卡那霉素中卡那霉素B生物效价测定方法的研究

卡那霉素产生菌在发酵过程中产生卡那霉素A及卡那霉素B,我们在参照中国药典1977年版“卡那霉素中卡那霉素B的检查法”测试卡那霉素B生产工艺研究中间体样品时遇到困难,特别是在B含量较高,杂质含量高,成份较复杂的发酵液样品时,B含量偏高,常超过100％现象,而且重演性很差。 1977年版药典中卡那霉素B计算公式:     

发酵液中卡那霉素A、B的分离鉴别

卡那霉素产生菌发酵过程中,除产生卡那霉素A之外,还产生不同量的卡那霉素B。B对革兰氏阳性菌和阴性菌有强的抗菌作用,对金黄色葡萄球菌的作用比A约大5倍,但B毒性较A大,成品中B含量增高,对病人的毒性也将随之增高。为此,我国药典1977年版规定卡那霉素A中卡那霉素B含量不得超过5％,并规定了卡那霉素B在浓盐酸中回流水解后的生物测定方法。我们为了能快速检测发酵液中卡那霉素组份,采用了薄层层离卡那霉素A、B组份,N.B.D.氯化物萤光显迹的方法。本文介绍薄层层离溶剂系统的选择和卡那霉素A、B用N.B.D.氯化物萤光显迹的灵敏度。     

荧光薄层扫描法测定卡那霉素中B组份的含量

卡那霉素含有A、B、C三个主要组份,我国生产的卡那霉素主要组份是卡那霉素A.C组份含量极微,由于B组份毒副作用大,因而要求控制在5％以下。英国药典 1980年版用柱层析的方法控制B组份的限度;美国药典XX版和中国药典1985年版采用先水解,后用微生物检定法,规定的含量不得超过5％,该方法可以定量测定,但操作复杂,误差较大。高效液相色谱法具有分离分析性能,最适于抗生素组份分离测定。但在无HPLC情况下可选用荧光薄层扫描法测定卡那霉素B组份含量。     

分光光度法测定发酵液中卡那霉素A和B

本文报道复杂组分中卡那霉素A和B的单组分的分光光度测定法。样品中的卡那霉素A和B用硅胶H薄层层析分离,以茚三酮-醋酸镉溶液系统显迹和显色。分离和测定过程很简单,容易操作。可供发酵液中卡那霉素A和B单组份的含量测定,并得到满意的结果.     

卡那霉素B的酶—化学修饰

用酶—化学修饰的方法,对卡那霉素B的C_3~′位进行化学结构改造。利用耐药菌E.coliK.12 ML1629产生的钝化酶选择性地使卡那霉素B的C_3~′位羟基磷酸化,再用化学方法,将卡那霉素B-3~′—磷酸酯转化为3′—氯代—3′—去氧卡那霉素B,进而合成3′去氧卡那霉素B,即妥布拉霉素。     

卡那霉素及有关氨基糖甙类抗菌素的化学结构改造

卡那霉素(1)系一个氨基糖甙类抗菌素,它由A、B、C三种成分组成,卡那霉素A(1a)为主要成分,而卡那霉素B(1b)具有最高的抗菌活性。随着卡那霉素的广泛应用,逐步发现有许多细菌对卡那霉素是耐药的。为了克服对卡那霉素的耐药问题以及它的某些不良副反应(如对听觉神经的毒性等),人们在卡那霉素的化学结构改造方面,开展了大量的研究工作。     

小单孢菌FIM10-2207生物转化卡那霉素B的初步研究

在卡那霉素B的微生物转化研究中,从台湾海峡海底沉积物中分离得到五株对卡那霉素B具有转化作用的菌株,选取其中转化率较高的一株菌,编号为FIM10-2207,经分类学研究鉴定为小单孢菌。初步考察了培养基的选择,底物卡那霉素B的初始浓度和添加时间这3个因素对转化率的影响,发现转化培养基C,添加时间32h和底物初始浓度1500μg/mL时,转化率较高。卡那霉素B经该菌株转化后,得到一个新化合物,波谱数据分析结果表明该产物为1,3″-二乙酰化卡那霉素B。     

卡那霉素发酵研究

近年来,国内外在提高卡那霉素发酵单位方面的研究工作,有一些报告。Basak,K.等报导了在合成培养基上卡那链霉菌对碳源及氮源的利用。Abou-Zeid,AbouZeid,A.等对卡那霉素发酵做了大量工作,他们用埃及糖蜜做原料,使卡那霉素发酵单位最高达6000μ/ml并降低了 B含量。1971年Kawaji,S.等用二脱氧链霉胺来提高卡那霉素发酵单位,作用较大。1963年H.Umezawa曾报导Fe~( )、Fe~( )和Zn~( )对提高卡那霉素发酵单位的作用。1975年Basak,K也作了类似的报导。     

