结核分枝杆菌临床分离株药敏结果与耐药程度的关联分析

目的 探讨结核分枝杆菌临床分离株对12种抗结核药物的MIC值及其药敏检测结果 与耐药程度的关联规律,从而为临床制定治疗方案提供借鉴依据.方法 采用液体培养基联合MTT技术进行抗结核药物的MIC检测.对上海市肺科医院2009年1-6月间的163株结核分枝杆菌临床分离株进行RFP、INH、SM、EMB、OFLX、LVFX、MOX、AMK、CPM、PTA、CLA和PAIN的MIC检测和Bactec MGIT快速培养仪药敏检测,并进行MIC与耐药程度的关联性分析.结果 67%(42/62)的SM耐药株MIC≥16 μg/ml,63%(51/81)的INH耐药株MIC≥8 μg/ml,77%(50/65)的RFP耐药株MIC≥8 μg/ml,20%(12/60)的EMB耐药株MIC≥4 μg/ml;43%(25/58)的OFLX耐药株MIC≥8 μg/ml;41%(15/37)的AMK耐药菌株MIC≥16 μg/ml,41%(12/29)的CPM耐药菌株MIC≥4 μg/ml.OFLX耐药株的3个氟喹诺酮类药物的MIC(OFLX、LVFX和MOX的MIC分别为2～128、1～32和0.0625～1 μg/ml)差异有统计学意义(F=16.874,P<0.01);SM、INH、RFP、EMB、OFLX、AMK和CPM在任6种及7种药物同时耐药株中的MIC值(分别为0.5～128、2～64、0.25～128、1～32、1～64、0.5～128和1～128μg/ml)明显高于任1种及2种药物耐药菌株的MIC值(MIC值分别为0.25～128、0.0625～64、0.25～32、0.25～2、0.125～2、0.5～4和1～4 μg/ml,F值分别为20.066、40.499、47.197、70.373、91.432、41.840和21.547,P均<0.05);SM、INH、RFP、EMB在4种药物同时耐药菌株中MIC值(分别为1～128、2～64、0.25～128和1～32μg/ml)显著高于任1种及2种药物耐药株(MIC值分别为0.25～128、0.0625～64、0.25～64和0.25～2 μg/ml,F值分别为26.242、23.563、31.541和64.469,P均<0.05);RFP在MDR酶株的MIC值(2～64 μg/ml)显著高于非MDR的耐药菌株的MIC值(0.25 μg/ml,F=5.613,P<0.05).结论 本研究揭示了常用的12种抗结核药物的耐药程度与常规药敏检测结果 之间的关联规律,为临床医生根据常规药敏结果 制定更加有效的抗结核治疗方案提供重要的借鉴.     

结核分枝杆菌mRNA在利福平快速药敏试验中的初步应用

目的　建立一种Mycobacteriumtuberculosis(结核分枝杆菌 ,MTB)mRNA快速敏感的检测方法并初步探讨其在利福平快速药敏试验中的应用。方法　用超声粉碎和Tripure试剂提取MTB总RNA ,针对α抗原 85B的特定编码序列建立MTBmRNA的RT PCR检测方法 ;观察MTB在含 1、2、4 μg/ml利福平的液体培养基中生长时 ,85BmRNA的动态改变 ,确定快速检测利福平耐药菌株的最佳药物浓度和时间点 ,比较RT PCR和快速培养法对 2 0株临床分离菌株利福平耐药性检测的差异性。结果　 85BmRNA的RT PCR最低检测下限为 10 0 0个细菌。 85BmRNA的动态结果表明 ,在 4 μg/ml利福平中培养 2 4h为最佳药物浓度和时间点。RT PCR和快速培养法对 2 0株临床菌株利福平药敏试验检测结果无显著差异 (χ2 =0 .5 ,P >0 .0 5 ) ,但前者能显著缩短药敏检测周期。结论　检测结核分枝杆菌mRNA的RT PCR方法可望应用于利福平快速药敏试验     

