人参提取物对C57BL/6J鼠毛囊生长的影响

目的通过体外培养C57BL/6J小鼠的触须毛囊,探讨人参提取物促进鼠毛囊生长的最佳浓度.方法在解剖显微镜下分离C57BL/6J小鼠胡须垫内完整的生长期毛囊,置于含有不同浓度人参提取物的Willimas E培养基中,在5%CO2和37℃条件下常规培养毛囊,每24h计算毛干长度一次;毛囊培养24h后,每孔均掺入3H-TdR 50μl,10%三氯醋酸在冰浴条件下冷却固定毛囊,0.3mol*L-1 NaOH 37℃水浴锅内消化至毛鞘全部溶解,将细胞收集于999型纤维膜上,烤干后加闪烁液,于LS-6500液闪计数仪上测量.结果人参提取物浓度为0.005～0.1mg*ml-1时具有促毛囊生长的作用,其中浓度为0.1mg*ml-1时促毛囊生长的效果最好.结论人参提取物具有促毛囊生长的作用.     

微卫星DNA标记技术检测ENU致C57BL/6J小鼠基因突变

目的建立微卫星DNA标记技术检测基因突变的方法。方法对C57BL/6J近交系小鼠腹腔注射乙基亚硝基脲（ENU）溶液后,分析其外观和精子畸形状况,应用41个在不同品系小鼠间表现多态性的微卫星位点,通过STR扫描技术检测ENU诱变后不同组织的微卫星多态性。结果个别ENU诱变小鼠背部出现白斑;精子畸形率在80%左右,显著高于对照组（P〈0.01）;有4个微卫星位点在不同组织表现出多态性。结论微卫星DNA标记技术可检测到基因突变,初步建立了微卫星DNA检测ENU致C57BL/6J小鼠基因突变的方法。     

C57BL/6和BALB/C小鼠创伤反应差异性初步探讨

目的 观察C57BL／6和BALB／C小鼠对相同创伤的反应能力有无差异。方法 采用冲击波致伤C57BL／6（171只）BALB／C（159只）近交系小鼠,观察两种小鼠伤后即刻（0）、1、6,24,72h的死亡率,对两种小鼠的肺损伤严重度进行病理形态学比较。 结果 在相同冲击伤条件下,C57BL／6和BALB／C小鼠伤后72h内的死亡率和肺损伤程度比较,差异有非常显著性意义（P＜0．01）,其中C57BL／6表现出对冲击波具有较强的耐受能力,肺损伤程度也明显较BALC／C小鼠轻。两种小鼠内雌雄之间的死亡率和肺损伤程度比较,差异无显著性意义,并且绝大部分动物死亡发生在伤后6h以内。结论 C57BL／6和BALB／C小鼠对相同创伤的反应能力比较,差异具有显著性意义,这种差异性可能与它们在遗传背景上的差异有关。     

C57BL/6小鼠CIA模型的建立及其监测体系的初步筛选

目的 建立稳定的C57BL／6小鼠胶原诱导关节炎(CIA)模型,构建进一步进行类风湿关节炎(RA)发病机制及治疗研究的体系。方法 取40只雄性C57BL／6小鼠,随机分为模型组和对照组。模型组采用鸡Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂在尾部皮内注射,21天后同样方法加强免疫。定期观察两组小鼠的关节和关节外表现以及病理学改变;用三重免疫荧光标记、胞内细胞因子测定流式细胞术检测外周血T细胞亚群。结果 对照组小鼠均未发病。模型组小鼠在50天的发病率达70％,关节炎评分在3～8分,持续时间大约100天;病理切片显示典型的炎性细胞浸润,滑膜增生,软骨及软骨下骨破坏．外周血Th1／Th2比值升高。结论 应用Ⅱ型胶原能在C57BL／6小鼠上成功建立CIA模型,该模型是进行RA研究的良好动物模型。     

