胰岛素联合骨髓基质干细胞治疗帕金森病模型鼠

目的 观察胰岛素联合骨髓基质干细胞(BMSCs)治疗帕金森病(PD)模型鼠的疗效.方法 采用贴壁法培养、纯化BMSCs,流式细胞仪检测第3代BMSCs细胞的表面标志表达情况;将6-OHDA单侧损毁成功的PD模型大鼠21只随机分为3组,每组各7只,分别移植BMSCs 12 μl(细胞密度为1×10~5个/μl)、同数量的BMSCs+胰岛素50 nmol/L和生理盐水12μl于模型鼠右侧纹状体.在干预后4周分别观察模型大鼠阿朴吗啡诱导的旋转行为的变化,运用免疫荧光观察每组2只模型大鼠脑内BMSCs细胞存活情况以及高效液相HPLC法检测每组5只模型人鼠脑内双侧黑质-纹状体区DA含量的变化.结果 (1)第3代的BMSCs表面标志物CD29、CD34、CD44和CD45表达分别为97.1%、0.0%、99.0%和0.5%;(2)细胞移植治疗4周后联合组旋转次数较BMSCs组(P<0.05)和生理盐水组(P<0.01)明显减少;(3)免疫荧光观察模型鼠脑内BMSCs细胞存活情况:BrdU阳性细胞数量胰岛素+BMSCs组干预4周后BrdU阳性细胞数比BMSCs组明显增多(P<0.01);(4)HPLC结果示:胰岛素联合组模型鼠脑内黑质.纹状体区DA含量虽较其他两组增加,但差异无统计学意义(P>O.05).结论 胰岛素联合BMSCs移植治疗PD模型的疗效总体好于BMSCs组和生理盐水组.     

脂肪来源的神经干细胞移植治疗帕金森病模型鼠

目的 探讨脂肪基质干细胞(ADSCs)诱导分化为巢蛋白(nestin)阳性的神经干细胞(NSCs)后移植治疗帕金森病(PD)大鼠模型的疗效及作用机制.方法 将大鼠随机分为对照组(正常大鼠16只)、生理盐水组(成功的PD模型大鼠22只)、细胞移植组(成功的PD模型大鼠22只).溴尿嘧啶(BrdU)标记NSCs( 1.2×106个/只),生理盐水12μl分别注入模型鼠右侧纹状体,在干预后2、4、8周分别观察行为学变化;脑冰冻切片免疫荧光染色检测双标细胞;8周时,免疫组织化学法检测脑纹状体区酪氨酸羟化酶(TH)数量变化;RT-PCR检测脑内TH mRNA的表达;高效液相色谱法检测脑内多巴胺(DA)的含量.结果 ADSCs可定向诱导表达nestin的NSCs;细胞移植干预后4周(29±7)r、8周(21 ±4)r,PD大鼠行为学得到明显改善;在纹状体移植区可见BrdU/nestin、BrdU/NF-200、BrdU/GFAP双标的神经细胞,但未发现明显的BrdU/TH双标的细胞;脑内TH数量[(17.70±4.61)个/视野]、TH mRNA (2.79±0.40)及DA[ (25.60±0.79) μg/g]含量都有所增加.结论 脂肪源性的NSCs移植治疗PD大鼠可以有效改善行为学症状.     

