Ⅰ和Ⅲ型脊髓灰质炎病毒Sabin疫苗株间的重组病毒可作为候选Ⅲ型活疫苗株

本文报道在脊髓灰质炎病毒Mahoney株与和减毒Ⅰ型Sabin株间进行重组,应用感染性cDNA克隆构建了4个重组病毒:PV1(SM)IC-8b、PV1(SM)IC-11b、PV1(SM)IC-8a和PV1(SM)IC-11a。这4个重组病毒与其亲本株Mahoney和Ⅰ型Sabin株进行比较,包括猴神经毒力试验和体外表型特征试验。结果表明,主要编码病毒核壳蛋白的基因区段与神经毒力或减毒表型几乎没有关系,影响Ⅰ型病毒神经毒力或减毒表型的主要位点在基因组5′端非编码区。编码核壳蛋白的基因区域表现出对Ⅰ型病毒的神经毒力和减毒表型仅有微弱影响,     

重组HIV-2金丝雀痘(ALVAC)疫苗在食蟹猴中的免疫原性和保护力

作者在26只食蟹猴中对其组建的两种携带2型人类免疫缺陷症病毒(HIV-2)基因的重组金丝雀痘病毒的免疫效果进行了研究.一种是vCP188,表达全部HIV-2env基因产物;另一种是vCP206,表达HIV-2gag和pcl基因产物以及HIV-2env基因产物gp120(TM).用纯化的天然HIV-2gp125或     

表达腮腺炎病毒和猴免疫缺陷病毒抗原的重组麻疹病毒

麻疹病毒 ( MV )是含非节段性负链RNA基因组的包膜病毒。作者构建了一组重组麻疹病毒 ( r MV) ,分别在基因组中不同部位表达腮腺炎病毒 ( Mu V)的 HN或 F表面糖蛋白或猴免疫缺陷病毒 ( SIV)的 env、gag或 pol蛋白。具体方法为 :采用聚合酶链反应法将编码 Mu V的 HN、F糖蛋白以及 SIV的gag、pol、env蛋白的解读框架扩增后 ,分别克隆进载体 P( + ) MPr GFPV(位于 MV P基因下游 )及 P( + ) MHr GFPV(位于 H基因下游 )中 ,得到了一系列不同的含 Mu V及 SIV蛋白基因的真核表达载体。将它们转染 2 93-3- 46辅助细胞系 ,获得 r …     

以金丝雀痘病毒为载体的HIV-1疫苗单独或联合使用gp120免疫的安全性和免疫原性评价

作者在 2期临床研究中考核了金丝雀痘病毒的 1型人类免疫缺陷病毒 ( HIV- 1 )抗原在高危和低危受试者中的安全性和免疫原性。　　重组金丝雀痘病毒 AL VAC v CP2 0 5表达的 HIV- 1基因产物 ,包括 HIV- 1 L AI株gag基因表达的 p55多蛋白 ,HIV- 1 LAI株中可表达蛋白酶活性的 pol基因部分 ,HIV-1 MN株的部分 env基因表达的 gp1 2 0 ,HIV- 1 L AI株的 gp4 1跨膜区。试验中同时使用重组 gp1 2 0亚单位以提高抗体和辅助性T细胞应答。　　试验采用双盲法进行 ,分别在 0、1、3、6月于左臂肌肉注射 v CP2 0 5或安慰剂 ,于右臂注射 gp…     

艾滋病病毒结构蛋白与IFNα-2b表达产物的细胞免疫

为观察艾滋病病毒结构蛋白与IFNα-2b表达产物诱导机体产生细胞免疫的变化,将编码艾滋病病毒(HIV-1)外膜蛋白env、核心蛋白gag与编码干扰素(IFNα-2b)基因分别插人pSFJ16与pSFJ38真核表达载体,利用分子克隆技术构建重组质粒,经脂质体转染与野生型痘病毒在Cos-7细胞内同源重组、筛选、纯化,获得重组痘苗病毒vJ16env/IFNα-2b和vJ38gag/IFNα-2b。免疫小鼠后,检测小鼠周围血与脾淋巴细胞对ConA及LPS的反应性,用流式细胞仪测定小鼠脾细胞CD4~+、CD8~+细胞计数。结果表明,周围血与脾淋巴细胞对ConA、LPS的反应性,实验组与对照组比较差异有显著性(P<0.05);CD4~+T细胞与对照组比较差异有显著性(P<0.05);CD8~+T细胞与对照组比较差异无显著性,但呈增高趋势。结论:重组痘苗病毒能诱导小鼠产生较强的细胞免疫。重组痘苗病毒体外与HIV-1gag阳性血清发生特异性反应,具有免疫原性和免疫反应性。     

