骨桥蛋白介导类风湿关节炎发病机制的初步研究

目的研究骨桥蛋白(OPN)介导类风湿关节炎(RA)发病和促进炎症因子产生的作用。方法采用实时定量聚合酶链反应(PCR)的方法检测OPN在RA患者外周血、关节液和关节滑膜组织和在T淋巴细胞亚群中的表达;从蛋白水平分析RA患者关节液中促炎症细胞因子和抗炎症细胞因子的分泌格局,分析OPN与细胞因子的相关性。结果RA患者关节滑液和关节滑膜组织的OPN表达远远高于外周血单个核细胞的OPN基因表达,CD4 T细胞OPN基因表达均高于CD8 T细胞;RA患者关节液中OPN的表达显著高于血清,白细胞介素(IL)-10,干扰素(IFN)-γ和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平比自身血清及对照组血清增高,IL-18和IL-12水平比正常对照组明显升高。结论OPN可能通过调节病灶部位的细胞因子的分泌来调控RA病理过程中的炎症反应。     

趋化因子受体CCR4在活动期类风湿关节炎患者外周血CD4+T细胞表达的研究

目的 探讨活动期类风湿关节炎(aRA)患者趋化因子受体CCR4在外周血CD4+T细胞的表达及其意义,并对该表达与血清重要细胞因子水平的相关性进行研究.方法流式细胞计数方法对12例aRA患者和10名健康对照者外周血CD4+T细胞表面CCR4的表达情况进行检测;酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测患者血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-10及干扰素(IFN)-γ的水平并记录患者相关临床及实验室资料.分析及评价aRA患者外周血淋巴细胞中CD4+CCR4+T细胞百分数(CD4+CCR4+T%)与TNF-α、IL-10、IFN-γ的血清水平及临床指标的相关性.结果 aRA组外周血CD4+CCR4+T%明显高于健康对照组(P＜0.01).aRA组血清TNF-α(P＜0.01)、IL-10(P＜0.01)及IFN-γ(P＜0.01)水平明显高于健康对照组.在检测的细胞因子中,aRA患者血清IL-10水平与CD4+CCR4+T%呈明显正相关关系(r＝0.66,P＜0.05).在临床指标中,CD4+CCR4+T%与aRA患者Lunsbury关节指数、血沉、C反应蛋白及血小板计数呈明显正相关关系(P＜0.05).结论 CCR4在CD4+T细胞趋化至病变关节过程中可能发挥重要作用;外周血CD4+CCR4+T%与血清IL-10水平密切相关;该百分数可以作为临床评价RA活动性的一个敏感指标.     

骨桥蛋白在系统性红斑狼疮中的临床意义

目的 研究血清骨桥蛋白(OPN)与系统性红斑狼疮(SLE)临床表现、实验指标、疾病活动的相关性,探讨血清OPN在SLE中的意义及SLE的发病机制.方法 用酶联免疫吸附(ELISA)法检测68例SLE患者和20名正常对照组血清中OPN的水平,并监测SLE患者的临床表现及实验室指标,分析其与OPN的相关性.结果 68例SLE患者中79%血清OPN阳性,20名正常对照组0PN均阴性,SLE组患者血清OPN阳性率及OPN水平显著高于正常对照组(P＜0.01).血清OPN阳性组的SLE患者与OPN阴性组的SLE患者相比,在年龄、性别及病程上差异均无统计学意义(P＞O.05 .血清OPN阳性组SLE患者发热、脱发、白细胞降低、肝脏损害、补体C4降低、免疫球蛋白IgA增高、蛋白尿及抗dsDNA抗体阳性的发生率明显高于OPN阴性组(P＜0.05). SLE患者血清OPN阳性率明显高于抗dsDNA抗体、抗sm抗体的阳性率,差异具有统计学意义(P＜0.01). SLE患者血清OPN水平与SLE疾病活动指数(SLEDAI)积分呈明显的正相关(r=0.292;P＜0.05);SLE活动期患者血清OPN阳性率及水平明显高于SLE缓解期患者,两组比较差异具有统计学意义(P＜O.05).结论 SLE患者血清中OPN水平升高,与SLE疾病活动性密切相关,可作为SLE的病情活动指标.     