显微镜观察药物敏感度检测技术在二线抗结核药耐药性检测中应用

目的 探讨MODS同时快速检测4种二线抗结核药耐药性的效果.方法 用24孔细胞培养板建立显微镜观察药物敏感性技术,进行二线抗结核药物耐药性检测,并对最佳检测条件进行探讨.将该技术用于上海市肺科医院2007-2008年住院肺结核患者痰标本分离60株结核分枝杆菌对丙硫异烟胺、阿米卡星、卷曲霉素、左氧氟沙星耐药性检测,并与传统罗氏药敏结果进行比较,对2种方法检测结果不符的菌株进行MIC测定.结果 MODS检测丙硫异烟胺、阿米卡星、卷曲霉素、左氧氟沙星药敏结果与罗氏药敏结果符合率分别为96.7%(58/60)、98.3%(59/60)、91.7%(55/60)、96.7%(58/60).以传统罗氏药敏结果为判断金标准,MODS检测敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值及准确性丙硫异烟胺分别为100%、87.5%、87.5%、100%、96.7%,阿米卡星分别为100%、90.0%、90.0%、100%、98.3%,卷曲霉素分别为76.9%、95.7%、83.3%、93.8%、91.7%,左氧氟沙星分别为100%、96.0%、83.3%、100%、96.7%.结论 MODS检测丙硫异烟胺、阿米卡星、卷曲霉素、左氧氟沙星耐药性具有快速、操作简便、价廉等优点,与传统罗氏药敏结果有较高的符合率,可作为MTB耐药性的快速检测方法之一.     

焦磷酸测序技术检测结核分枝杆菌四种药物耐药性

目的 利用焦磷酸测序技术检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、氧氟沙星、阿米卡星的耐药性,并对其临床应用进行评价.方法 收集上海市肺科医院2008-2009年临床确诊的肺结核患者的痰标本培养阳性结核分枝杆菌89株.所有菌株按<结核病诊断实验室检验规程>进行分枝杆菌培养、菌种鉴定.另外10株已知药敏结果的结核分枝杆菌来自上海市肺科医院菌株库.利用焦磷酸测序技术,以10株已知药敏结果和经直接测序已知耐药基因突变情况的结核分枝杆菌为试验菌株,探索焦磷酸测序检测结核分枝杆菌rpoB、katG、gyrA、rrs耐药基因的最佳模式,并用该条件检测89株结核分枝杆菌临床分离株,检测结果与Bactec 960药敏法进行比较.结果 rpoB、gyrA基因检测宜采用焦磷酸测序序列分析模式,katG、rrs基因检测宜采用焦磷酸测序单核苷酸多态性模式.以Bactec 960药敏法测定结果为判断标准,则焦磷酸测序法检测89株结核分枝杆菌临床分离株对利福平、异烟肼、氧氟沙星、阿米卡星耐药性的敏感度分别为98.0%、64.1%、79.5%、78.3%,特异度分别为97.5%、100.0%、90.0%、100.0%,准确性分别为97.8%、77.5%、85.4%、94.4%,该法检测利福平、氧氟沙星、阿米卡星的检测结果与Bactec 960药敏检测结果一致性较好,Kappa值均≥0.7.结论 焦磷酸测序技术检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、氧氟沙星、阿米卡星耐药性具有快速、准确、高通量的优点,是一种可对结核分枝杆菌多种药物耐药性进行快速检测的方法.

Abstract：

Objective To develop an assay to determine Mycobacterium tuberculosis resistance to rifampin, isoniazid, ofloxacin and amikacin by pyrosequencing and evaluate the value of this method in clinical application. Methods Eighty-nine clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis from tuberculosis patients were collected from Shanghai Pulmonary Hospital during 2008 to 2009. All strains were isolated from decontaminated sputum, cultured on Lowenstein-Jensen media and identified by traditional biochemical tests with standard methods. Ten Mycobacterium tuberculosis were selected from the strain bank of Shanghai Pulmonary Hospital. The optimal conditions of detection of rpoB, katG, gyrA and rrs gene by pyroseuencing were determined, using the 10 Mycobacterium tuberculosis strains whose drug susceptibility of Bactec 960 and sequence of rpoB, katG, gyrA, rrs gene were known. Then the drug susceptibility of 89 Mycobacterium tuberculosis clinical isolate strains were detected by pyrosequencing using this conditions and the results were compared with that of the Bactec 960 methods. Results The pyrosequencing program of sequence analysis was suitable for the detection of the mutations of rpoB and gyrA genes, and the program of single nucleotide polymorphism was suitable for katG and rrs genes. Among the 89 Mycobacterium tuberculosis clinical isolates,when using the drug susceptibility of Bactec 960 as the standard, the sensitivity of rifampin, isoniazid,ofloxacin and amikacin is 98.0%, 64. 1%, 79.5%, 78. 3% respectively, the specificity is 97.5%,100. 0%, 90. 0%, 100. 0% respectively, the accuracy is 97.8%, 77. 5%, 85.4%, 94. 4% respectively,tested by pyrosequencing. The results of the detection of resistance to rifampin, isoniazid, ofloxacin and amikacin in Mycobacterium tuberculosis using pyrosequencing technique were almost the same with that of Bactec 960, and Kappa ≥0. 7 in each detection. Conclusion Pyrosequencing is thus a rapid, accurate and high throughput method for detecting Mycobacterium tuberculosis resistance to these four drugs.     

