人脂肪细胞总RNA的抽提及对脂联素mRNA的扩增

目的建立一种提取脂肪组织总RNA并能够有效地进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法。方法利用Trizol试剂提取人皮下脂肪组织总RNA,用紫外分光光度法鉴定其产率及纯度,用琼脂糖凝胶电泳和RT-PCR鉴定所提取的总RNA的完整性。结果采用选择性mRNART-PCR试剂盒特异性地扩增出脂联素(adiponectin)和β肌动蛋白(β-actin)的mRNA。结论在脂肪组织总RNA抽提中容易混入基因组DNA,而采用选择性mRNART-PCR只针对mRNA进行特异的扩增。     

罗格列酮对糖耐量受损大鼠血清脂联素和肝脏脂联素受体表达的影响

目的探讨罗格列酮对糖耐量受损大鼠血清脂联素和肝脏脂联素受体-1表达的影响。方法60只Wistar雄性大鼠随机分为对照组(普通饲料喂养)和高脂组(高脂饲料喂养)。每周记录体质量变化,每2周作1次糖耐量试验;用HOMA胰岛素抵抗指数评价胰岛素抵抗程度,用反转录聚合酶链反应和蛋白印迹法分别测定脂联素受体1 mRNA和蛋白在肝脏的表达,成模后用罗格列酮干预4周。结果①12周时高脂组有18只大鼠成模,其2 h血糖均值达到了糖耐量受损的诊断标准,空腹血糖高于对照组(P<0.05),但未达到空腹血糖受损的诊断标准;②成模组大鼠体质量明显增加,空腹胰岛素和HOMA-IR指数高于对照组(P<0.05);③罗格列酮干预4周后血清脂联素水平较模型组升高(P<0.05),肝脏组织脂联素受体1 mRNA和蛋白的表达与模型组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论脂联素表达的下降在高脂饮食导致的胰岛素抵抗的发生中起着重要作用,罗格列酮可升高血清脂联素水平,但不影响肝脏脂联素受体-1的表达。     

姜黄素对人脂肪组织脂联素分泌的影响

目的探讨在体外培养条件下不同浓度姜黄素干预对内脏脂肪组织与腹部皮下脂肪组织脂联素（APN）分泌的影响。方法用体外组织培养法培养手术中离体脂肪组织（n=84），分别予低浓度姜黄素（10μg·mL^-1）和高浓度姜黄素（100μg·mL^-1）干预不同时间，用酶联免疫吸附法（ELISA）测定干预前后组织培养液中APN的含量。结果与对照组相比，在姜黄素浓度为100μg·mL^-1干预下，内脏及腹部皮下脂肪组织APN分泌均有明显增加（P〈0．05），干预浓度为10μg·mL^-1时对脂肪组织APN分泌无明显影响（P〉0．05）；且基础状态下体外培养6h和24h时，腹部皮下脂肪比内脏脂肪APN分泌分别升高28．79％、19．76％。结论姜黄素干预脂肪组织可使APN分泌增加，而且与剂量有关。     

多囊卵巢综合征患者脂联素水平的变化与胰岛素抵抗的关系及罗格列酮的干预效果

目的 探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清脂联素水平及其与胰岛素抵抗的关系,观察罗格列酮对PCOS的治疗作用.方法 41例PCOS患者依据体重指数(BMI)分为肥胖组及非肥胖组,志愿者25例为对照组,检测其血清脂联素、胰岛素、血糖,计算胰岛素抵抗指数(Homa-IR);给予PCOS患者每日口服罗格列酮4 mg,共12周,测定治疗后上述指标的变化.结果 2组PCOS患者脂联素水平均明显低于对照组(P＜0.01),且肥胖组又显著低于非肥胖组(P＜0.05);肥胖及非肥胖组PCOS患者胰岛素水平及Homa-IR明显高于对照组(P＜0.05),肥胖组显著高于非肥胖组(P＜0.05);经相关性分析发现:PCOS患者脂联素与胰岛素水平、Homa-IR呈显著负相关(r分别为-0.62和-0.71,P＜0.01);PCOS2组患者经罗格列酮治疗后,胰岛素及Homa-IR水平较治疗前显著下降(P＜0.05),脂联素水平显著增加(P＜0.05),BMI只在肥胖组PCOS患者中下降差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PCOS患者脂联素水平明显降低,并与胰岛素水平、胰岛素抵抗呈负相关;罗格列酮治疗后患者临床症状改善,脂联素水平增高,胰岛素及胰岛素抵抗指数均显著下降.     

