结核分支杆菌耐药性快速检测的研究进展

近年来，全球结核病的发病率呈上升趋势。迄今为止，有5000万人感染的是耐药的结核分支杆菌，而在过去30年中未开发出有效的新型抗结核药。出现这种情况的根本原因在于结核分支杆菌产生了耐药性。在结核控制中，建立快速、敏感和特异的检测耐药性结核分支杆菌的方法，可以指导制定合理的治疗方案，判断治疗是否失败并产生耐药性，也便于进行较大规模的结核分支杆菌耐药性调查。     

结核病 WHO/IUATLD 全球性抗结核药物耐药性监测计划

结核病ＷＨＯ／ＩＵＡＴＬＤ全球性抗结核药物耐药性监测计划白常乐１摘译徐兆炜２校在美国和欧洲的人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）感染的病人中，多重耐药性结核病（ＭＤＲＴＢ）的爆发流行促使人们对抗分支杆菌药物具有耐药性的结核分支杆菌的高度重视。然而，不论是有免疫...     

煤工尘肺结核120例临床耐药情况分析

结核病是严重危害人类健康的慢性传染病。据WHO估计，全球约有20亿人受结核分支杆菌感染，其中约有5000万人感染了耐药分支杆菌，耐药形势十分严峻。在煤工尘肺结核领域中，耐药及多耐药煤工尘肺结核患者正在日渐增多，为此我们对120例煤工尘肺结核病人的临床耐药情况作一分析，并从中作出可供耐药患者选择使用的个体化治疗方案，以对耐多药煤工尘肺结核的治疗有所选择和帮助。     

结核分枝杆菌异烟肼耐药与KatG基因相关性

目的探讨新疆地区结核分支杆菌异烟肼(INH)耐药与结核杆菌KatG基因突变和缺失的关系。方法收集结核病患者的痰标本238份,分离培养结核杆菌分离株60株,其中异烟肼敏感株28株,耐药株32株,抽提临床菌株DNA和H37RV标准株DNA,应用聚合酶链反应-单链多态构象分析(PCR-SSCP)和测序方法对结核分支杆菌KatG基因突变进行检测。结果 238份肺结核病人痰标本,涂片抗酸杆菌阳性60例,阳性率25.2%;以结核分支杆菌H37RV为对照,28株药物敏感株的KatG,基因扩增产物273片段单链多态构象分析(SPSS)图谱均正常,32例耐INH分离株中32株KatG基因扩增阳性,其中11株SSCP图谱与H37RV株有差异,KatG突变率为34.37%。结论新疆地区结核杆菌INH耐药率仍属于高耐药区域,新疆地区结核分支杆菌INH耐药的产生可能是其KatG基因突变所致。     

单链探针反向杂交试验技术检测结核分支杆菌链霉素耐药基因

[目的]建立同时检测结核分支杆菌链霉素耐药基因突变的单链探针反向杂交试验技术(PCR-LiPA),同时从分子水平分析结核分支杆菌链霉素耐药性表型与耐药基因rpsL、rrs突变的相关性,评价单链探针反向杂交技术检测结核分支杆菌链霉素耐药性的应用价值.[方法]采集临床标本,按照实验规程培养、鉴定结核分支杆菌,并对分离到的结核分支杆菌进行药敏试验;PCR扩增结核分支杆菌rpsL、rrs耐药基因,单链探针反向杂交试验技术检测耐药基因.将PCR-LiPA方法结果与DNA测序比较验证方法的准确性,将PCR-LiPA方法结果与药敏结果比较.[结果]50株结核分支杆菌传统药物敏感性试验结果显示,15株耐SM.PCR-LiPA方法分析分析结果:耐SM菌株中7株rpsL基因突变、SM敏感株1株rpsl基因突变,rrs基因未发现突变;与DNA测序结果的符合率为100%.[结论]用PCR-LiPA可简便、快速、灵敏、特异地检测出一部分结核分支杆菌链霉素耐药株的rpsL、rrs基因突变,可作为临床结核分支杆菌链霉素耐药性的辅助诊断手段.     

