大鼠肝卵圆细胞体外分离培养和诱导分化为肝细胞的初步研究

目的 探索体外诱导成年Wistar大鼠肝卵圆细胞(HOCs)分化为肝细胞的可行性.方法 雄性Wistar大鼠36只,建立肝卵圆细胞增殖模型,采用两步法灌注和Percoll密度梯度离心法分离纯化HOCs,行体外培养并添加HGF、OSM和FGF4诱导其分化.结果 每只模型大鼠肝脏体外分离可获得约1.34×105/ml HOCs,细胞为圆形、椭圆形或多角形,大小为正常肝细胞1/6～1/3,核质比例大,2周后可呈克隆样增殖生长.所获HOCs胞浆和胞膜表达干细胞标志Thy-1及C-kit,其原始细胞标志AFP呈阳性表达;能稳定传代,在HGF、OSM和FGF4刺激下形态逐渐发生改变,细胞伸展且体积渐增大,贴壁能力减弱,诱导14天后分化细胞Alb表达明显阳性,且随着诱导时间延长阳性率逐渐升高;诱导分化的细胞胞浆G-6-P及PAS染色均呈阳性.结论 HOCs在体外一定条件刺激下可诱导分化为肝细胞.     

食蟹猴骨髓基质干细胞体外诱导分化的实验研究

为观察食蟹猴骨髓基质干细胞（BMSC）体外培养及诱导分化情况，分离食蟹猴的BMSC，以神经干细胞培养液和分化诱导因子进行体外培养和诱导分化。结果发现，分离得到的食蟹猴BMSC能在体外培养中增殖，分化，这些具有克隆能力的BMSC能表达神经干细胞特异性抗原Nestin，并能进一步诱导分化出胶质细胞样细胞和神经元样细胞，免疫细胞化学检测可见有GFAP和NSE抗原表达。提示灵长类BMSC是多分化潜能细胞，具有较强的自我更新和多分化能力，在适当的诱导分化条件下可形成具有神经系细胞（神经元和神经胶质细胞）特征的细胞；BMSC可作为神经干细胞的种子细胞。     

肝细胞生长因子诱导小鼠胚胎干细胞分化的实验研究

目的探讨肝细胞生长因子（HGF）诱导小鼠胚胎干细胞（ESC）体外定向分化为肝细胞的能力。方法对ESC体外悬浮培养5～7天形成的拟胚体,观察ESC自主分化、HGF诱导分化的情况。观察和检测经诱导4周的细胞的HE染色,糖原染色,尿素氮及甘油三酯合成,心肌MHC、白蛋白、AFP、CK18的表达,以及吲哚氰绿（ICG）染色情况。结果ESC自主分化难以控制。HGF可促进ESC向内胚层进一步分化,但更可能诱导其向心肌分化。表达白蛋白、AFP、CK18、ICG和FDA染色阳性。结论HGF可诱导ESC分化出肝细胞,但HGF的单一作用能力有限,提示肝细胞的诱导分化可能需要多种因素共同作用。     

恒河猴骨髓基质细胞体外诱导分化成神经干细胞的实验研究

为研究恒河猴骨髓基质细胞（BMSC）体外培养及诱导分化为神经干细胞的可行性，分离恒河猴BMSC，在体外应用神经干细胞培养液和细胞因子进行诱导分化，利用免疫细胞化学方法进行鉴定。结果发现，恒河猴BMSC能在体外培养中增殖，分化和表达干细胞特异性抗原神经巢蛋白（Nestin)，并最终能分化为胶质细胞样细胞和神经元样细胞；免疫细胞化学检测可见有神经元特异性烯醇化酶（NSE）和胶质原性纤维酸性蛋白（GFAP）抗原表达；未发现维甲酸（RA），表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)对骨髓基质干细胞的诱导分化具有明显影响作用。提示恒河猴BMSC是具有较强的自我更新能力和多分化潜能的细胞，在一定条件下，可分化为表达神经系细胞（神经元和神经胶质细胞）抗原的细胞，可作为神经细胞的种子细胞。     

