荧光探针杂交技术检测临床标本内结核人支杆菌的价值

目的：评价聚合酶链反应（PCR）荧光探针杂交技术（TaqMan技术）检测临床标本中结核分支杆菌的应用价值。方法：应用细菌学方法（涂片镜检和培养）及TaqMan法检测133份结核病患者痰标本，53份非结核呼吸系疾病患者痰标本。结果：细菌学方法检测结核病患者临床标本中结核分支杆菌阳性率为36．1％，TaqMan法阳性率为61．7％，高于细菌学检测法，经统计学处理，两者有显著性差异（P＜0．05），用TaqMan法检测临床标本特异性为96．2％，结论：TaqMan技术将PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化，在单一管内完成，具有简便，快速、防污染，敏感性及特异性较高等优点，是结核病辅助诊断的有效方法之一。     

聚合酶链式反应在结核病诊断中的临床评价

采用聚合酶链式反应（PCR法）对73例结核病患者和60例非结核病患者不同部位的标本进行检测，同时进行涂片法抗酸染色。BACTEC460TB系统结核菌培养，分别比较其阳性率与特异性。结果发现73例不同部位结核性标本中PCR法、涂片法、培养法总阳性率分别为47．9％、21．9％、35．7％，PCR法与其它两种方法比较有显著性差异（P<0．05）。60例非结核性标本（阴性）特异性分别为76．7％、100％、96．7％，PCR法与其它两种方法比较有显著性差异（P＜0．05）。     

荧光定量PCR技术在肺结核诊断中的临床应用研究

目的评价荧光定量PCR技术在肺结核病诊断中的应用价值。方法采用荧光定量PCR、金胺O染色荧光镜检和培养法同时检测860例肺结核患者的痰标本,对检测结果进行比较。结果荧光定量PCR检测灵敏度可达10~100 cfu/ml,重复性好,对其他呼吸道病原体检测结果均为阴性。肺结核患者痰标本荧光定量PCR检测阳性率要高于金胺O染色荧光镜检和培养法的阳性率,差异有统计学意义(P0.01)。结论应用荧光定量PCR方法检测结核杆菌,具有特异、灵敏、简便、快速的特点,可作为结核病诊断的方法之一。     

荧光探针杂交技术检测临床标本内结核分支杆菌的价值

目的　评价聚合酶链反应(PCR)荧光探针杂交技术(TaqMan技术)检测临床标本中结核分支杆菌的应用价值。方法 应用细菌学方法(涂片镜检和培养)及TaqMan法检测133份结核病患者痰标本,53份非结核呼吸系疾病患者痰标本。结果 细菌学方法检测结核病患者临床标本中结核分支杆菌阳性率为36.1%,TaqMan法阳性率为61.7%,高于细菌学检测法,经统计学处理,两者有显著性差异(P<0.05),用TaqMan法检测临床标本特异性为96.2%。结论 TaqMan技术将PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化,在单一管内完成,具有简便、快速、防污染、敏感性及特异性较高等优点,是结核病辅助诊断的有效方法之一。     

实时荧光PCR检测儿童肺结核粪便中Mtb-DNA的效果评价

目的 应用实时荧光PCR快速检测肺结核患儿粪便中Mtb-DNA,并初步评估其临床效果。 方法 收集肺结核住院儿童粪便标本76份,应用实时荧光PCR检测Mtb-DNA,检测结果与20例其他呼吸系统疾病患儿的粪便实时荧光PCR检测Mtb-DNA、76例粪便抗酸杆菌涂片检查以及41例患儿痰标本的涂片和(或)培养、实时荧光PCR检测结果进行比较。 结果 粪便实时荧光PCR检测敏感度达到23.68%(18/76),特异度为100.00％(20/20),肺结核患儿粪便PCR阳性率［23.68%(18/76)］明显高于涂片阳性率［6.58%(5/76)］,41例患儿中痰涂片和(或)培养阳性例数(15例)和痰PCR检测阳性例数(18例)高于粪便PCR检测阳性例数(11例)。 结论 实时荧光PCR检测儿童粪便Mtb-DNA,是一种特异度高、比较敏感、非侵入性且相对安全的儿童肺结核快速诊断方法。     

