不同液化处理及核酸共提取方法对痰样本中病毒核酸的提取效果比较

目的 比较不同痰液液化方法及不同核酸提取方法共提取痰液中病毒RNA和DNA的效果,并比较其优劣.方法 将痰液样本分为二硫苏糖醇(DTT)、氢氧化钠(NaOH)液化痰液组,以生理盐水为对照,分别使用TTIANamp Virus DNA/RNA Kit(方法1)、KBW酶法(方法2)、KBW通用法(方法3)和单一核酸提取试剂盒(方法4)提取核酸,微量核酸分析仪检测核酸纯度,多重定量PCR方法检测核酸的浓度.结果 核酸纯度测定结果:生理盐水组中方法2和方法3,DTT处理组中方法1和方法2,NaOH处理组中方法3所提DNA纯度略大于1.8;各组中采用方法1所提RNA纯度均明显超过2,方法4及NaOH处理组中方法3所提RNA纯度均低于1.8,其余纯度均在正常范围内.PCR浓度测定结果:腺病毒(DNA)Ct值:生理盐水组＜NaOH处理组(q=35.09,P＜0.05),生理盐水组和DTT处理组间差异无统计学意义(q=2.54,P＞0.05);提取方法1＜方法3(q=12.68,P＜0.05),方法1、方法2与方法4之间差异无统计学意义(q=0.84、1.69、2.53,P＞0.05);呼吸道合胞病毒(RNA)Ct值:生理盐水组＜DTT组＜NaOH组(F=152.76,P＜0.01);提取方法1＜方法2＜方法3(q=6.98、3.75,P＜0.05),方法2与方法4之间差异无统计学意义(q=1.28,P＞0.05).结论 痰液液化前处理会影响病毒RNA和DNA的共提取,TIANamp Virus DNMRNA Kit和KBW酶法对痰样本中病毒核酸共提取效果较好.     

1株柯萨奇病毒A6型河南分离株全基因序列特征分析

柯萨奇病毒A6(CVA6)属于肠道病毒A组成员,主要引起疱疹性咽峡炎,也可引起手足口病.2011年河南地区从手足口病患者粪便标本中分离到1株CVA6,为了解其基因特征,本研究对分离的CVA6毒株进行全基因序列测定.1.材料与方法:待测毒株为2011年河南省疾病预防控制中心传染病预防控制所实验室分离并鉴定的毒株,命名HN421.引物设计:根据原型株Gdula(AY421764)和日本毒株Shizuoka 18 (AB678778)序列,设计10对首尾相互重叠、覆盖全基因的引物(表1).RNA提取及反转录:将毒株接种于RD细胞,待病变达到75％时收获毒株,用美国Qiagen公司的Rneasy mini试剂盒提取RNA,用大连宝生物公司的PrimeScript 1-Strand cDNA Synthesis试剂盒反转录cDNA,所有操作均按说明书进行.     

水体中致病菌富集和核酸提取方法及优化

目的 建立一种灵敏、可靠、快速对水体中致病菌富集和核酸提取的前处理方法，用于水体致病菌荧光定量PCR检测。方法 通过加标准菌株脓肿分枝杆菌、原菌液梯度稀释，采用离心柱法和磁珠法核酸提取试剂盒结合不同滤膜洗脱方式进行核酸提取；采用不同材质、尺寸、数量的击打物质及均质仪循环次数等对核酸提取条件进行优化；所得核酸进行荧光定量PCR检测，比较各方法的提取效率；采用最优提取条件，对加标水样进行荧光定量PCR检测，考察全流程回收率和检出限。结果 采用0.20μm滤膜过滤+7颗大锆珠均质仪循环6次+TIANMicrobe Magnetic Envir-DNA Kit方法回收率最高（81.03%±19.23%），检出限达到6.20 CFU/100 mL。结论 均质仪+TIANMicrobe Magnetic Envir-DNA Kit法更适用于水体中致病菌的富集和核酸提取。     

