应用转染BMP7基因组织工程软骨修复兔膝关节软骨缺损观察

目的 构建转染骨形态发生蛋白-7(BMP7)基因组织工程软骨,观察对家兔膝关节软骨缺损的修复作用.方法 将转染BMP7基因的软骨细胞(5×109个/L)接种于胶原-纤维蛋白凝胶的支架中,培养14 d后移植于家兔膝关节软骨表面,直径为5.0 mm,深达软骨下骨板的全层软骨缺损部位.移植后4、8、12周处死家兔,通过创面形态观察、组织形态的光镜观察、BMP7基因在移植部位的表达,评价转染BMP7基因组织工程软骨对兔膝关节软骨缺损的修复作用.结果 转染BMP7和未转染BMP7基因组织工程软骨培养物的体积分别为9 mm × 9 mm×2 mm和8 mm×8 mm×2 mm.转染BMP7基因组移植于家兔膝关节软骨后4、8、12周,均有软骨缺损修复作用,且移植部位有红褐色BMP7 mRNA和棕红色BMP7蛋白表达.移植后12周修复效果佳.优于未转染BMP7基因组.结论 转染BMP7和未转染BMP7基因组织工程软骨对兔膝关节软骨缺损均有修复作用,但转染BMP7基因组织工程软骨修复作用更强.     

BMP-7水平与肾移植慢性排异患者肾功能的关系

目的探讨肾移植慢性排异患者血清和尿液中骨形态发生蛋白（BMP）-7水平与肾功能的相关性。方法采用ELISA法检测肾移植慢性排异患者的血、尿BMP-7及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达,比较其在不同肾功能分期中的表达。结果随着肾功能分期升高,肾移植慢性非异患者血清和尿液BMP-7水平呈降低趋势,TGF-β1呈增高趋势（P均〈0.05）。结论肾移植慢性排异患者血清和尿液BMP-7水平变化与肾功能损伤程度呈反比,可作为评价肾移植慢性排异的疗效及预后的指标。     

骨形态发生蛋白4与血管钙化的相关性

骨形态发生蛋白4(BMP-4)是转化生长因子β(TGF-β)超家族成员之一,属于多功能生长因子,在胚胎发育、血管生成、细胞增殖、分化、骨骼形成、异位成骨、骨折修复等方面具有重要作用。血管钙化(VC)是一个与骨发育相似的可调控的复杂的生物学过程,其中心环节是血管平滑肌细胞(VSMC)向成骨样细胞转化。近年的研究发现,BMP-4可能参与血管钙化的发生和发展,但具体机制尚未清楚,文章就其相关关系的研究进展作一综述。     

重组人骨形态发生蛋白-7抗体的制备及鉴定

目的利用重组人骨形态发生蛋白-7（rhBMP-7）制备抗体,为BMP-7临床应用奠定基础。方法采用皮内多点注射法将rhBMP-7免疫新西兰大白兔4次,每次间隔2周。免疫后颈动脉插管取血。ELISA法测定抗血清效价,蛋白免疫印迹技术确定抗血清特异性、最佳稀释度、灵敏度。结果抗血清效价为1：640000;通过从小鼠骨组织及肾脏组织中提取的BMP-7证实抗体有很好的特异性,抗血清的最佳稀释度为1：5000-1：50000,灵敏度为1～100ng。结论成功制备了rhBMP-7抗体,该抗体具有很高的特异性及灵敏度。     

重组骨形态发生蛋白-7的复性及纯化

目的探讨重组骨形态发生蛋白-7（rhBMP-7）的复性及纯化获得高纯度rhBMP-7二聚体的方法。方法表达rhBMP-7的工程菌经发酵、裂菌、提取包涵体后,4℃下依次在尿素浓度为4、2、1 mol/L的磷酸盐缓冲液中透析使蛋白复性,然后再通过层析色谱纯化去除杂蛋白。结果纯化后rhBMP-7以单体和二聚体形式存在,纯度达95%以上,其中rhBMP-7二聚体含量可达60%以上。结论初步建立了先复性然后在低脲浓度下纯化的方法,能够获得含量较高的rhBMP-7二聚体。     