脑源性神经生长因子和神经干细胞联合移植对大脑中动脉阻塞大鼠神经功能恢复的作用

目的 将脑源性神经生长因子(BDNF)和神经干细胞(NSCs)单独及联合移植应用于大脑中动脉阻塞(MCAo)模型大鼠,观察BDNF和NSCs移植对大鼠缺血性脑卒中神经功能恢复的作用及BDNF对内源性和外源性NSCs增殖、迁移及分化的影响.方法 体外分离、培养新生大鼠海马NSCs,BrdU标记.实验动物随机分为A组(MCAo组);B组(MCAo+BDNF组);C组(MCAo+NSCs组);D组(MCAo+BDNF+NSCs组),每组16只,移植后进行神经功能损害评分(NSS),用免疫组织化学行BrdU、nestin、BrdU/NSE检测,分析结果.结果 移植后的2、4周神经功能评分分别为:A组5.3±0.5、5.3±0.5;B组4.0±0.8、3.8±0.5;C组3.5±0.6、3.5±0.6;D组2.0 ±0.8、1.8±1.0,D组显著好于其他3组(P<0.05),B组与c组显著好于A组(P<0.05).nes.tin阳性细胞数:A组1.24±1.13,B组2.59±1.44(P<0.05),BrdU阳性细胞数:A组0.52±0.68,B组1.65±1.10(P<0.05).BrdU阳性细胞数:C组6.08±1.52,D组10.26±1.96(P<0.05),BrdU/NSE双阳性细胞数:C组1.74±1.04,D组3.58±1.20(P<0.05).结论 BDNF和NSCs移植单独及联合应用对MCAo大鼠的神经功能恢复均有作用,两者联合具有协同作用.BDNF对内源性NSCs的激活、增殖有促进作用,对外源性NSCs的增殖、迁移及分化有促进作用.     

超顺磁氧化铁、增强型绿色荧光蛋白双标中脑神经干细胞移植治疗帕金森病

目的 观察超顺磁氧化铁(SPIO)、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)双标中脑神经干细胞(mNSCs)移植对帕金森病(PD)大鼠的治疗作用.方法 6-羟多巴胺立体定向注射建立PD大鼠模型,随机分为对照组(n=12)和细胞移植组(n=12).将SPIO、EGFP双标mNSCs移植到PD大鼠纹状体区.阿朴吗啡(APO)诱导PD大鼠旋转行为评估细胞移植的治疗作用.磁共振成像动态观察移植细胞的存活和迁移,免疫荧光组织化学研究移植细胞的存活、迁移和分化.结果 与对照组比较,SPIO、EGFP双标mNSCs移植能显著改善APO诱导PD大鼠的异常旋转行为(P＜0.01);大多数移植细胞停留于移植原位,仅少数细胞向周围脑组织迁移;移植8周后,大多数mNSCs保持其未分化状态(37±6)%或分化为神经胶质细胞(36±4)%,仅少数细胞分化为DA神经元(6±2)%.结论 通过MRI成像可对体内移植的SPIO标记细胞进行活体示踪.SPIO、EGFP双标mNSCs移植可显著改善PD大鼠的运动障碍.     

盐酸戊乙奎醚对大鼠急性脊髓损伤修复的作用

目的 观察盐酸戊乙李醚对大鼠急性脊髓损伤后脊髓损伤修复的作用.方法 选用健康成年雄性SD大鼠90只分为3组,A组:盐酸戊乙奎醚治疗组(n=40),从造模后1 h开始,经腹腔注射盐酸戊乙奎醚每天3 mg/kg,卣至取材;B组:单纯损伤组(n=40),单纯损伤组同法给予等量生理盐水;C组:正常对照组(n=10),不作任何处理.A组、B组大鼠采用改良Allen'S重物坠落法在T10段制作急性脊髓损伤模型.各组取材前24 h腹腔注射溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)溶液,对距离损伤中心5 mm处的脊髓进行BrdU、nestin阳性细胞数检测.结果 C组脊髓中央管周围及外膜可见少量BrdU阳性细胞,几乎看不到nestin阳性细胞.B组造模后24 h即可见大量BrdU阳性细胞,1周达到高峰,2周后开始明显减少,4周时仅见少量BrdU阳性细胞.与B组比较,24 h时A组BrdU阳性细胞差异无统计学意义,1周时BrdU阳性细胞数明显增多(P<0.05),至2周时仍处于较高水平,4周时仍有大量BrdU阳性细胞表达.B组造模后7 d nestin阳性细胞增多,14 d达到高峰,28 d时可见极少量nestin瞄H性细胞.与B组比较,7 d时A组nestin阳性细胞差异无统计学意义,14 d时nestin阳性细胞数明显增多,至28 d时仍处于较高水平(P<0.05).结论 盐酸戊乙奎醚能够促进急性脊髓损伤大鼠损伤区BrdU及nestin的表达,提示有促进神经干细胞增殖的能力,增强脊髓损伤后自体的修复功能.     

