应用多重PCR技术检测120株蜡样芽胞杆菌毒力基因

目的 应用多重PCR技术对蜡样芽孢杆菌毒力基因进行快速检测,为研究蜡样芽胞杆菌致病性提供有力依据。 方法 根据蜡样芽胞杆菌（B.cereus）的cer、hblA、hblC、nheA、nheB、cytK和bceT基因设计并合成引物,优化反应条件,应用多重PCR技术检测120株B.cereus毒力基因序列。结果 多重PCR检测结果非常理想,不同基因扩增条带清晰可辨,蜡样芽胞杆菌呕吐毒素基因cer携带率为96.66%（116/120),细胞毒素cytK基因携带率为42.37%(50/118),肠毒素bceT基因携带率为38.33%(46/120),非溶血性基因nheA携带率为78.33％(94/120),非溶血性基因nheB携带率为83.05％(98/118),溶血性基因hblA携带率为55.0%(66/120),溶血性hblC基因携带率为27.96%(33/118)。结论 多重PCR结果很好,7对引物所扩增出的DNA条带区分明显,电泳条带清晰,特异性强,敏感度高。本实验对120株蜡样芽胞杆菌7种毒力基因进行检测,为研究蜡样芽胞杆菌致病性提供有力依据。     

北京朝阳164株蜡样芽胞杆菌耐药性及腹泻毒力基因分析

目的了解北京朝阳2013年-2014年164株蜡样芽胞杆菌生化分型、耐药及毒力基因携带情况。方法全自动细菌鉴定药敏系统进行药敏试验,手工生化分型,PCR检测毒力基因。结果 164株蜡样芽胞杆菌分成13型,主要为3型(45株)、8型(29株)、1型(19株)、12型(16株)、9型(14株)、6株未分型; 8种基因携带率依次为nheC(59. 15%)、hblC (49. 39%)、bceT (23. 17%)、cytK (16. 46%)、hblA (14. 02%)、nheA (9. 14%)、hblD (8. 54%)、nheB(6. 70%); 164株蜡样芽胞杆菌对氨苄青霉素、头胞西丁、青霉素G 100%耐药,对其余20种抗生素均敏感。结论 164株蜡样芽胞杆菌主要为3型,无13型、15型; 78%菌株至少携带一种毒力基因,52%菌株携带2种以上毒力基因,nheC携带率最高,食品来源菌株均不携带cytK;青霉素类、头孢类药物100%耐药。     

温州市市售奶粉蜡样芽胞杆菌污染情况调查及毒力基因分析

目的了解温州市市售奶粉中蜡样芽胞杆菌的污染状况及毒力基因的携带情况。方法采集温州市市售奶粉样品,依据国家标准GB 4789. 14—2014进行蜡样芽胞杆菌分离鉴定,并采用PCR法对分离株进行毒力基因检测。结果 400份奶粉样品,共检出76株蜡样芽胞杆菌,检出率为19. 00%。其中复合型非溶血性肠毒素nhe基因、溶血素BL基因携带率分别为75. 00%、21. 05%,2. 63%菌株携带呕吐毒素基因,非溶血性基因nhe基因与肠毒素FM基因为主要毒力基因。结论温州市市售奶粉存在一定程度的蜡样芽胞杆菌污染,且分离的蜡样芽胞杆菌毒力基因携带率较高,存在潜在的食品安全隐患。     

陕西食品中蜡样芽胞杆菌毒力基因的分布及分子分型研究

目的了解陕西省食品中蜡样芽胞杆菌的毒力基因的分布及分子分型情况。方法采用PCR方法对2016年本省不同地区不同食品中收集到的123株食源性蜡样芽胞杆菌的10种毒力基因进行检测,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)的方法对携带呕吐基因的蜡样芽胞杆菌进行分子分型,并用Bio Numerics软件对结果进行聚类分析。结果 123株蜡样芽胞杆菌均携带有毒力基因且均携带3种以上,最多携带9种。nhe基因和ent FM基因是本省的主要毒力基因。不同地区溶血素hbl基因的分布差异有统计学意义,不同食品bce T基因的分布差异有统计学意义。8株携带呕吐基因的蜡样芽胞杆菌的PFGE结果显示没有聚集性。结论本省食源性蜡样芽胞杆菌毒力基因携带率较高,基因型多样,对食品安全和公共健康构成潜在的毒性威胁,具有一定的安全隐患。     

