳转细胞系;GFP:green fluorescent protein为绿色荧光蛋白）组,常氧+OP9-Dll1（Dll1:Delta-like 1为Notch的配体）组,H/R+OP9-GFP组,H/R+OP9-Dll1组。用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,并应用荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）水平的变化。 结果 H/R后心肌细胞的凋亡水平增高（P<0.01）;与表达Dll1的OP9细胞系共培养,则可显著抑制心肌细胞的凋亡（P<0.01）;H/R增高的心肌细胞ROS水平（P<0.05,P<0.01）可以被共培养的OP9细胞系生成的Dll1显著降低（P<0.05,P<0.01）;应用百草枯可促进ROS的生成,而显著抑制Dll1激活心肌Notch信号途径的抗H/R凋亡效应（P<0.01）。 结论 激活Notch信号途径,具有抗H/R后心肌损伤的作用,该作用可能与降低ROS水平有关。     

PEP-1-CAT预处理对H9c2细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的:探讨细胞穿透肽PEP-1介导的人过氧化氢酶(catalase,CAT)对H9c2细胞缺氧复氧损伤的保护作用。方法:利用基因工程方法表达和纯化His-tag-PEP-l-CAT融合蛋白,将H9c2细胞随机分为正常对照组(CTL)、缺氧复氧组(H/R)、H/R加CAT组(H/R+CAT)、H/R加PEP-1-CAT组(H/R+PEP-1-CAT)。分别向H/R+PEP-1-CAT及H/R+CAT组加入2 mol/L的PEP-1-CAT及CAT500μl处理6 h,将各组细胞置于缺氧箱中缺氧21 h,再复氧6 h。采用试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)及丙二醛(MDA)水平;通过流式细胞仪检测细胞的凋亡水平;通过Western blot检测凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:与H/R组相比,H/R+PEP-1-CAT组的细胞的LDH、MDA、细胞的凋亡率及Bax的表达量均明显下降,Bcl-2的表达量升高(P<0.05)。结论:PEP-1-CAT预处理通过抗氧化和抗凋亡的作用发挥对H9c2细胞缺氧复氧损伤的保护作用。