脂联素及其受体2mRNA在非酒精性脂肪性肝炎大鼠的表达及替米沙坦的干预作用

目的探讨替米沙坦对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝组织脂联素及其受体R2mRNA表达的影响。方法 35只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组,n=10)、模型组(FC组,n=15)和替米沙坦干预组(FT组,n=10)。FC和FT组给予高脂饲料喂养16周诱发脂肪性肝炎,其中FT组于高脂喂养12周后,给予替米沙坦(5mg·kg-1·d-1)灌胃治疗4周。取肝组织测肝指数;检测血清ALT及AST,RT-PCR方法测定大鼠肝组织脂联素及其受体R2mRNA的表达。结果与NC组相比,FC组血清ALT、AST均明显升高(P<0.01),脂联素及其受体R2mRNA水平均显著降低(P<0.01);FT组的血清ALT显著降低(P<0.01),脂联素及其受体R2mRNA水平较FC组均升高(P<0.05)。结论替米沙坦对实验性非酒精性脂肪肝大鼠具有一定的治疗作用,其作用机制之一是促进肝脏脂联素及其受体R2mRNA的表达。     

罗格列酮对高脂血症大鼠心肌脂联素系统的调节作用

目的探讨罗格列酮对高脂血症大鼠心肌脂联素及其受体表达的影响,阐述过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动药心肌保护的新机制。方法28只WKY大鼠随机分为普通饲料组、高脂饲料组和罗格列酮(4mg·kg-1.d-1)组。24wk处死动物,采用全自动生化分析仪测定血脂,HE和Masson染色观察心肌形态学变化、测定心肌肥厚指数和平均心肌细胞直径,ELISA、RT-PCR和免疫组化法测定心肌脂联素及脂联素受体1和2(AdipoR1和AdipoR2)的表达。结果罗格列酮显著抑制高脂饮食引起的血脂升高和体重增加、抑制细胞内脂质沉积及心肌细胞肥大、增加心肌组织局部脂联素水平及其受体1基因和蛋白的表达。结论罗格列酮通过改善脂质代谢、增加心肌局部脂联素水平及其AdipoR1基因和蛋白的表达拮抗高脂血症所致心肌损害,从而发挥心肌保护作用。     

脂联素与非酒精性脂肪性肝病

非酒精性脂肪性肝病（non—alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是临床常见肝病之一，包括从单纯的肝脂肪变性到非酒精性脂肪性肝炎，以及可最终发展为肝硬化的一组肝脏慢性临床病理综合征，其病因及发病机理至今尚未完全阐明。脂联素为新发现的一种脂肪细胞因子，具有增加胰岛素敏感性、抗炎、增加葡萄糖摄取、促进脂肪酸氧化等作用，已有研究认为与NAFLD关系密切，本文就此作一综述。     

脂联素干预TNF-α作用后的巨噬细胞脂联素受体mRNA表达水平及其吞噬脂质变化

目的探讨脂联素干预TNF-α作用后的巨噬细胞表面脂联素受体mRNA表达水平及其吞噬脂质的变化。方法单核巨噬细胞系用佛波酯诱导,使之分化为巨噬细胞;进而采用不同浓度的TNF-α(0、0.1、1、10、100ng/ml)作用24h(以TNF-α0ng/ml为空白对照组),采用RT-PCR技术观察巨噬细胞表面脂联素受体R1、R2mRNA表达水平。选择0、10ng/ml浓度TNF-α作用后的巨噬细胞,用0.2mg/ml低密度脂蛋白混悬生长液作用24h,油红O染色和比色定量检测巨噬细胞吞噬脂质变化;同时TNF-α作用后的巨噬细胞,进一步用人重组脂联素20μg/ml干预24h,再次观察巨噬细胞表达脂联素受体mRNA水平及吞噬脂质变化。结果巨噬细胞用不同浓度的TNF-α作用后,随着TNF-α浓度梯度增加,脂联素受体R1、R2mRNA表达水平逐渐下降(P<0.05)。TNF-α10ng/ml作用后的巨噬细胞吞噬脂质的量明显高于TNF-α空白对照组(P<0.05);同时10ng/mlTNF-α作用后的巨噬细胞,进一步用脂联素干预,巨噬细胞表达脂联素受体R1、R2mRNA水平均较干预前上调(P<0.05),吞噬脂质的量较干预前减少(P<0.05)。结论脂联素及其受体在调节巨噬细胞吞噬脂质过程中产生重要作用,该作用可能成为预防和治疗动脉粥样硬化发生发展的新靶标。     