用重组禽痘病毒表达HIV-1包膜基因

1型人免疫缺陷症病毒(HIV-1)env基因编码糖基化蛋白前体,其在细胞中被蛋白酶水解成精蛋白(gp)120及gp41.已在gp41氨基末端发现高度免疫显性表位,后者能使健康的血清阳性个体产生体液免疫,在体外能特异性地抑制淋巴细胞增生.此区与Ⅰ型和Ⅱ型人嗜T淋巴细胞病毒的gp21E跨膜蛋白和多种逆转录病毒的免疫抑制(IS)区具有同源序列.作者通过基因重组获得了表达HIV-1SF2株包膜基因的重组金丝雀痘(CP)病毒和禽痘(FP)病毒,并将它的表达情况在鸡胚成纤维细胞(CEF)、猴肾细胞(Vero)及     

HIV-1DNA疫苗和趋化因子

DNA疫苗已被证实具有在动物模型和人体中诱导体液及细胞免疫应答的能力。同样也证实由质粒表达载体传递的基因能在宿主中表达功能蛋白。另外 ,注射编码细胞因子、趋化因子或共刺激分子的质粒 (也称作免疫调节质粒 )能使该技术进一步扩展至定向免疫。作者研究了趋化因子与 1型人类免疫缺陷症病毒 (HIV- 1 ) DNA疫苗共同免疫的效果以及机体对 DNA免疫产生应答后趋化因子水平的变化。　　分别对小鼠和黑猩猩注射 5 0 μg和 5 0 0 μg表达 HIV- 1 env蛋白和 gag/pol蛋白的重组质粒 ,同时注射表达 IL- 8、VIP- 1 0、MIP- 1 α、MCP- 1…     

HIV-1 Gag-gp120嵌合基因在重组杆状病毒系统中的嵌合表达

将中国株HIV-1B亚型gag基因序列克隆到杆状病毒表达载体pFASTBAC1中,将gp120基因以相同的读框克隆到gag基因的3／端下游,构建了重组表达质粒pFge,利用大肠杆菌埃希菌杆状病毒表达系统筛选重组杆状病毒,在昆虫细胞sf9中表达了HIV-1的Gag-gp120嵌合蛋白。     

脊髓灰质炎病毒嵌合体诱生广泛反应性HIV-1中和抗体

1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)包膜蛋白(env)具有广泛的序列异质性和抗原变异性,也存在着抗原性保守位点.理想的疫苗应含有此保守位点,以便诱生能与许多病毒分离株起反应的抗体.作者选用HIV-1跨膜糖蛋白gp41(组特异性抗原决定簇),以Ⅰ型脊髓灰质炎病毒Sabin疫苗株为表达载体(pCASl),用DNA重组技术构建成脊髓灰质炎病毒/HIV-1抗原嵌合体Sl/env/3.     

从1名健康疫苗接种者分离到的重组3型/2型脊髓灰质炎病毒及其包含的嵌合核壳VP1的鉴定

从接种口服脊髓灰质炎疫苗后约 1 2周的 1名 2岁男孩的粪便标本中分离到Sabin3/Sabin2 /Sabin3( S3/2 /3)型间重组脊髓灰质炎病毒。　　由于该分离株的初步鉴定为嵌合 Sabin3/Sabin2核壳结构 ;从而使作者进一步研究了这个病毒的整个基因组序列、抗原特性和温度敏感性。　　研究表明 ,第 1个重组连接位于编码VP1核壳蛋白的基因区 ,在 32 74和 32 85位核苷酸之间 ;第 2个连接则位于 RNA聚合酶区域 ( 6 82 4和 6 82 5位核苷酸 )。重组把 6个 Sabin2衍生氨基酸引入 Sabin3核壳中的VP1羧基末端。重组病毒的全基因组与其亲代 Sabin株在 33…     

新型甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶抑制剂细胞水平评价体系的建立

本文旨在建立以2009新型甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶 (neuraminidase, NA) 为靶点的神经氨酸酶抑制剂 (neuraminidase inhibitors, NAIs) 细胞水平评价体系。NA有促进流感病毒释放的作用, 本研究应用重组病毒技术, 通过将表达NA [A/California/04/2009 (H1N1)] 的质粒、表达流感病毒血凝素蛋白HA (hemagglutinin) 的质粒以及表达敲除外壳基因并带有荧光素酶报告基因的HIV-1基因组共转染至病毒生成细胞, 产生以HA、NA为外壳蛋白包裹HIV-1核心的重组病毒。在病毒释放前加入不同浓度的化合物, 收集病毒上清液感染细胞, 通过测定感染率来反映化合物对重组病毒NA的抑制作用。经用阳性对照药物奥司他韦及其羧酸盐证实本模型能够反映化合物对病毒NA的抑制作用; 在此基础上, 本研究还建立了奥司他韦耐药株评价模型。本研究所建立的体系可用于针对新型甲型H1N1流感病毒及其临床耐药株神经氨酸酶抑制剂的寻找和评价。     