RT-PCR对青岛市小学生乙型流感病毒Victoria系暴发的检测

目的分析青岛地区乙型流感暴发的流行病学特征,探讨RT-PCR方法对乙型流感病毒暴发的诊断价值,并对疫情控制措施做出评价。方法采集暴发性疫情流感样病例的咽拭子,采用QIAGEN试剂盒提取病毒RNA,RT-PCR方法分别扩增甲型和乙型流感病毒核酸的特异片段,然后,对核酸检测阳性标本采用狗肾传代细胞(MDCK)细胞培养,红细胞凝集抑制试验对培养的病毒进行鉴定和分型。结果采集的18份咽拭子中15份乙型流感病毒核酸检测呈阳性,但甲型流感病毒未检出;15份乙型流感病毒核酸阳性标本经MDCK细胞培养,9份标本发生细胞病变,经鉴定和分型,毒株均属于乙型流感病毒Victoria系。结论 RT-PCR方法对乙型流感病毒暴发的检测具有快速、敏感和高度特异性的特点,WHO推荐的2008-2009年流感疫苗成分中乙型流感病毒株(B/Florida/4/2006)为Yamagata系,而青岛地区暴发的流感为乙型流感病毒Victoria系,提示在今后决定我国疫苗成分时是否应考虑地区流行的特点。     

三种核酸提取方法在甲型流感病毒临床样本检测中的效果对比

目的比较三种核酸提取方法在甲型流感临床样本检测中的效果,为优化甲流病毒临床样本检测效果提供依据。方法在三例口岸送检的甲流临床样本的检测中,分别以硅胶膜法、磁珠法和快速法三种方法提取病毒核酸,以商品化荧光RT-PCR试剂盒或实验室自建荧光RT-PCR体系进行甲型流感病毒和流感病毒H3亚型检测。结果商品化试剂盒检测中,用硅胶膜法提取的三份样本均能检出阳性,而快速法提取的核酸仅能在03号样本中检出,在另外两份样本中未能检出。在自建体系检测中,三种方法提取的核酸均能检出甲流病毒阳性,但快速法检测的Ct值明显高于硅胶膜法和磁珠法。结论对于低病毒浓度样本,硅胶膜法和磁珠法提取核酸的效率更高,快速法有漏筛的风险。     

3种RNA提取方法在血清丙型肝炎病毒RNA定量检测中的性能评价

目的 比较3种方法对血清HCV RNA的提取性能,并对其作方法学评价,揭示RNA提取技术对HCVRNA定量的影响.方法 使用QIAamp Viral RNA Mini Kit(Q法),NucliSens miniMag系统(M法)和匹基(PG)丙型肝炎病毒定量试剂盒自带RNA提取方法(P法)进行血清HCV RNA提取,实时荧光RT PCR定量检测,对77例临床血清标本进行了提取检测,同时设计了方法学评价实验,从准确度,重复性,线性和灵敏度方面评价3种方法.结果 77例临床标本的M、Q和P法阳性率分别是85.7%、84.4%和36.3%;25例共同阳性标本中,M和Q法的CT值分别比P法平均低7.5和9.35,表现出高于P法的提取效率和RNA质量;M和Q法的标准变异指数(S.D.I.)绝对值均<2,P法S.D.I.绝对值>2;M法平均CV为40.0%,Q法为71.0%,P法>100.0%;M法表现最佳的线性(R>0.99),M、Q和P法的最低检测限分别为39.4、394和3943 IU/ml.结论 从提取效率和收获RNA质量上M和Q法远远优于P法,进一步方法性能表明,M法为HCV RNA定量最佳提取方法,而P法因其提取效率低、收获RNA质量差以及重复性不好,不适合临床HCV RNA定量试验.     

吴起县学生群体性发热疫情的快速检测诊断

目的 搞清2006年吴起县学生群体性发热疫情的病原。方法采集了20例发热学生的鼻咽拭子和血液标本，使用美国QUICKVUE流感A＋B快检试剂进行现场检测；在国家级流感监测网络实验室（陕西省疾病预防控制中心），使用美国DHI公司呼吸道病毒抗原七项（甲、乙型流感病毒，副流感病毒1、2、3型，腺病毒，呼吸道合胞病毒）荧光检测试剂盒进行直接荧光抗原检测，用RT—PCR方法进行乙型流感病毒核酸检测。结果对13份鼻拭子标本进行了现场快速抗原检测，其中7份小学生标本显示乙型流感病毒抗原阳性，阳性率为53．85％；对12份鼻咽拭子进行了免疫荧光抗原检测，其中3份呈乙型流感病毒抗原阳性，阳性率为25．00％；对17份鼻咽拭子标本进行了RT—PCR检测，12份显示乙型流感病毒核酸阳性，阳性率为70．59％。结论根据以上实验室快速检测结果，引起此次学生群体发热的病原为乙型流感病毒。     