应用PCR-SSCP检测耐异烟肼结核分支杆菌Kat G基因突变

结核分支杆菌对抗结核药物产生耐受性，已成为全球结核防治工作面临的一个严重问题［１，２］。传统的药敏试验需１～２个月，难以满足临床诊治的需要。近年来发展的ＢＡＣＴＥＣ法测定耐药性也需要３～４周，仍为生长依赖性，且需昂贵仪器设备，因而限制其推广应用。因此对结核分支杆菌耐药机制深入了解，并依此建立准确的药敏检测新方法已成为结核病防治工作的一项重要而紧迫的课题。异烟肼（ＩＮＨ）是一线抗结核药物，最近的研究结果表明，结核分支杆菌耐ＩＮＨ的产生与过氧化氢一过氧化物酶编码基因（Ｋａｔ Ｇ）改变有关。聚合酶链反…     

结核分支杆菌1293株的耐药性分析

目的　分析 1996年以来到福州肺科医院就诊的肺结核病人结核分支杆菌耐药态势 ,为结核病的防治提供依据。方法　应用固体罗氏培养基与快速分离培养技术 (BACTECMGIT 960 )作痰抗酸杆菌培养 ,经菌型鉴定为人型结核分支杆菌者 3 0 0 2株 ,作异烟肼 (INH)、利福平 (RFP)、链霉素 (SM)、乙胺丁醇 (EMB)耐药性测定。结果　 3 0 0 2株结核分支杆菌耐药12 93株 ,总耐药率 43 1% ;耐多药 (MDR) 2 5 9株 ,耐多药率 8 6% ,原发及获得性耐多药率分别为 3 9%和 6 9%。耐单药顺位从高到低依次为SM(2 6 3 % ) ,RFP(2 5 5 % ) ,INH(14 3 % ) ,EMB(10 2 % )。耐 2种药及其以上耐药率 2 0 2 % ,MDR耐药率11 6%。各年龄组耐药及耐多药均为青年组 >中年组 >老年组。结论　结核分支杆菌耐药性结果反映了福州地区结核病耐药的基本现状 ,说明结核病患病率仍有升高的危险 ,防治工作任重道远。     

结核分支杆菌检测概述（综述）

自上世纪末以来,由于各国对结核病控制工作重视不足、流动人口增加、耐药结核杆菌增多以及结核病与艾滋病合并感染等原因,结核病在全球死灰复燃,严重危害人类健康,不仅成为严重的公共卫生问题,更成为影响各国发展的重大社会和经济问题。1993年世界卫生组织（wHO）宣布“结核病全球紧急状态”,我国是世界上22个结核病高负担国家之一,结核病患者数量居世界第二位（第一位为印度。结核病作为单因致死率最高的传染性疾病,加之耐药结核菌、艾滋病以及移民等因素,目前疫情再次呈现上升趋势田。结核病的临床诊断主要依靠结核菌检测和胸部x线检查以及其他辅助检查,结核分支杆菌的检测对诊断结核病尤其重要。现就结核分支杆菌检测技术作概述如下。     

利用基因芯片检测结核分支杆菌及其利福平耐药性的研究

目的 探讨结核杆菌耐利福平(RFP)检测基因芯片在结核病诊断及其耐药性检测中的应用价值。方法 采用结核杆菌耐RFP芯片对35株RFP耐药的临床分离菌株，102例肺结核患者、27例非结核病的其他患者的痰标本中的结核杆菌及其RFP耐药性进行了检测，基因芯片检测结果与痰涂片、细菌培养及结核杆菌标准化药敏试验结果比较。结果结核杆菌耐RFP检测芯片检测35株耐药株，有33株判定为RFP耐药株，与传统药敏试验结果的符合率为94．29％。对27份其他患者的痰液标本进行结核杆菌检测，特异性为92．59％。对102份结核患者痰标本中结核杆菌进行检测，痰涂片法阳性率35．29％(36／102)，细菌培养法阳性率28．43％(29／102)，基因芯片法阳性率77．45％(79／102)。传统的药敏试验报告102份痰标本仅29份培养出结核分支杆菌，其中8份RFP耐药株，而基因芯片法检测102份痰标本中发现20份耐RFP结核杆菌。主要基因突变位点为531、526和516。结论 采用结核杆菌耐RFP检测芯片检测结核杆菌及RFP耐药性具有快速简便、特异性高的特点。     