减毒HIV-1辅助基因免疫接种盒的构建

基因免疫接种或DNA疫苗接种能诱导抗1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1）结构和酶基因产物的广泛免疫应答,故作者提出可否利用编码gag/pol/rev以及env/rev与辅助基因免疫原的多重基因表达盒来开发一种新型HIV-1疫苗。包括HIV在内的许多慢病毒的调节基因tat与rev以及辅助基因nef、vif、vpr、vpu和vpx均相当保守,其蛋白产物在病毒致病机理中起重要作用。研究证实,这些基因的蛋白产物具有免疫原性。本研究旨在设计一种安全有效的、含有辅助基因编码的基因免疫原的抗HIV疫苗。     

大肠杆菌表达的甲型肝炎病毒核壳蛋白的抗原性和免疫原性

作者用基因工程方法在大肠杆菌中表达出甲型肝炎病毒(HAV)核壳蛋白VP1基因,研究其表达的Trp E/HAV VP1融合蛋白的抗原性和免疫原性。用限制性内切酶从质粒pHAV_L1307和pHAV_(LB)228中分离得重叠的亚基因组HAVcDNA片段,重组成质粒pHAV113。该质粒含病毒基因组完整的核壳编码区。再从pHAV113中分离得核苷酸位置从2069到3492位1.4千个碱基对(Kb)片段。在片段两端接连EcoRI衔接物再将修饰的片段插入表达质粒pA     

表达HIV-1蛋白的委内瑞拉马脑炎病毒载体:提高疫苗效力的载体设计方案

以减毒疫苗株为基础的促进异源病毒蛋白表达的病毒疫苗载体 ,可诱生抗病毒载体和抗外源蛋白的免疫应答 ,这种策略尤其适用于 1型人类免疫缺陷症病毒 ( HIV- 1)这样的病毒。作者报告了以委内瑞拉马脑炎( VEE)病毒弱毒株为载体表达 HIV- 1蛋白的情况。　　作者将 VEE病毒株改造成含 2个独立的减毒突变 ( E2 Lys2 0 9和 E1Thr2 72 )的突变体 ,并进一步引入 2 6 S亚基因组 m RNA启动子复制拷贝 ,为了产生下游启动子载体 ,将此额外启动子紧接在 E1基因之后插入 ,而上游启动子载体则将额外启动子紧插在真正的 2 6 S启动子的上游。外源性…     

一种新的HIV-1突变体用于制备疫苗

世界专利局最近通过一项将一种新的HIV-1突变体用于制备疫苗的专利申请。这种突变体的RNA Psi位点或编码gag表达产物的核苷酸顺序被改变。修改部位对病毒包裹十分重要。其方法是:1.HIV-1 Psi位点部分或完全缺失。2.核苷酸293～331缺失。3.核苷酸293～313缺失。4.对病毒包裹十分重要的gag核苷酸顺序缺失。5.在2009位置的唯一的Apal p15 gag位点上插入核苷酸顺序CATCGCATC。6.用A取代1508和1517位置的G。7.用A取代1571和1580     

分散在MF59中的微粒——一种有效的抗HIV-1重组蛋白质疫苗的佐剂结合物

作者对包裹重组抗原的丙交酯乙交酯共聚物 ( PL G)微粒分散于 MF5 9乳剂佐剂中的新佐剂配方进行了评价。使用的重组蛋白抗原为 1型人类免疫缺陷病毒 ( HIV- 1 SF2 )rgp1 2 0 (中国仓鼠卵巢细胞表达 )和 HIV- 1 SF22 4gag(酶母细胞表达 )。 PLG/gp1 2 0、PL G/p2 4分别表示包裹有上述抗原的 PLG微粒 ,平均大小为 1μm,约有 2 0 %的抗原于第 1天释放 ,余下的则可持续释放 5 0～ 6 0天。将上述微粒再分散于佐剂 MF5 9中 ( PL G/gp1 2 0+ MF5 9和 PLG/p2 4+ MF5 9) ,给小鼠和狒狒肌肉注射进行免疫学试验。　　结果表明 ,小鼠中 ,…     