系统性红斑狼疮患者外周血CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞数量和Foxp3mRNA的表达水平与疾病活动性的相关性

目的 研究系统性红斑狼疮(SEE)患者CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞的数量及其功能基因Foxp3 mRNA的表达水平与SLE疾病活动性和肾脏损伤的相关性.方法 采用四色流式细胞术以Foxp3-异硫氰酸荧光素(FITC )/CD25-藻红蛋白/CD4-多甲藻叶绿素蛋白(PerCP)/CD3-藻蓝蛋白7抗体组合检测40名健康对照者及42例SLE患者外周血CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞的数量,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测特异性转录因子Foxp3 mRNA的表达水平,并分析其与SLE患者疾病活动指数(SLEDAI)、补体C3及血清抗双链DNA(dsDNA)抗体的关系.统计学方法采用t检验和Spearman相关分析.结果 活动期SLE患者外周血CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞数量显著低于健康对照组[(4±3)％与(7±4)％,P＜0.05],稳定期与健康对照组差异无统计学意义(P＞0.05);活动期SLE患者外周血CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞数量及CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞/CD4+比值显著低于稳定期患者[(4±3)％,(9±6)％与(5±4)％,(10±6)％,P均＜0.05];活动期SLE患者外周血Foxp3 mRNA的表达水平明显低于稳定期和对照组(P＜0.01,P＜0.05);SLE患者并发肾病组外周血CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞数量及CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞/CD4+比值显著低于SLE非肾病组(P＜0.05).相关分析显示,SLE患者外周血CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞数量与SLEDAI呈负相关(r=-0.5782,P＜0.05);CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞/CD4+比值与SLEDAI呈负相关(r=-0.4913,P＜0.05),与补体C3呈正相关(r=0.3687,P＜0.05);SLE患者外周血CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞数量与Foxp3 mRNA的表达水平呈正相关(r=0.6142,P＜0.0l).结论 SLE患者外周血CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞和Foxp3 mRNA的变化可能是导致SLE疾病发生和发展的关键因素之一,与疾病的活动性有密切关系.     

胃癌患者CD4~+/8~+T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3表达水平及意义

目的观察胃癌患者外周血、癌旁组织和癌组织中CD4~+T细胞和CD8~+T细胞表面T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim3)的表达情况及其对CD4~+T细胞和CD8~+T细胞功能的影响。方法抽取胃癌患者外周血,通过密度梯度离心法分选获取外周血单个核细胞(PBMC)。获取的肿瘤组织及癌旁组织标本经研磨法获取肿瘤浸润T细胞。通过流式细胞染色的方法检测胃癌患者外周血、癌旁组织和癌组织中CD4~+T细胞和CD8~+T细胞表面Tim3的表达情况。激活Tim3信号后,通过流式细胞术胞内染色的方法检测CD4~+T细胞和CD8~+T细胞表达肿瘤坏死因子(TNF)-α和穿孔素的能力。结果与胃癌患者外周血CD4~+/8~+T细胞表面Tim3表达水平相比,胃癌患者癌旁组织和癌组织浸润CD4~+/8~+T细胞表面Tim3表达水平显著升高(P0.01);且与胃癌患者癌旁组织浸润CD4~+/8~+T细胞表面Tim3表达水平相比,胃癌患者癌组织浸润CD4~+/8~+T细胞表面Tim3表达水平显著升高(P0.01)。激活Tim3信号后,CD4~+T细胞分泌TNF-α的能力显著降低(P0.01),同时CD8~+T细胞分泌穿孔素的能力亦显著降低(P0.01)。结论胃癌组织CD4~+T细胞和CD8~+T细胞表面Tim3表达水平的升高可能与胃癌的进展密切相关。     