结核分支杆菌耐异烟肼分子机制的研究

目的：探讨耐异烟肼结核分支杆菌KatG基因突变在结核分支杆菌耐异烟肼耐药性测定中的应用价值。方法：采用PCR和PCR－SSCP方法对72株结核分支杆菌临床分离株和30例耐INH肺结核病人痰标本KatG基因突变进行检测。结果：以结核分支杆菌H37RV为对照，30株药物敏感株的KatG基因PCR扩增产物282bp片段28例SSCP图谱正常，2例异常。42例耐INH分离株中，38株KatG基因扩增阳性，其中24株SSCP图谱异常，其敏感性为63．1％，30例耐INH肺结核病人痰标本有18例PCR扩增阳性，10例SSCP图谱与H37RV株有差异，KatG突变率为55．6％，结论：结核分支杆菌INH耐药的产生可能是由于其KatG基因完全缺失或KatG基因突变所致，PCR－SSCP技术有望直接用于临床标本耐药性检测。     

寡核苷酸表达谱揭示异烟肼耐药对结核分支杆菌致病性的影响

目的研究结核分支杆菌异烟肼耐药菌株与H37Rv异烟肼敏感菌株感染巨噬细胞后差异表达的基因. 方法利用高密度cDNA芯片检测巨噬细胞U937感染结核分支杆菌异烟肼耐药菌株与H37Rv后的基因表达谱的差异. 结果两者诱导巨噬细胞的差异表达基因有53条,异烟肼耐药菌株比敏感菌株诱导多种趋化因子和细胞免疫增强的细胞因子表达上调和免疫抑制细胞因子IL-10等表达下调. 结论异烟肼耐药对细菌毒力有明显的影响,异烟肼耐药菌株的致病力下降,异烟肼耐药菌株容易被宿主免疫系统清除;结果为耐多药结核病控制提供依据;骨桥接素和巨噬细胞趋化因子等,在抗异烟肼耐药结核分支杆菌感染免疫中的作用值得深入研究.     

单链探针反向杂交试验快速检测结核分支杆菌5种耐药基因

目的:建立可同时检测结核分支杆菌rpoB、katG、rpsL、rrs、embB基因突变的单链探针反向杂交试验技术(PCR-LiPA),评价该技术检测结核分支杆菌利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇耐药性的应用价值。方法:采集临床标本,按照实验规程培养、鉴定结核分支杆菌,并对分离到的结核分支杆菌进行药敏试验;PCR扩增结核分支杆菌rpoB、katG、rpsL、rrs、embB耐药基因,单链探针反向杂交试验技术检测耐药基因。将PCR-LiPA结果与DNA测序比较验证方法的准确性,将PCR-LiPA结果与药敏结果比较,了解结核分支杆菌耐药性表型与耐药基因突变的相关性。结果:50株结核分支杆菌传统药物敏感性试验结果显示,12株耐INH,7株耐RFP,15株耐SM,2株耐EMB。PCR-LiPA方法分析结果:耐RFP菌株中4株rpoB基因突变;耐INH菌株中5株KatG基因突变;耐SM菌株中7株、SM敏感株1株rpsl基因突变;耐EMB菌株1株、EMB敏感株1株embB基因突变。与DNA测序结果的符合率为100%。结论:用PCR-LiPA可简便、快速、灵敏、特异地检测出一部分结核分支杆菌耐药株的rpoB、katG、rpsL、rrs、embB基因突变,可用于临床结核分支杆菌耐药性的辅助诊断手段。     

结核分支杆菌耐药性检测方法研究进展

结核病至今仍是世界上一个严重的公共卫生问题,结核分支杆菌(MTB)的高耐药问题是结核病疫情恶化的重要原因。结核分支杆菌耐药性的快速检测,对于其防治具有重要意义,目前临床正在使用和研究的耐药性检测方法归纳起来,有表型检测和基因检测两大类。1表型检测1·1常规药敏试验方法用L-J或Middlebrook7H10培养基做直接或间接药敏试验。此方法由于受结核菌缓慢的生长速度的影响而费力费时(需6~8周甚至更长时间),不能满足临床之急需。1·2BACTECTB-460放射性液体培养基法是目前最常用的结核菌快速药敏试验方法。其原理为利用细菌生长需要代…     