两种方式移植骨髓基质干细胞治疗大鼠脊髓损伤的电生理研究

目的 通过立体定向和尾静脉移植骨髓基质干细胞(BMSCs)于脊髓损伤(SCI)大鼠体内,观察移植后诱发电位的变化及移植细胞对大鼠SCI神经功能恢复的影响. 方法 体外分离、纯化、扩增大鼠BMSCs,移植前用免疫组化单染BrdU标记.动脉瘤夹钳夹法制作大鼠SCI模型.将45只健康成年雌性SD大鼠随机分为对照组、静脉移植组和立体定向移植组(n=15).对照组仅造模,静脉移植组和立体定向移植组在致伤7d后分别经尾静脉和立体定向途径将标记BrdU的BMSCs悬液植入SCI大鼠体内.通过神经电生理检测比较不同途径移植BMSCs对SCI大鼠神经功能恢复的影响. 结果 三组大鼠造模前和造模后7d诱发电位潜伏期及波幅比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);造模后30 d所有大鼠潜伏期逐渐出现不同程度缩短,而波幅逐渐出现不同程度升高.立体定向移植组与静脉移植组大鼠运动诱发电位、感觉诱发电位恢复均优于对照组,且立体定向移植组大鼠运动诱发电位恢复优于静脉移植组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 BMSCs经不同途径移植均可在大鼠脊髓内存活、迁移,明显改善SCI大鼠的神经功能缺损,且移植等量BMSCs时立体定向移植疗效优于尾静脉移植.     

不同诱导阶段的骨髓间充质干细胞修复兔骨损伤的实验研究

目的对比不同诱导阶段的骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)对兔骨折损伤的疗效,并找到适宜移植的最佳诱导时间。方法体外分离培养BMSCs,表型鉴定。绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)转基因标记后,定向诱导。将实验兔40只随机分为5组:未诱导组5只;诱导3 d组10只;诱导7 d组10只;诱导21 d组10只;对照组5只。建立兔尺骨骨折动物模型,造模24 h后,将GFP标记的不同诱导阶段细胞按3×106cells/Kg于骨折处局部注射,移植后行X线检查并评分。结果骨折处X线评分,BMSCs未诱导组、诱导7 d、诱导21 d组评分比较无明显差异(P>0.05),且均显著高于对照组(P<0.01),3 d组评分高于7 d和21 d组(P<0.05),且显著高于对照组(P<0.01)。结论BMSCs成骨诱导3 d可能是最适宜移植的。     

绿色荧光蛋白转基因大鼠骨髓间充质干细胞在急性脊髓损伤大鼠中的迁移和分化

目的观察绿色荧光蛋白转基因大鼠来源的骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)在急性脊髓损伤大鼠脊髓组织中的迁移和分化情况。方法全骨髓贴壁培养法培养BMSCs,Allen法制作脊髓损伤大鼠模型,共30只大鼠。于造模1周后进行干预,随机选取造模成功的24只大鼠并随机分为脊髓损伤组、假移植组(生理盐水注射)和细胞移植组(BMSCs注射),每组8只。于移植前、移植后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d及42 d进行BBB(Basso,BeattieBresnahan locomotor rating scale)评分。HE染色、免疫荧光观察脊髓损伤的组织修复和BMSCs的迁移分化情况。结果从第14天始,细胞移植组大鼠的BBB评分较脊髓损伤组和假移植组大鼠高,差异具有统计学意义(P0.05)。HE染色显示细胞移植组大鼠的脊髓结构相对完整,液化和囊泡区缩小,炎性细胞减少。免疫荧光显示BMSCs聚集于脊髓损伤处,且能分化为神经元、神经胶质细胞和神经前体细胞。结论 BMSCs能向脊髓损伤部位迁移和聚集,并分化为相应的神经细胞促进脊髓功能恢复。     