埃及伊蚊蚊幼肠道cDNA合成研究

目的 合成埃及伊蚊蚊幼肠道cDNA，为进一步构建伊蚊蚊幼肠道cDNA基因文库奠定基础。方法 饲养埃及伊蚊，收集蚊幼肠道并提取mRNA，合成cDNA。结果 成功地合成了埃及伊蚊蚊幼肠道cDNA6μg，纯度达到A260／A2801．95，片段大于400bp。结论 使用Invitrogen Life technologies公司的Fast Track试剂盒和Copy Kit试剂盒成功地合成了高质量的cDNA，为伊蚊蚊幼肠道cDNA基因文库构建奠定了基础。     

血液HBV全自动核酸筛查方法的应用研究

目的：探讨在加样仪上实现血液样本汇集，在Roche MPLC上全自动提取样本HBV DNA，在COBAS AMPLICOR上进行扩增和检测的方法，为血液HBV全自动核酸筛查提供应用依据。方法：在酶联免疫吸附实验(EHISA)筛查血液基础上，应用STAR2000加样仪自编程序进行全自动血样汇集(24人份)，在MPLC上全自动方法提了样本核酸，应用PCR方法在COBAS AMPLICOR进行扩增和检测分析结果，从检出限量及抗干扰能力方面进行考评。结果：用国际标准核酸质控品考评及深圳应用，表明全自动汇集，全自动核酸提取及扩增和检测HBV DNA95％检出限量为38．9IU／ml，95％CI为21～323，20mg／dl胆红素、Ig／dl血色素及中等程度的脂血对结果无影响。通过对16512个样本共688个汇集池分析，HBV DNA阳性8例，阳性率为0．049％。结论：本实验结果认为HBV DNA全自动核酸检测方法可应用于血液混样核酸筛查工作。     

新冠病毒核酸检测试剂盒的性能分析与评价

目的：对4种新型冠状病毒核酸检测试剂盒的性能包括敏感性与特异性、最低检出限、精密度和分析特异性进行评价,为实验室选择新冠病毒核酸检测试剂盒提供参考,促进新冠肺炎病毒核酸检测技术的创新改进。方法：以20例新冠病毒确诊阳性和10例确诊阴性的咽拭子作为研究样本,经提取得到RNA后根据4种新冠病毒核酸检测试剂盒说明书对其进行检测,分析扩增结果,评估各试剂盒的差异。结果：检测结果显示4种试剂盒对30例研究样本的阴阳性判定情况不尽相同,其中a试剂盒的敏感性和特异性最高,均达到100%;3例阳性样本稀释到100倍时,c试剂盒只能检出其中的1例,而其他三种试剂盒能检出其中的2例,表明c试剂盒的检测敏感性低于其他三种;4种试剂盒在精密度实验中检测样本得到的Ct值的CV值都较接近,且都<10%;加入了8种常见的高浓度干扰物质的临界阳性样本经4种试剂盒检测,结果依然为弱阳性,说明无干扰;4种试剂盒检测5例含非目标病毒的临床样本,检测结果为阴性,即未发生交叉反应。结论：新冠病毒核酸检测试剂盒对低浓度核酸样本的检测能力有所差异,各试剂盒不同的检出限也造成了总体上的敏感性和特异性的差异,实验室在选择新冠病毒...     