174株耐多药结核分枝杆菌对二线抗结核药耐药情况分析

目的：分析该院耐多药结核分枝杆菌对二线抗结核药的耐药情况,为耐多药结核病的治疗提供参考。方法采用回顾性分析法分析2011年5月至2013年5月结核病患者痰标本培养及药敏结果资料,对比分析耐多药分枝结核杆菌对5种二线药物耐药比率。结果初治耐多药结核分枝杆菌对二线耐药情况如下：耐药顺次由高到低依次为左氧氟沙星、对氨基水杨酸、丙硫异烟胺、阿米卡星及卷曲霉素的耐药比率分别为17．7％、14．5％、12．9％、8．1％及3．2％,耐两种的比率为4．8％,耐3种及3种以上的比率均为3．2％;复治情况的耐药顺次同初治顺次,但耐药比率不同,分别为50．0％、33．9％、25．9％、21．4％和16．1％,耐2种的比率为16．1％,耐3种为13．4％,耐3种以上的为12．5％。初治与复治的各种情形耐药比率比较,差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论该院耐多药结核杆菌耐药比率低于国内平均水平,复治病例耐药比率高于初治。     

结核分枝杆菌快速药敏实验的研究进展

结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的结核病是常见的人类传染病之一。约三分之一的世界人口曾经感染MTB,亚洲地区感染者占全世界的三分之二。中国是全球22个结核病高发国之一,发病人数居世界第2位,仅次于印度[1]。全国第4次结     

MTS在肝癌细胞药物敏感试验中的应用

针对个体进行的化疗药物敏感性试验 ,已用于多种肿瘤的临床用药指导并取得一定的效果 ,ＭＴＴ法即是广泛应用的方法[1] 。在此基础上我们将一种新的四唑盐类化合物ＭＴＳ ,用于肝癌细胞药物敏感试验 ,并取得较好效果。1　材料和方法1 1　肿瘤细胞株培养　Ｈｅｐ Ｇ2 细胞株用含 10 %小牛血清的ＲＰＭＩ 16 4 0培养液培养 ,隔天换液 ,待细胞生长处于对数期 ,将细胞调整为 0 5× 10 6/ｍｌ待用。1 2　标本　本院住院原发性肝癌患者 ,其中男 30例 ,女 10例 ,年龄 2 1～ 6 2 ｙ ,均由病理检查证实。患者术前未进行放疗、化疗。1 3　试剂　ＭＴ…     

结核分枝杆菌两种药敏方法的比较

目的：比较两种药敏方法的差异。方法：BACTEC MGIT960与改良罗氏培养法。结果：128例有8例不相符，符合率为94．1％，两者无明显差异（P〉0．05）。结论：建议用MGIT960做初代培养再用改良罗氏培养法做药敏。     