缬沙坦对肝纤维化大鼠脂联素及脂联素受体2表达的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂缬沙坦对肝纤维化大鼠脂联素(ADN)及ADN受体2(AND-R2)表达的影响。方法选36只雄性Wistar大鼠分为对照组、模型组、药物组,用四氯化碳(CCl4)背部皮下注射法制备大鼠肝纤维化模型,药物组于造模开始每只大鼠缬沙坦灌胃(30 mg·kg-1·d-1),8周末处死。肝组织苏木素-伊红(HE)染色和Masson染色,进行肝纤维化分期。酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定血清ADN、肿瘤坏死因子(TNF)-α、转化生长因子-β1(TGF-β1)的浓度,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肝组织中ADNm RNA(ADN-R2)m RNA水平,蛋白印迹法检测肝脏ADN、ADN-R2、Ⅰ型胶原表达水平。结果 (1)模型组大鼠造模成功,药物组肝组织纤维化程度较模型组明显减轻;(2)模型组较对照组血清脂联素水平降低,TNF-α、TGF-β1水平增高(P<0.01),药物组较模型组ADN增高(P<0.01)、TNF-α和TGF-β1水平下降(P<0.01或<0.05);(3)肝脏ADN和ADN-R2m RNA水平模型组较对照组明显下降(P<0.01),药物组较模型组增高(P<0.05);(4)模型组较对照组ADN、ADN-R2蛋白表达减少,Ⅰ型胶原蛋白增高(P<0.01),药物组较模型组ADN蛋白表达增高(P<0.01),ADNR2蛋白表达增高(P<0.05),Ⅰ型胶原蛋白下降(P<0.05)。结论血管紧张素受体拮抗剂缬沙坦可能通过增高大鼠ADN、ADN-R2的表达,减少TNF-α、TGF-β1水平,减轻肝脏炎症,发挥抗肝纤维化作用。     

妊娠期糖尿病血清中趋化素及脂联素的临床意义

目的 通过测定趋化素、脂联素在正常妊娠妇女、妊娠期糖尿病(GDM)患者孕早、中期血清中的表达情况,探讨正常孕妇和妊娠期糖尿病患者外周血中趋化素、脂联素的表达差异,为GDM的早期检测提供依据.方法 选取本院2015年5月至2017年2月120例孕妇,其中GDM孕妇患者为实验组,正常妊娠孕妇为对照组,各60例.测定孕早、中期空腹血清趋化素、脂联素、胰岛素及血糖水平.结果 随着孕周期增长,两组血清趋化素、FBG、FBG、HOMA-IR水平上升,血清脂联素水平下降;实验组孕早、中期血清趋化素、HOMA-IR水平显著高于对照组(P<0.05);孕早、中期血清脂联素水平均明显低于对照组(P<0.05).结论 趋化素及脂联素在GDM患者孕早中期的表达有明显变化,联合监测趋化素、脂联素的水平有助于GDM的早期检测.     

罗格列酮钠联合二甲双胍改善2型糖尿病患者糖脂代谢及机制研究

目的探讨罗格列酮钠联合二甲双胍治疗对2型糖尿病患者糖脂代谢及胰岛素抵抗改变及其作用机制。方法 42例确诊2型糖尿病患者经过二甲双胍及罗格列酮钠干预治疗12周。检测治疗前后空腹血糖(FBS)、餐后2h血糖(PBS)、空腹胰岛素(FINS)、血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)低密度胆固醇(LDL)等血脂全套,用HOMA公式计算胰岛素抵抗指数(IR)与正常对照组34例相比较。同时测定治疗前后血清游离脂肪酸(FFA)、C反应蛋白(CRP)。结果 2型糖尿病患者与对照组比,FBS、PBS、HbA1c、LDL、TC、TG、FFA、CRP、IR均显著增高。2型糖尿病组经干预治疗后,FBS、PBS、HbA1c、IR、FFA、CRP浓度均比治疗前显著下降(P<0.01)。LDL、TC、TG经治疗后亦有明显下降(P<0.01)。结论罗格列酮钠联合二甲双胍治疗肥胖2型糖尿病患者可通过降低CRP、FFA,改善IR从而改善糖脂代谢。     