长春新碱过量引起严重毒副反应1例的护理体会

报道1例霍奇金淋巴瘤患者因误用长春新碱（VCR）10mg一次性静脉推注后治疗护理情况。其出现间断性神志恍惚、眼睑闭合不全、言语不清、口腔黏膜糜烂、全身疼痛、麻痹性肠梗阻、尿潴留、手足麻木等症状,经积极解救,禁食,持续胃肠减压、胃管内注入麻油、开塞露、生理盐水灌肠,合理应用肠外营养,注重疼痛、心理护理,做好口腔、肛周护理,预防感染加重,患者病情得到控制好转出院。     

Choice of measures of vaccination and estimates of risk of pediatric pertussis

BackgroundVaccination uptake at the individual level can be assessed in a variety of ways, including traditional measures of being up-to-date (UTD), measures of UTD that consider dose timing, like age-appropriate vaccination, and risk reduction from individual doses. This analysis compared methods of operationalizing vaccination uptake and corresponding risk of pertussis infection.MethodsCity-wide case-control study of children in Philadelphia aged 3 months through 6 years, between 2001 and 2013. Multiple logistic regression was used to isolate the independent effects of each measure of vaccination uptake and the corresponding relative odds of pertussis.ResultsBeing UTD on vaccinations was associated with a 52% reduction in risk of pertussis (OR 0.48, 95% CI: 0.34, 0.69). Evaluation of delayed receipt of vaccine versus on-time UTD yielded similar results. There was a decrease in risk of pertussis for each additional dose received with the greatest reduction in pertussis infection observed from the first (OR 0.48, 95% CI: 0.28, 0.83) and second dose (OR 0.17, 95% CI: 0.08, 0.34). Additional doses conferred minimal additional protection in this age group.ConclusionExamining vaccination status by individual doses may offer improved predictive capacity for identifying children at risk for pertussis infection compared to the traditional UTD measure.     

上海市某医院骨科平均住院日影响因素分析

对上海市某医院2003年-2007年骨科出院病人的住院日描述性分析．2003年-2007年骨科的床位利用指数与平均住院日相关性分析．2003年-2007年骨科床位与医护比例分析．2007年骨科前10大病种平均住院目影响因素分别进行单因素相关性分析和多因素逐步回归分析（STATA软件）。通过对骨科10大病种住院日影响因素分析,术前等待天数、手术类型、是否输血分别对10个、9个和8个病种的住院目有影响。输血因素和手术类型是医院不可控、由病人的病情决定的,术前等待天数是管理因素,是最值得医院重视的影响因素。     

Correlates of stages of change of smoking among inhabitants of deprived neighbourhoods

BACKGROUND: This study examines the prevalence and correlates of stages of change of smoking, in terms of psychosocial, structural and sociodemographic factors, among inhabitants of deprived neighbourhoods. METHODS: Cross-sectional data were obtained from a survey on health related behaviour. Subjects were 2009 current and former smokers, aged 20-46, living in deprived neighbourhoods in Rotterdam, the second largest city in the Netherlands. Three groups of smokers were formed according to the stages of change-definitions of the Transtheoretical Model: smokers not planning to quit (precontemplators), smokers planning to quit (contemplators/preparators) and former smokers (actors/maintainers). Smokers planning to quit and smokers not planning to quit were compared regarding psychosocial factors (attitude, social norm, self-efficacy), structural factors (neighbourhood problems, material deprivation, financial problems, employment status) and sociodemographic factors (age, gender, marital status, cultural background, educational level). Former smokers were compared with smokers planning to quit regarding structural and sociodemographic factors. Logistic regression was used to assess correlates of stages of change. RESULTS: Smokers planning to quit (prevalence = 19%) reported a more positive attitude, stronger social norms and higher self-efficacy expectations in quitting smoking than smokers not planning to quit (prevalence = 57%). Smokers planning to quit less often were Dutch-born, more often had attended higher vocational schooling or university and more often reported experiencing two or more neighbourhood problems compared to smokers not planning to quit. Former smokers (prevalence = 24%) were older, more often Dutch-born, married, employed and higher educated, compared to smokers planning to quit. Furthermore, former smokers less often reported material deprivation and financial problems than smokers planning to quit. CONCLUSION: Among people living in deprived neighbourhoods, different factors correlate with different stages of change of smoking. Implications for health promotion are discussed.     

