陕西省2000-2007年麻疹野病毒基因特征分析

目的阐明2000-2007年陕西省流行的麻疹野病毒分离株的基因特征,为控制并消除麻疹提供依据。方法2000-2007年采集陕西省麻疹暴发和散发患者的咽喉拭子标本147份,用EB病毒转化的狨猴淋巴母细胞（B95a）分离到麻疹病毒21株,通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）,从分离到的麻疹病毒株中扩增出核蛋白基因羧基末端450个核苷酸片段,再对扩增产物进行核苷酸序列测定和基因分型。结果21株麻疹病毒均属H1基因型,其中H1a18株,H1b3株,H1a和H1b在450个核苷酸片段中的差异为2％～4％。结论H1a和H1b在陕西省的流行状况提示,流行优势株的变化可能受本土病毒变异和邻省输入病毒的双重影响;同时在陕西省存在同一毒株的持续循环。     

广东省东莞市1株麻疹野病毒核蛋白基因分析

目的分析2008年广东省东莞市疫情中分离到的1株麻疹病毒的核蛋白基因序列,了解毒株基因型别及其核蛋白基因变异情况。方法采集麻疹疫情中病例的尿液标本,用VERO-SLAM细胞进行病毒分离培养,对分离到的病毒株通过反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增麻疹病毒核蛋白基因片段,对扩增产物进行测序并与麻疹各基因型代表株及沪191疫苗株进行序列比对和构建进化树分析。结果分离到的麻疹病毒株属于H1基因型H1a亚型。与China93-2毒株同源性最高,为99.1%,与China94-7毒株同源性为97.1%,与其他几株H1亚型的同源性则在97.6%～98.0%之间。与沪191疫苗株同源性为92.9%。结论此次疫情中的毒株属于H1基因型H1a亚型,与中国其他地区的流行情况一致。与其同亚型的毒株相比变异较小。     

2013-2016年江西省麻疹病毒分离株H基因特征分析

目的 探究江西省2013-2016年麻疹病毒的流行特点与流行趋势.方法 用Vero/SLAM细胞对麻疹病毒进行分离培养,对获得的麻疹毒株扩增其H基因序列,并对获得的基因片段进行核苷酸序列的测定,再与Gengbank上麻疹各基因型别的参考序列进行比对,分析其亲缘关系、同源性等变异情况.结果 2013-2016年获得75株...     

2012－2016年北京市朝阳区33株风疹病毒分离株基因特征分析

目的 通过对北京市朝阳区疑似风疹病例咽拭子标本进行细胞培养及基因特征分析,了解其分子流行病学特征。 方法 使用Vero/SLAM细胞对2012 — 2016年北京市朝阳区暴发和散发病例的风疹咽拭子标本进行病毒分离,应用反转录–聚合酶链式反应扩增风疹病毒E1基因序列,对扩增产物进行核苷酸序列测定。 使用分子生物信息学软件,将获得风疹病毒毒株核酸序列与世界卫生组织推荐风疹病毒13个基因型的32个参考毒株及16株中国部分省市流行株E1基因739个核苷酸序列进行系统发生树的构建及对比分析。 结果 共分离出33株风疹病毒毒株,其中8株为1E基因型,25株为2B基因型。 1E型风疹流行株分离自2012 — 2013年,2B型风疹流行株分离自2012 — 2016。 2B型流行株组内遗传距离及组间遗传距离均小于1E型流行株的组内遗传距离和组间遗传距离。 结论 2012 — 2016年北京市朝阳区风疹病毒流行优势株为2B基因型,1E基因型正在逐步被2B基因型代替。 2B基因型风疹流行株核酸序列更稳定,并逐渐成为优势基因型。      

2013年北京市首例输入性D_9基因型麻疹毒株的分离和鉴定

目的分离并鉴定北京市输入性D9基因型麻疹毒株。方法使用Vero/SLAM细胞,对可疑麻疹输入性病例的咽拭子和尿液标本进行麻疹毒株的分离培养。用反转录-聚合酶链反应扩增麻疹病毒核蛋白(N)基因羧基末端676个核苷酸片段,对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,并以羧基末端450个核苷酸片段构建基因亲缘关系树,进行遗传距离及核苷酸同源性分析。结果该病毒分离株BJCY13026-2和世界卫生组织D9基因型代表株Victoria.AUS(维多利亚.澳大利亚)12.99在基因亲缘性关系树上同属一个分支,核苷酸同源性为95.8%,氨基酸同源性为96%;和其他23个基因型代表株的核苷酸和氨基酸同源性分别在88.1%~95.6%和90.7%~96.7%。和中国大陆目前所使用的麻疹疫苗株沪191相比对,其核苷酸和氨基酸同源性分别为91.1%和90.0%;和中国目前流行的麻疹病毒绝对优势本土基因型H1a基因型代表株相比对,其核苷酸和氨基酸同源性分别为89.4%和91.3%。结论该输入性病例的病毒分离株为麻疹病毒D9基因型。     