成年大鼠局灶性脑缺血后内源性神经前体细胞增殖迁移的研究

目的 研究局灶性脑缺血后成年大鼠内源性神经前体细胞在缺血后不同时间窗内增殖分化及前体细胞最大的增殖效应。方法 用Longa’s线栓法制作大鼠脑缺血模型，用免疫组织化学的方法检测大鼠内源性神经前体细胞最佳增殖时间及最大增殖效果。结果 脑缺血半球室管膜下区、嗅球和头端迁移流(RMS)溴化脱氧尿嘧啶(BrdU)阳性细胞数在脑缺血后1d明显增多，3～7d达高峰，14d后开始下降；BrdU阳性细胞数在脑缺血半球室管膜下区和嗅球成正相关；脑缺血侧海马齿状回未见BrdU阳性细胞数明显增多；BrdU阳性细胞最大数量在脑缺血后第3周，从第4周开始BrdU阳性细胞数下降。结论 成年大鼠局灶性脑缺血后3～7d内源性神经前体细胞增殖达高峰。在该期进行外源性细胞移植治疗可能会更行之有效。     

新型MRI磁标记技术对兔骨髓基质干细胞自体皮下移植进行活体示踪的研究

目的 利用超顺磁性氧化铁(SPIO)粒子标记骨髓基质干细胞(BMSCs),探讨用0.2T MRI活体示踪自体皮下移植磁化标记BMSCs的分布和迁移的可行性. 方法 从兔骨髓中分离培养BMSCs,实验组经体外采用SPIO和BrdU双重标记后,与壳聚糖复合植入兔自体大腿皮下.设立自体皮下移植未标记BMSCs组和皮下单纯注射SPIO组为对照组,每组6只.于术后1、5 d及2、4、8周连续行MRI梯度回波T2加权(GRE T2* WI)扫描序列对磁标记细胞成像示踪,并行组织学检查. 结果 磁标记细胞普鲁士蓝染色和电镜检查显示细胞胞浆内含致密铁颗粒.磁标记后自体皮下移植的兔BMSCs在GRE T2* WI序列成像时产生特征性的低信号改变至少维持8周,并观察到从移植部位发出低信号线进入宿主组织.组织学检查显示宿主组织中发现普鲁士蓝阳性细胞和BrdU阳性细胞.结论 体外SPIO能有效地标记BMSCs,利用0.2T MRI活体示踪体自体皮下移植的磁标记兔BMSCs分布和迁移是可行的.     

神经干细胞移植对大鼠脑外伤的治疗作用

目的 通过神经干细胞（NSCs）移植治疗大鼠自由落体撞击脑损伤来探讨NSCs对脑损伤修复的影响。方法 体外培养NSCs并用5—2溴脱氧尿嘧啶（BrdU）标记．自由落体撞击大鼠左侧大脑皮质运动感觉区制作脑外伤模型，脑外伤后24小时内移植NSCs，分别于脑外伤前、脑外伤后1、2、4周时行神经运动行为学评分（NMFE）和免疫组织化学染色检测BrdU、巢蛋白（nestin）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和半乳糖脑苷酯（GalC）蛋白表达。结果 大鼠自由落体撞击伤后．右下肢神经运动功能障碍明显。神经运动行为学评分在第1周时，实验组与对照组无明显差异，而在第2、4周时，实验组的评分明显低于对照组，统计学处理，P〈0．05，有明显统计学差异。第2、4周时实验组NSE．GFAP和GalC染色阳性细胞数要多于对照组．nestin染色在第1周时表达最高，后逐渐下降。BrdU阳性细胞在损伤灶中心区最高多．在损伤灶的远隔部位也有少许发现。结论 NSCs移植有利于大鼠脑自由落体撞击伤后期的功能恢复。移植的NSCs可以在损伤部位存活．并增殖分化与迁移。     