OK－432联合IL－2对C57BL／6小鼠Lewis肺癌的抑制作用及p21的表达

目的：研究OK－432与IL－2抑制近交系小鼠C57BL／6 Lweis肺癌（LLC）的生长及p21的表达。方法：以C57BL／6荷瘤LLC小鼠为模型，观察OK－432联合IL－2对肿瘤发生、生长、移的影响，体内对肿瘤细胞的作用及用抗鼠p21单克隆抗体进行SABC免疫组化技术半定量测定p21在Lewis肺癌原发灶中的表达。结果：二联用对肿瘤体积和重量的抑制作用明显增强（P＜0．01），增强抑瘤率（P＜0．05）；肺转称灶数目明显减少，电镜下显示肿瘤灶中出现许多凋亡细胞、瘤细胞核染色质浓集成块，在核膜内呈新月形或环形排列，核膜清楚，瘤细胞内质网扩张，线粒体肿胀，p21在联合用药组表达明显减少。结论：OK－432与IL－2有明显的协同抗肿瘤活性，其杀瘤过程主要为对瘤细胞的直接或间接攻击，部位原因可能阻抑ras癌基因的激活，诱导瘤细胞凋亡；提示OK－432联合IL－2可为临床治疗癌症患一种有效的生物治疗方法。     

C_(57)BL/6Lewis肺癌肿瘤浸润淋巴细胞提取成功与否的原因探讨

1 实验步骤、方法、注意事项、出现问题的原因 C_(57)BL/6于右侧腋下皮下接种Lewis肺癌瘤株,待肿瘤长至1.5cm×1.5cm,在超净工作台无菌剥离,置入HBSS液中,剪取边缘新鲜瘤组织成1nm× 1mm,置于RPMI-1640配制的消化液中稍加改良, DNase Ⅰ 0.1mg/ml,collagenase Ⅳ 1mg/ml, hyaluronidase:0.5mg/10ml, 于37℃孵箱消化4 h,经120目尼龙网过滤,离心1500r/min,5min弃上清;用HBSS液洗一次,弃上清,加入约2mlHBSS,吹打制成细胞悬液,准备细胞分离。     

当归调控放射性肺损伤TGF-β1表达水平的研究

目的阐明当归对放射性肺损伤过程中TGF-β1水平的影响,寻求预防或治疗放射性肺损伤的有效途径.方法成年雌性C57BL/6小鼠72只,随机分作4组(1)空白对照组9只,腹腔注射生理盐水20 ml/(kg·d);(2)单纯当归组9只,腹腔注射25%当归注射液20 ml/(kg·d);(3)单纯照射组27只,全肺单次照射12 Gy+腹腔注射生理盐水20 ml/(kg·d);(4)照射+当归组27只,全肺单次照射12 Gy+腹腔注射25%当归注射液20 ml/(kg·d).生理盐水和25%当归注射液于照射前1周开始注射,直至照射后2周结束.于照射后1、24和72 h、1 (潜伏期)、2、4、8、16(肺炎期)和24周(纤维化期)取实验组及相同鼠龄对照组小鼠肺组织,空白对照组与单纯当归组各1只,单纯照射组与照射+当归组各3只.左肺留作组织学与免疫组化分析.右肺作总RNA提取及实时定量RT-PCR分析.结果空白对照组和单纯当归组动物,其免疫组化阳性细胞数相对较低,仅波动在9～31个之间.单纯照射组的阳性细胞数较上述两组明显增高(P<0.01),尤以1周后为甚.照射+当归组的阳性细胞数则介于两者之间,也显著低于单纯照射组(P<0.01).实时定量PCR结果显示,单纯照射组的TGF-β1mRNA相对含量较单纯当归组和空白对照组均有统计学意义(P<0.01).照射+当归组的TGF-β1mRNA相对含量较单纯照射组明显下调.但后两组数值之间并无统计学意义(P=0.054).结论 TGF-β1在放射性肺损伤发生、发展过程中起着重要作用,而当归能明显降低该过程中TGF-β1表达水平,提示当归可能通过调控该细胞因子来起到辐射防护之作用.     

