亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌分子流行病学及耐药基因研究

目的探讨岳阳市第一人民医院耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌（CRAB）的分子流行病学特征,以及碳青霉烯酶基因在介导CRAB对碳青霉烯类药物耐药性形成中的作用。方法收集岳阳市第一人民医院分离的CILAB共65株,其中对亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌（IRAB）38株,亚胺培南敏感鲍曼不动杆菌（ISAB）27株。采用琼情稀释法检测上述细菌对15种抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）,改良Hodge试验筛查碳青霉烯酶;PCR扩增碳肯霉烯酶基因;脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析菌株同源性。结果在检测的15种药物中,敏感性最高的药物为多黏蒂素B-IRAB与ISAB组除对头饱两丁、多黏菌素B耐药性较一致外,对其他抗菌药物耐药性差异均有统计学意义（P〈0．05）;改良Hodge试验阳性率为66％（43／65）,其中38株IRAB中,阳性36株,27株ISAB中,阳性4株;38侏IRAB有32株携带OXA-23基因,1SAl3组菌株中均未检测到OXA-23基因;65株菌主要分为6型,A型52株,是主要的流行克隆。结论本院存在CRAB的流行,主要为A型株。OXA-23基因的产生在介导CRAB碳青霉烯药物耐药中发挥作用。     

广泛耐药鲍曼不动杆菌产碳青霉烯酶基因型和表型分析

目的分析临床分离的鲍曼不动杆菌耐药谱和产碳青霉烯酶表型和基因型。方法应用全自动细菌鉴定仪对从本地三级医院收集的93株鲍曼不动杆菌进行菌株鉴定和药敏试验,用碳青霉烯酶抑制法(carbapenem inactivation method,CIM)检测产碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌耐药表型;PCR法确定产碳青霉烯酶菌株耐药基因型。结果93株鲍曼不动杆菌,广泛耐药株47株(耐药率为50.5%),耐碳青霉烯类56株(耐药率为60.2%)。以亚胺培南为底物的碳青霉烯酶抑制法检出产碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌55株,检出率为98.1%(55/56)。在56株碳青霉烯类耐药株中,TEM-1基因、PER-1基因、OXA-23基因、Ⅰ型整合子基因、adeB基因阳性率分别为75.0%、42.9%、80.4%、73.2%、64.3%,其余耐药基因均未检出。结论碳青霉烯酶抑制法快速、简便,可以作为常规检测产碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌的表型检测方法;目前本地OXA-23和TEM-1型碳青霉烯酶以及Ⅰ型整合子是导致鲍曼不动杆菌广泛耐药和对碳青霉烯酶类耐药的主要原因。     

多药耐药鲍曼不动杆菌主动外排作用研究

目的:观察羰基氰氯苯腙(CCCP)对多药耐药鲍曼不动杆菌耐药水平影响,以探讨主动外排作用在鲍曼不动杆菌耐药中所起的作用。方法:用琼脂二倍稀释法测定鲍曼不动杆菌对哌拉西林等临床常用抗生素的最低抑菌浓度(MIC),观察在CCCP存在条件下MIC值的变化;用PCR法扩增外排泵编码基因adeB。结果:79.2%(19/24)的菌株外排泵表型试验阳性,其中有63.2%(12/19)同时对2种以上的药物有明显的外排作用,这19株主动外排表型阳性菌株adeB基因检测均阳性。结论:外排泵抑制剂在体外能降低多种抗菌药物对鲍曼不动杆菌的MIC,外排泵抑制剂的应用及外排泵编码基因的检测为临床提供一种敏感的检测鲍曼不动杆菌主动外排系统的方法。     

鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型及分子流行病学研究

目的研究宁波地区3家综合性医院临床分离亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌的耐药性、同源性及碳青霉烯酶基因型。方法收集宁波市李惠利医院、宁波市第一人民医院、宁波市第二人民医院碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌28株。琼脂稀释法和E-test法测定14种抗菌药物的最小抑菌浓度值;脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析菌株同源性;PCR及克隆测序分析碳青霉烯酶基因型。结果28株鲍曼不动杆菌对多粘菌素E耐药率最低为4．7%,头孢哌酮/舒巴坦为87%,其余抗菌药物耐药率均高于90%耐药。PFGE分型共分为4型,以A、B两型为主。28株鲍曼不动杆菌中均产OXA-23碳青霉烯酶基因,未检测到VIM、IMP型金属酶基因。结论宁波地区碳青霉烯抗生素耐药鲍曼不动杆菌均产OXA-23型碳青霉烯酶,3家医院均有克隆播散流行。     

OXA 23基因阳性耐亚胺培南鲍曼不动杆菌感染暴发调查研究 FREE

目的了解某院神经内科重症监护室 （ICU） 暴发流行耐亚胺培南鲍曼不动杆菌感染的基因型及耐药机制。方法以API20NE鉴定菌株,纸片扩散法测定分离菌株对常用抗菌药物的敏感性,聚合酶链反应 （PCR） 扩增3种酶基因 （OXA、IMP、VIM）,并对产物进行测序。结果患者痰标本分离的7株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌均携带OXA 23基因,未检出IMP、VIM基因。结论此次暴发流行中,耐碳青霉烯类药物的鲍曼不动杆菌携带的耐药基因为OXA 23基因。     

人工气道患者碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌感染相关因素分析

目的 对存在碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌（CRAB）肺部感染的人工气道患者进行相关因素分析,了解CRAB耐药特点。 方法 研究重症监护病房2016年1月至2019年12月收治的鲍曼不动杆菌肺部感染的268例患者,按其痰培养结果分为CRAB及碳青霉烯类抗生素敏感鲍曼不动杆菌（CSAB）两组,分析两组患者的临床特征,CRAB对常见抗生素的耐药情况,并检测相关耐药基因。 结果 鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药率从2016年为51.61%,上升至2018年86.57%,2019年下降至79.45%,差异有统计学意义（〖XC五号.EPS;P〗=22.81, P <0.001）;CRAB组患者年龄、急性生理与慢性健康(APACHE)Ⅱ评分、机械通气时间、C反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）、病死率等均明显高于CSAB组患者（ P <0.05）;logistic 回归分析显示:合并COPD（ OR =2.095,95% CI :0.117～1.474）、机械通气时间大于10天( OR =68.250,95% CI :3.545～5.374)及感染前使用碳青霉烯类抗生素（ OR =10.846,95% CI :1.784～3.201）是CRAB感染的危险因素。CRAB中含有AmpC、IMP、VIM、OXA-23、OXA-51、aac ( 3)–I、ant（3″）-I、aph（3＇）-VIa、gyrA、parC等多种耐药基因。 结论 重症监护病房CRAB耐药率较高,应减少碳青霉烯类抗生素的使用,缩短机械通气时间,选用敏感抗生素治疗以遏制人工气道患者的CRAB感染。     

Ade ABC主动外排系统及外膜蛋白在鲍氏不动杆菌对碳青霉烯类耐药中的作用研究

目的探索AdeABC主动外排系统及外膜蛋白在鲍氏不动杆菌对碳青霉烯类耐药中的作用。方法随机收集复旦大学附属中山医院临床标本鲍氏不动杆菌40株,以琼脂稀释法测定其对美罗培南、亚胺培南的最低抑菌浓度,按不同的耐药表型分组,进行羰基氢氯苯腙抑制试验,普通PCR扩增外排泵基因adeB,实时荧光定量PCR检测adeB基因表达水平;超声物理法提取外膜蛋白,12%十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析外膜蛋白。结果 40株鲍氏不动杆菌中,对亚胺培南、美罗培南均敏感检出15株,检出率37.5%,亚胺培南敏感美罗培南耐药检出6株,检出率15.0%,亚胺培南、美罗培南均耐药检出19株,检出率47.5%;中山医院鲍氏不动杆菌中,adeB外排泵基因广泛存在,在敏感菌株中存在率也很高;碳青霉烯类耐药组外排泵adeB基因的表达量相对高于敏感组,统计学分析3组之间差异无统计学意义;外膜蛋白分析发现,部分菌株有29 kd的条带丢失。结论主动外排系统和外膜蛋白缺失在鲍氏不动杆菌对碳青霉烯类耐药中可能发挥一定的作用。     