体外培养人胎肝细胞与永生化L-02肝细胞的生物学性状比较

目的 对比体外培养的人胎肝细胞与L-02肝细胞形态学及增殖分化特征的异同，初步评价其用于移植的可行性，探讨介入性肝细胞移植术的理想供体来源。方法 分离培养14～24周的引产胎儿肝细胞，放射免疫法测定上清液中甲胎蛋白(AFP)与白蛋白(ALB)含量，免疫细胞化学法检测细胞角蛋白19(CK—19)的表达。同法检测传代培养L-02肝细胞的蛋白表达。结果人胎肝细胞分离活率达95％，在体外存活最长达3周，可同时检测到AFP、ALB及CK—19表达，其中ALB分泌峰值42．06μg／ml；L-02肝细胞增殖迅速，AFP与CK-19表达阴性，ALB表达在10μg／ml水平，部分细胞多次传代后发生形态变异，ALB表达缺失。结论人胎肝细胞具有潜在的双向分化能力，是肝细胞移植较为合适的供体来源；L-02肝细胞不适用于移植。     

HGF和FGF4在诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化中的作用

目的 评估肝细胞生长因子(HGF)和成纤维细胞生长因子4(FGF4)在诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化中的作用.方法 CCl_4经腹腔注射复制小鼠肝损伤模型,48h后处死小鼠取肝组织,分离肝脏组织制备肝损伤条件培养液进行培养.以正常小鼠肝组织制备的培养液作为对照组.ELISA法测定培养0、1、5、3、6、12、24、48h后肝组织培养液中的HGF和FGF4含量.用肝损伤条件培养液培养骨髓间充质干细胞,分别加入HGF抗体和(或)FGF4抗体,以封闭培养液中的HGF和(或)FGF4因子,未添加细胞因子抗体的培养液作为对照组;ELISA法检测肝细胞特异性白蛋白(ALB)水平,免疫荧光法检测细胞内ALB、甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白19(CK19)的表达,评价骨髓间充质干细胞向肝细胞的分化状况.结果 与对照组比较,肝损伤小鼠肝细胞培养液中HGF和FGF4表达量均升高(P<0.05);在培养3h时HGF、FGF4上升达峰值,随后下降;FGF4在培养12h达低谷后再次升高.抑制HGF和(或)FGF4第14天后,ELISA和荧光标记染色法检测均显示ALB表达下降,与对照组比较差异显著(P<0.05);荧光标记染色显示封闭后AFP及CK-19表达均有下降(P<0.05).结论 HGF、FGF4是诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的重要因子,且可能有其他因子参与诱导肝细胞的定向分化.     

瘀胆血清体外诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的实验研究

目的探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）体外诱导其分化为肝细胞的可行性。方法分离、纯化并鉴定大鼠骨髓MSCs,制备正常及瘀胆大鼠血清,取第3代MSCs分组培养：A组：DMEM＋10％FBS;B组：肝细胞生长培养基（HGM）＋5％FBS0、组：HGM＋5％正常大鼠血清;D组：HGM＋5％瘀胆大鼠血清;E纽：HGM＋5％瘀胆大鼠血清＋25ug／LHGF。观察各组细胞形态变化,MTT法测定细胞生长曲线,采用RT～PCR检测甲胎蛋白（AFP）和细胞角蛋白18（CK18）的表达,溴甲酚绿法检测上清液中白蛋白（ALB）的含量。结果培养过程中,D、E组出现多角形及双核细胞,A、B、C组细胞形态无明显变化。生长曲线显示细胞生长速度C组最快,D、E组均较B组快（P〈0．05）。D、E组于诱导第7,14天出现AFPmRNA阳性表达,第14,21天出现CK18mRNA阳性表达,D、E组上清波中白蛋白浓度随诱导时间延长逐渐升高,且E组高于D组（P〈0．05）。A、B、C组未见AFP、CK18表达及白蛋白浓度变化。结论正常大鼠血清能明显促进MSCs的增殖;瘀胆血清对MSCs有一定促增殖作用,且能有效诱导其向肝细胞分化,联合使用HGF能提高分化率。     

体外诱导表皮细胞去分化的初步实验研究

目的 建立表皮细胞去分化体外模型,探索与去分化过程有关的信号通路.方法 分离培养人表皮细胞,分别用双氧水、ERK阻断剂PD98059加双氧水处理细胞,采用免疫细胞化学染色法和Western blot法检测不同方式处理后表皮细胞表型的变化情况,Western blot法检测双氧水处理后ERK信号通路相关蛋白的表达情况.结果 双氧水处理后,表皮细胞干细胞标志物(CK19、β1整合素、Oct4和p63)表达增加,分化细胞标记物(CK10)表达减少,ERK信号通路中相关的磷酸化蛋白表达增强.以PD98059阻断ERK通路的活化后,双氧水诱导的表皮细胞表型逆转受到了抑制.结论 ERK通路参与了双氧水诱导的表皮细胞去分化过程.     