肿瘤坏死因子作用于大鼠C6胶质瘤的1H磁共振波谱研究

目的　采用1H磁共振波谱 (MRS)观察大鼠C6胶质瘤在肿瘤坏死因子 (TNF α)治疗后的代谢改变 ,评价1HMRS在肿瘤疗效观察中的有效指标及应用价值。方法　采用立体定向的方法将C6细胞悬液种植于 3 3只SD大鼠脑尾状核部位 ,高场强磁共振波谱仪观察C6胶质瘤大鼠在腹腔给予TNF α后 3、6、9、12、15d的代谢改变 ,比较N 乙酰门冬氨酸 (NAA)、胆碱类化合物 (Cho)、肌酸和磷酸肌酸 (Cr)及乳酸 (Lac)以及Cho/Cr、NAA /Cr、NAA/Cho积分值的变化 ,进行统计学分析。结果　在给予TNF α后第 3天 ,Cho出现降低 ,在第 15天达到治疗前水平 ,其积分值在未治疗组与 3d组 ,3d组与 6d组以及 9d与 12d组间差异有显著性意义 (P <0 0 5 ) ,而NAA及Cr无明显改变。NAA/Cho在治疗后 3、6以及 9、12d组差异有显著性意义 (P <0 0 5 )。Cho/Cr在用药后第 3、6天下降 ,差异有显著性意义 (P <0 0 5 )。而NAA /Cr无明显改变。结论　1HMRS能够早期观察肿瘤治疗的效果 ,Cho是肿瘤疗效观察的有效指标。     

脂肽对Con A诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用

目的 研究脂肽在伴刀豆球蛋白A(Con A)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用并探讨相关作用机制.方法 应用尾静脉注射Con A构建小鼠急性肝损伤模型,以腹腔注射脂肽方式给药,观察小鼠的存活率,并检测血液中转氨酶水平,分析肝组织病理切片,统计坏死面积,同时对肝内炎症因子的表达水平进行检测.结果 脂肽H6101对Con A引起的小鼠急性肝损伤有明显保护作用.降低Con A引起的小鼠死亡率达40％,12 h检测丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)的水平降低达50％.而实时定量PCR结果显示脂肽给药组中炎症因子IFN-γ、IL-6、TNF-α的表达水平分别降低了83.8％、99.3％和99.1％.肝脏病理学分析结果显示,Con A模型组与脂肽给药组相比,小鼠肝坏死面积由14.4％降到6％,差异显著(P＜0.01).表明脂肽对于Con A引起的肝坏死情况有较明显改善.结论 脂肽对Con A引起的小鼠急性肝损伤具有明显的保护作用.     

Effect of ionizing radiation on liver protein oxidation and metabolic function in C57BL/6J mice

Abstract

Purpose: Protein oxidation in response to radiation results in DNA damage, endoplasmic reticulum stress/unfolded protein response, cell cycle arrest, cell death and senescence. The liver, a relatively radiosensitive organ, undergoes measurable alterations in metabolic functions following irradiation. Accordingly, we investigated radiation-induced changes in liver metabolism and alterations in protein oxidation.

Materials and methods: C57BL/6 mice were sham irradiated or exposed to 8.5 Gy ⁶⁰Co (0.6 Gy/min) total body irradiation. Metabolites and metabolic enzymes in the blood and liver tissue were analyzed. Two-dimensional gel electrophoresis and OxyBlot? were used to detect carbonylated proteins that were then identified by peptide mass fingerprinting.

Results: Analysis of serum metabolites revealed elevated glucose, bilirubin, lactate dehydrogenase (LDH), high-density lipoprotein, and aspartate aminotransferase within 24–72 h post irradiation. Liver tissue LDH and alkaline phosphatase activities were elevated 24–72 h post irradiation. OxyBlotting revealed that the hepatic proteome contains baseline protein carbonylation. Radiation exposure increased carbonylation of specific liver proteins including carbonic anhydrase 1, α-enolase, and regucalcin.