血清BMP-2、BMP-4检测在慢性肾脏病大鼠主动脉钙化中的意义

目的建立慢性肾脏病(CKD)大鼠主动脉钙化模型,探讨血清骨形态发生蛋白2(BMP-2)、骨形态发生蛋白4(BMP-4)与主动脉钙化程度的相关性。方法 55只SD大鼠随机分为对照组(20只)和CKD组(35只,由于预实验中CKD组大鼠后期存在死亡现象,为保证实验过程每个时间的实验样本量充足,因此CKD组样本量较对照组多),分别于第2、4、6、8周收集血液、尿液、主动脉、肾脏;肾脏HE染色评估肾脏病理改变;茜素红染色法、钙含量测定评估主动脉钙化程度; ELISA测定大鼠血清BMP-2、BMP-4水平;免疫组织化学检测主动脉BMP-2、BMP-4蛋白表达。结果与对照组各时间点相比,CKD组大鼠24 h尿蛋白定量、血清尿素氮、肌酐、胱抑素C水平明显增加(P0.05)。肾脏HE染色显示,自第2周起,肾小管出现扩张,小管内棕黄色物质沉积,随时间进展,逐渐出现间质纤维化,肾小球部分萎缩,血管减少,炎性细胞浸润。茜素红染色随时间进展,第8周出现大量橘红色颗粒物沉积伴钙结节形成。CKD组钙含量明显增加且与血清BMP-2 (r=0.929,P0.01)及BMP-4 (r=0.702,P0.01)明显正相关。同时,自模型成功建立第4周,主动脉BMP-2、BMP-4蛋白表达即明显增加。结论血清BMP-2、BMP-4表达增加可作为CKD血管钙化的血清标志物。     

BMP-7过表达抑制大鼠肝星状细胞上皮-间叶转化

目的观察慢病毒介导的BMP-7高表达是否能抑制大鼠HSC-T6细胞发生上皮-间叶转化（epithelial to mesenchymal tran-sition,EMT）,并能拮抗TGF-β1的促EMT作用。方法构建大鼠BMP-7慢病毒表达载体,体外感染HSC-T6细胞株,将成功感染BMP-7重组慢病毒的细胞给予TGF-β1（5 ng/mL）或溶酶体处理。Real-time PCR检测α-SMA、S100A4、E-cadherin mRNA转录水平。Western blotting检测α-SMA、S100A4、E-cadherin、Ⅰ型胶原蛋白表达水平。结果 BMP-7慢病毒感染HSC-T6后,无论TGF-β1存在与否,real-time PCR检测到α-SMA、S100A4 mRNA转录下调,E-cadherin转录上调。Western blotting显示α-SMA、S100A4及Ⅰ型胶原蛋白表达下调,E-cadherin蛋白表达上调。实验组与空病毒对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,空病毒对照组与空白组比较,差异无统计学意义。结论 BMP-7能有效拮抗TGF-β1对HSC-T6的促EMT作用,可能成为肝纤维化治疗的新途径。     

异氟醚通过BMP4/Smad信号通路对自发性高血压大鼠脑损伤的作用机制研究

目的:探究异氟醚通过调节骨发生形态蛋白4(BMP4)及其下游Smad蛋白对自发性高血压大鼠(SHR)脑损伤的作用机制。方法:采用随机数字表法将48只SHR分为模型组、异氟醚组、阳性药物组、异氟醚+LDN193189组,健康大鼠作为健康对照组,每组12只。各组大鼠分别放入氧气箱中,健康对照组、模型组、阳性药物组大鼠通入特殊气体(30%O₂、70%N₂)1 h,异氟醚组、异氟醚+LDN193189组通入混杂2%异氟醚的特殊气体1 h,通过麻醉气体检测仪检测异氟醚含量,确保异氟醚浓度始终保持在2%。通气结束后,异氟醚+LDN193189组大鼠腹腔内注射BMP4/Smad通路抑制剂溶液20μL(LDN193189,5 mg/kg),阳性药物组大鼠腹腔内注射缬沙坦溶液20μL(10 mg/kg),健康对照组、模型组、异氟醚组大鼠腹腔内注射等量的生理盐水。氧气箱通气实验及注射每日1次,持续10 d。无创血压检测仪检测尾动脉收缩压变化;神经学行为评分评价行为功能;脑含水量检测脑水肿程度;原位末端转移酶标记法(TUNEL)染色和尼氏染色观察海马组织病理学变化...     

骨形态发生蛋白-7生物学功能的研究进展

最初发现骨形态发生蛋白(BMP)-7的作用是异位诱导成骨,并根据这一特点应用于治疗临床一些难治性骨缺损疾病.新近发现BMP-7还与泌尿系统、生殖系统关系密切,可用于治疗动物模型中缺血性肾病、炎性肾病、高转换率肾性骨营养不良和血管钙化等.因此,BMP-7具有广泛的功能与应用前景.     