成人骨髓源性神经干细胞诱导分化实验研究

为探讨成人骨髓分离培养神经干细胞的可行性和有效性 ,无菌条件下行骨穿 ,梯度密度离心分离获取成人骨髓源细胞 ,以“CYTOKINE·神经干细胞培养液”培养 ,确定神经干细胞的最佳体外生存环境。以细胞克隆方法判断神经干细胞增殖情况 ;以NESTIN、NSE及GFAP免疫细胞化学方法分别鉴定神经干细胞、神经元和神经胶质细胞。细胞培养所涉及的细胞因子主要有GDNF(2 0ng/ml)、LIF(10ng/ml)和RA(0 5 μg/ml)等。结果发现 ,成人骨髓源细胞在相应培养条件下快速分裂增殖为大而圆并含粗大胞质颗粒的神经干细胞 ,后者形成细胞球 (或称“神经球”) ,该细胞球表达特殊的神经干细胞NESTIN抗原 ;若进一步将这些细胞球分离成单细胞并重新以克隆密度培养 ,单个的细胞又很快形成新的神经球。神经干细胞球进一步分化 ,可见到有的细胞胞体增大并出芽 ,逐渐发育成为较成熟的长突起细胞 ,长突起相互连接、交织成网并建立有神经纤维样联系 ,表达NSE或GFAP抗原。说明成年人骨髓在一定条件诱导下可以生成神经干细胞 ;用人骨髓组织诱导神经干细胞作为种子细胞具有可行性和有效性     

大鼠肝卵圆细胞免疫组化定位及超微结构观察

目的研究大鼠肝组织卵圆细胞的定位及其超微结构。方法建立SD大鼠卵圆细胞增生模型，用胆管上皮分化标志CK18、19和干细胞标志CD34作组织免疫组化染色，采用透射电镜观察超微结构。结果组织免疫组化发现大鼠卵圆细胞主要分布于汇管区，部分分散于肝小叶内，根据组织和细胞透射电镜超微结构特点，发现卵圆细胞有三型，Ⅰ型细胞体积较小、7μm左右，核大、胞质少，细胞器少，此为较为原始的卵圆细胞。Ⅱ型细胞体积稍大，8μm左右，胞质稍多，有部分细胞器。Ⅲ型细胞体积更大，9μm左右，细胞器较多。结论大鼠肝卵圆细胞位于汇管区，超微结构观察发现肝卵圆细胞可能是肝脏干细胞。     

人胚胎骨髓间充质干细胞在大鼠体内分化为肝细胞的研究

目的：观察人胚胎骨髓间充质干细胞(MSC)在受体大鼠体内的分化演变，研究人胚胎骨髓间充质干细胞在活体大鼠体内转化为人肝细胞的可行性。方法：将人胚胎MSC移植到肝损伤合并自身肝细胞再生抑制大鼠的脾脏。术后分时段取脾脏进行免疫组化染色，了解人白蛋白(ALB)、人角蛋白(CK8)、人CK18、人CK19的表达情况。结果：人胚胎MSC移植后10d大鼠脾脏的人CK8、人CK18、人CK19免疫组化染色可见阳性细胞；移植后15d大鼠脾脏组织内人ALB免疫组化染色可见阳性细胞。结论：人胚胎MSC能够在自身肝细胞再生抑制的肝损伤大鼠脾脏内分化为肝细胞。     