音猬因子体外诱导人骨髓基质干细胞转化为神经元样细胞的研究

目的：研究体外使用音猬因子（sonic hedgehog，SHH）诱导人骨髓基质干细胞（BMSCs）分化为神经元样细胞（神经干细胞、神经细胞、神经胶质细胞）的可行性。方法：从健康志愿者髂骨抽取骨髓5ml．离心、分离BMSCs。接种于含10％胎牛血清（FBS）的DMEM／F12培养液中，BMSCs体外扩增、纯化到第五代后分别种于含有不同浓度诱导液的24孔板中：A组为空白对照；B组加SHH 700ng/ml，碱性成纤维生长因子8（fibroblast growth factor-8，FGF-8）140ng／ml；C组加SHH500ng/ml，FGF-8100ng／ml；D组加SHH250ng/ml，FGF-8 50ng／ml；E组加SHH125ng／ml，FGF-825ng／ml，诱导BMSCs分化。使用免疫组化及免疫荧光鉴定微管相关蛋白（MAP-2）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、神经元烯醇化酶（NSE）的表达。结果：诱导7d后，部分BMSCs胞体收缩、突起伸出，表现出神经元样细胞的形态。除A组外其余各组免疫组化及免疫荧光染色NSE、MAP-2均为阳性，各组免疫组化及免疫荧光染色均有GFAP阳性细胞存在，且以B组、C组的MAP-2、GFAP、NSE染色阳性细胞数最多。结论：人BMSCs具有较强的自我更新和多向分化潜能，一定浓度的SHH可以在体外有效诱导人BMSCs转化为神经元样细胞。     

bFGF与骨髓间充质干细胞联合应用对大鼠脊髓损伤的修复作用

目的:观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)与成纤维细胞生长因子(bFGF)联合移植对大鼠脊髓损伤的修复作用,并探讨其机制。方法:利用血清培养技术获得SD大鼠BMSCs。80只健康雄性6周龄SD大鼠(重约240 g)随机分为4组,每组20只。假手术组行单纯椎板切除,不损伤脊髓,与其余3组同条件饲养。其余3组均采用左侧T9脊髓半切,建立脊髓损伤模型。制模9 d后进行损伤局部移植治疗,对照组损伤处植入吸附有生理盐水的明胶海绵;BMSCs移植组损伤处植入吸附有BMSCs的明胶海绵;bFGF+BMSCs移植组损伤处植入吸附有bFGF+BMSCs的明胶海绵。术后4、8周后Western blotting分析受损脊髓组织中NF-200、GFAP表达水平,Basso Beattie Bresnahan (BBB)运动功能评分量表评价大鼠的后肢功能恢复情况。结果:术后4、8周后BMSCs移植组和bFGF+BMSCs移植组的(BBB)评分较对照组改善(P0.05),且bFGF+BMSCs移植组与BMSCs移植组比较差异有统计学意义(P0.05);术后4、8周后NF200在对照组表达极少,在BMSCs移植组只有少量表达,而bFGF+BMSCs移植组呈高表达(P0.05)。GFAP在对照组表达高,BMSCs移植组少量表达,bFGF+BMSCs移植组呈现低表达(P0.05)。bFGF+BMSCs移植组与BMSCs移植组、对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:BMSCs与bFGF联合移植对大鼠脊髓损伤有修复作用,机制可能与其降低GFAP表达及升高NF-200表达有关。     