2型糖尿病肾病患者血清中骨形态发生蛋白-7及转化生长因子-β1水平的变化及意义

目的探讨2型糖尿病肾病患者(DN)血清中骨形态发生蛋白-7(BMP-7)及转化生长因子-β1(TGF-β)水平的变化及意义。方法用ELISA法检测T2DM组(87例)及同期门诊健康体检者D组(24例)人群血清中TGF-β1、BMP-7水平,根据尿微量白蛋白/肌酐值(ACR)(<30 mg/g;30³00 mg/g;>300 mg/g)将T2DM组分为正常白蛋白尿A组32例,微量白蛋白尿B组31例,临床白蛋白尿C组24例,同时检测糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FPG)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、总胆固醇(TC)、体重指数(BMI)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。结果糖尿病组患者血清中的水平较健康对照组显著升高,BMP-7的水平较健康对照组显著降低。A组与B组中TGF-β1因子水平未见统计学差异(P>0.05),A组与C组比较有统计学差异(P<0.05);A组与B组、A组与C组以及B组与C组中BMP-7比较均有统计学差异(P<0.05);整体糖尿病组ACR与TGF-β1呈正相关(r=0.433,P<0.001),与BMP-7呈负相关(r=-0.493,P<0.001)。结论 TGF-β1和BMP-7的表达变化可能与DN的进展有关,对其检测和早期靶向治疗可能成为诊断和治疗早期DN的新方向。     

血清炎症因子与慢阻肺急性加重期肺功能的相关性

目的分析血清炎症因子与慢阻肺急性加重期肺功能的相关性。方法分析2014年1月至2015年1月在我院接受诊疗的慢阻肺患者的临床资料。依据患者疾病活动状态分为两组,观察组(急性加重期)及对照组(稳定期)。结果本研究共纳入慢阻肺患者86例,其中观察组46例,对照组40例。观察组患者血清TNF-α水平显著高于对照组(t=2.924,P=0.004);观察组患者血清IL-10水平显著低于对照组,差异具有统计学意义(t=3.093,P=0.003)。观察组患者FEV_1值、FEV_1/FVC值及FEV_1%值均显著低于对照组(P0.001)。Pearson相关性分析显示,观察组血清TNF-α水平与FEV_1呈现显著负相关(r=-0.440,P=0.002);观察组血清IL-10水平与FEV_1呈现显著正相关,具有统计学意义(r=0.629,P0.001)。结论血清炎症因子与慢阻肺患者肺功能密切相关,可用以辅助临床诊疗。     

腔隙性脑梗死患者炎性因子水平与卒中后抑郁的相关性

目的探讨腔隙性脑梗死患者炎症因子水平与卒中后抑郁(PSD)的相关性,分析影响PSD的危险因素。方法回顾性分析安徽省合肥市第二人民医院在2018年4月至2019年4月收治的腔隙性脑梗死患者155例,根据发病后6个月内是否出现PSD分为PSD组(39例)和非PSD组(116例),分析两组患者临床资料,检测胱抑素-C(Cys-C)及超敏C反应蛋白(hsCRP)水平,比较两组患者MRI影像学资料;多因素回归分析引起PSD的危险因素。结果 (1)155例患者中共出现39例PSD,发生率为25.16%;PSD组汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分比非PSD组高,组间比较差异具有统计学意义(t=15.618,P<0.05);(2)PSD组丘脑卒中、额叶卒中总负荷方面高于非PSD组(χ2=23.018,P <0.05);(3)炎症因子方面,PSD组Cys-C水平高于非PSD组(t=10.808,P <0.05);(4)多因素线性回归方程分析显示,丘脑卒中、额叶卒中(β=0.205,0.200,P <0.05)、Cys-C高表达(β=0.484,P <0.05)是导致PSD的独立危险因素。结论腔隙性脑梗死后通过早期发现丘脑卒中、额叶卒中、Cys-C高表达能够预测PSD的发生,做到早期干预可能会减少PSD的发生。     

肿瘤坏死因子基因多态性与炎症性肠病的相关性分析

目的　明确我国汉族人群中炎症性肠病(IBD)患者肿瘤坏死因子(TNF)的基因多态性,探讨IBD的发病机制。方法　采用聚合酶链反应(PCR)、限制性片段长度多态性分析(RFLP)技术对131例IBD患者的TNFα和TNFβ基因多态性进行分析。结果　溃疡性结肠炎(UC)患者TNFα-308 位点基因型频率(15.5%)及等位基因频率(8.7%)显著高于正常人群的4.1%和2.0%(P<0.01),克罗恩病(CD)患者TNFα-308位点基因型频率及等位基因频率与正常人群比较差异无统计学意义(P>0.05);UC和CD患者TNFβ+252位点的基因型频率及等位基因频率与正常人群比较差异无统计学意义(P>0.05);TNFα-308与TNFβ+252位点基因多态性与IBD患者的年龄、性别、疾病的活动性及发病部位比较差异无统计学意义。结论　TNFα-308等位基因与UC发病的易感性相关,TNFα-308 的基因多态性与CD的发病无关;TNFβ+252的基因多态性与IBD的发病无关。     