蜡样芽胞杆菌及毒素引起食物中毒的实验室检测

目的:探讨食物中毒实验室检测机制。方法:采集中毒者肛拭子、剩余食物,带回实验室进行金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌检验。结果:4份剩余食物其中3份样品检出蜡样芽胞杆菌,并蜡样芽胞杆菌菌落总数>105 cfu/g,所有样品的细菌生化反应结果一致。并在剩余食物中检出蜡样芽胞杆菌肠毒素。肛拭子和剩余食物均未检出金黄色葡萄球菌。结论:按WS/T.82-1996诊断标准,可判定此次是由蜡样芽胞杆菌所引起的食物中毒。     

一起副溶血性弧菌食物中毒的调查与分析

目的分析食物中毒的原因,查明致病菌。方法对14例食物中毒患者进行流行病学调查,3例食物中毒患者肛拭子、1份粪便标本及7份剩余菜肴进行病原菌的分离、鉴定,并对分离菌株进行血清学分型、毒力基因多重PCR检测tdh、trh和toxR基因试验、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型。结果 3份食物中毒患者肛拭子、1份粪便标本中均检出副溶血性弧菌,经血清学分型、毒力基因多重PCR检测、PFGE分子分型试验,4份患者标本的分离株试验结果完全一致。均为副溶血性弧菌,血清型为O4∶K9,毒力基因tdh阳性、trh阴性和toxR阳性,脉冲场凝胶电泳图谱的聚类分析结果显示:4株副溶血性弧菌的带型相似度为100%。7份剩余菜肴均未检出相关致病菌。结论根据流行病学调查,实验室检测分析,这是一起由副溶血性弧菌污染食物所致的食物中毒。     

蜡样芽孢杆菌所致食物中毒病原学诊断的实验研究

目的：为快速诊断由蜡样芽孢杆菌引起的食物中毒，采取营养琼脂与MYP同时进行实验研究。方法：采集可疑食物、患者肛拭、呕吐物、物体表面涂抹物，按文献^[1,2]方法进行蜡样芽孢杆菌分离鉴定、药敏试验。结果：采集样品78份，检出蜡样芽孢杆菌59株，阳性率为73．42％；药敏试验结果表明：蜡样芽孢杆菌对庆大霉素等9种抗生素敏感。结论：蜡样芽孢杆菌食物中毒分二个类型，呕吐型及腹泻型，根据生化分型，引起本区食物中毒呕吐型为Ⅰ、Ⅱ、Ⅸ型，腹泻型为Ⅷ、Ⅸ型。用营养琼脂进行检测定量，简便、快速、敏感，更能获得准确的结果。     

贵州省食源性蜡样芽孢杆菌毒力基因及耐药研究

目的 了解贵州省食源性蜡样芽胞杆菌的毒力基因分布及耐药谱,为蜡样芽胞杆菌食源性疾病的防治提供参考依据。方法 采用PCR方法对2015-2017年贵州省60株食源性蜡样芽胞杆菌进行10种毒力基因的检测;采用K-B法检测10种抗生素的敏感性。结果 60株蜡样芽胞杆菌共发现16种毒力基因携带模式,其中nheB、nheC检出率100%,nheA、entFM为96.67%(58/60),hblA为63.33%(38/60),hblC为56.67%(34/60),hblD为53.33%(33/60),bceT为15%(9/60),ces为3.33%(2/60)。60株蜡样芽胞杆菌对庆大霉素、氯霉素、环丙沙星、万古霉素敏感率100%,对四环素、红霉素、克林霉素、氨苄西林、甲氧苄啶的敏感率分别为98.33%、91.67%、86.67%、13.33%、3.33%,对头孢吡肟100%耐药。结论 贵州省食源性蜡样芽胞杆菌毒素基因携带率较高,存在引起食源性疾病的风险。氨苄西林、甲氧苄啶、头孢吡肟不建议作为蜡样芽孢杆菌引起的食源性疾病的临床治疗用药。     