高龄肝癌患者CD4+CD25+调节性T细胞及转化生长因子-β1检测的临床意义

目的 探讨检测老年原发性肝癌患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)及血清转化生长因子(TGF)-β1的临床意义. 方法 应用流式细胞学方法和酶联免疫吸附测定方法分别检测80岁以上老年健康者20例、原发性肝癌患者22例、转移性肝癌患者25例外周血Treg占总CD4+T细胞的比例和血清TGF-β1浓度. 结果 老年原发性肝癌、转移性肝癌患者外周血Treg占总CD4+T细胞的比例与老年健康对照组比较均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01).老年原发性肝癌患者外周血T reg总CD4+T细胞比例较老年转移性肝癌患者亦明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).老年原发性肝癌、转移性肝癌患者血清TGF-β1浓度与老年健康对照组比较均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01).老年原发性肝癌患者血清TGF-31浓度较老年转移性肝癌患者亦明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01).相关分析显示,原发性肝癌患者外周血Treg占总CD4+T细胞的比例与病理分期、血清TGF-β1浓度呈正相关(r=0.782、r=0.698,P＜0.01),与Karnofsky功能状态(KPS)评分负相关(r=-0.643,P＜0.01). 结论 高龄原发性肝癌患者外周血Treg比例明显升高,且与血清TGF-β1浓度、病理分期及KPS评分具有一定的相关性.检测老年原发性肝癌患者外周血Treg占总CD4+T细胞的比例,可能有助于评估老年原发性肝癌患者病情进展情况及判断其预后.     

CD4+CD25+ T细胞在溃疡性结肠炎中的表达及其临床意义

目的 研究溃疡性结肠炎(UC)患者外周血CD 4CD 25调节性T细胞比例的变化,探讨其在UC病理机制中的意义.方法 选择UC患者33例,对照组20例.用流式细胞仪检测外周血CD 4CD 25T细胞阳性率.用RT-PCR检测外周单个核细胞(PBMC)中Foxp3 mRNA的表达.用酶联免疫吸附试验检测血清中IL-10和TGF-β的浓度.结果 UC患者CD 4CD 25T细胞占CD 4T细胞的比例明显低于对照组(P＜0.01),并且与疾病的活动指数及血沉水平均呈显著负相关(R值分别为-0.660和-0.572,P值均＜0.01).UC患者Foxp3 mRNA的表达也明显低于对照组(P＜0.01).两组患者血清IL-10和TGF-β的浓度比较无明显差异(P＞0.05).结论 UC患者外周血CD 4CD 25 调节性T细胞明显降低,与疾病活动性相关,提示这类细胞可能在UC的病理机制中发挥作用.Foxp3表达降低可能是导致CD 4CD 25 T细胞发育障碍的重要因素.     