多药耐药鲍曼不动杆菌AdeB外排系统与碳青霉烯类耐药的关系

目的 探讨我国多药耐药鲍曼不动杆菌（鲍氏不动杆菌,MDR-AB）AdeB外排系统对碳青霉烯类抗生素耐药的介导作用.方法 选取全国21家医院MDR-AB菌株101株和敏感菌株12株,用琼脂稀释法检测外排泵抑制剂苯丙氨酸-精氨酸-β-苯胺（PAβN,50 mg/L）对菌株AdeB外排系统的抑制作用及菌株对亚胺培南和美罗培南的耐药情况.利用实时荧光定量PCR技术分析adeB的表达情况,并探讨其与外排表型及耐药之间的关系.结果 101株MDR-AB对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为62.4％和52.5％.1 13株菌株中,共有82株adeB阳性菌株,其中adeB表达比率＞2.5的7株菌株均表现为多重耐药.亚胺培南的耐药组和非耐药组adeB的表达比率分别为1.237±0.159和0.698±0.115,差异有统计学意义（t=2.641,P＜0.05）;而美罗培南耐药组和非耐药组adeB的表达比率分别为1.013±0.148和0.978±0.150,组间差异无统计学意义（t=0.166,P＞0.05）.结论 我国MDR-AB中,AdeB外排泵系统的过度表达介导了其对亚胺培南耐药,并可能和美罗培南耐药有关.     

江西地区鲍曼不动杆菌NDM-1及其他碳青霉烯酶基因检测研究

目的了解江西地区耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)NDM-1及其他碳青霉烯酶基因携带情况,为预防和控制医院感染提供实验室依据。方法收集2015年1月—2016年6月江西地区3所三级甲等医院临床标本分离的CRAB共64株,采用K-B法测定其对常用抗菌药物的敏感性,采用改良Hodge试验和EDTA协同试验筛查CRAB产碳青霉烯酶和金属酶的情况,采用聚合酶链反应(PCR)检测碳青霉烯酶基因,对产NDM-1的鲍曼不动杆菌进行接合试验。结果 CRAB对氨苄西林/舒巴坦、环丙沙星、庆大霉素、左氧氟沙星耐药率高达95.31%、98.44%、90.63%、54.69%。CRAB菌株改良Hodge试验阳性率为76.56%,EDTA协同试验阳性率为96.88%。PCR扩增结果显示,87.50%(56株)的CRAB携带OXA-23、VIM-1基因,18.75%(12株)携带SIM基因,3.13%(2株)携带OXA-24基因,26.56%(17株)携带NDM-1基因。携带NDM-1基因的CRAB均来自于南昌大学第一附属医院,其中64.70%(11/17)表现为泛耐药。接合试验结果显示,携带NDM-1基因的菌株可将NDM-1基因传递给受体菌大肠埃希菌J53,使其获得对亚胺培南的耐药性。结论该地区临床分离的CRAB耐药率高,碳青霉烯酶基因以OXA-23、VIM-1基因型为主,检出NDM-1基因阳性CRAB,NDM-1基因可能存在医院内的克隆传播,应尽快采取有效措施预防和控制NDM-1基因阳性CRAB的传播。     