去胆管肝叶肝组织形态及功能变化的实验研究

目的观察大鼠肝叶胆管栓塞结扎后肝细胞形态及功能的变化,探讨去胆管肝叶的保留价值。方法应用氰基丙烯酸酯对仅保留肝右叶和方叶的大鼠行右叶胆道栓塞并结扎,制备去胆管肝叶,肝方叶不处理或行门静脉结扎作去门脉肝叶自身对照。通过分肝静脉血化验检查、组织学观察探讨肝细胞形态及功能的变化。结果与假手术对照组及自身未处理肝叶相比,去胆管肝叶萎缩不明显,超微结构变化不大。透射电镜观察发现去胆管肝叶肝细胞富含线粒体、核糖体及粗面内质网。PAS染色显示肝糖原代谢也无明显差别。分肝静脉血白蛋白及纤维蛋白原含量无明显减低。结论去胆管肝叶在观察期内无明显纤维化,仍保留有肝细胞蛋白质合成、分泌及营养物质代谢功能,提示去胆管肝叶具有保留价值。本实验为临床特殊情况下结扎或切除胆管而保留相应的肝脏组织提供了理论基础。     

Pseudo-obstruction of the extrahepatic bile duct due to artifact from arterial pulsatile compression: a diagnostic pitfall of MR cholangiopancreatography

PURPOSE: To evaluate the frequency of artifact from arterial pulsatile compression as the cause of pseudo-obstruction of the extrahepatic bile duct at magnetic resonance (MR) cholangiopancreatography (MRCP) and specify the causative vessels. MATERIALS AND METHODS: In 234 patients (102 men, 132 women; age range, 25-80 years), MRCP images obtained by using a single-shot turbo spin-echo sequence were reviewed to assess pseudo-obstruction of the extrahepatic bile duct caused by vascular compression. Dual-phase spiral computed tomography, contrast material-enhanced three-dimensional MR angiography, and/or digital subtraction angiography also were performed to determine the vessel that caused the pseudo-obstruction. RESULTS: Thirty-six pseudo-obstructions due to vascular compression were found in 33 (14%) patients. The common hepatic duct (27 [75%] sites) was the most common pseudo-obstruction site, followed by the left hepatic duct (four [11%] sites), proximal common bile duct (three [8%] sites), and right hepatic duct (two [6%] sites). The causative vessels were identified as the right hepatic artery at 24 (67%) sites; gastroduodenal artery, two (6%) sites; cystic artery, two (6%) sites; proper hepatic artery, one (3%) site; and an unspecified branch of the common hepatic artery, seven (19%) sites. CONCLUSION: At MRCP, pseudo-obstruction of the extrahepatic bile duct can be caused by pulsatile vascular compression of the hepatic and gastroduodenal arteries, and it should not be misdiagnosed as a bile duct tumor or biliary stone.     

Imaging Findings of Intrahepatic Bile Duct Adenoma (Peribiliary Gland Hamartoma): a Case Report and Literature Review

Intrahepatic bile duct adenoma is a rare benign epithelial hepatic tumor derived from bile duct cells. We report the imaging findings of a patient with bile duct adenoma, which appeared as a small heterogeneously enhancing mass with focal small cystic change on CT and MRI. Follow-up images at seven months showed a slight increase in tumor size, which could be partly explained by intratumoral hemorrhage on pathologic examination. Although rare, bile duct adenoma should be considered as a differential diagnosis of a small hypervascular tumor located in the periphery of liver. Focal cystic change and intratumoral hemorrhage may occur.     

大肠侧向发育型肿瘤细胞株的建立及其鉴定

目的 为了深入研究大肠侧向发育型肿瘤(LST)细胞的生物学特性及其发生发展的机制。方法采用人LST组织进行肿瘤细胞建株及细胞分离与原代培养,传代至70代进行细胞鉴定．包括细胞的形态结构分析、染色体分析和免疫组化分析等,并与非LST细胞作对比。结果 LST细胞为上皮来源的肿瘤细胞,多形性上皮细胞占大多数,其有近似肿瘤细胞的生长特性,群体倍增时间为36h;染色体数量为42-66,85％在三倍体范围内,并具有异常染色体核型;免疫组织化学观察ESA、CK20均呈阳性;超微结构具肿瘤细胞样表现和特征。结论成功建立了1个LST细胞株,并命名为LST-R1细胞,为进一步深入研究LST细胞的生物学特性及大肠癌的发生发展机制奠定了基础。     