乙型肝炎病毒感染者不同疾病阶段外周血T淋巴细胞表面程序性死亡受体-1及血清细胞因子的表达

目的 探讨HBV感染后不同疾病阶段(免疫耐受期、免疫清除期、非活动携带状态)患者T淋巴细胞表面程序性死亡受体-1(PD-1)和血清细胞因子的表达差异.方法 2011年4月至2011年9月无锡市第五人民医院住院或门诊的HBV感染者105例,HBV感染后免疫耐受期、免疫清除期、非活动携带状态患者各35例,另选20名健康人作为对照组.收集研究对象的外周血,流式细胞术检测CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞表面PD-1的表达水平,ELISA检测血清IL-10、IFN-γ的表达水平.数据处理采用t检验,相关性分析采用Pearson相关分析.结果 HBV感染组CD8+T淋巴细胞表面PD-1表达水平为(12.35±3.48)％,高于健康对照组的(4.65±1.21)％(t=9.76,P＜0.01);HBV感染组CD4+T淋巴细胞表面PD-1表达水平为(4.95±2.87)％,健康对照组为(4.08±2.14)％,两组比较差异无统计学意义(t=1.29,P＞0.05).免疫耐受组、免疫清除组、非活动携带组CD8+T淋巴细胞表面PD-1表达水平分别为(15.87±3.18)％、(7.69±3.64)％和(10.12±2.84)％,均高于健康对照组(t值分别为15.12、3.61和8.17,均P＜0.01),免疫耐受组CD8+T淋巴细胞表面PD-1表达水平高于免疫清除组(t=10.01,P＜0.01).慢性乙型肝炎患者外周血CD8+T淋巴细胞表面PD-1表达水平与IL-10呈正相关(r=0.377,P＜0.05),与IFN-γ呈负相关(r=-0.620,P＜0.05).结论 慢性乙型肝炎患者外周血CD8+T淋巴细胞表面PD-1表达上调,PD-1水平与血清Th1细胞因子IFN-γ呈负相关,与血清Th2细胞因子IL-10呈正相关;HBV感染慢性化可能与PD-1高表达有关.     

糖皮质激素对系统性红斑狼疮CD4+Foxp3+T细胞水平的影响

目的 探讨糖皮质激素治疗对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD4+ Foxp3+ T细胞水平的影响以及CD4+Foxp3+T细胞与SLE疾病活动的相关性.方法 采用流式细胞术检测26例SLE患者和5名正常人外周血CD4+Foxp3+T细胞百分率,Spearman相关分析法分析CD4+Foxp3+T细胞与SLE疾病活动指标及糖皮质激素的相关性.结果 活动期SLE患者外周血CD4+Foxp3+T细胞百分率(2.4±1.6)%低于正常人(3.3±0.8)%,但差异无统计学意义;非活动期SLE患者外周血CD4+Foxp3+T细胞百分率(3.3±0.7)%与正常人比较差异无统计学意义.活动期SLE患者经糖皮质激素治疗后外周血CD4+Foxp3+T细胞(6.1±3.5)%较治疗前(3.9±2.4)%升高(P＜0.05).SLE患者外周血CD4+Foxp3+T细胞水平与年龄、病程、红细胞沉降率、尿蛋白定量(24 h)、血清补体C3浓度、血清抗双链DNA(anti-dsDNA)抗体水平及SLE疾病活动指数(SLEDAI)无相关性,但与糖皮质激素每日用量呈显著正相关(r=0.51,P＜0.05).结论 SLE患者外周血CD4+Foxp3+T细胞水平不能作为狼疮活动指标.糖皮质激素治疗可上调SLE患者外周血CD4+Foxp3+T细胞水平,CD4+Foxp3+T细胞水平上调可能是糖皮质激素治疗SLE有效的机制之一.     

B7-CD28/CTLA-4在胃癌患者中的表达及意义

目的 观察胃癌患者外周血中CD＋28、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）（CD152）＋T细胞和癌组织细胞表面B7表达水平,以进一步探讨肿瘤的免疫逃逸机制.方法 研究对象包括同期手术治疗的胃癌患者（胃癌组）36例、胃炎及胃溃疡患者10例（胃良性疾病组）、健康查体者26例（对照组）,采用流式细胞术检测三组外周血中CD＋3、CD＋4、CD＋8、CD＋28、CTLA-4（CD152）＋T细胞水平,检测前两组胃组织细胞B7分子表达水平.结果 胃癌组外周血CD＋28T细胞水平显著低于其余两组（P＜0.01）、CTLA-4（CD152）＋T细胞水平显著高于其余两组（P＜0.01）;胃组织细胞B7-1（CD80）、B7-2（CD86）表达水平胃癌组显著低于对照组（P＜0.01）.结论 胃癌患者存在B7-CD28/CTLA-4共刺激通路异常,此可能为影响T细胞有效清除肿瘤细胞、从而使肿瘤逃避机体免疫监视的机制之一.     

