衢枳壳及其近缘种中4种黄酮苷类成分含量测定与相关性分析

摘要：目的 检测衢枳壳、成熟胡柚及其近缘种瓯柑中四种黄酮苷类成分的含量,并分析其与生境因子的相关性。方法 收集衢枳壳、成熟胡柚及其近缘种瓯柑的新鲜样品,建立高效液相色谱HPLC法同时检测样品中新橙皮苷、橙皮苷、柚皮苷与芸香柚皮苷的含量,并考察其与经纬度、海拔之间的相关性,用 SPSS 与EXCEL 2010软件处理数据,组间比较采用ANOVA单因素方差分析。结果 新橙皮苷、橙皮苷、柚皮苷与芸香柚皮苷在1.0~100 μg/mL范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为99.51 %、98.15 %、100.35 %与100.63 %;衢枳壳中芸香柚皮苷、柚皮苷的含量显著高于有籽瓯柑、无籽瓯柑与胡柚,分别达7.1651±0.071 mg/g与26.9576±0.2737 mg/g,瓯柑中新橙皮苷、橙皮苷的含量显著高于衢枳壳与胡柚（*P<0.05）;芸香柚皮苷、柚皮苷含量与纬度、海拔呈显著正相关关系,与经度呈显著负相关关系;橙皮苷、新橙皮苷含量与纬度、海拔呈显著负相关关系,与经度呈显著正相关关系。结论 该方法准确、快速、简便,可用于衢枳壳药材质量控制及其近缘种中黄酮苷类成分的含量测定。     

衢枳壳及其近缘种中四种黄酮苷类成分含量测定与相关性分析

枳壳为芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种的干燥未成熟果实,其中衢枳壳为芸香科植物胡柚Citrus maxima(Burm)Merr.的干燥未成熟果实,是浙江省道地药材,新“浙八味”之一,性微寒,味苦、辛、酸,入肺、脾、大肠经,具有理气宽中、行滞消胀之功效,主治胸胁气滞、胀满疼痛、食积不化、痰饮内停、胃下垂、脱肛、子宫脱垂等症[1]。现代化学与药理学研究表明,枳壳中含有黄酮[2]、挥发油[3]和生物碱[4]等化学成分,具有抑菌[5]、降血脂[6]、抗抑郁[7]等药理活性。目前,枳壳研究多集中在栽培技术、采收时间、干燥加工技术、炮制方法、药理活性等方面[8-11]。而对衢枳壳及其近缘种中黄酮苷类成分含量测定的研究较少,本研究收集衢枳壳、成熟胡柚及其近缘种瓯柑的种质资源,建立高效液相色湘(HPLC)法测定上述样品中四种黄酮苷类成分的含量,并分析其与经纬度、海拔之间的相关性,以期为衢枳壳质量评价及枳壳替代品的资源开发利用提供参考依据。     

HPLC法测定不同产地野菊花两种黄酮苷的含量

目的 通过HPLC法测定不同产地野菊花中蒙花苷与香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量,控制入药野菊花的质量.方法 采用Welchrom C18(4.6 mm×250 mm,5μm),甲醇-水-醋酸(52:46:2)流动相洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长334 nm,柱温为室温,进样量20μL.结果 安徽、山东产的野菊花两种黄酮苷含量较高,约为其他产地的2倍.结论 不同产地野菊花中蒙花苷和香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量差异较大,入药时应选择黄酮苷类含量较高的野菊花.     

RP-HPLC法测定芫花叶中3种黄酮苷的含量

芫花叶为瑞香科植物芫花Daphne genkwa Sieb.et Zucc.的干燥叶。为了扩大芫花及芫花根的药用植物资源，河南中医学院冀春茹教授等自20世纪80年代以来对其化学成分进行了较系统研究，从中发现了多种黄酮苷元及苷类、绿原酸类化合物及木脂素类成分，并发现其水溶性部位对心血管系统有良好的作用，能明显增加冠脉流量，而对心率的影响不明显，并对心肌缺氧有保护作用，还能降低麻醉猫的血压，抑制麻醉猫在结扎左冠状动脉前降支血清磷酸激酶(CPK)活性的升高，静脉注射以后还可产生短暂但明显的降压作用。该部位除含有已分离得到的绿原酸类化合物及其他糖类、无机成分等小分子化合物外，可能含有较多的黄酮苷类化合物。为了进一步探讨其活性成分和为开发新的药用部位提供科学依据，本实验采用RP-HPLC法同时测定了芫花叶中芫花叶苷、木犀草苷和异槲皮苷的含量。     