含HIV-1gp120基因抗原决定簇的重组脊髓灰质炎病毒的构建及鉴定

目的 构建含HIV-1gp120基因抗原决定簇的重组脊髓灰质炎病毒疫苗,并初步评价其免疫效果.方法 将HIV-1gp120基因抗原决定簇插入到脊髓灰质炎病毒表达载体PSVA14中,构建含HIV-1gp120基因抗原决定簇的重组脊髓灰质炎病毒,通过脂质体介导法将重组脊髓灰质炎病毒转染入Hela细胞,通过PCR,酶切鉴定等方法对重组脊髓灰质炎病毒载体进行了表达鉴定,并通过氯仿-PEG/NaCl-氯仿三步法纯化重组脊髓灰质炎病毒,利用免疫酶法,Western blot方法对重组脊髓灰质炎病毒作了初步的免疫效果的研究.结果 构建的重组脊髓灰质炎病毒在Hela细胞内可以正确的表达gp120基因,并能感染293细胞而不产生细胞病变,并能随293细胞的传代被复制克隆.结论 重组脊髓灰质炎病毒能正确的表达gp120基因,并能感染人正常细胞,初步证实了其生物安全性.     

爱滋病疫苗研制的展望

本文提出了研制爱滋病疫苗的途径,以期促进协作研究,加速疫苗研制过程.爱滋病病毒尽管爱滋病在临床上有其独特性,但爱滋病病毒却与其他已经充分研究的逆转录病毒有许多共同特性。它的基因组能编码少数蛋白,包括几种结构蛋白、病毒复制所需的酶及1~2个功能不明的多肤。具体地说,皿型人类嗜T淋巴细胞病毒/琳巴结病相关病毒(HTLV一111/LAv)基因组含有gag、pof和env三种基因。gag基因编码病毒的核心蛋白(其中一种分子量为18,000,另一种为2吐,000(P24)〕,由gag基因编码的第三种蛋白(分子量为15,000)极可能为核糖核蛋白。pof基因编码复制酶逆转录酶。env基因编码的蛋白(可能有两种)构成病毒的外壳或包膜,其中一种主要包膜蛋白,分子似较大,(分子量110,000~120,000,即gp120),且已充分糖基化,另一种分子量为41,000(gp41)的蛋白,可能是膜转移蛋白,使病毒核心与包膜相连。患者血清中的抗体通常可与大多数主要病毒结构蛋白(核心和包膜)起反应。抗体在宿主防御感染中的作用尚不清楚,但一些感染者的血清能在体外中和HTLv一111/LAv,这一证据表明,有些杭体可能具有保护作用。用现有的技术测定这些扰休(至少是高效价抗体)的阳性率似较低,而且,迄今还不能根据抗体的测定鉴别患者是否得到保护。这与猫白血病病毒感染的情况截然不同。后者中和抗体的存在与对严重感染的防御作用密切相关,而HTLv一111/LAv感染     

新一代HIV疫苗将首次进行临床试验

据推测,由九种主要病毒抗原制成的人类免疫缺陷症病毒(HIV)疫苗(如美国Therion生物制品公司的TBC-3B疫苗)将取代由一种HIV抗原制成的疫苗。这种多抗原疫苗可能首先进入市场。 TBC-3B疫苗的Ⅰ期临床试验由美国国立变态反应和传染病研究所(NIAID)进行。这种疫苗是首次在人体中试验的重组疫苗,它能表达几种主要的HIV蛋白。 公司总裁Panicali说,“公司研究方法是将尽可能多的抗原插入疫苗中以模拟HIV”。在活疫苗病毒的天然结构中表达主要的HIV抗原。将三种HIV基因env、gag和pol插入疫苗病毒中,后者又能产生9种HIV蛋白,包括基质、核心、包膜、核壳体、逆转录酶、整合酶和蛋白酶抗原。仅表达包膜蛋白的疫苗似不能产生病毒株交叉性保护作用。 HIV包膜糖蛋白能诱生结合游离病毒的抗体,因此能进一步预防感染。虽然包     

在分子遗传学基础上研制新脊髓灰质炎病毒疫苗

本文报道用电子计算机分析3个型的脊髓灰质炎病毒(PV)Sabin疫苗株和Ⅰ型Mahoney株[PVI(M)]毒粒RNA全部核苷酸序列的结果,并讨论病毒的基因结构与其生物学性质之间的关系。病毒基因组序列分析方法:从纯化的PV毒粒RNA合成病毒基因组的双链cDNA,经HindⅢ酶处理,并嵌入到PBR322克隆载体的适宜位置,筛选克隆,用Maxam等法测定克隆cDNA核昔酸序列,对非克隆DNA基因组的5′末端序列也作了测定。结果:Ⅰ型脊髓灰质炎Sabin株[PV1(sab)]的毒粒RNA分子有7,441个核苷酸长度,PV2(sab)有7,439个,PV3(sab)有7,434