珠海保税区发生蜡样芽孢杆菌食物中毒事件的处置

〔目的〕调查引起此次食物中毒的原因,防止口岸区域内再次发生类似的突发公共卫生事件。〔方法〕对疑似食物中毒患者的发病特点、临床表现、流行病学特征进行调查和分析;采集确诊病例呕吐物、肛拭子,食堂从业人员肛拭子,以及发病前一天早、中、晚餐和当天早餐食物留样以及可疑食品生河粉进行实验室检测。〔结果〕经临床诊断,28例疑似食物中毒患者中有8例确诊为食物中毒。所有食物留样和生河粉样品以及病例呕吐物中均检出蜡样芽孢杆菌,生河粉样品的蜡样芽孢杆菌计数为13×107cfu/g。从业人员肛拭子中2份检出奇异变形杆菌,1份检出大肠埃希菌,未检出金黄色葡萄球菌。〔结论〕这是一起由蜡样芽孢杆菌污染食物而引起的集体食物中毒事件。口岸辖区内的企业职工食堂存在食物中毒隐患,口岸检验检疫机构应将其作为食品卫生监督的重点,加强管理以杜绝类似事件的发生。     

河南省洛阳市餐饮食品中蜡样芽孢杆菌污染状况及毒力基因分析

目的 检测河南省洛阳市餐饮食品中蜡样芽孢杆菌的污染状况和毒力基因携带情况,为防控该菌引起的食源性疾病提供参考依据。方法 2021年,按照《国家食品污染物和有害因素风险监测工作手册》的要求,从洛阳市餐饮服务环节和流通环节采集餐饮食品样品113份,定量检测蜡样芽孢杆菌,并采用PCR方法对分离得到的31株蜡样芽孢杆菌菌株所携带的10种毒力基因进行检测。结果 蜡样芽孢杆菌总检出率为27.43%(31/113)。不同种类食品中,熟制米面的蜡样芽孢杆菌检出率最高,为32.69%(17/52)。第三季度蜡样芽孢杆菌的检出率最高,为39.53%(17/43);不同季度蜡样芽孢杆菌检出率差异有统计学意义(χ²=8.607,P=0.014)。不同采样地点中流动摊档食品蜡样芽孢杆菌的检出率最高,为37.50%(12/32)。散装食品蜡样芽孢杆菌的检出率(28.26%)略高于预包装食品(23.81%)。100%菌株至少携带一种腹泻型毒素基因,共计12种毒力基因携带模式,非溶血性肠毒素基因nheA、nheB检出率最高,为96.77%;未检出呕吐型毒素基因ces。结论 洛阳市餐饮食品中蜡样芽...     

一起由多种血清型副溶血性弧菌引起的食物中毒的实验室检测分析

目的研究引起本次食物中毒的副溶血性弧菌血清型和分子分型的特征。方法采集患者肛拭子、剩余食物和水样样本进行致病菌检测,对分离的可疑致病菌进行鉴定、PCR毒力基因检测和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型。结果从27份样本中分离出16株副溶血性弧菌,分属8个血清型;经PFGE分型,16株菌共产生11种带型,相似度为51.45%;12株菌携带tdh基因,所有菌株均不带有trh基因。结论此次食物中毒由多型别的副溶血性弧菌混合感染引起。建议在处理由副溶血性弧菌引起的食物中毒的过程中,每一个样本均需挑取多个可疑菌落,留待后续的检测。     

一起两种致病菌引起的食物中毒的检验分析

目的:确定一起因食用炒米饭引起的食物中毒的病原菌。方法:GB/T4789-2003食品卫生微生物检验,GB/T4789-2010食品安全国家标准2010年最新食品安全检验方法及生产规范。结果:从一份食剩炒米饭中检出蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌,蜡样芽胞杆菌计数6.1×106,10份呕吐物和8份肛拭子中检出蜡样芽胞杆菌,5份呕吐物和4份肛拭子中检出金黄色葡萄球菌。结论:此次食物中毒是由蜡样芽胞杆菌和金黄色葡萄球菌污染食物引起的。     