系统性红斑狼疮患者外周血Th17细胞与调节性T细胞的变化

目的 探讨外周血辅助性T细胞17(Th17)与调节性T细胞在系统性红斑狼疮(SLE)发生、发展中的变化.方法 选取32例SLE活动期患者作为SLE活动组、30例SLE稳定期患者作为SLE稳定组及25名健康者作为对照组,采用流式细胞术及定量聚合酶链反应(PCR)的方法,分别从蛋白质水平与mRNA水平检测其外周血CD4+T细胞IL-17及FoxP3的表达.采用单因素方差分析进行统计学处理.结果 SLE活动组外周血CD4+T细胞IL-17蛋白质(1.01±0.22)％及mRNA(2.04±0.63)表达水平显著高于SLE稳定组(0.48±0.16)％、(1.12±0.34)及健康对照组(0.41±0.12)％、1(P＜0.01),但SLE稳定组与健康者对照组差异无统计学意义(P＞0.05).SLE活动组外周血CD4+T细胞FoxP3蛋白质(2.36±0.54)％及mRNA(0.42±0.16)表达水平显著低于SLE稳定组(4.34±0.95)％、(0.87±0.28)及健康对照组(5.09±1.17)％、 1(P＜0.01),SLE稳定组又低于健康对照组(P＜0.05).结论 SLE患者外周血中可能存在Th17/调节性T细胞的失衡,且失衡程度可能与病情活动性相关.     

晚期血吸虫病患者外周血CD4~+T细胞Tim-3分子表达及与肝功能损伤指标的相关性

目的检测T细胞免疫球蛋白域黏蛋白结构域分子3(T cell immunoglobulin and mucin domain protein 3,Tim-3)在晚期血吸虫病患者外周血CD4+T细胞表面的表达,并探讨其与肝功能损伤指标的关系。方法以28例晚期血吸虫病患者作为研究对象,同时选择20例慢性血吸虫病患者和30例健康人群作为对照,采用流式细胞术检测CD4+T细胞Tim-3表达水平,用ELISA法检测血清干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平,以日立7600型生化分析仪检测肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)和总胆红素(TBIL)浓度。结果晚期血吸虫病、慢性血吸虫病患者以及健康人群外周血CD4+T细胞表面Tim-3表达水平差异具有统计学意义(F=4.578,P0.05),晚期血吸虫病患者外周血CD4+T细胞Tim-3表达水平为(8.33±2.28)%,显著高于健康对照人群的(6.57±1.99)%(t=3.015,P0.01)。Spearman相关分析显示,晚期血吸虫病患者外周血CD4+T细胞Tim-3表达水平与患者血清ALT(rs=0.746,P0.01)、γ-GT(rs=0.656,P0.01)、IL-4水平(rs=0.672,P0.01)呈正相关,与IFN-γ水平(rs=-0.404,P0.05)呈负相关。结论晚期血吸虫病患者外周血CD4+T细胞Tim-3表达上调,其可能通过调节CD4+T细胞功能参与晚期血吸虫病肝损伤过程。     