聚山梨酯80的脂肪酸组成及其精制方法研究

目的：以聚山梨酯80的色泽与脂肪酸组成作为考察指标。探求可提高其品质的有效途径。方法：参考《欧洲药典》建立聚山梨酯80脂肪酸组成的检测方法并对市售样品进行测定。后围绕浊点萃取法、三相分离法以及基于其制备原料（油酸）纯度控制这3种方法展开聚山梨酯80的精制工艺研究。结果：当选用高纯度油酸作为聚山梨酯80制备的起始原料时．产品的脂肪酸组成可达到《欧洲药典》要求,并且聚山梨酯80经浊点萃取法和三相分离法两种方法精制后,尤其经三相分离法精制后,产品的色泽可接近无色。结论：应当选用高品质起始原料进行聚山梨酯80的制备,并配合三相分离法的使用。可实现聚山梨酯80产品外观与内在品质的共同提高。     

Binding of Digitoxin to Human Serum Albumin: Influence of Free Fatty Acids,Bile Acids,and Protein Unfolding on the Digitoxin-Albumin Interaction

Abstract The binding of digitoxin to purified human serum albumin was studied under equilibrium conditions. The binding affinity was uninfluenced by the strongly bound free fatty acids of the albumin. All bile acids studied were found to inhibit the binding of digitoxin to albumin. Cholic acids and desoxycholic acid induced a competitive inhibition of the digitoxin-albumin interaction without any physical signs of protein unfolding. Surface active organic anions, known to produce conformational changes of albumin, were found to be powerful inhibitors of the digitoxin-albumin interaction.     

人脂联素基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的：克隆人脂联素（adiponectin）基因，并在大肠杆菌宿主系统中高效表达出adiponectin蛋白进行鉴定。方法：从人皮下脂肪组织提取总RNA，确认其正确性后经RT-PCR扩增得到全长cDNA片段，此片段经纯化回收后克隆至pMD 18-T载体，经行DNA序列分析，进一步克隆构建到表达载体至pET-DEST42中，用IPTG在大肠杆菌中诱导表达。结果：含重组adiponeetin质粒的大肠杆菌经0．4mmol／L的IPTG诱导6h后有高表达。结论：adiponeetin基因的克隆构建和在大肠杆菌中的表达获得成功。     

二甲双胍对大鼠高脂饮食性脂肪肝的预防和治疗作用

目的探讨二甲双胍对大鼠高脂饮食性脂肪肝的预防治疗作用。方法 36只SD大鼠随机分为6组：正常对照1、2组给予标准饲料;脂肪肝模型1、2组给予高脂饮食;预防组和治疗组分别在高脂饮食喂养3周、10周时加用二甲双胍100mg/（kg·d）灌胃7周。相对应的正常对照组和模型组同期给予等容积蒸馏水灌胃。分别在10周、17周后分批处死动物。结果预防组体重、肝指数、血清和肝脏甘油三酯（TC）、HOMA胰岛素抵抗指数（IR）和肝脂变程度均显著低于模型1组（P〈0.05）,与正常对照1组无显著差异（P〉0.05）;治疗组体重、肝指数、血清转氨酶、胰岛素、TG、肝脏TG、HOMA-IR和肝脂变程度均明显低于模型2组（P〈0.05）,但仍与正常对照2组有显著差异（P〈0.05）。结论二甲双胍通过降脂和改善胰岛素敏感性,具有预防和治疗大鼠高脂饮食性脂肪肝的作用,但早期预防效果更佳。     

莱菔子脂肪酸成分的气相色谱-质谱联用分析

目的研究中药莱菔子提取物的质量控制方法。方法采用超声提取法提取莱菔子种子中的脂肪酸成分,进行甲酯化处理后用气相色谱-质谱（GC—MS）联用技术分离和鉴定脂肪酸成分的组成和含量。结果从莱菔子中共分离鉴定出7种脂肪酸成分,占总量的99．80％。结论分离鉴定出的7种脂肪酸成分中相对含量较高的有油酸（34．84％）、亚麻酸（26．16％）、芥酸（20．33％）、棕榈酸（11．23％）等脂肪酸。     