一起菌痢疫情实验室检测分析

目的查明某校食物中毒事件的原因,为有效控制和处置疫情提供技术支持。方法采集患者粪便、肛拭子、呕吐物;厨师粪便、肛拭子;留样食物和水样进行致病菌检测,对分离的可疑致病菌进行鉴定、药敏试验、PCR毒力基因检测和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型比较溯源。结果从患者样品中分离出13株宋内志贺菌;经PFGE分子分型证明13株菌为同一带型;所有菌株均带有ipa H基因,11株携带ial基因,3株携带Sen基因,均不带有Set1基因;分离株对磺胺耐药率最高为61.54%。结论结合实验室结果和流行病学调查,可证实宋内志贺菌是引起这次菌痢疫情的病原菌。     

沈阳市2012—2021年食源性致病菌监测蜡样芽孢杆菌多位点可变数量串联重复序列的分型分析

目的 利用多位点可变数量串联重复序列分型(MLVA)技术,对沈阳市在各类食品检出的蜡样芽孢杆菌进行分子分型,为预防预警食物中毒提供技术支持。方法 采集2012—2021年沈阳市食源监测样品中蜡样芽孢杆菌阳性菌株61株,利用PCR方法,结合毛细管电泳,对样品选择Bcms-08、Bcms-17、Bcms-18、Bcms-19、Bcms-20共5个位点进行蜡样芽孢杆菌MLVA分子分型。结果 61株的蜡样芽孢杆菌有24个基因分型,共分为3个聚类群,其中食物来源相同的菌株基因分型基本一致,但相同食物来源的菌株又处在不同聚类群的基因分型中。结论 蜡样芽孢杆菌MLVA分型呈较好的多态性,大部分菌株亲缘关系较近,相似度较高,无明显的聚集性。由于研究中缺少食物中毒爆发菌株及食品外环境分离株,样本数量有限,所以对致病菌的基因分布尚有局限性。     

一起副溶血性弧菌食物中毒的病原学分析及分子分型溯源研究

目的对1起食物中毒事件分离的副溶血性弧菌进行病原学检测及分子分型溯源研究。方法按照《食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》GB 4789.7—2013对事件中病例的粪便/肛拭子、可疑食物等10份样本进行副溶血性弧菌的分离和鉴定。利用荧光PCR对分离出的副溶血性弧菌特异的ToxR基因进行检测,并采用多重荧光PCR对其进行不耐热性溶血毒素(tlh)、耐热直接溶血素(tdh)毒力基因和耐热相关溶血素(trh)毒力基因进行检测;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术进行电泳获得指纹图谱,并经Bio Numerics软件对其进行聚类分析。结果从4例病例的粪便/肛拭子和2份可疑食物样本中共分离出6株副溶血性弧菌,含5种血清型,分别为O1:KUT、O1:KUT、O3:K6、O4:KUT、OUT:KIII、O3:KUT。6株副溶血性弧菌均扩增出副溶血性弧菌特异的ToxR基因。所有菌株tlh基因均为阳性,分离自病例的粪便/肛拭子的4株菌株tdh毒力基因均为阳性;分离自可疑食物的2株菌株中有1株为tdh毒力基因阳性,另1株为阴性;所有分离菌株trh毒力基因均为阴性。聚类分析显示,菌株间相似系数为62.3%~100.0%。分离自可疑食物的菌株与病例的菌株带型不一致,为不同菌株,分离自病例的同一血清型的菌株同源,不同血清型为不同克隆。结论这是1起由携带tdh毒力基因的O1、O3、O4等多种血清型的不同克隆副溶血性弧菌混合感染引起的食物中毒事件。     

一起副溶血性弧菌引起的群体性食物中毒事件溯源分析

目的 对一起副溶血性弧菌引起的群体性食物中毒事件进行溯源分析,为避免类似食物中毒事件发生提供依据。方法 对采自该食物中毒事件现场的接触者肛拭子、食物样本、环境涂抹样本进行病原学检测,并对分离出的副溶血性弧菌进行毒力基因鉴定、血清学分型和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型。结果 采集的38份样本中,有21份（19份肛拭子、2份环境涂抹样本）检出副溶血性弧菌,检出率为55.3%。分离出的21株副溶血性弧菌血清型均为O3:K6,其tlh/tdh毒力基因为阳性,PFGE分子分型显示高度同源（同源性在98.7%～100.0%之间）。结论 综合流行病学调查结果和实验室检测结果判定,引起该群体性食物中毒事件的病原菌为携带tlh/tdh基因的O3:K6型副溶血性弧菌。建议监管部门加强卫生监管力度,避免类似事件的发生。     