吴江地区多重耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因携带情况及同源性

目的了解吴江地区临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌(MDRAB)碳青霉烯酶基因携带情况和同源性。方法收集吴江地区3所综合性医院2010年1月—2013年12月临床分离的非重复MDRAB 44株,测定其最低抑菌浓度(MIC);采用聚合酶链反应（PCR）扩增碳青霉烯酶基因OXA 51、OXA 23、OXA 24、OXA 58、IMP、TEM、SHV和GES,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株同源性。结果44株MDRAB主要来源标本为痰（占93.18%）,主要分布在重症监护病房（ICU）、呼吸科和神经外科,各占45.45%、27.27%和13.64%;MDRAB对米诺环素和多粘菌素B均敏感,对哌拉西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢他啶、庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星耐药率均为100.00%,对亚胺培南和美罗培南耐药率均为97.73%。44株MDRAB均检出OXA 51、OXA 23和TEM基因,其中12株菌GES基因阳性,OXA 58和SHV基因阳性各1株,未检测到OXA 24及IMP基因;MDRAB分为A—G 7个型别,分别为19、3、9、3、1、4、5株。A型主要来源于吴江地区的两所大型综合性医院（吴江第一人民医院和盛泽医院）,吴江第一人民医院未发现B、D和E型;E型仅1株,分布在永鼎医院,其余型别散在分布。结论吴江地区临床分离鲍曼不动杆菌多重耐药严重,基因OXA 23和TEM是鲍曼不动杆菌多重耐药的主要原因,并以A、C型为主,呈克隆性传播。     

呼吸ICU耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌耐药基因的携带情况及同源性

目的了解我院呼吸ICU耐碳青酶烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)携带的β-内酰胺酶的耐药基因及其流行特征。方法收集2015年10—12月呼吸ICU临床患者送检标本分离的CRAB。试验菌株进行5种耐药基因(KPC-2、IMP、VIM、NDM-1、OXA-23)PCR特异性扩增,扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳和测序分析,并且进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)同源性分析。结果 2015年10—12月呼吸ICU共分离CRAB22株,其中19株(86.36%)分离于痰。22株CRAB对复方磺胺甲口恶唑的耐药率为59.09%,对米诺环素的耐药率为9.09%,对多粘菌素B均敏感,对其他检测抗菌药物的耐药率均为80%以上。PCR扩增未检出KPC-2、IMP、NDM-1三种耐药基因,而VIM、OXA-23阳性率均为100%。PFGE同源性分析结果:22株菌分为13种不同带型,每种带型包含菌株数为1~5株不等,其中9种带型(69.23%)分别只包含1株菌,其他4种(30.77%)带型包含菌株数为2~5株不等。其中,A5、A7和A8为同一型,A9、A11、A14、A19和A22为同一型,A4、A10和A12为同一型,A16和A18为同一型。结论呼吸ICU分离CRAB携带的β-内酰胺酶耐药基因主要为VIM、OXA-23型基因。同源性分析证实,有小部分为同一克隆株,存在小范围的流行。     

呼和浩特地区耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药性及OXA基因检测

目的了解呼和浩特地区临床分离耐亚胺培南鲍曼不动杆菌(IRAB)的耐药性和OXA碳青霉烯酶基因携带情况,为预防和控制多重耐药鲍曼不动杆菌医院感染提供依据。方法收集2012年1—12月3所呼和浩特三级甲等医院患者临床分离的非重复IRAB49株,采用纸片扩散法进行药敏试验,应用聚合酶链反应(PCR)检测4种OXA碳青霉烯酶基因(blaOXA-51-like、blaOXA-23-like、blaOXA-24-like、blaOXA-58-like)的携带情况。结果 49株IRAB对米诺环素的耐药率(8.16%)较低,对其他抗菌药物均具有较高的耐药率(81.63%~100.00%)。49株IRAB均携带blaOXA-51-like基因(检出率为100.00%),其中42株同时携带blaOXA-23-like基因(检出率为85.71%);3所医院均检出blaOXA-23-like、blaOXA-51-like基因,均未检出blaOXA-24-like、blaOXA-58-like。结论 IRAB呈多重耐药现象,对米诺环素耐药率最低;该地区IRAB的主要耐药机制是产OXA-23型碳青霉烯酶。     