阿莫西林制剂血浓度测定及相对生物利用度研究

目的：建立阿莫西林血浓度的HPLC测定法,并用于人体生物等效性研究。方法：采用随机双交叉实验设计,20名健康受试者分别口服阿莫西林受试制剂和参比制剂500mg,HPLC法测定血浆中的阿莫西林浓度。结果：受试制剂和参比制卉4的AUC0-8。分别为（29．80±4．26）mg·h·L^-1、（31．05±4．12）mg·h·L^-1;AUC0-∞分别为（30．66±4．57）mg·h·L^-1、（31．86±4．15）mg·h·L^-1;Cmax分别为（10．99±1．55）mg·L^-1、（10．95±1．64）mg·L^-1;tmax分别为（1．33±0．38）h、（1．31±0．39）h;t1/2分别为（1．52±0．35）h、（1．48±0．41）h。受试制剂的相对生物利用度为（96．2±9．1）％。两制剂的AUC0-∞、Cmax、tmax、t1/2差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：两制剂具有生物等效性。     

高效液相色谱荧光法测定人血浆中唑吡坦浓度及生物等效性研究

目的：建立高效液相色谱荧光法（HPLC—FLU）测定人血浆中唑吡坦的血药浓度并对其口服制剂人体生物等效性进行研究,为临床用药提供参考依据。方法：采用随机自身对照双周期交叉实验设计,18名健康受试者口服受试制剂和参比制剂10mg,用HPLC—FLU法测定人血浆中的唑吡坦浓度,用非房室模型估算唑吡坦的药动学参数。结果：受试制剂和参比制剂的药动学参数如下：AUC0-t分别为（564．19±139．11）和（451．58±115．94）μg·h·L^-1;AUC0-∞分别为（588．49±139．40）和（474．56±119．43）μg·h·L^-1;Cmax分别为（155．48±39．43）和（125．11±33．33）μg·L^-1;tmax分别为（0．75±0．27）和（1．14±0．31）h;t1/2分别为（1．76±0．69）和（2．12±0．51）h。受试制剂的相对生物利用度为（126．0±12．0）％。结论：经统计学分析,两种国产唑吡坦片剂不具有生物等效性。     

液相色谱-质谱联用法测定人血浆阿奇霉素浓度及生物等效性研究

目的建立阿奇霉素血药浓度的液相色谱-质谱联用（LC—MS）测定法，为临床用药提供参考依据。方法采用随机双交叉试验设计，20名健康受试者口服受试制剂和参比制剂0．5g，用LC—MS法测定人血浆中的阿奇霉素浓度。结果受试制剂和参比制剂的0～144h药时曲线下面积（AUC0-144）分别为（6617．87±2669．96）μg·h／L和（6456．05±2739．62）μg·h／L；0～∞药时曲线下面积（AUC0-n）分别为（7146．36±2848．25）μg·h／L（7089．33±3073．11）μg·h／L；峰浓度（Cmax）分别为（546．69±198．75）μg／L和（536．47±192．27）μg／L；峰时间（Tmax）分别为（2．1±0．9）h和（2．2±0．9）b；半衰期（t1/2）分别为（41．17±8．68）h和（44．22μ8．48）h。受试制剂的相对生物利用度为（102．7±9．7）％。结论两种国产阿奇霉素片剂具有生物等效性。     

EMIT法与HPLC法测定人全血环孢素谷浓度的比较

目的：比较酶放大免疫（EMIT）法和HPLC法测定人全血环孢素（Cs A）浓度的区别与相关性。方法：收集肾移植患者服药后的稳态谷浓度血样119份,分别用EMIT法和HPLC法进行测定,考察两种测定方法的区别和相关程度。结果：HPLC法和EMIT法检测的Cs A血浓度差异有统计学意义（P〈0.05）,EMIT法测定全血Cs A浓度的结果较HPLC法测定的结果平均高26.2 ng·ml^-1,95%CI为（14.6-37.7）ng·ml^-1,两种分析方法具有良好的相关性（r=0.997 4）。结论：HPLC法和EMIT法测定Cs A全血药物浓度结果差异具有统计学意义,在临床进行Cs A药物浓度监测中应予以关注并作相应调整。