Conclusions: 8.5 Gy irradiation resulted in distinct metabolic alterations in hepatic functions. Coincident with these changes, radiation induced the carbonylation of specific liver enzymes. The oxidation of liver enzymes may underlie some radiation-induced alterations in hepatic function.     

Engraftment of bone marrow-derived cells after nonlethal radiation in syngeneic C57BL/6 mice

Objective To study the characteristics of cell engraftment in mice at a lower dose under nonlethal radiated condition.Methods A syngeneic C57BL/6 mouse model,transplanted with 1 × 107 bone marrow cells...     

蛋白组学技术研究有氧运动影响C57BL/6小鼠骨骼肌代谢系列报道之四——有氧运动对胰岛素抵抗小鼠骨骼肌蛋白折叠/降解通路相关蛋白的影响

目的:运用蛋白组学技术研究有氧运动对胰岛素抵抗(Insulin Resistance,IR)小鼠骨骼肌蛋白表达的影响,初步探究骨骼肌蛋白质折叠/降解通路相关蛋白在有氧运动改善IR过程中的作用机制。方法:选取80只4周龄C57BL/6雄性小鼠,随机分为正常饮食组(NC,n=20)和IR模型组(n=60)并分别饲以基础和高脂饲料10周。10周后通过检测空腹血清胰岛素水平(Fasting Insulin,FIN)及口服葡萄糖耐量试验(Oral Glucose Tolerance Test,OGTT)鉴定IR模型是否成功。选取40只成模小鼠,再次随机分为高脂饮食运动组(HE)和高脂饮食安静组(HC)。HE组小鼠采用6周75%VO2 max有氧跑台运动训练。运动结束后处死动物、提取各组小鼠股四头肌总蛋白,经Bradford法检测蛋白浓度后进行蛋白质双向电泳(2-DE),采用ImageMaster 2D Platinum V5.0软件分析2-DE电泳图谱,并对所选取的差异蛋白点用基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight MassSpectrometry,MALDI-TOF-MS)和高效液相色谱-串联谱法(Liquid-Chromatography–tandemMass Spectrometry,LC-MS/MS)进行分析,经Mascot检索软件结合NCBI nr数据库鉴定差异蛋白后使用相关软件对所得数据进行统计分析。结果:10周高脂饮食后,IR模型组小鼠FIN水平比NC组增加50%,OGTT曲线峰值时间点显著后移并出现平台期,提示10周高脂饮食可诱导小鼠产生IR。6周有氧跑台运动后,HE组小鼠FIN水平较HC组下降17.2%,OGTT曲线峰值下降且时间点前移,平台期消失,表明6周有氧运动可显著改善IR小鼠症状。经双向电泳显影,设定1.5倍为筛选差异表达蛋白的标准,比较HC组与HE组蛋白,共发现差异表达蛋白22个,其中运动后表达下调蛋白14个,表达上调蛋白8个。差异表达蛋白中有5个蛋白与细胞蛋白折叠/降解通路密切相关。其变化倍数分别为:纤维蛋白原β链前体(Fibrinogen Beta Chain Precursor)运动后下降38%,β型蛋白酶体7前体(Proteasome Subunit Beta Type-7 Precursor)运动后增加3.27倍,α型蛋白酶体1(Proteasome Subunit Alpha Type-1)运动后增加1.67倍,伴侣素β亚基(Chaperonin ContainingTcp-1 Beta Subunit,CCTβ)、Ester Hydrolase C11Orf54 Homolog为运动后新增蛋白。结论:6周有氧运动可通过调节IR小鼠骨骼肌蛋白折叠/降解通路相关蛋白的表达,改善高脂饮食诱导的IR。     

Radiation-induced changes in breathing frequency and lung histology of C57BL/6J mice are time- and dose-dependent

Purpose

Pneumonitis and fibrosis constitute serious adverse effects of radiotherapy in the thoracic region. In this study, time-course and dose-dependence of clinically relevant parameters of radiation-induced lung injury in C57BL/6J mice were analyzed. A well-characterized disease model is necessary for the analysis of the cellular and molecular mechanisms using genetically modified mice.