HPLC法同时测定朝药肾炎草中4种黄酮碳苷成分的含量

[目的]建立可同时测定朝药肾炎草中芹菜素-8-C-阿拉伯呋喃糖、异牡荆素、金圣草素-8-C-阿拉伯呋喃糖和异金雀花素4种黄酮碳苷成分含量的HPLC方法 .[方法]采用SunFire C₁₈ (5μm, 4.6 mm×250 mm)色谱柱,流动相为0.1%(体积分数)冰乙酸的乙腈溶液(B)-0.1%(体积分数)乙酸水溶液(A),梯度洗脱,流动速度为1.0 mL/min,检测波长为335 nm,柱温为50℃,进样量为10μL.[结果]芹菜素-8-C-阿拉伯呋喃糖、异牡荆素、金圣草素-8-C-阿拉伯呋喃糖和异金雀花素分别在0.42～28.00、0.30～20.00、0.90～20.00、0.83～25.14μg/mL的质量浓度范围内与峰面积的线性关系良好,r²>0.999 5.精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD<2.0%;平均加样回收率在94.7%～107.9%之间,RSD<2.0%.[结论]所建立的方法简便快捷,准确有效,可为朝药肾炎草中黄酮碳苷类成分含量的测定提供参考.     

三七中黄酮成分的含量测定

目的 考察不同产地，不同规格，不同采收期三七中的黄酮含量的变化规律。为三七的质量评价提供依据。方法 采用紫外分光光度法，在249nm处测定槲皮素的量。结果 不同产地，不同采收期和不同规格的三七中黄酮含量有明显差异。结论 产地，采收期和规格对三七黄酮含量具有重要影响。     

不同产地牛蒡子中所含成分牛蒡苷含量测定

目的:对不同产地牛蒡子中所合成分牛蒡苷进行含量测定.方法:以HPLC法测定了辽宁20个产地牛蒡子中牛蒡苷的含量.结果:测定牛蒡子中牛蒡苷含量,方法稳定、可靠.结论:本实验通过对不同产地牛蒡子进行含量测定,表明不同地区生态环境对牛蒡子中牛蒡苷含量有一定影响.     

超高效液相色谱法同时测定覆盆子中3种黄酮成分的含量

目的建立同时测定覆盆子中3种黄酮成分含量的超高效液相色谱法(ultra performance liquidchromatography,UPLC)。方法采用BEH C18(2.1mm×100mm,1.7μm)色谱柱;以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱;流速0.12ml/min,检测波长365nm,柱温20℃。结果椴树苷、槲皮素、芦丁分别在1.31～13.08、1.92～19.20、49.20～492.00ng范围内与峰面积呈现良好的线性关系。平均加样回收率分别为99.7%、99.7%、100.2%,相对标准偏差分别为1.03%、0.74%、1.42%。不同产地和采收期覆盆子中3种黄酮成分含量有显著差异。结论该方法简单、可行,可作为覆盆子药材质量控制的参考依据。     

RP-HPLC法同时测定不同产地女贞子中8个主要成分的含量

目的建立同时测定不同产地女贞子中羟基酪醇、红景天苷、类叶生麻苷、特女贞苷、橄榄苦苷、女贞苷G13、木犀草素、芹菜素8种化学成分的HPLC方法。方法采用YMC-Pack ODS-A色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,以乙腈-0.2%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 m L/min,检测波长为265 nm,柱温为25℃。结果在上述色谱条件下,羟基酪醇、红景天苷、类叶生麻苷、特女贞苷、橄榄苦苷、女贞苷G13、木犀草素、芹菜素获良好分离,分别在21.3852、22.6723.2、21.3852、251000、22.8273.8、23.91074、0.9459.45和2.327.4μg/m L内线性关系良好,平均回收率分别为101.43%、100.91%、101.90%、98.86%、99.07%、98.86%、99.17%、102.25%。结论该方法简便,重复性好,可以更好地用于女贞子药材的质量控制。     

UPLC-MS/MS法同时测定三叶青中13种黄酮类成分的含量

目的:建立超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法同时测定三叶青中13种黄酮类成分(原花青素B1、原花青素B2、儿茶素、异槲皮苷、芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷、紫云英苷、槲皮苷、丁香亭-3-O-葡萄糖苷、阿福豆苷、槲皮素、山柰酚和异鼠李素)的含量.方法:超高效液相色谱采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm);流动相为乙腈(A)-0.1％甲酸水溶液(B),梯度洗脱;流速0.25 mL/min;柱温40℃.质谱条件采用电喷雾离子源负离子模式进行检测,多反应监测模式定量测定.结果:在考察的浓度范围内,13种黄酮成分均呈良好的线性关系(r≥0.99753);回收率和RSD分别为95.84％～107.38％和0.84％～2.65％.结论:该方法同时测定了三叶青中13种黄酮类成分的含量,方法可行,重现性好,可为三叶青的质量控制提供参考.     