抗酸杆菌液基薄层涂片方法的临床应用研究

目的评价结核分枝杆菌液基薄层涂片法对不同类型标本的染色检查效能。方法对200份住院1周内结核病患者的标本同时进行液基薄层方法与直接涂片法镜检抗酸杆菌,其中包括148份晨痰标本,52份体液标本,比较2种方法的阳性检出率。结果排除16份重复标本,9份未进行分枝杆菌培养的标本,纳入的123份痰标本中,液基薄层法阳性率33.33%,直接涂片法阳性率24.39%,差异有统计学意义(P=0.012);培养阳性病例的痰标本中,液基薄层法阳性率58.82%,直接涂片法阳性率44.12%,差异有统计学意义(P=0.018)。52份体液标本中,液基薄层法阳性率13.46%,直接涂片阳性率1.96%,差异有统计学意义(P=0.041);培养阳性病例的16份体液标本中,液基薄层法阳性比例为7/16,直接涂片法阳性比例为1/16,差异有统计学意义(P=0.040)。结论基于液基薄层方法的抗酸杆菌涂片阳性率高于直接涂片法,对于体液标本阳性率提高显著,有利于临床上快速诊断,但对于痰标本的应用须综合考虑检验时长和检验费用。     

支气管肺泡灌洗液GeneXpert-MTB/RIF检测在活动性肺结核诊断中的效能

目的探讨支气管肺泡灌洗液Xpert-MTB/RIF检测对肺结核早期诊断的价值。方法选择2017年9月～2018年9月在苏州大学附属传染病医院肺科住院,临床诊断肺结核患者共158例,分别对其支气管肺泡灌洗液及痰标本行GeneXpert-MTB/RIF法(简称"Xpert法")检测,同时对其支气管肺泡灌洗液行涂片抗酸染色镜检、MGIT 960培养、荧光定量PCR,并对Xpert法检测法结果进行分析。结果 Xpert法检测支气管肺泡灌洗液阳性率明显高于涂片找抗酸杆菌,差异有统计学意义(P0.05);支气管肺泡灌洗液培养阳性率也明显高于涂片找抗酸杆菌,差异有统计学意义(P0.05);支气管肺泡灌洗液PCR检测结核分枝杆菌DNA阳性率也明显高于涂片找抗酸杆菌,差异有统计学意义(P0.05)。Xpert法检测阳性率明显高于PCR检测结核分枝杆菌DNA,差异有统计学意义(P0.05);上述四项联合检测阳性率明显高于Xpert法、结核培养等,差异有统计学意义(P0.05)。而Xpert法检测阳性率与痰培养阳性率比较,差异无统计学意义(P0.05)。以支气管肺泡灌洗液结核培养为金标准,Xpert法检测敏感度78.75%,特异度为65.38%。支气管镜BALF Xpert法检测阳性率57.0%,痰Xpert法检测阳性率32.3%,支气管肺泡灌洗液Xpert法检测阳性率明显高于痰标本,差异有统计学意义(P0.05)。结论支气管肺泡灌洗液Xpert法检测相比痰检及其他传统检测方法快捷、安全、高敏感性,能很大程度提高结核病及耐药结核的早期诊断率,有极大的临床应用前景。     

不同温度下应用荧光染色法检测抗酸杆菌的研究

荧光染色法检测抗酸杆菌是结核病实验室诊断的重要方法之一，我们对此进行了改进。本研究应用双盲法比较３７℃和室温下荧光染色法对抗酸杆菌检出率的影响，选取１１７例住院结核病人痰标本涂片染色镜检并培养，结果发现３７℃染色时涂片阳性率为６２．４％，而室温染阳性率分别为３９．３％，３７℃染色明显提高了是性检出率，实验同时发现培养阳性率仅为１６．２％，明显低于涂片镜检，特别是３７℃染色镜检的阳性率，涂（＋）培（     