2型糖尿病患者血清炎性因子与颈动脉粥样硬化的相关性研究

目的 研究2型塘尿病患者血清炎性因子水平与颈动脉粥样硬化的关系.方法 选择124例2型糖尿病患者,采用酶联免疫吸附法测定血清内皮细胞猫附分子1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子1（VCAM-1）,E选择素、白细胞介素6（IL-6）和C反应蛋白（CRP）水平;按颈动脉超声检查结果将糖尿病患者分为颈动脉正常组（38例）、颈动脉增厚组（40例）和颈动脉斑块组（46例）.选择40例健康体检者作为对照组,比较各组血清炎性因子水平.结果 ①颈动脉正常组血清ICAM-1,IL-6及CRP较对照组升高,颈动脉增厚组ICAM-1、VCAM-1、IL-6及CRP水平高于颈动脉正常组,颈动脉斑块组ICAM-1、VCAM-1、E选择素高于颈动脉增厚组,上述指标各组差异均有统计学意义,P 〈0.05,或P〈0.01.②相关性分析显示,颈动脉内-中膜厚度（IMT）增厚程度与糖化血红蛋白（HbAlc）（r=0.472）、ICAM-1（r=0.501）、VCAM-1（r = 0.484）、E选择素（r＝0.289）、IL-6（r=0.425）及CRP（r=0.381）呈正相关.患者HbAlc与ICAM-1、VCAM-1、IL-6及CRP呈正相关.ICAM-1、VCAM-1、E选择素、IL-6、CRP间呈正相关,均P〈0.01或P〈0.05.结论 炎性反应参与了2型糖尿病患者颈动脉粥样硬化的发病过程,血清炎性因子水平可以在一定程度上反映糖尿病患者的颈动脉粥样硬化程度.     

急性脑梗死患者血糖波动与NIHSS评分、mRS评分及血清炎症因子水平的相关性研究

目的 研究急性脑梗死患者血糖波动与血清炎症因子水平、美国国立卫生院研究卒中表（NIHSS）评分和改良Rankin量表（mRS）评分的相关性。方法 将河北大学附属医院神经内科2019年2月—2021年2月间收治的97例急性脑梗死患者纳入观察组,同时将60例健康体检合格者纳入对照组,比较2组血糖波动参数及血清炎症因子,比较不同NIHSS评分患者日内平均血糖波动幅度（MAGE）和全天血糖水平标准差（SDBG）,比较不同mRS评分患者MAGE、SDBG值及炎症因子水平,比较MAGE增高组和MAGE正常组患者NIHSS评分、mRS评分及血清炎症因子水平,采用Pearson检验和Spearman检验进行相关性分析,采用受试者工作曲线（ROC）评价各指标对急性脑梗死预后不良的预测效能。结果 观察组MAGE、SDBG及血清白介素6 (IL-6)、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、高敏C反应蛋白（hs-CRP）水平均显著高于对照组（P<0.05）;不同NIHSS评分患者MAGE和SDBG值差异有统计学意义（P<0.05）;mRS评分> 2分患者MAGE、SDBG值及TNF-α、IL-6、h...     