三叶青水提物抑制小鼠痛经作用

目的 观察三叶青水提物对小鼠痛经模型的影响.方法 采用连续灌胃给药后,观察三叶青水提物对缩宫素诱发的小鼠离体子宫体平滑肌收缩及扭体反应的影响.结果 发现三叶青水提物对缩宫素诱发的小白鼠扭体反应有较好的对抗作用(P＜0.01);对正常小白鼠离体子宫平滑肌的收缩活动无明显影响,在浴槽终质量浓度为(50～200 mg/ml)...     

鸦葱中黄酮苷类成分的提取分离与结构鉴定

目的：阐明鸦葱(Scorzonera ruprechtiana Lipsch. et Krasch.)中化学成分,为进一步开发利用其药用价值提供实验数据。方法：以鸦葱全草为原材料,用70%乙醇冷浸提取,经大孔树脂柱色谱纯化,用硅胶、ODS柱色谱分离其化学成分,利用紫外光谱测定仪、红外光谱仪、核磁共振仪测定其化学成分的光谱学数据。结果：根据在薄层色谱中呈现单一斑点结果,从鸦葱全草中分离得到3种黄酮苷和1种倍半萜苷,经理化常数测定及光谱学数据分析鉴定其化学结构,分别为5,7,3′,4′- 四羟基黄酮-8-C-β-D-葡萄糖碳苷（Ⅰ）;5,7,3′,4′-四羟基黄酮6-C-β-D-葡萄糖碳苷（Ⅱ）;5,7,4′-三羟基黄酮6-C-β-D-木糖-(1→2)-β-D-葡萄糖碳苷（Ⅲ）;3-氧-β-D-吡喃葡萄糖基3 -羟基- 1α,5α,7α H-4(15),10(14),11(13)-三烯-12,6α-愈创木内酯（Ⅳ）。结论：从鸦葱全草中分离得到3种黄酮苷和1个其他成分。该3种黄酮苷（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）为首次从鸦葱中得的黄酮苷类化合物。     

鸦葱中黄酮成分的提取分离及结构鉴定

目的：提取、分离鸦葱中的黄酮成分并鉴定其结构,为开发利用其药用价值提供实验依据。方法：取鸦葱全草粉末,用70％乙醇提取,提取液经大孔树脂、硅胶、ODS柱、高效液相色谱仪分离纯化,并对分离的化合物进行结构鉴定。结果：分离得到3个化合物,经光谱学数据分析和理化常数鉴定其分别为：5,7,4′- 三羟基黄酮-8-C-β-D-吡喃葡萄糖碳苷、5,7,4′- 三羟基黄酮-6-C-α-L-吡喃阿拉伯糖8-C-β-D-吡喃葡萄糖碳苷及5,7,3′,4′- 四羟基黄酮-6-C-α-L-吡喃阿拉伯糖8-C-β-D-吡喃葡萄糖碳苷。结论：3种化合物均为首次从鸦葱中得到的黄酮苷类化合物。     

三叶青乙酸乙酯提取物诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡

目的:评价三叶青乙酸乙酯提取物(ethyl-acetate fraction of extracts from Tetrastigma hemsleyanumDiels et.Gilg,EAFT)诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用。方法:体外培养HT-29细胞。FITC标记annexinⅤ/PI染色流式细胞术分析细胞凋亡率。ELISA法测定细胞组蛋白/DNA碎片。Western Blotting分析细胞Bax蛋白和细胞色素C的表达。结果:EAFT以浓度依赖方式诱导annexinⅤ染色阳性细胞百分率和组蛋白/DNA碎片增加(P<0.01)。10.0 mg/L EAFT分别作用HeLa细胞6 h、12 h和24 h,细胞色素C和Bax蛋白表达上调。结论:EAFT具有诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用,其作用机制与激活线粒体途径有关。     

比色法在花粉总黄酮含量测定中的应用研究

目的 探讨比色法在测定花粉总黄酮含量的可行性和应用价值.方法 以芦丁为对照品,采用比色法,对油菜、荞麦、玉米、黑松和赤松6种花粉中的黄酮含量进行了测定.结果 在选定的实验条件下,光密度与溶液中芦丁的含量呈线性关系,总黄酮含量的平均回收率为99.7%,黄酮在不同花粉中的含量差异很大,其中油菜花粉黄酮含量较高,松花粉中黄酮含量甚少.结论 比色法在测定花粉总黄酮含量上是可行的,该方法操作简单,结果可靠.     