四种结核分枝杆菌检测方法的临床应用评价

目的评估涂片、培养、PCR和增菌PCR检测结核分枝杆菌临床应用价值。方法对124例临床确诊的肺结核、可疑结核患者和非结核病人痰标本的涂片、培养、PCR和增菌PCR四种方法的检测结果进行比较。结果涂片、培养、PCR和4及7d的增菌PCR检测31例临床确诊的肺结核病人痰标本阳性率分别为22．5％、32．2％、54．8％、64．5％和87．1％；检测59例临床可疑肺结核病人痰标本阳性率分别为13．6％、18．6％、28．8％、37．3％和52．5％。比较四种方法的阳性检测率有显著性差异（P〈0．05）。检测34例非结核病人痰标本，涂片、培养均为阴性，而PCR和增菌PCR均有1例假阳性，假阳性率2．9％。比较PCR与增菌PCR对茵阳和菌阴病人的痰标本阳性检测率，有显著性差异（P〈0．05），而两种方法的假阳性率相同。结论增菌PCR检测结核分枝杆菌具有很高的敏感性和特异性，可作为结核病的有效辅助诊断方法之一。     

实时荧光核酸恒温扩增检测技术在结核病诊断中的临床应用

目的 评估实时荧光核酸恒温扩增检测技术（simultaneous amplification and testing,SAT）在结核病患者的痰液、体液及病灶组织等标本中检测结核分枝杆菌的价值.方法 收集在广州市胸科医院就诊的疑似结核病患者的痰液734份、体液标本94份（包括68份胸腔积液、21份脑脊液、5份关节积液,以下统称“体液”）及病灶组织标本76份,共计904份标本.同时采用SAT法、改良罗氏培养法进行检测,培养阳性者进行基因芯片菌种鉴定.SAT法与改良罗氏培养法结果不相符的标本,用结核分枝杆菌聚合酶链（polymerase chain reaction technology for Mycobacterium tuberculosis,PCR-TB）荧光诊断试剂盒进行检测.采用x2检验比较SAT法与改良罗氏培养法对结核病患者的阳性检出率.结果 以改良罗氏培养结果为金标准,则SAT法在痰液、体液、病灶组织标本的敏感度、特异度、符合率分别为90.20％（230/255）、92.48％（443/479）、91.69％（673/734）;94.74％（18/19）、81.33％（61/75）、84.04％（79/94）;100.00％（14/14）、77.42％（48/62）、81.58％（62/76）.以扩大金标准（培养＋PCR法）比对,则SAT法在痰液、体液、病灶组织标本的敏感度、特异度、符合率分别为96.30％（260/270）、99.35％（461/464）、98.23％（721/734）;96.97％（32/33）、100.00％（61/61）、98.94％（93/94）;100.00％（27/27）、97.96％（48/49）、98.68％（75/76）.改良罗氏培养法和SAT法在痰液、体液、病灶组织标本的阳性检出率分别为34.74％（255/734）和36.24％（266/734）、20.21％（19/94）和34.04％（32/94）、18.42％（14/76）和36.84％（28/76）;痰标本两者的阳性率比较,差异没有统计学意义（x2=0.36,P＞0.05）.体液与病灶组织标本中,SAT法较改良罗氏培养法的阳性率高出13.83％和18.42％,差异有统计学意义（x2值分别为4.55、6.44,P值均＜0.05）.结论 SAT法检测痰液、体液及病灶组织标本中的结核分枝杆菌,具有快速、敏感度和特异度较高的优点,可提高结核分枝杆菌的检出率.     

不同细菌学与病理学检查技术对骨关节结核诊断的效能研究

目的:回顾性分析脓液标本细菌学检测技术和组织标本病理学检测技术诊断骨关节结核的检测效能。方法:以2016年1月至2018年12月在北京胸科医院住院治疗的213例送检同部位脓液和组织标本进行检测的疑似骨关节结核患者作为研究对象,取新鲜脓液标本进行涂片染色镜检、GeneXpert MTB/RIF(GeneXpert)检测、实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测和BACTEC MGIT 960液体培养(MGIT 960液体培养);组织标本经石蜡包埋后进行抗酸染色镜检和FQ-PCR检测。结果:根据骨结核临床诊断综合参考标准(CRS),186例纳入患者诊断为骨关节结核,其中124例为确诊结核患者,23例为高度疑似结核患者,39例为疑似结核患者;27例患者排除骨关节结核。与CRS比较,脓液标本涂片镜检、MGIT 960液体培养、FQ-PCR、GeneXpert以及组织标本抗酸染色和FQ-PCR检测的敏感度分别为28.7%(49/171)、49.0%(48/98)、58.1%(25/43)、87.5%(161/184)、48.6%(90/185)和85.4%(146/171);特异度分别为100.0...     