从卡那霉素结晶母液中分离卡那霉素B

卡那霉素B系卡那霉素链霉菌(Str.Kanamyceticus)在发酵培养过程中产生的主要成份之一,它对革兰氏阳性、阴性菌均有很强的抗菌作用,特别是对青霉素、链霉素、红霉素等产生耐药的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌对本品亦敏感。对金黄色葡萄球菌作用,本品>头孢菌素Ⅰ>四环素>羧苄青霉素,比卡那霉素大五倍。它的抗菌能力很大,但毒性亦稍高,主要对第八对脑神经听觉系统产生障碍和肾脏毒性,但停药后一周即消失。 卡那霉素结晶母液中存在着一定量的卡那霉素B,本文报导从卡那霉素母液中分离卡那霉素B并制成针剂,用在猪哮喘病治疗上,取得很好效果。     

1-N-(1,3-二羟基-2-丙基)卡那霉素B(UK-31,214)的合成及其抗菌活性

UK-31,214是美国 Pfizer 公司研制的卡那霉素 B 的新衍生物,化学结构: UK-31,214本品系以卡那霉素 B 为原料,先将卡那霉素 B 分子中2′,3,3″,6′-位的四个氨基行甲酰化(保护氨基)得2′,3,3″,6′-四-N-甲酰卡那霉素B(Ⅰ),然后在二甲基亚砜中,用1,3-二羟基丙酮和氰基硼氢化钠对(Ⅰ)的1-位氨基进行烷基化得1-N-(1,3-二羟基-2-     

从发酵液中分离提取卡那霉素的新工艺研究

以卡那霉素发酵液为原料 ,通过比较不同类型阳离子交换树脂的吸附特性 ,筛选出卡那霉素B的吸附率高、杂质吸附量较低和卡那霉素吸附总量较高的D4阳离子交换树脂。确定了较佳的吸附富集条件为 :上柱发酵液的pH7.0 ,吸附流速 1.5v/(v·h) ;进一步确定较佳的除杂洗脱条件为 :硫酸铵溶液浓度 1.0 %(v/v) ,pH7.5 ,流速 1.2 5v/(v·h)除杂质。最后用 4%(v/v)氨水洗脱。经过在阳离子交换树脂上的吸附富集和除杂质后 ,可以将发酵液卡那霉素中约含 2 .5 %的卡那霉素B组分提高到 6%以上。通过采用多柱串联工艺流程 ,达到分离富集卡那霉素B组分 ,提高卡那霉素碱成品 (卡那霉素A碱 )纯度的目的     

HPLC-CAD法同时测定硫酸卡那霉素注射液中卡那霉素和卡那霉素B的含量

摘 要 目的：建立HPLC CAD法测定硫酸卡那霉素注射液中卡那霉素和卡那霉素B含量的方法。方法: 采用Boston Green ODS C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱,以0.2 mol·L-1三氟醋酸溶液 甲醇（95 ∶〖KG-*2〗5）作为流动相,流速:1.0 ml·min^-1,柱温:30℃,喷雾温度:55℃,喷雾压力:56.4 psi。结果:卡那霉素在0.385~38.500 μg·ml^-1之间呈现良好的线性关系（r=0.999 9）,检出限为0.075μg·ml^-1,定量限为0.154 μg·ml^-1,回收率为100.97%（n=9）。卡那霉素B在0.374~37.400 μg·ml^-1之间呈现良好的线性关系（r=1.000 0）,检出限为0.075 μg·ml^-1,定量限为0.150 μg·ml^-1,回收率为100.44%（n=9）。结论:建立的HPLC CAD测定卡那霉素和卡那霉素B含量的方法检出限低,操作简单准确,可以有效控制硫酸卡那霉素注射液的质量。     

卡那霉素B的酶修饰和化学修饰

用酶修饰和化学修饰相结合的方法,对卡那霉素B的(C_3’位进行了化学结构改造。利用耐药菌E.coli K 12 ML 1629产生的钝化酶选择性磷酰化卡那霉素B的C_3’位羟基,我们对该大肠杆菌的培养条件,酶反应的最适pH、缓冲溶液的选择、ATP的加入量及反应时间等进行了探讨。然后再用化学方法,将卡那霉素B-3’-磷酸酯转化为 3’-氯-3’-脱氧卡那霉素B。对氯代反应的条件、产物分     