重庆市2011-2016年风疹病毒基因特征分析

目的 通过对重庆市2011-2016年分离的风疹病毒进行基因型别鉴定及系统进化分析,为预防和控制风疹提供分子流行病学依据.方法 收集重庆市2011-2016年风疹病毒核酸检测阳性病原学标本进行病毒分离,通过序列测定鉴定其基因型别;与GenBank中风疹各型别参考毒株及其他省市所获毒株进行进化树构建和遗传距离分析.结果 2011-2013年风疹毒株主要为1E基因型(94/103);2014-2016年主要为2B基因型(50/56),仅2014年有1株2A基因型毒株.重庆株系与其他省市毒株核苷酸同源性1E型为97.63%~99.73%,平均98.90%;2B型为95.77%~99.73%,平均98.30%.系统树上重庆毒株并未与其他省市株系相互隔离.结论 重庆市风疹优势基因型近年已经逐渐由1 E型替代为2B型.重庆市的风疹病毒基因型在不断变化,优势株与其他省市呈共同进化状态.     

2018年上海市一起D8基因型麻疹病毒引起的输入性麻疹暴发报告

目的追踪2018年上海市一起输入性麻疹暴发的来源,并分析其病毒分子流行病学特征。方法直接从临床咽拭子标本中提取病毒核酸,采用一步法反转录–聚合酶链式反应,扩增麻疹病毒核蛋白基因COOH末端676个核苷酸,然后对扩增产物进行核苷酸序列测定,并分析其同源性,以确定病毒基因型及其可能的来源。结果本次暴发病例来自于同一家庭,且2例成年人病例在发病前21 d内有共同的出境旅游史;导致此次暴发的麻疹病毒为D8基因型。结论结合流行病学调查和实验室检测结果,推断此次疫情为一起D8基因型麻疹病毒引起的输入性麻疹暴发。     

麻疹病人咽拭子标本的麻疹病毒分离结果

目的收集麻疹病人的咽拭子标本进行麻疹病毒分离,为我国麻疹病毒流行毒株基因型的鉴定提供更多的分离株。方法2005年5￣8月,选择南京市第二医院收治入院的疑似麻疹病人109例采集了咽拭子标本,接种EB病毒转化的狨猴淋巴母细胞(B95a细胞)。结果分离到麻疹病毒46株,分离阳性率为42.20%。结论此次南京第二医院与江苏省CDC合作分离到麻疹野病毒,标本量大,阳性率高,分析原因,与采集的时间、操作人员的技术及冷链储运和及时运输密切相关。     

常州地区乙型肝炎病毒基因分型及外膜大蛋白定量检测的临床研究

目的 了解常州地区乙型肝炎病毒基因型的分布,探讨检测外膜大蛋白与不同基因型肝病之间的临床意义.方法 乙型肝炎病毒基因分型采用巢式聚合酶链反应,扩增乙型肝炎病毒S基因区,用末端标记方法对PCR产物标记并直接测序,测序结果和基因库中登录的标准基因型序列进行比较;乙型肝炎病毒外膜大蛋白(LHBs)应用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行定量检测.结果 对该地区147例不同HBV感染者血清HBV DNA进行了基因分型,其中B型63例(42.9%),C型80例(54.4%),B、C混合型1例(0.7%),B、D混合型3例(2.0%).69例慢性乙型肝炎患者中B型为33例、C型为34例;63例肝癌患者中B型15例、C型46例.二组比较,肝癌组中C型明显高于慢性乙肝组(x2=8.28,P<0.005).肝癌患者组B型、C型HBV LHBs含量分别为(61.2±59.2)υg/L和(36.9士31.7)υg/L,两组间存在统计学差异(t=2.11,P<0.05);慢性乙型肝炎患者组HBV LHBs含量则分别为(131.2土85.7)gg/L和(132.5士80.5)υg/L,两组间不存在统计学差异(t=0.064,P>0.05).结论常州地区HBV DNA基因型主要为B型和C型;C基因型与肝癌关系密切;肝癌患者组B型HBV LHBs含量明显高于C型;B、C基因型HBV感染在肝癌的发生中可能存在不同的机制.     