结核/非结核分枝杆菌核酸快速检测方法临床应用价值

目的 评价结核/非结核分枝杆菌核酸快速检测方法的临床应用价值。 方法 应用实时荧光PCR技术对420例标本进行临床试验研究,并与抗酸杆菌涂片和分枝杆菌培养方法对照比较。 结果 结核分枝杆菌核酸检测灵敏度为48.5%（其中菌阳标本灵敏度为95.8%,菌阴标本灵敏度为14.5%）,特异度99.3%,阳性预测值为99.1%,阴性预测值为55.5%;临床试验388例痰标本中检测出1例非结核分枝杆菌核酸阳性,经测序确认,准确率100%;同时对32例非结核分枝杆菌临床分离株进行核酸检测,并经测序确认,准确率100%。 结论 应用实时荧光PCR技术,能实现在1支管内同时进行结核分枝杆菌/非结核分枝杆菌的核酸检测。该方法具有简单快速、特异性好污染性少的特点。可作为实验室辅助检测结核/非结核分枝杆菌核酸方法之一。     

国产实时荧光定量PCR试剂与GeneXpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌的对比分析

目的评价国产实时荧光定量PCR(FQ-PCR)试剂与GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)检测痰标本结核分枝杆菌的临床应用价值,并比较两者的检测效能。方法收集2017年1月至2018年12月于深圳市南山区慢性病防治院就诊的210例疑似肺结核患者的痰标本,同时做涂片镜检、BACTEC MGIT 960(简称“MGIT 960”)培养、GeneXpert和FQ-PCR检测。以MGIT 960培养为参考,比较GeneXpert和FQ-PCR检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值,比较两者与MGIT 960培养结果的一致性及两者之间的一致性。按照涂片镜检结果分级报告标准,将痰标本分为荷菌量逐步递增的6个组,即阴性组、少量组、+组、++组、+++组、++++组,比较GeneXpert和FQ-PCR检测各个组阈值循环数(Ct值)均值的差异。结果GeneXpert检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为83.7%(123/147)、87.9%(51/58)、94.6%(123/130)、68.0%(51/75);FQ-PCR检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为83.7%(123/147)、89.8%(53/59)、95.3%(123/129)、68.8%(53/77)。FQ-PCR、GeneXpert分别与MGIT 960行Kappa检验,一致性分别为85.4%(176/206)和84.9%(174/205),Kappa值分别为0.70、0.66;对GeneXpert和FQ-PCR检测结果行Kappa检验,一致性为92.8%(194/209),Kappa值为0.85。FQ-PCR检测显示,阴性组与少量组的Ct值均值比较[(33.87±5.00)和(27.29±1.30)个],差异有统计学意义(t=5.56,P<0.001);GeneXpert检测分别为(33.32±6.05)和(23.99±3.36)个,差异有统计学意义(t=5.19,P<0.001)。检测涂片阴性标本时,FQ-PCR与GeneXpert检测的Ct值均值[(33.87±5.00)和(33.32±6.05)个]差异无统计学意义(t=0.32,P=0.750);检测涂片阳性(少量组、+组、++组、+++组、++++组)标本时,FQ-PCR检测的Ct值均值[分别为(27.29±1.30)、(27.95±2.85)、(25.88±3.62)、(24.79±2.46)、(22.38±2.72)个]均明显高于GeneXpert检测[分别为(23.99±3.36)、(23.10±4.05)、(20.22±2.81)、(20.31±4.16)、(16.48±2.78)个],差异均有统计学意义(t值分别为2.60、4.71、6.08、3.85、9.02,P值分别为0.030、<0.001、<0.001、<0.001、<0.001)。结论国产FQ-PCR试剂与GeneXpert检测结果一致性较好,对结核病大规模筛查、降低检测成本具有临床应用价值。     