HPLC-CAD法测定硫酸卡那霉素及注射液含量及有关物质

目的建立测定硫酸卡那霉素原料及其注射液中有关物质与卡那霉素含量的高效液相色谱-电喷雾检测器(HPLCCAD)方法。方法采用Waters HSS T3色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以0.2 mol/L三氟乙酸水溶液为流动相,流速0.3m L/min,柱温30℃,电喷雾检测器的喷雾器温度为35℃。结果新建方法对卡那霉素与硫酸盐、有关物质分离良好,精密度、重复性、回收率均满足分析要求。卡那霉素浓度与峰面积线性关系良好(R2>0.99),检出限可达到6.1ng。采用该方法对单硫酸卡那霉素、硫酸卡那霉素以及硫酸卡那霉素注射液进行了测定,检出的有关物质个数及含量均高于现行标准的结果。结论新建方法灵敏度更高、分离度更好,能检出更多杂质,可以满足硫酸卡那霉素原料及注射液有关物质及含量测定分析要求。     

应用ELISA测定睫状神经营养因子中卡那霉素残留量

目的:建立ELISA检测卡那霉素残留量的方法并进行方法学验证,用于重组技术产品的质量控制。方法:采用间接竞争ELISA方法,样本中残留的卡那霉素将和微孔板上预包被的偶联抗原竞争抗卡那霉素抗体,加入酶标二抗后,用3,3,5,5-四甲基联苯胺(TMB)底物显色,样本吸光值与残留卡那霉素的含量成负相关,用酶标仪进行检测并用SOFT MAX分析软件进行分析。结果:ELISA方法测定卡那霉素残留量在0.5~40.5 ng.mL-1范围内线性良好,且符合四参数方程式:y=(A-D)/[1+(X/C)B]+D,r2≥0.99;板内变异小于15%,板间变异小于20%,实验重复性好,加标回收率在80%~120%之间;该方法检测与庆大霉素、盐酸四环素、链霉素和氨苄西林药物未显示交叉反应。应用该法对1批睫状神经营养因子(CNTF)原液的卡那霉素残留量进行测定,结果表明,每人用剂量CNTF(100μg)卡那霉素残留量小于0.5 ng。结论:该方法具有灵敏度高、操作简便、检测迅速等特点,可用于重组技术产品中卡那霉素残留量的检定。     

氨基糖苷类抗生素衍生物的工业生产

3′,4′-双脱氧卡那霉素 B(Dibeka-cin)、丁胺卡那霉素(Amikacin)是以氨基糖苷类抗生素的耐药机制为基础进行化学改造而获得的对耐药菌有效的新的广谱半合成卡那霉素衍生物,对革兰氏阴性肠道杆菌和禄脓杆菌具有特效,是继卡那霉素和艮他霉素     

三种氨基甙类抗生素(紫苏霉素、乙基紫苏霉素、双去氧卡那霉素)简评

一、这三种使用较少的药物性质的略述紫苏霉素是一种由小单孢菌Micromonspora inyoensis产生的天然氨基甙抗生素,而双去氧卡那霉素和乙基紫苏霉素都是半合成氨基甙类抗生素。双去氧卡那霉素是3′.4′-二去氧卡那霉素B;乙基紫苏霉     

复方卡那霉素眼药水中卡那霉素和地塞米松的含量测定

目的：解决复方卡那霉素眼药水中卡那霉素和地塞米松的含量测定问题。方法：在复方卡那霉素眼药水中加入衍生试剂,使卡那霉素形成二氢吡啶衍生物,利用其在紫外有吸收的特点进行测定。地塞米松的测定因受到对羟基苯甲酸乙酯的干扰,所以采用双波长分光光度法进行测定。结果：卡那霉素在８～２０μｍ／ｍｌ范围内呈线性ｒ＝０．９９９８,地塞米松在１２～２０μｇ／ｍｌ范围内呈线性ｒ＝０．９９９８,卡那霉素和地塞米松的平均回收     

TLC法测定制剂中氨基苷类药物的含量

本文报道用薄层色谱(TLC)紫外分光法测定地贝卡星、新霉素B、卡那霉素、乙基西梭霉素、西索米星、妥布拉霉素、庆大霉素等7个氨基苷类抗生素的注射剂、胶囊、眼药水、溶液与油膏制剂中的氨基苷含量,方法简便、快速。当氨基苷经硅胶G TLC 分离后以茚三酮显色后,用薄层分光仪测定含量。RSD     

绿脓杆菌产生的6′-N-乙酰转移酶基质结构的要求

众所周知,带R—因子的大肠杆菌和绿脓杆菌产生的6’-N-乙酰转移酶(简称为AAC(6’))系构成对一些氨基糖甙类抗菌素耐药机制的组成部份;例如卡那霉素,卡那霉素B.3’、4’—二脱羟卡那霉素B(简称为DKB)和Ribostamycin可被上述酶所钝化;庆大霉素CIa和Sisomicin亦然。本文报导有关从绿脓杆菌制备的AAC(6)’对基质结构的某些要求。根据前文所述的方法制备绿脓杆菌GN315在100,000g离心分离