红景天苷对大鼠BMSCs向胆碱能神经细胞分化的影响

目的探讨传统中药红景天苷诱导大鼠BMSCs向胆碱能神经细胞分化的作用及影响,以期为红景天苷应用于干细胞治疗神经系统疾病提供理论依据。方法取4～6周龄Wistar大鼠(体重约120 g)2只分离、培养BMSCs,并采用流式细胞仪鉴定。取第2代细胞,根据诱导方法不同将实验分为红景天苷诱导组(A组)、维甲酸诱导组(B组)和空白对照组(C组),A、B组BMSCs分别采用红景天苷(20μtg/mL)和维甲酸(5μmol/mL)诱导培养1、3、6、9 d,MTT法检测细胞增殖活力;细胞免疫荧光染色检测神经细胞相关标志分子神经元特异性烯醇化酶(neuron-specificenolase,NSE)、神经微管相关蛋白2(microtubule-associated protein 2,MAP2)、β-微管蛋白Ⅲ(β-TubulinⅢ)、神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、乙酰胆碱(Acetylcholine,Ach)及NGF的表达;RT-PCR检测NSE、β-TubulinⅢ、GFAP、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)、脑源性神经生长因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)mRNA的表达;ELISA法测定培养液中BDNF和NGF含量;Western blot检测NGF蛋白表达水平。结果流式细胞仪检测显示,CD90和CD106阳性,CD34和CD45阴性,实验细胞为BMSCs。A、B组诱导培养6 d和9 d,细胞增殖活力较C组明显增强(P<0.05)。RT-PCR检测示,A组诱导培养6 d,NSE、BDNF、β-TubulinⅢ、GFAP mRNA表达丰度上调至峰值。B组诱导培养6 d,NSE mRNA表达丰度上调至峰值;1 d时BDNF mRNA表达丰度上调,6 d时达峰值;3 d时β-TubulinⅢmRNA表达丰度上调至峰值;1 d时GFAP mRNA表达丰度达峰值,与其余各时间点及C组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。各组各时间点均未见GABA mRNA表达。细胞免疫荧光染色示,诱导培养3 d,A、B组NSE、MAP2、β-TubulinⅢ和GFAP阳性率与C组比较差异均有统计学意义(P<0.01);A、B组诱导培养3、6、9 d,Ach阳性率均高于诱导培养1 d时及C组阳性率(P<0.01);A、B组各时间点NGF阳性率均显著高于C组(P<0.01)。ELISA法检测显示,A、B组诱导培养1、3、6、9 d时,BDNF、NGF表达水平均较C组上调(P<0.01),各时间点A、B组间BDNF表达水平比较差异无统计学意义(P<0.01)。Western blot检测显示,A组诱导培养6 d、B组诱导培养3 d时NGF蛋白表达最高。结论红景天苷能定向诱导大鼠BMSCs分化为胆碱能神经细胞。     

神经干细胞经枕大池移植后在损伤脑组织中的表达及分化

目的本实验将神经干细胞经枕大池移植到创伤性脑损伤模型大鼠蛛网膜下腔中，观察其向损伤脑组织迁移、存活及分化能力，探讨神经干细胞更安全、便捷及经济的移植途径。方法体外培养的神经干细胞（NSCS）取自胎鼠皮层，并用5-溴脱氧尿嘧啶（Brdu）标记。采用Feeney＇s自由落体脑创伤模型制成大鼠脑损伤模型，伤后24h将神经干细胞经枕大池移植到蛛网膜下腔，分别于移植后第1、2周处死取脑，行免疫组织化学染色检测BrdU、微管相关蛋白2（MAP2）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）。结果免疫组织化学染色表明，BrdU（＋）神经干细胞迁移到脑内损伤灶，并分化成煳（＋）神经元或GFAP（＋）胶质细胞。结论神经干细胞具有从蛛网膜下腔迁移入脑内损伤组织、分化为神经元及神经胶质细胞。     

大鼠骨髓间充质干细胞分离培养及多向分化研究的体外实验

目的 分离培养较高纯度大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）,检测其多向分化潜能.方法 采用密度梯度离心结合差速贴壁法分离培养大鼠BMSCs,观察细胞形态,检测表面标志物CD34、CD44、CD45、CD90表达情况,及其成骨、成脂、成神经诱导后茜素红染色、油红O染色和NSE、GFAP免疫荧光染色情况.结果 细胞呈典型的成纤维细胞样形态,CD44和CD90呈阳性表达,CD34和CD45呈阴性表达,细胞纯度＞98%.成骨、成脂、成神经诱导后,茜素红染色、油红O染色、NSE和GFAP免疫荧光均为阳性.结论 密度梯度离心结合差速贴壁法可分离、培养出高纯度的大鼠BMSCs,该细胞具有成脂、成骨、成神经多向分化潜能,是脊髓损伤修复的一种较理想的种子细胞.     