荧光PCR诊断肺结核的临床应用研究

目的对荧光PCR(FQ-PCR)、痰涂片、结核抗体血清学试验及痰培养在肺结核诊断上进行方法学评价。方法 FQ-PCR、痰涂片及痰培养四种方法对结核组(124例)及非结核组(119例)进行检测,对四种方法进行方法学评价。结果结核组中荧光PCR、痰涂片、痰培养、血清学试验四种方法检出率分别为58.9%、30.6%、47.5%及66.1%,差异有统计学意义(P0.01),其中以血清学试验及荧光PCR检出率较高;在非结核组中,荧光PCR、痰涂片、痰培养三种方法均未检测出阳性结果,血清学试验检测出12例阳性;四种方法的方法学评价:灵敏度、约登指数、符合率、阴性预测值以荧光PCR、血清学试验较高,特异度、阳性预测值荧光PCR、痰涂片、痰培养均为100%,综合各项指标以荧光PCR方法较好。结论荧光PCR具有较高的灵敏度、特异度,快速、简单,在肺结核的诊断上具有较大的优势,适合在临床推广应用。     

结核分支杆菌镜检、培养和PCR技术诊断结核病的临床评估

目的　评估结核分支杆菌PCR、培养、镜检对结核病诊断的临床效果。方法 对1217例临床可疑结核病人用PCR、培养和镜检三种方法的阳性检出率进行比较。结果 不同临床标本用PCR技术诊断结核病,其敏感性高于培养和涂片镜检,阳性检出率分别为:88.7%,43.4%,26.5%。结论 通过三种方法比较分析,说明PCR技术是一种速度快、检出率高的检测结核分支杆菌的重要方法,对结核病的诊断有重要的参考价值。     

噬菌体生物扩增法检测痰结核分枝杆菌的临床研究

目的评价噬菌体生物扩增(PhaB)法检测痰中结核分枝杆菌的应用价值。方法分别应用PhaB法、直接涂片法、集菌涂片法和BACTECMGIT960快速培养法检测2005年8月至10月沈阳市胸科医院53例疑诊肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌,并对检测结果进行比较。结果PhaB法、直接涂片法、集菌涂片法、BACTECMGIT960快速培养法检出阳性标本数分别为24,11,17和22份;以培养结果为评价标准,PhaB法的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为86.4%,83.9%,79.2%和89.7%;集菌涂片法和PhaB法联合检测的敏感性为90.9%,特异性为83.9%,阳性、阴性预测值分别为80.0%和92.9%。结论PhaB法检测痰中结核菌操作简便,具有较高的敏感性和特异性,可作为临床结核分枝杆菌的快速检测方法;PhaB法联合集菌涂片法进行检测可进一步提高敏感性,减少漏诊率。     

交叉引物恒温扩增检测技术在疑似肺结核患者临床诊断中的价值

目的 评估交叉引物恒温扩增(cross priming amplification, CPA)检测技术在肺结核早期临床诊断中的应用价值。 方法 以2016年1—10月广东省佛山市和江门市及所辖7个县(区)级结核病防治机构(简称“结防机构”)就诊的初诊疑似肺结核患者为研究对象,共纳入患者6507例;所有患者均进行了胸部影像学检查并送检痰标本进行涂片镜检、固体培养和CPA检测,培养阳性菌株进行菌种鉴定,项目点临床医生结合实验室和临床检查结果对纳入患者进行初诊诊断,国家级临床专家对初诊临床诊断结果进行现场复核。分析项目地区确诊活动性肺结核患者中病原学阳性患者所占比例,并与专家复核后的临床诊断结果进行比较,分析涂片镜检、固体培养和CPA诊断肺结核的敏感度及特异度。 结果 6507例疑似肺结核患者中,涂片镜检、固体培养和CPA检测阳性率分别为18.2%(1187/6507)、25.0%(1629/6507)和23.9%(1555/6507)。3199例临床确诊为活动性肺结核患者中,涂片联合培养阳性检出率为48.5%(1550/3199),涂片联合CPA阳性检出率为47.9%(1531/3199),涂片、培养和CPA三种方法联合检测阳性率为54.4%(1740/3199)。以临床诊断结果为标准,涂片镜检、固体培养和CPA检测诊断活动性肺结核的敏感度分别为35.0%(1120/3199)、46.4%(1485/3199)和44.6%(1428/3199),特异度分别为98.0%(3241/3308)、95.7%(3164/3308)和96.2%(3181/3308)。 结论 县(区)级结防机构可应用CPA检测技术用于疑似肺结核患者的快速诊断,多种诊断技术联合应用可显著提高活动性肺结核患者的病原学诊断阳性率。     