尘肺病患者145例死因调查

目的分析汉中市尘肺病的发生、发展和死亡原因，以提高尘肺病患者的生存质量。方法对145例尘肺病患者的死因进行回顾性分析，计算其平均发病年龄、死亡年龄及患尘肺病后的存活年限。结果矽肺的平均发病年龄和死亡年龄均早于煤工尘肺和石棉肺，尘肺病的主要死因为患肺部疾患，患尘肺病后的平均存活年限为12a。结论加强职业健康体检工作，对尘肺病人做到早发现早治疗和预防并发症的发生。     

西林瓶装注射用水的装量检查分析

为了检查西林瓶装注射用水的实际分装量是否符合2005年版《药典》三部要求,按照2005年版《药典》三部中“生物制品分装和冻干规程”,分装规格为0．8ml的西林瓶装注射用水10000瓶,随机在分装过程的前、中、后阶段共抽取100瓶,轧盖、目检。分别用1ml标定注射器及1ml普通无菌注射器抽取每瓶注射用水的实际体积,以t检验法对实际抽取量与标示量的差值进行统计学分析,结果显示其与2005年版《药典》三部要求分装附加量为0．1ml相比有显著性差异（P〈0．001）。     

两种不同肌瘤剔除术治疗子宫肌瘤的临床疗效比较

目的:比较腹腔镜子宫肌瘤剔除术与腹式子宫肌瘤剔除术的临床疗效。方法:回顾分析63例腹腔镜子宫肌瘤剔除术与61例腹式子宫肌瘤剔除术的临床资料,比较2种手术方式的手术时间、术中出血量、肛门排气时间、使用抗生素时间、术后感染率、体温恢复正常时间、住院时间等情况。结果:两组患者接受子宫肌瘤剔除术顺利完成,腹腔镜组手术时间长于开腹组(P0.05),腹腔镜组术中出血量及剔除肌瘤个数均少于开腹组(P0.05),术后腹腔镜组体温恢复正常时间、肛门排气时间、抗生素使用及住院时间均短于开腹组,两组患者最多随访6个月,腹腔镜组平均康复时间较开腹组短(P0.05),两组随访B超均未发现明显肌瘤结节。结论:腹腔镜子宫肌瘤剔除术损伤小,恢复快,住院时间短,是值得推广的微创手术。     

对《医疗事故处理条例》的几点认识--学习《医疗事故处理条例》的一点体会

国务院颁布的《医疗事故处理条例》（以下简称《条例》）在吸收、总结原《医疗事故处理办法》（以下简称《办法》）实施十几年以来正反两方面经验教训的基础上，对《办法》作了许多重大的修改：《条例》扩大了医疗事故的主体与范围，提出了防范医疗事故的一些重要措施，授权医学会独立担纲医疗事故技术鉴定工作，赋予了患者更多的权利，规定医疗事故民事责任争议可以“私了”，制定了更为规范的医疗事故的赔偿制度等。《条例》作出的这些新规定必将使医疗事故得以更加科学、客观、公正、公平、合理的解决。认真学习、把握《条例》的这些新规定，很好地透视《条例》的立法宗旨与原则，必将极大地提高学习、宣传《条例》的主动性与积极性，更好地推进《条例》的贯彻执行工作。     

The analysis of case-control studies of the efficacy of screening for recurrence of cancer

Occasionally, the efficacy of screening for cancer recurrence has been evaluated by means of case-control studies. However, these studies generally have not been designed and analyzed in a manner that will yield an unbiased result. The commentary shows that by adhering to the principles developed for the analysis of studies of the efficacy of screening for the presence of a given cancer in persons with no history of this disease, a case-control study of screening for recurrence will improve its chances of obtaining valid findings.     

137例地中海贫血出生相关因素分析

目的:揭示地中海贫血患儿出生相关因素,提出干预措施,为进一步制定地贫预防控制总体规划提供决策参考。方法:对近3年137例地贫儿(45例重型β-地贫、29例中间型β-地贫、32例中间型α-地贫和31例巴氏胎儿水肿综合征)出生相关因素进行调查研究。结果:地贫儿出生相关社会心理因素顺位依次为:基因携带者不知情(70.07%)、经济困难(21.17%)、心理因素(5.11%)、其它(3.65%)。基因携带者对自身情况不知情是本组地贫儿主要出生相关因素,与其它出生相关因素有显著差异(P<0.05)。结论:基因携带者自身的认识与重视是预防控制工作的一个重要组成部分,地贫高发区人群携带者(轻型β-地贫、α-地贫特征和静止型携带者)的检出及系统管理是预防控制工作的关键环节,应进一步应用生物、社会及心理的医学模式搞好地贫预防控制工作。