血清脑源性神经营养因子水平与缺血性卒中后抑郁的相关性

目的 探讨血清脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)与卒中后抑郁(post-stroke depression,PSD)的相关性.方法 前瞻性纳入90例缺血性卒中患者,入院后检测血清BDNF含量,采用美国国立卫生研究院卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale,NIHSS)评定神经功能缺损,采用Barthel指数(Barthel index,BI)评定日常生活活动能力.6个月随访时采用17项汉密尔顿抑郁量表(Hamilton Depression Scale,HAMD)进行抑郁评定,≥17分为抑郁,＞24分为重度抑郁.结果 共40例患者(44.4％)发生PSD,轻度抑郁30例(33.3％),中度抑郁8例(8.9％),重度抑郁2例(2.2％).单变量分析显示,PSD组多发性梗死的患者比例(65.0％对32.0％;x2=9.723,P=0.002)、基线NIHSS评分[(7.05±4.25)分对(4.35±3.14)分;t=3.465,P =0.001]和出院时NIHSS评分[(5.43±3.02)分对(3.11±2.56)分;=3.944,P＜0.001]显著高于非PSD组,而受教育年限[(9.03±4.51)年对(13.45 ±5.02)年;=4.340,P＜0.001]、血清PDNF浓度[(16.754 ±4.451) pg/ml对(29.551 ±3.213)pg/ml;t =15.827,P＜0.001]以及出院时BI[(55.00±28.10)分对(83.11±27.11)分;=4.809,P＜0.001]显著低于非PSD组.多变量logistic回归分析显示,高血清BDNF水平是PSD的独立保护因素(优势比0.571,95％可信区间0.416 ～0.967;P=0.003).结论 高血清BDNF水平是PSD的独立保护因素.     

Correlation between serum leptin,cytokines, cartilage degradation and functional impact in obese knee osteoarthritis patients

Aim of the workThe aim of the present work was to correlate between serum level of leptin, matrix metalloproteinase-13 (MMP13), interleukin-1β (IL1β), tumour necrosis factor (TNF-α), nitric oxide (NO) and functional impact in obese patients with knee osteoarthritis (KOA).Patients and methodsThe study included 84 obese patients suffering from primary KOA. The knees were examined; pain assessed by visual analogue scale (VAS) and Lequesne’s index for functional impact calculated. Serum leptin, MMP13, IL1β, TNF-α and NO were assessed.ResultsThe mean age of the patients was 54.64 ± 7.7 years. They were 72 females and 12 males (F:M = 6:1) with a mean BMI of 35.29 ± 4.8. Sixty patients had knee effusion which was bilateral in 54 (64.3%), unilateral in 6 (7.2%) while 24 (28.6%) did not have any effusion. Knee deformities were present in 60 (71.4%) patients. Female patients were only significantly higher than males regarding Lequesne’s index (15.08 ± 4.4 vs 11 ± 3.4, p = 0.003). Patients with knee deformity had significantly higher VAS (9.12 ± 1.3 vs 6.96 ± 0.46, p = 0.001), IL1β (621.1 ± 98.8 vs 503.9 ± 74.6 pg/ml, p = 0.001), TNF-α (115.4 ± 29.1 vs 87.4 ± 4.4 pg/ml, p = 0.001), NO (67.32 ± 5.7 vs 59.2 ± 2.2 μmol/L, p = 0.001), MMP13 (33.98 ± 2.24 vs 30.1 ± 1.7 ng/ml, p = 0.012) and leptin (13.2 ± 1.6 vs 10.4 ± 0.6, p = 0.004) than those without. The VAS, Lequesne index, IL1β, TNF-α NO, MMP13 and leptin were significantly higher in patients with bilateral knee effusion (p < 0.0001 for all) compared to those with unilateral effusion or without. Leptin significantly correlated with BMI, VAS, Lequesne’s index, IL1β, TNFα, NO and MMP13 (p < 0.0001 for all).ConclusionLeptin plays a key role in obese patients with knee OA. It significantly correlates with knee pain, functional impairment, inflammatory cytokines and cartilage degradation.     

冠心病患者体内前蛋白转化酶枯草溶菌素9水平与炎性因子的相关性分析

目的:探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)患者血浆前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)与血脂各指标及性因子的相关性。方法:入选210例未行降脂治疗的胸痛患者,入院后根据冠状动脉造影检查结果分为冠心病组120例和对照组(非冠心病)90例。收集临床资料,采集空腹静脉血检测血常规、血生化等各项指标。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测患者血浆PCSK9、白介素10(IL-10)水平。结果:两组资料对比,CAD组吸烟及糖尿病史的比例高于对照组,空腹血糖、LDL-C、IL-10、PCSK9水平明显高于对照组,HDL-C水平低于对照组,差异有统计学意义。Logistic回归分析显示在调整了性别、高血压、TG、TC、载脂蛋白A1(Apo A1)、Apo B因素后,老年、吸烟、糖尿病史、LDL-C、脂蛋白(a)、HDL、PCSK9是CAD的独立危险因素。PCSK9与LDL-C、Apo B水平呈正相关;与炎性标志物hs-CRP、中性粒细胞和IL-10呈正相关。结论:PCSK9是CAD的独立危险因素,与动脉粥样硬化(As)的形成和发展有密切关系。PCSK9水平与抗炎细胞因子IL-10及hs-CRP正相关,提示IL-10和hs-CRP与PCSK9共同参与了AS的形成和发展。