广州市ICU环境中耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的克隆相关性

目的了解广州市重症监护病房(ICU)环境中耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)的克隆相关性,明确其基因分型,为预防和控制医院感染提供依据。方法收集广州市7所医院ICU环境中分离的39株CRAB,采用K-B法测定其对10种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)检测菌株的OXA基因,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)对CRAB菌株进行克隆多态性分析。结果 39株CRAB对左氧氟沙星耐药率最低,为56.4%,对其余9种抗菌药物耐药率均90%。PCR扩增结果显示,39株(100%)CRAB均携带OXA-51基因,37株(94.9%)携带OXA-23基因,OXA-24和OXA-58基因未检出。PFGE技术显示,其中38株CRAB分为5个克隆群,A群为主要流行克隆;MLST分析结果显示,CRAB的主要流行克隆型为ST195。结论广州市ICU环境中存在携带OXA-23基因的CRAB克隆传播,应加强ICU环境的清洁和消毒,减少由CRAB引起的医院感染。     

外排泵adeB基因高表达在鲍氏不动杆菌临床分离株产生泛耐药中的作用

目的探讨外排泵adeB基因高表达在鲍氏不动杆菌临床分离株产生泛耐药中的作用。方法 M-H琼脂稀释法检测临床分离的泛耐药鲍氏不动杆菌(PRABA)对常用抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)及羰氰氯苯腙(CCCP)处理前后MIC值的变化情况,聚合酶链反应(PCR)和实时荧光RT-PCR检测泛耐药株adeB基因及adeBmRNA量。结果 PRABA对环丙沙星、四环素、头孢噻肟较CCCP处理前其MIC下降两个折点;头孢西丁下降4个折点,1号与5号菌株庆大霉素下降6个折点,为原MIC值的1/64;10株PRABAadeB基因阳性,2株全敏感鲍氏不动杆菌(PSABA)未检测到adeB基因,PRABAadeB基因mRNA的表达量平均为(0.84E+3)拷贝。结论主动外排泵adeB基因高表达与鲍氏不动杆菌产生泛耐药相关。     

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌目标性监测

目的了解耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)的临床分布和耐药特征。方法回顾性分析某院2015年1—12月所有住院患者送检标本CRAB检出情况,分析其药敏试验结果。结果 721株AB中检出CRAB231株,CRAB检出率为32.04%。1—4季度中每季度CRAB的检出率分别为48.99%(73/149)、41.98%(68/162)、27.39%(63/230)、15.00%(27/180),呈下降趋势(P0.001)。CRAB主要来源于痰标本(140株,60.61%),其次是创面分泌物(33株,14.28%)和尿标本(24株,10.39%)。CRAB主要来源科室为重症监护病房(101株,43.72%)、神经外科(37株,16.02%)及烧伤整形科(22株,9.52%)。CRAB对氨苄西林/舒巴坦、庆大霉素、左氧氟沙星、环丙沙星的耐药率为85.28%~90.48%,对妥布霉素的耐药率较低(19.48%),未发现对多粘菌素B耐药的菌株。结论 CRAB耐药性较为严重,应针对重点科室进行重点管理,采取科学防控举措,有效减少医院感染事件的发生。     

不同病区分离的鲍曼不动杆菌耐药性差异

目的了解鲍曼不动杆菌在不同病区的医院感染现状及耐药性差异,为有效预防及治疗医院鲍曼不动杆菌感染提供依据。方法回顾性分析某院2012年1月-2013年7月住院患者送检标本中分离的446株鲍曼不动杆菌资料。结果446株鲍曼不动杆菌主要分离自重症监护室（ICU;236株,52.92%),其次是呼吸内科(55株,12.33%)和神经外科（48株,10.76%）;均主要来源于痰标本（共占94.62％）。13种常用抗菌药物的药敏结果显示,ICU分离的鲍曼不动杆菌耐药性最强,其敏感率均＜20%;神经外科分离株耐药性次之,敏感率均＜30%;而呼吸内科分离株敏感率均＞50%,耐药率最低。结论不同病区分离的鲍曼不动杆菌耐药性差异较大,ICU分离株耐药性最严重。