A case of recurrent cholangitis after bile duct injury during laparoscopic cholecystectomy: Value of scintigraphy with Tc-99m GSA and hepatobiliary scintigraphy for indication of lobectomy

A 39-year-old woman with acute cholecystitis and gallstones underwent laparoscopic cholecystectomy. She suffered from recurrent episodes of cholangitis due to injury of the major bile ducts during laparoscopic cholecystectomy. Hepatobiliary scintigraphy with Tc-99m Sn-N-pyridoxyl-5-methyltryptophan was performed. Although normal bile excretion was found from the left hepatic duct to the percutaneous transhepatic biliary drainage (PTBD) tube, excretion from the right hepatic lobe was prolonged. Scintigraphy with Tc-99m diethylenetriaminepentaacetic acid-galactosyl human serum albumin demonstrated atrophy of the right hepatic lobe and enlargement of the left hepatic lobe. Cholangiography via the PTBD tube revealed complete obstruction of the left hepatico-jejunal anastomosis and could not enhance the right intrahepatic bile duct. A right hepatic lobectomy was performed because of the atrophy, glissonitis and the absence of an appropriate bile duct for reconstruction. Postoperatively she was active and exhibited no evidence of recurrent cholangitis.     

门静脉动脉化对实验性梗阻性黄疸大鼠肝脏再生的影响

为探讨门静脉动脉化重建肝血流后对肝脏再生的影响 ,作者建立了门静脉动脉化重建肝脏血流加行半肝切除 (43 % )的梗阻性黄疸大鼠实验模型 ,分别在术后 3天和 10天取出肝脏烘干称重、光镜下计数进入有丝分裂期的肝细胞和分离肝细胞进行流式细胞仪分析 ,以观察肝脏再生的情况。结果显示 ,实验组术后 3天和10天测定的肝脏干重与对照组比较无显著性差异 (P >0 0 5 ) ;进入有丝分裂期的肝细胞计数与对照组比较无显著性差异 (P >0 0 5 ) ;流式细胞仪测得的进入G2 和M期的肝细胞与对照组比较无显著性差异 (P >0 0 5 )。提示行门静脉动脉化重建肝血流不影响肝脏的再生     

单次激发放射状MRCP临床应用

目的　探讨单次激发放射状磁共振胰胆管水成像 (SSH/MRCP/RAD)序列的临床应用价值。方法　对 42例均经手术或病理证实的胰胆管疾病患者的MRCP资料进行回顾性分析 ,MRCP采用单次激发放射状自旋回波序列技术。其中包括结石 19例、炎症 3例、先天囊肿 6例、胆管癌 12例、十二指肠降段憩室炎引起黄疸 1例、Mirizzi综合征 1例。结果　 42例MRCP检查均一次成功 ,肝内外胆管显示率 10 0 % ,主胰管显示率 80 .5 8%。定位诊断为 10 0 % ,定性诊断 88.2 %。结论　对胰胆管病变的检查 ,SSH/MR CP/RAD是较为理想的成像技术 ,在临床上有较大的应用价值。     

肝华支睾吸虫病多层螺旋CT 表现的研究

目的：探讨肝华支睾吸虫病的多层螺旋C T表现。方法对经临床证实的65例肝华支睾吸虫病的多层螺旋C T表现进行分析总结。结果65例肝华支睾吸虫病均有肝内胆管呈囊状及杵状扩张,其中38例肝华支睾吸虫病扩张胆管内可见点状软组织密度虫体影,占58％（38/65）,13例胆囊内见点片状沉积物样及团状虫体影,占20％（13/65）。合并胆管结石6例,占9．2％（6/65）。合并胆囊结石8例,占12．3％（8/65）。合并胆管炎8例,占12．3％（8/65）。合并胆囊炎5例,占7．6％（5/65）。合并肝脓肿3例,占4．6％（3/65）。65例胆总管均未见扩张。多平面重建可更仔细的观察肝胆管扩张情况。结论肝内胆管呈囊状及杵状扩张,而胆总管无扩张是肝华支睾吸虫病的特征性CT表现。扩张胆管内点状及胆囊内沉积物样或团状虫体影,是肝华支睾吸虫病的特异征象。多平面重组可更细致观察肝胆管扩张情况和细节,结合实验室检查,可以做出准确的诊断。