综合医院结核病归口管理效果评价

我国是全球22个结核病高负担国家之一,结核病是严重危害我国人民健康的传染病,是国家重点控制的重大疾病。做好结核病防治工作,关系到提高人民健康水平,关系到保证经济建设和社会进步。1　结核病流行趋势全球人口中大约三分之一的人口约20亿已感染结核分支杆菌。1993年ＷＨＯ宣布“结核病紧急状态”。我国的结核病疫情下降缓慢,传染性结核病人数几乎没有减少,结核感染率上升,全人口结核感染率为44.5%,说明我国有近半的人口约5.5亿人感染了结核杆菌,高于既往估计1/3人口被结核感染的水平。　　表1市二院结核病发病转诊到位情况时间传染病…     

颈部肿物检出结核菌阳性报道

自20世纪80年代以来，结核病疫情重新上升，成为严重危害公共卫生的问题之一。据世界卫生组织估计，目前，全球约有20亿人感染结核分支杆菌，结核菌感染率高、患病率高、耐药率高、死亡率高。因此，对结核菌的检测是十分必要的。     

绵阳市结核分支杆菌耐药性分析

目的了解绵阳市结核分支杆菌耐药情况,为耐药结核病的预防控制提供依据。方法采用比例法对79株结核分支杆菌进行一线抗结核药物:异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)耐药性检测。结果共检测出耐药菌17株,总耐药率为21.52%,多耐药率为12.66%,耐多药率为6.33%。初治耐药率为18.64%,获得性耐药率为30.00%。单耐药顺序为:INH>SM>RFP>EMB,耐药率分别为15.19%,12.66%,7.59%和7.14%。耐药在性别和年龄组方面无统计学意义。结论绵阳市结核分支杆菌耐药率低于全国平均水平,应进一步加强耐药菌监测以指导临床合理用药。     

结核分支杆菌rpoB基因突变与耐利福平的研究

目的：研究结核分支杆菌耐利福平（RFP）分离株rpoB基因突变情况并评价其应用价值。方法：采用聚合酶链反应一单链构象多态性(PCR-SSCP)方法对355株结核分支杆菌临床分离株（其中敏感株109株，耐RFP或含耐RFP株246株）rpoB基因进行检测，并对其中31株耐药株用双脱氧末端终止法进行测序分析。结果：以结核分支杆菌标准株H37Rv为对照，所有109株药物敏感株rpoB基因均无突变；246株耐药株中，225株rpoB基因SSCP图谱异常，其敏感性为91.5％。31株耐药株（其中SSCP异常25株，正常6株）PCR扩增产物经测序证实，19株在531位密码子TCG-TTG，7株526位密码子CAC-TAC，3株在516位密码子GAC-GTC，2株未改变。结论：rpoB基因突变是耐 RFP结核分支杆菌耐药性的主要分子机制；其最常见的突变位点是531位色氨酸和526位组氨酸，PCR-SSCP可快速检测结核分支杆菌RFP耐药性。     

兰州地区结核分支杆菌耐药性分析

目的 分析兰州地区2005～2007年结核分支杆菌耐药情况,为结核病的防治提供科学依据.方法 利用比例法对215株菌株进行药物敏感性检测,用SPSS 11.0进行统计分析.结果 兰州地区结核分支杆菌总耐药率为47.51％,耐多药率4.75％,低于2001～2004年统计结果,原发性耐药占耐药菌株总数的55％,获得性耐药率为46.59％.结论 兰州地区结核病患者结核分枝杆菌耐药率有所下降,但结核病传染源的控制、结核病防治宣教及结核病短程化疗(DOTS)健康教育和促进工作都需进一步加强.     

272株结核分支杆菌耐药性分析

目前控制结核病的最主要手段仍然是化学疗法.但随着化疗药物的广泛应用,结核杆菌的耐药率日趋上升,尤其是日益增多的耐多药结核病(MDR-TB),给结核病的控制工作带来巨大困难.为了掌握武汉市结核病人的耐药情况,以便给临床医生制定有效的化疗方案提供依据, 对272例肺结核患者的结核分支杆菌培养阳性菌株,分别用INH、RFP、SM、EMB、PAS进行了药敏试验,结果报告如下.     

耐药结核病的健康指导

耐药结核病是指体外实验证明结核分枝杆菌对某一种或几种抗结核药物产生耐药性的结核病.根据结核分枝杆菌耐药的情况分为单耐药结核病、多耐药结核病、耐多药结核病和广泛耐药结核病.