趋化因子及受体变化与初发系统性红斑狼疮免疫异常的相关性研究

目的初步探讨趋化因子及受体与初发系统性红斑狼疮(SLE)免疫异常的相关性。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测37例初发SLE患者和20名正常对照的巨噬细胞炎症蛋白-la (MIP-1α)、MIP-1β、激活正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)以及γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4 (IL-4)的血清水平,用流式细胞术检测其中18例初发SLE患者及10名正常对照外周血CD4~ T细胞表面趋化因子受体(CCR)1、CCR3、CCR5的表达情况,分析它们的相关性。结果初发SLE血清MIP-1α、MIP-1β水平较健康对照显著升高(P＜0．01),MIP-1α和MIP-1β呈显著正相关(r=0．609,P＜0．01)；初发SLE组的CD4~ CCR1~ 、CD4~ CCR5~ 细胞百分率显著低于对照组(P均＜0．01),CD4~ CCR1~ 细胞百分率与血清MIP-1α、IFN-γ水平呈显著负相关(r=-0．525,P=0．017；r=-0．442,P=0．045)；CD4~ CCR5~ 细胞百分率与血清IFN-γ水平呈显著负相关(r=-0．645,P=0．001)；CD4~ CCR3~ /CD4~ CCR5~ 比值显著高于对照组(P＜0．01)。结论趋化因子及其受体与细胞因子间相互影响,它们的异常改变可能导致机体免疫紊乱,参与SLE发病。     

初发系统性红斑狼疮患者外周血CD4+调节性T细胞CD73表达

目的 研究CD73在初发活动性系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD4+调节性T细胞的表达情况,探讨其在SLE发病中的作用.方法 采用流式细胞术检测29例初发未经治疗的活动期SLE患者(SLE组)和22例健康人(健康对照组)外周血CD4+CD25+CD73+T细胞百分率及CD4+CD73+、CD4+CDhi25、CD4+CD25+T细胞中叉头状转录因子3(FOXP3)蛋白表达,同时对CD73表达水平与SLE活动指标进行相关性分析.结果 SLE组患者外周血CD4+ CD25+ CD73+T细胞百分率低于健康对照组[(1.25±1. 32)%vs(2.35±1.09)%,P＜0.01].SLE组和健康正常对照组,CD73在C4+ CDhi25T细胞的表达水平[(29.05±12.53)%、(43.35±10.09)%]高于CD4+ CD25+T细胞[(17.48±6.92)%、(29.98±10.39)%,P＜0.001];FOXP3蛋白在CD4+ CD73+ T细胞[(65.36±14.40)%、(63.80±14.05)%]、CD4+ CDhi25 T细胞的表达水平[(67.30±13.04)%、(56.30±9.21)%]明显高于CD4+ CD25+ T细胞[(45.70±12.74)%、(43.98±5.17)%,P＜0.001],在CD4+ CD73-T细胞几乎不表达,而在CD4+ CD73+ T细胞、CD4+ CDhi25 T细胞中的表达差异无统计学意义(P值均大于0.05).CD73在CD4+ CD25+ T细胞的表达水平与SLE疾病活动指数、ESR、C反应蛋白、抗补体C1q、抗核小体抗体均无相关性(P＞0.05).结论 CD73可作为调节性T细胞新的表面标记,其在调节性T细胞中的异常表达可能参与SLE的发病机制.     

骨桥蛋白下游信号分子在肝细胞癌中的表达

目的 通过肝癌组织芯片检测骨桥蛋白(OPN)下游的信号蛋白,以确定其在肝癌组织中的信号传导途径.方法构建肝细胞癌组织芯片,用免疫组织化学染色法检测并分析OPN及其相关分子、整合素αV、CD44v6、磷酸化黏着斑激酶(p-FAK)、p-Src、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的表达水平及其关系.计数资料用卡方检验(或Fisher's确切概率法),各指标之间的相关性采用Spearman相关分析.结果OPN及其受体整合素αV、CD44v6和相关信号分子p-FAK、p-Src、Src、p-ERK、p-AKT在肝癌组织的表达水平均明显高于癌周正常肝组织(P＜0.05).FAK在肝癌和癌周组织中的表达差异无统计学意义(P＞0.05).OPN的表达与整合素oV(P＜0.01)、p-ERK(P＜0.01)、CD44v6(P＜0.05)密切相关,与p-FAK、p-Src、p-AKT无相关性(P＞0.05).但p-FAK(P＜0.05)、p-Src(P＜0.01)和p-AKT(P＜0.05)均与OPN受体整合素αV密切相关,p-FAK还与OPN的受体CD44v6密切相关(P＜0.01).结论 OPN通过其受体整合素αV、CD44v6激活下游的丝裂原活化蛋白激酶途径以促进肝癌转移.