四川部分地区乙型肝炎病毒基因分型分析

目的了解四川部分地区乙肝病毒（HBV）基因型分布情况。方法选择390例经荧光PCR法定量HBV—DNA含量〉104copies／ml的感染者血清，采用聚合酶链反应-酶联免疫吸附试验（PCR-ELISA）法检测HBV基因型。结果390例患者中B型186例（47．7％），C型142例（36．4％），BC混合型54例（13．8％），A型3例（0．7％），5例测序待定。C型HBV—DNA水平和HBeAg阳性率分别为（7．59&#177;1．18）log值和75．58％，明显高于B型的（5．36&#177;1．10）log值和45．90ck（P〈0．01）；C型ALT、AST、TBIL的水平均高于B型（P〈0．05）。结论四川部分地区乙肝病毒基因型以B、C型为主，B型占优势，C型次之。     

Characteristics of fresh isolates of wild measles virus

Characteristics of fresh isolates of wild measles virus were studied by immunofluorescence using monoclonal antibodies, SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, and electron microscopy. By the immunofluorescence test, hemagglutinin, nucleocapsid-associated phosphorylated, and fusion proteins were found only in the cytoplasm of cells infected with the virus at a low passage level. Nucleocapsid (NP) and membrane (M) proteins were found in both the cytoplasm and nuclei. Since the M protein is present only in the cytoplasm of cells infected with the laboratory strain of measles virus, this intranuclear M protein may be specific to the wild virus. At an increased passage level, the intranuclear M protein became undetectable, but the NP protein was still present in the nuclei. SDS-polyacrylamide and electron microscopy showed that wild measles viruses were shown to have characteristics similar to those of laboratory strains.     

宜春市2015年麻疹病毒野病毒感染病例的快速鉴别

目的 引进并运用逆转录多聚酶链式反应-限制性片段长度多态性分析方法(RT-PCR-RFLP方法)快速鉴别2015年宜春市麻疹野病毒感染病例与疫苗株病毒引起的相关麻疹病例.方法 运用realtime RT-PCR对宜春市400例疑似麻疹病例咽拭子标本进行麻疹病毒核酸检测,引进RT-PCR-RFLP方法对麻疹病毒核酸检测阳性咽拭子标本进行检测是否含有AflⅡ酶切位点(疫苗株病毒有,野病毒没有)鉴别疫苗相关麻疹病例.结果 麻疹病毒核酸检测阳性标本为9例,阳性率为2.25%;9例麻疹病毒核酸检测阳性标本RT-PCR-RFLP方法检测的结果为均未能被AflⅡ酶切开,为麻疹野病毒感染.结论成功引进和建立宜春市麻疹野病毒感染病例与疫苗株病毒引起的相关麻疹病例的RT-PCR-RFLP快速鉴别方法,并鉴别了2015年宜春市9例麻疹病例均由麻疹病毒野病毒感染引起.     

中国部分地区159株结核分枝杆菌临床分离株MLVA-19分型分析

目的初步了解中国部分地区结核分枝杆菌临床分离菌株数目可变串联重复序列（variable number of tandem repeats,VNTRs)基因多态性特征。 方法采用多位点VNTRs分析（multiple loci VNTRS analysis, MLVA）技术,随机选取159株中国部分地区结核分枝杆菌临床分离菌株,PCR和琼脂糖凝胶电泳技术,对结核分枝杆菌的19个VNTRs位点进行检测,用BioNumerics (Version 5.0) 软件进行结果分析,数据结果与国际MLVA数据库（http://minisatellites.u-psud.fr）比对,初步分析结核分枝杆菌DNA 多态性特征。结果159株菌株大致被分成4个主要的簇,其中73.8%的菌株为北京家族菌株,其次为H37Rv相似菌株及在数据库中没有比对结果的一簇,这一簇的MLVA特点是ETRD3,MIRU10、MIRU27、MIRU39、MIRU40及Mtub21位点结果为22221,与其他簇的菌株结果有比较明显的区别。可能是中国特有的菌株。另外发现与BCG相似的一簇。结论本次研究中的中国结核分枝杆菌具有明显的VNTR基因多态性,主要流行菌株为北京家族菌株,可能存在中国特异的VNTR基因型。BCG临床分离株的发现,提示BCG疫苗相关病例可能成为值得关注的卫生问题。     