5-BrdU标记的骨髓间充质干细胞对大鼠创面愈合的作用研究

目的探讨以5-溴脱氧尿嘧啶（5-BrdU）标记的骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）在大鼠创面愈合中的作用。方法分离培养大鼠BMSCs并用流式细胞仪技术鉴定。在大鼠背部脊柱一侧制作全层皮肤缺损模型，实验组经尾静脉注入经5-BrdU标记的BMSCs，移植细胞数为2×10^7。对照组为5-BrdU标记的BMSC移植的正常大鼠。术后3d、7d、14d、21d、28d分批处死动物，观察移植细胞参与创面愈合的情况。结果流式细胞仪鉴定细胞表达CD29、CD90；CD45表达呈阴性。实验组：经5-BrdU体外标记的BMSCs进行细胞移植14d后，大鼠创面局部及边缘可见5-BrdU标记的阳性细胞聚集，免疫组化染色可见基底层、真皮层、新生血管周围有散在红棕色标记细胞；对照组中未发现明显的聚集现象；抗BrdU／FⅧ、BrdU／波形蛋白免疫双标技术检测结果显示：在创伤部位有部分BMSCs分化为血管内皮细胞和成纤维细胞参与创面愈合。大鼠正常皮肤中未见明显的BMSCs聚集和增殖分化情况。结论经尾静脉注射移植的BMSCs参与皮肤创面愈合。     

骨髓基质干细胞治疗脊髓损伤的体外诱导分化及相关蛋白表达

目的 探讨模拟脊髓细胞环境下骨髓基质干细胞(BMSCs)的分化及蛋白差异表达.方法 分离培养Wistar大鼠骨髓的BMSCs和脊髓的神经细胞,设立BMSCs自然分化组、与神经细胞共培养组和双层培养组,8 d后对各组BMSCs进行神经特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光检测.应用表面增强激光解析离子化-飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)筛选双层培养组BMSCs变化明显的蛋白进行分析.结果 BMSCs与神经细胞共培养和双层培养8 d后,BMSCs呈神经细胞形态.NSE和GFAP检测结果 ,BMSCs与神经细胞共培养组明显高于BMSCs与神经细胞双层培养组(P＜0.05),而BMSCs和神经细胞双层培养组又明显高于BMSCs自然分化组(P＜0.05).SELDI-TOF-MS检测到TIP39_RAT和CALC-RAT增加到原来的5.360和2.807倍,INSL6-RAT、PNOC_RAT和PCSK1_RAT减少到原来的38.0%、49.9%和43.8%.结论 在脊髓神经细胞微环境下体外培养BMSCs能诱导其分化成神经细胞,而且接触培养分化率高;BMSCs在向神经细胞分化机制中与TIP39_RAT、CALC_RAT、INSL6_RAT、PNOC_RAT和PCSK1_RAT密切相关.     

Trophic Effect of Porcine Sertoli Cells on Rat and Human Ventral Mesencephalic Cells and hNT Neurons In Vitro

The poor survival of embryonic dopaminergic (DA) neurons transplanted into patients with Parkinson’s disease (PD) has encouraged researchers to search for new methods to affect the short- as well as long-term survival of these neurons after transplantation. In several previous rodent studies Sertoli cells increased survival of islet cells and chromaffin cells when cotransplanted in vivo. The aims of this study were to investigate whether porcine Sertoli cells had a positive effect on the survival and maturation of rat and human DA neurons, and whether the Sertoli cells had an effect on differentiation of neurons derived from a human teratocarcinoma cell line (hNT neurons). A significant increase of tyrosine hydroxylase (TH)-positive neurons of both rat and human ventral mesencephalic tissue was found when cocultured with Sertoli cells. Furthermore, there was a significantly increased soma size and neurite outgrowth of neurons in the coculture treated group. The Sertoli cell and hNT coculture also revealed an increased number of TH-positive cells. These results demonstrate that the wide variety of proteins and factors secreted by porcine Sertoli cells benefit the survival and maturation of embryonic DA neurons and suggest that cotransplantation of Sertoli cells and embryonic DA neurons may be useful for a cell transplantation therapy in PD.