三种外排泵抑制剂对氧氟沙星药物抗结核分枝杆菌最低抑菌浓度的影响

目的研究三种外排泵抑制剂对氧氟沙星(OFLX)抗结核分枝杆菌最低抑菌浓度(MIC)的影响。方法在96孔板上应用加入变色剂的7H9培养基进行实验。OFLX经倍比稀释后一系列药物浓度对12株结核分枝杆菌临床分离株的抑菌作用作为对照。经过实验确定羰基氰氯苯腙、维拉帕米和利血平三种常用外排泵抑制剂对OFLX抗结核分枝杆菌MIC的影响。结果三种泵抑制剂对OFLX抗8株OFLX耐药菌MIC呈现了不同程度的影响。在8株耐药菌中利血平对OFLX的MIC值降低了32～64倍,影响均非常明显。8株耐药菌中的6株菌维拉帕米与羰基氰氯苯腙两种泵抑制剂对OFLX的MIC影响程度相同,其中4株菌的MIC值几乎不影响,另外2株菌的MIC值降低了32倍。8株耐药菌中的另2株菌维拉帕米与羰基氰氯苯腙对OFLX的MIC值影响的差异却高达32倍。三种泵抑制剂对4株敏感菌OFLX的MIC影响相对一致,影响总体表现较小。结论三种抑制剂因其机制不同导致其对OFLX抗结核分枝杆菌的影响存在差异。对敏感菌影响相对一致,对耐药菌呈现不同的影响程度。     

中性红染色在抗真菌药物敏感试验中的应用

目的为了进一步验证中性红染色方法在抗真菌药物敏感试验中的应用。方法分别测定特比萘芬和伊曲康唑对２２株临床常见皮肤癣菌（红色毛癣菌、须癣毛癣菌、石膏小孢子菌、犬小孢子菌）的最低抑菌浓度（ＭＩＣ）和最低杀菌浓度（ＭＦＣ）值。其中ＭＦＣ值的测定用中性红染色方法与常规培养方法分别进行对比。结果特比萘芬对皮肤癣菌ＭＩＣ值与ＭＦＣ值相同，为０．００１～０．００８μｇ／ｍｌ。结论特比萘芬有抑菌和杀菌的双重作用。中性红染色方法具有方便、快捷的特点，对于判断真菌的活性以及评价抗真菌药物的ＭＦＣ较常规方法更为优越，值得进一步推广应用。     

BACTEC MGIT960在二线抗结核药物药敏试验应用中的效果评价

目的 评价BACTEC MGIT 960进行4种二线抗结核药物药敏试验的效果.方法 用MGIT 960对结核分枝杆菌临床分离菌株进行二线抗结核药物卷曲霉素、卡那霉素、氧氟沙星和乙硫异烟胺的药敏检测,并将结果与L-J比例法结果进行比较分析.结果 111 株结核分枝杆菌临床分离株用MGIT960法与L-J比例法卷曲霉索、卡...     

微量MIC检测判断结核分枝杆菌药敏的方法学研究

目的 建立用微量MIC值判断结核分枝杆菌药物敏感性的方法 ,并进行初步临床应用评价.方法 采用液体培养基MIC测定技术,在96孔U型板中进行检测,以60株已知药敏结果 的本院菌株库保存菌株作为试验菌株, 根据Bactec MGIT结果采用ROC曲线分析建立微量MIC药敏判断界值,最后用80株连续时间段内收集的结核分枝杆菌临床分离株对微量MIC药敏判断界值进行验证和修正.结果 微量MIC药敏法的最佳接种菌量为10~(-3)mg/ml数量级,7～10 d即可报告结果 ,链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇、氧氟沙星、阿米卡星和卷曲霉素的最佳判断界值分别为2、0.25、1、2、1、4和4 μg/ml,其敏感度分别为93.5%、97.7%、93.5%、84.4%、95.8%、91.7%和88.9%, 特异度分别为95.6%、94.6%、100.0%、93.8%、92.9%、95.6%和91.5%.其准确性分别达95.0%、96.3%、97.5%、90.0%、93.8%、95.0%和91.3%. 结论 微量MIC药敏检测方法 具有快速、准确、低成本和操作简单的优点,具有良好的推广应用前景,适合在我国各级结核病专业收治机构使用.     