HPLC-MS/MS法同时测定薄荷药材中4种黄酮苷的含量

目的 建立HPLC-MS/MS同时测定薄荷药材中橙皮苷、香叶木苷、香蜂草苷、蒙花苷4种黄酮苷含量的方法.方法 采用Inertsil ODS-3色谱柱(4.6×150 mm,5μm),柱温30℃,流动相为甲醇-0.1％甲酸水,以0.5 mL/min的流速梯度洗脱,进样量2μL;质谱条件:采用电喷雾离子源进行正离子模式检测,多反应监测模式(MRM)用于定量测定.结果 薄荷药材中4种成分橙皮苷、香叶木苷、香蜂草苷和蒙花苷能完全分离;峰面积与浓度呈良好的线性关系.平均回收率(n=6)分别为99.40％、98.63％、99.08％、98.62％,RSD分别为2.5％、2.7％、2.6％、2.4％.结论 该方法简便、快速、准确、专属性高,适用于薄荷药材中橙皮苷、香叶木苷、香蜂草苷、蒙花苷含量的同时测定.     

紫外分光光度法测定水蔓菁中总黄酮的含量

目的建立水蔓菁中总黄酮的含量测定方法。方法采用紫外分光光度法,以芦丁为对照品,测定波长为410nm。结果芦丁在3.1-24.8μg/ml范围内线性关系良好,回归方程为A=34.9×10-3c-0.0005,r=0.9999;精密度RSD=0.3%;平均回收率在98.0%-102.0%之间。结论该方法准确、可靠,可以用于水蔓菁药材的质量控制。     

RP-HPLC法测定五味子中三种成分的含量

目的:建立反向高效液相色谱法测定五味子中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量的方法。方法:采用SUNTEK Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),Dikma Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以水-甲醇梯度洗脱为流动相,流速:1 mL/min,检测波长:254 nm。结果:五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素进样量均在0.02μg~1.0μg范围内与峰面积有良好线性关系,r2=0.999 9、1.0、0.999 8;平均回收率分别为98.5%、98.1%、98.6%;RSD分别为1.2%、1.4%、2.4%(n=9)。结论:该方法方便、准确、专属性好,适用于五味子的质量控制。     

HPLC法测定酸模属植物根中蒽醌类成分的含量

目的：考察酸模属植物根中蒽醌类成分的含量,以评价其药用价值。方法：采用ＨＰＬＣ法对５种酸模属植物根及３个不同产地羊蹄根中的蒽醌类成分进行含量测定。结果：该属５种植物根中蒽醌类成分的含量范围分别为：大黄素０．０５１％～０．３０３％、大黄酚０．０９０％～０．３２０％、大黄素甲醚０．０２５％～０．１４２％;３个不同产地羊蹄根中的蒽醌类成分的含量范围分别为：大黄素０．０５１％～０．１２５％、大黄酚０．１２７％～０．１９３％、大黄素甲醚０．０４９％～０．０９６％。结论：巴天酸模及羊蹄根中的蒽醌类成分含量相近,从化学上支持两者都作为“羊蹄”入药的传统用法;不同产地及生境的羊蹄根中,蒽醌类成分含量存在差异,３种蒽醌类成分以南京产羊蹄为最高;金不换及酸模根中蒽醌类成分较高,而齿果酸模中各成分含量均较低。     

瓜蒌薤白颗粒中多糖的含量测定

目的:从瓜蒌薤白颗粒中提取多糖并测定其含量。方法:以葡萄糖为对照品,采用硫酸-苯酚法测定瓜蒌薤白颗粒中多糖含量。结果:标准曲线回归方程为A=7.16C-0.0124,r=0.9998,加样回收率为98.04%,RSD=2.80%。结论:该法操作简单,重复性较好,可作为瓜蒌薤白颗粒中多糖含量测定的方法。