Material and methods

C57BL/6J mice received single dose right hemithorax irradiation with 12.5 or 22.5?Gy. Body weight and breathing frequency were recorded as parameters for health impairment. Lung tissue was collected over 24?weeks for histological analysis.

Results

Hemithorax irradiation with 12.5 or 22.5?Gy induced biphasic breathing impairment with the first increase between days 7 and 70. Although breathing impairment was more pronounced in the 22.5?Gy group, it was accompanied in both dose groups by pneumonitis-associated histological changes. A second rise in breathing frequency ratios became visible starting on day 70 with a steady increase until day 210. Again, breathing was more strongly affected in the 22.5?Gy group. However, breathing impairment coincided only in the 22.5?Gy group with a significant increase in collagen deposition in the lung tissue by day 210. Tissue inflammation and fibrosis were observed in the irradiated and the shielded lungs, pointing toward involvement of systemic effects.

Conclusion

Hemithorax irradiation induces time-dependent pneumonitis and fibrosis in C57BL/6J mice. While hemithorax irradiation with 12.5?Gy is sufficient to induce lung inflammation, it is below the threshold for collagen deposition and fibrosis development by day 210.     

早期单纯高原肺水肿患者血浆IL-6、IL-8、C3a变化的临床意义

目的:探讨单纯高原肺水肿患者血浆中IL-6、IL-8、C3 a变化的情况,从而了解判断其临床意义。方法:放射免疫法测定进藏后患单纯高原肺水肿的30名患者的血浆中IL-6、IL-8、C3 a,与肺炎人群、对照组(同海拔健康人)IL-6、IL-8、C3 a水平对照分析。结果:单纯高原肺水肿患者血浆IL-6、IL-8水平高于同海拔健康人群,具显著性差别(P<0.01),但明显低于同海拔肺炎人群,差别具有显著性(P<0.01),单纯高原肺水肿患者血浆C3 a水平与高原健康人群差别无显著性(P<0.05),与高原肺炎人群相比差别具有显著性(P<0.01)。结论:单纯高原肺水肿患者血浆IL-8、IL-6、C3 a变化提示早期单纯高原肺水肿患者无明显的C3 a介导的炎症反应,IL-6、IL-8可能介导参与了早期反应,为临床治疗高原肺水肿提供了依据。     

人参皂苷Rg1对MPTP致帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元保护作用研究

目的研究人参皂苷Rg1（GinsenosideRg1,Rg1）对1-甲基4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（1-methy-4-phenyl-1,2,3,6-tetra—hydropyrldine,MPTP）致帕金森病小鼠黑质（substantla nigra,SN）多巴胺（dopamine,DA）能神经元变性的保护作用及其可能机制。方法C57BL6小鼠随机分为对照组（NS,ip）、MPTP组（30mg·kg^-1×5d,ip）及Rg,（5mg·kg^-1×8d,ip）预处理组。应用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）、免疫组织化学染色等技术观察了SN Caspase-3mRNA、Bcl-2 mRNA、Bax mRNA、酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）mRNA的表达水平和黑质致密带（substantia nigra zona compacta,SNzc）TH免疫反应阳性细胞数量等多项指标的变化,用高效液相色谱法检测小鼠纹状体（stfiatum,Str）内DA及其代谢物二羟基苯乙酸（dihydroxyphenylaceti cacid,DOPAC）和高香草酸（homovanillic acid,HVA）含量。结果MPTP组SN内TH阳性细胞数量、Str内DA及其代谢产物DOPAC和HVA的含量明显减少,应用Rg1后可逆转上述改变（P〈0．01）。MPTP组SN Bcl-2、THmRNA的表达明显降低（P〈0．01）;Caspase-3、Bax mRNA的表达明显增加（P〈0．01）。应用Rg1后可逆转上述改变（P〈0．05）。结论Rg1对MPTP致帕金森病小鼠SNDA能神经元具有明显的保护作用,其机制可能与抗凋亡过程有关。