脉冲场凝胶电泳技术对一起变形杆菌引起的食物中毒的分型研究

目的：运用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术对变形杆菌进行分析。方法：对本地区一起由奇异变形杆菌引起的食物中毒进行常规鉴定后,对分离到的菌株进行PFGE分析,观察引起食物中毒的菌型是否为同一菌株引起。结果：此次食物中毒共分离到6株奇异变形杆菌,其中4株肛拭子中分离,2株剩余食品中分离,除一株从肛拭子分离的外,其余5株的PFGE型别相同。结论：此次食物中毒的爆发为同一株奇异变形杆菌引起,PFGE可以作为食物中毒中对细菌进行鉴定的分析技术。     

成都市91株副溶血性弧菌血清型、 耐药性及毒力基因检测

摘要:目的　了解成都市副溶血性弧菌食物中毒疫情分离菌株和生鲜冻水产品分离菌株血清型分布、耐药性及毒力基因携带状况,为成都市副溶血弧菌疾病防治提供科学依据。方法　对检出的91株副溶血性弧菌采用血清凝结实验血清分型;采用E-test药敏试验进行耐药性检测;用荧光PCR检测菌株的tdh、trh、tlh毒力基因。结果　91株菌分属于8个群26个血清型,主要为O1群（36.26%）,其次是O4群（23.07%）和O2群（16.48%）;46株疫情患者肛拭分离株O4群（48.71%）、O1群（35.89%）为主;22株鲜冻海产品分离株O1群（45.45%）为主;18株生鲜淡水产品分离株O2群（55.55%）为主。91株副溶血性弧菌均检出tlh,检出tdh基因均为食物中毒患者肛拭菌株,仅有1株食物中毒患者肛拭菌株检出trh基因。E-test实验结果显示,除青霉素和氨苄西林外的其他12种试验抗生素均敏感。结论　成都市引起食物中毒疫情的副溶血性弧菌主要为携带tdh基因的O4、O1群菌株。     

食物中毒中副溶血性弧菌的毒力基因及同源性分析

目的探讨无锡一起食物中毒事件中副溶血性弧菌分离株的毒力基因、耐药性及分子分型情况。方法对5份食品样品、8份环境涂抹样品、7份患者肛拭子、1份厨师肛拭子分别进行致病菌的分离鉴定、毒力基因检测、血清学分型、药敏试验以及脉冲场凝胶电泳(PFGE)图谱分析。结果分离自患者肛拭子的6株副溶血性弧菌血清型为O3∶K6型,毒力基因检测跨膜转录激活蛋白基因(tox R)阳性,耐热直接溶血素基因(tdh)阳性,耐热相关溶血素基因(trh)阴性,PFGE分型图谱一致;分离自食品和环境的2株副溶血性弧菌血清型为O4∶K42型,毒力基因检测tox R阳性,tdh阴性,trh阴性,PFGE分型图谱一致;两者之间的同源性50%。8株副溶血性弧菌对临床常用的8种抗生素均敏感。结论该起食物中毒由O3∶K6型副溶血性弧菌感染引起,排除了所采集食品和环境样品被污染作为传染源的可能。     

应用多重实时荧光PCR方法确诊一起副溶血性弧菌所致食物中毒

目的采用多重实时荧光PCR对一起疑似食物中毒的样本进行快速检测,结合病原学的结果,确定病原体。方法2015年5月广西东兰县发生了一起疑似细菌性食物中毒。应用多重实时荧光PCR方法对留存食品和患者肛拭子标本进行副溶血性弧菌4种毒力基因的检测,同时对样本进行病原学检测。结果共检测15份食品样本和12份肛拭子标本,除了从1份肛拭子标本中分离培养出O3∶K6副溶血性弧菌外,其余标本均未分离出食源性致病菌。从8份肛拭子标本中检出副溶血性弧菌毒力基因,其中所有菌株均携带tdh、tlh和orf8基因,3株携带trh基因。结论这是广西首次利用多重实时荧光PCR技术确诊由副溶血性弧菌引起的食物中毒。多重实时荧光PCR方法可以同时鉴定和检测副溶血性弧菌及其毒力基因,具有快速、灵敏、准确的优点,可为食源性暴发事件提供快速、可靠的检测结果。