Inhibitors of measles virus

Measles virus (MV) infections have been almost eradicated in some industrialized nations. However, MV continues to cause severe disease and mortality in the world and is responsible for clusters of exogenous-borne disease in essentially disease-free countries. Because of the ebb and flow of immunization campaigns, especially in the poverty-stricken and war-torn Third World, and the ominous potential for severe disease and mortality, it is vital that research for discovery of therapeutic countermeasures should continue. To that end, a number of compounds have been evaluated for efficacy in vitro and in animal models, and several therapeutic modalities have been tested in the clinic. The only current therapies used in the clinic include ribavirin administered orally or intravenously, alone or in combination with immune serum globulin; these therapies have demonstrated variable efficacy. Therefore, drug discovery efforts have been launched to supplement the existing treatments for MV infections. Antisense molecules, adenosine and guanosine nucleosides, including ring-expanded 'fat' nucleoside analogues, brassinosteroids, coumarins, peptide inhibitors, modulators of cholesterol synthesis and a variety of natural products have been screened for efficacy and toxicity both in vitro and in animals. However, none of these agents has gone into human clinical trials and most will not merit further development due to toxicity concerns and/or low potency. Thus, further research is needed to develop more potent and less toxic drugs that could be used for treating MV infections to supplement the existing MV vaccine campaigns.     

Amino Acid substitutions in matrix, fusion and hemagglutinin proteins of wild measles virus for adaptation to vero cells

Background: Wild-type measles virus (MV) is isolated in B95a but not in Vero cells. Through an adaptation process of wild-type MV to Vero cells, several amino acid substitutions were reported. Methods: Six strains were adapted to Vero cells and membrane (M), fusion (F) and hemagglutinin (H) genes were sequenced. Cell fusion was assessed and recombinant MVs were constructed, having wild-type H or M gene with or without mutations. Results: No F gene substitution was noted. Amino-acid substitutions at positions 481 from Asn to Tyr (N481Y) and 546 from Ser to Gly (S546G) were observed in the H protein. Glu at position 89 of the M protein was substituted for Gly (E89G) and two mutations were noted at positions 62 (S62R) and 83 (S83P) in M protein. Recombinant viruses with mutation(s) detected in Vero-adapted strains induced a cytopathic effect and grew well in Vero cells, but those with the wild type did not. Recombinant viruses with mutation(s) demonstrated lower viral growth in B95a cells. Conclusions: Substitutions of E89G, S62R and S83P of the M protein were newly observed through adaptation to Vero cells, besides the mutations described in previous reports, with varying adaptation for each strain.     

2004-2010年新疆维吾尔自治区麻疹流行特征分析

目的 了解新疆维吾尔自治区(新疆)2004-2010年麻疹流行特征,探讨消除麻疹的措施。 方法 运用描述流行病学的方法对新疆2004-2010年麻疹监测资料进行分析。 结果 新疆2004-2010年共报告麻疹30 462例,年平均发病率为21.33/10万。3-7月为麻疹发病高峰。15岁的病例占病例总数的59.14%~85.47%。有实验室检测结果的仅为总病例的18.48%。无免疫史和免疫史不详病例占总病例数的69.80%。 结论 控制和消除麻疹最有效的方式是提高常规免疫覆盖率和服务质量,政府需加大免疫规划工作的投入和加强督导,才能在预期时间内消除麻疹。     

Replication of measles virus in human lymphocytes

Replication of measles virus was restricted in human peripheral blood mononuclear cells (PBMC). However, in in vitro-infected, unstimulated cells, active synthesis of viral RNA and proteins occurred, while the release of infectious virus could not be detected. Stimulation with PHA caused a productive infection cycle comparable to the lytic infection. Replication of viral RNA was demonstrated in both T and B cells, and in both OKT4+- and OKT8+-depleted T cell subsets. The presence of measles virus RNA was detected in PBMC isolated from measles patients, and the production of the immunoreactive hemagglutinin protein was defective in these cells.