Abstract：

Objective Osteopontin (OPN) has close relationship with metastasis in hepatocellular carcinoma but its downstream signal pathways have not been well defined in hepatocellular carcinoma. The object of this study is to identify the associated signal pathways in human HCC tissues. Methods The expressions of OPN, intergrin α V, CD44v6, P-FAK, FAK, P-Src, Src, P-ERK and P-AKT were assayed using TMA analysis. The relationship of OPN with P-ERK, P-Src and P-AKT were explored and the role in HCC metastasis was analysed. Results The expression levels of OPN, intergrin α V, CD44v6, P-FAK, P-Src, Src, P-ERK and P-AKT in HCC tissue were significantly higher than that in normal tissue (P ＜ 0.05). No significant difference was found between the expression levels of FAK in HCC tissue and normal tissue (P ＞0.05). OPN expression was significantly associated with Integrin α v (P ＜ 0.01 ), CD44V6 (P ＜ 0.01) and P-ERK (P ＜ 0.05) but not with P-Stc, P-FAK and P-AKT (P ＞ 0.05). The expressions of P-FAK (P ＜ 0.05), P-Src (P ＜ 0.01) and P-AKT (P ＜ 0.05) were significantly associated with Integrin α v and the P-FAK expression was also significantly associated with CD44V6 (P ＜ 0.01). Conclusion OPN promotes HCC metastasis though Integrin α v/CD44V6/MAPK pathway in human HCC.     

系统性红斑狼疮患者外周血CD4+ CD8+和CD22+淋巴细胞活化分子CD69的表达

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血淋巴细胞(PBL) T细胞(CD4+、CD8+)和B细胞(CD22+)活化分子CD69的表达.方法应用双染色流式细胞术检测CD4、CD8、和CD22细胞亚群CD69分子;在植物凝集素(PHA)刺激后20 h淋巴细胞亚群CD69分子的表达.结果①SLE患者PBMC的CD69分子活动期高于静止期(P＜0.001)和正常对照组(P＜0.01)的表达,SLE静止期患者与正常对照组CD69表达差异无显著性(P＞0.05).②进一步分析CD4+、CD8+和CD22+淋巴细胞亚群的CD69的表达,其中,SLE活动期患者CD4+细胞的CD69表达显著高于静止期(P＜0.001)和正常对照组(P＜0.01)的表达,SLE静止期患者与正常对照组CD69表达差异无显著性(P＞0.05);CD8+细胞活动期高于静止期患者(P＜0.05),其余组间差异无显著性(P＞0.05);CD22+B细胞各组间差异无显著性.③PHA刺激20 h后,CD4+、CD22+B细胞的CD69表达,活动期显著高于静止期患者和正常对照组(P＜0.01).结论 SLE患者外周血CD4+T细胞和CD22+B细胞存在着异常的活化,这种淋巴细胞的异常活化是SLE重要的发病机制之一.     

类风湿关节炎患者外周血CD4 T细胞关节局部趋化机制

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血CD4 T细胞比例变化情况及其对关节局部趋化的机制。方法流式细胞术分析RA患者外周血单个核细胞(PBMC)中CD4 T细胞的比例,并分析CD4 T细胞比例与RA疾病活动性评分系统(DAS28)评分间的关系。激光共聚焦方法检测RA患者滑膜局部浸润CD4 T细胞情况。流式细胞术分析RA患者CD4 T细胞表面趋化因子受体表达情况。结果与对照组相比,RA患者外周血PBMC中CD4 T细胞的比例显著降低(P0.01),且RA患者外周血CD4 T细胞比例与DAS28评分呈明显负相关(r=-0.753 0,P=0.001 2)。关节局部CD4 T细胞浸润的激光共聚焦结果显示,与对照组相比,RA患者滑膜中具有更多的CD4 T细胞浸润。趋化因子受体分析结果显示,RA患者外周血CD4 T细胞表面CCR5、CXCR1和CXCR3的表达显著升高(P0.01)。结论 RA患者外周血CD4 T细胞表面表达升高的CCR5、CXCR1和CXCR3可能参与外周血CD4 T细胞向滑膜局部的趋化。     