2018—2020年深圳市龙华区某综合医院呼吸科加强住院患者结核病病原学检查的效果分析

目的: 分析2018—2020年深圳市龙华区某综合医院呼吸科住院的非已知肺结核及疑似肺结核患者中病原学阳性肺结核患者发现的情况,探索在呼吸科住院患者中进行肺结核早期发现的模式。 方法: 2018年1月至2020年12月,龙华区某综合医院设置留痰室,并配备专职留痰宣教人员,对呼吸科住院的非已知肺结核及疑似肺结核患者中有肺结核可疑症状或临床不能排除肺结核的住院患者(342例)采集痰液(或由医务人员采集支气管肺泡灌洗液或胸腔积液),同时进行涂片、培养、GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)检测,以发现其中病原学阳性的肺结核患者,分析不同检验策略在病原学阳性患者发现中的价值。 结果: 342例患者中,病原学阳性73例,病原学阳性率为21.3%。单一检测方法中,涂片法检出阳性患者24例(32.9%,24/73),培养法检出阳性患者52例(71.2%,52/73),GeneXpert法检出阳性患者54例(74.0%,54/73);检测方法组合中,涂片+培养检查发现阳性患者53例(72.6%,53/73),涂片+GeneXpert检查发现阳性患者58例(79.5%,58/73),培养+GeneXpert检查发现阳性患者73例(100.0%,73/73)。2020年纳入患者的病原学阳性率最高(27.7%,38/137),其次为2018年(20.6%,20/97),2019年最低(13.9%,15/108),差异有统计学意义(χ²=6.941,P=0.031)。结论: 综合医院呼吸科住院患者中,除已知肺结核及胸部影像学检查提示肺结核患者外,仍存在病原学阳性肺结核患者。建议综合医院与当地有检测能力的机构合作,在肺结核诊断性治疗前留痰送检,以实现病原学阳性肺结核患者发现关口的前移。     

不同方法检测痰和肺泡灌洗液中结核杆菌的分析

目的对比分析不同检测方法和不同检测标本在结核杆菌检测结果中的意义。方法选取本科室收治的初次我院就诊并临床诊断符合"肺结核"标准的158例患者的痰液和肺泡灌洗液,对所有的标本均进行两次抗酸染色涂片、两次快速培养检测结核杆菌(1次及1次以上阳性均记为阳性)。结果 1.快速培养法的结核杆菌检出率高于抗酸染色涂片法;2.肺泡灌洗液的结核杆菌阳性率均高于痰液。结论快速培养法是临床工作中确诊结核病的首选方法,肺泡灌洗液能有效提高肺结核的诊断率。     

一种直接检测结核病痰标本的PCR技术的建立与评价

目的建立并评价聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)在结核病痰标本检测中的应用价值。方法根据结核分枝杆菌复合体IS6110序列设计引物INS1和INS2,并建立PCR反应体系和反应条件。运用PCR方法分别检测标准菌株、结核分枝杆菌PCR检测标准品和拟诊结核病患者痰标本,采用痰涂片和细菌培养为对照。结果比较的统计学分析采用卡方检验。结果PCR方法对结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、卡介苗标准株的最小检出浓度分别达到102,103,103个细菌/毫升,能够特异地检出结核分枝杆菌复合体。在PCR检测的574例拟诊病例中,PCR检测阳性病例241例,42%;痰涂片和细菌培养的阳性率分别为19.69%和26.31%,PCR检测阳性率高于传统细菌学检验方法,经χ2检验,差异具有显著统计学意义(χ2=103.67,P<0.01)。以痰培养结果为标准,计算PCR检测方法的敏感度为67.53%。结论PCR检测方法与传统的细菌学检测方法相比可以提高阳性标本检出率,而且具有快速、特异、简便的特点,有望成为结核病大规模筛查和临床快速检测方法。