结核分枝杆菌对一线抗结核药物的耐药情况分析

目的了解东莞市2015-2018年结核分支杆菌对四种一线抗结核药物的耐药情况以及耐药患者人群分布特征,为制定科学的耐药结核病治疗和预防策略提供依据。方法收集东莞市2015-2018年登记的痰培养阳性的肺结核患者3975例,菌群鉴定为结核分支杆菌的标本进行药敏试验。药敏试验采用比例法,药物敏感试验药物种类包含异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)四种一线抗结核药物。结果3751株结核分枝杆菌对一线抗结核药物总体耐药率为25.70%(964/3751),四年间总体耐药率呈逐年增高趋势。单耐药率、耐多药率和多耐药率分别为17.41%(653/3751)、3.81%(143/3751)、4.48%(168/3751)。单耐药中耐链霉素(Sm)比例最高,耐多药中INH+RFP+EMB+Sm四种全耐的菌株比例最高。3751株结核分支杆菌对四种一线抗结核药物的耐药顺位为:Sm14.98%(562/3751)>EMB10.16%(381/3751>INH9.68%(363/3751)>RFP5.01%(188/3751)。卡方检验结果显示,年龄越大越容易耐多药(χ^2=9.27,P<0.05)和多耐药(χ^2=6.18,P<0.05)。复治患者更易患单一耐药(χ^2=11.70,P<0.05)、耐多药(χ^2=200.81,P<0.05)和多耐药(χ^2=4.66,P<0.05)。结论东莞市各耐药率水平低于全国平均水平,但呈现逐年增高水平,防控形势不容乐观。建立持续的耐药监测机制以及提供更多的标准化治疗方案并将其纳入免费治疗序列势在必行。     

结核分枝杆菌培养和药敏试验及菌群鉴定快速荧光法的研究

目的 建立一种经济、快速的结核分枝杆菌培养、药敏和菌群鉴定的方法。方法 用我们研制的快速荧光检测法（本法）与传统的改良罗氏法（L-J法），对分枝杆菌标准菌株及临床分离菌株，同期进行培养、药敏试验和菌群鉴定的对照研究，验证本法培养结核分枝杆菌的特性，确定药敏和菌群鉴定的药物最适应用浓度。结果 本法培养比L-J法检出时间平均提前19．13d，且阳性率高。药敏试验和菌群鉴定中各药物浓度确定为INH0．1μg／ml、RFP1μg／ml、EB2μg／ml、AMK2μg／ml、LVFX2μg／ml、PNB200μg／ml和TCH2、5μg／ml；7～10d可获结果，比L-J法缩短18～21d。结论 本法明显缩短了结核分枝杆菌培养、药敏和菌群鉴定的时间，提高培养阳性率；经济、实用，适合在基层单位推广。     

规范抗菌药药敏试验合理向临床报告检测结果

本文介绍美国临床和实验室标准协会(CLSI)抗菌药药敏试验的规范操作及向临床报告注意事项.共分9部分:(1)常规工作中药敏试验应注意要点;(2)葡萄球菌;(3)肠球菌;(4)肺炎链球菌;(5)肺炎链球菌以外的其他链球菌;(6)不常见的临床分离株及苛养菌;(7)肠杆菌科菌;(8)非肠杆菌科菌菌群;(9)流感嗜血杆菌.笔者还介绍了CLSI M100-S19,2009的文件中的部分新的内容.     

如何正确理解抗真菌药物体外敏感试验结果对临床用药的指导价值

随着临床侵袭性真菌感染患者的增加,真菌疾病的诊断和治疗倍受关注,临床亟须实验室在真菌鉴定和药敏方面提供帮助.本文将围绕临床和实验室共同关心的几个问题展开阐述,包括抗真菌药物体外药敏的发展历史和方法学进展,酵母菌和丝状真菌体外药敏的判读,折点解释以及对于临床的指导意义.本文同时紧密结合临床常用的几种抗真菌药物,以期从操作层面帮助实验室提高真菌药敏的工作水平,帮助临床更好地理解各种抗真菌药物的体外药敏结果.     

应用微孔噬菌体扩增法检测结核分枝杆菌对利福平的敏感性

目的　应用并评价微孔噬菌体扩增法 (micro wellphagereplicationassay ,MPRA)快速检测临床结核分枝杆菌分离株对利福平的敏感性。方法　将适当浓度的利福平溶液作用于结核分枝杆菌临床分离株 ,一定时间后 ,加入噬菌体悬液。应用MPRA法检测利福平药物的敏感性。结果　应用绝对浓度法对利福平敏感的 4 2株菌株中 38株MPRA法敏感 ;绝对浓度法对利福平耐药的 131株菌株中 12 4株MPRA法耐药。MPRA法与绝对浓度法的符合率为 93 6 % (16 2 / 173) ,与绝对浓度法相比 ,MPRA法的敏感度为 94 7% (12 4 / 131) ,特异度为 90 5 % (38/ 4 2 )。结论　MPRA法不失为一种快速检测结核分枝杆菌对利福平敏感性的较好方法