系统性红斑狼疮患者外周血CD5+B细胞亚群的意义

目的通过检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中CD5+B细胞亚群水平,以探讨CD5+B细胞亚群在SLE疾病活动中的作用.方法利用双色流式细胞分析法对44例SLE患者和19名正常人群外周血CD5+CD19+,CD5-CD19+细胞亚群进行检测,同时检测患者抗dsDNA抗体,C3和C4水平.结果活动期系统性红斑狼疮患者CD5+B细胞水平较正常人群明显升高(P＜0.01);静止期系统性红斑狼疮患者CD5+B细胞较正常人群明显下降(P＜0.05),系统性红斑狼疮患者CD5+B细胞水平与疾病活动指数明显正相关(P＜0.01).结论研究证实,活动期系统性红斑狼疮患者外周血CD5+B细胞水平明显升高,与SLE疾病活动有着一定的关系.     

类风湿关节炎患者血清和滑膜骨桥蛋白的测定

目的 研究骨桥蛋白(OPN)在类风湿关节炎(RA)患者外周血中的浓度变化及在滑膜的表达,探讨OPN在RA患者中的发病机制.方法 收集91例RA患者以及29名正常对照人群临床资料和血清,用酶联免疫吸附试验(ELIsA)方法检测OPN在RA患者外周血中的浓度,分析其变化和RA临床及实验室指标的关系.收集7例RA患者和1名正常对照的滑膜组织,用免疫组织化学的方法观察OPN的表达情况.结果 与正常对照组相比,活动组和非活动组的RA患者外周血中OPN水平均明显升高(p＜0.01),且与RA患者的部分临床指标有相关性:与压痛关节数(r=0.435,P=0.005)、关节的X线分期(r=-0.415,P=0.007)、关节功能(r=0.394,P=0.012)显著相关.OPN在RA滑膜组织大量表达,而在正常对照仅见OPN的少量表达.结论 OPN在RA患者外周血中浓度显著升高,且在滑膜表达明显,OPN可能与RA滑膜增生、骨侵蚀有关.     

共刺激分子CD28 CD152在类风湿关节炎患者T细胞亚群上表达异常的研究

目的观察共刺激分子CD28,CD152在类风湿关节炎(RA)患者的T细胞亚群上的表达异常情况,探讨RA的发病机制及治疗手段.方法用流式细胞仪采用直接免疫荧光法测定39例RA患者和20名健康对照人外周血T细胞表面标志CD3,CD4,CD8的表达情况及CD28,CD152在CD4+T和CD8+T细胞上的表达.结果 RA患者CD3+CD4+细胞较正常对照组显著增高(P＜0.01),CD3+CD8+细胞较正常对照组显著降低(P＜0.05),CD4+T细胞上CD28的表达较对照组显著降低(P＜0.05),而CD8+T细胞上CD28的表达与对照组差异无显著性(P＞0.05);CD4+T和CD8+T细胞上CD152的表达都较对照组显著增高(P＜0.01).结论在RA患者的细胞免疫活化过程中首先表现为B7/CD28信号途径占优势,T细胞被激活,激活的T细胞大量分泌CD152,它与CD28竞争结合B7分子,CD152/B7途径转而占优势,下调或终止T细胞反应.同时CD28+细胞数目的减少或功能缺陷造成RA患者外周血单个核细胞凋亡加速,是诱发RA患者的局部病理损害的原因.阻断CD152和B7的相互作用可增强特异性T细胞应答,为RA的免疫学治疗提供理论依据.