紫杉醇耐药卵巢癌细胞系的建立及耐药机制研究

目的建立人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株,探讨其耐药机制。方法采用梯度浓度递增法诱导建立对紫杉醇（Paclitaxel,TAX）耐药的人卵巢癌细胞耐药株SKOV3／TAX,MTF法检测SKOV3／TAX对SKOV3的耐药指数（resistanceindex,RI）,WesternBlot法检测耐药细胞中凋亡及耐药相关蛋白多聚ADP核糖聚合酶（polyADP．ribosepolymerase,PARP）的表达情况,探讨其耐药机制。结果成功建立人卵巢癌耐紫杉醇细胞株SKOV3/TAX,耐药指数高达88．46;与SKOV3相比,紫杉醇耐药细胞株形态较不规则,细胞扁平,且贴壁较牢;WesternBlot及免疫荧光实验均证实SKOVMTAX中PARP水平明显下调,且加用TAX后PARP的剪切带较亲本细胞明显减少甚至缺失。结论紫杉醇耐药卵巢癌细胞中PARP蛋白表达明显下调,该下调很可能参与了卵巢癌对紫杉醇的耐药调控。     

应用表达谱芯片筛选卵巢癌紫杉醇耐药差异表达基因

目的 应用表达谱芯片研究人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株SKOV3/TAX300及SKOV3/TAX30与敏感细胞SKOV3之间的基因表达谱差异,筛选耐药相关基因.方法 分别提取细胞的总RNA并纯化mRNA,mRNA逆转录合成cDNA后,用Cy5和Cy3-dUTP标记,与基因芯片进行杂交反应,扫描芯片荧光信号图像,用基因图像分析软件对扫描图像进行数字化处理和分析.采用荧光定量PCR、RT-PCR验证差异表达基因TNC mRNA和MDR1 mRNA水平,Western blot法验证TNC和MDR1蛋白表达.结果 SKOV3/TAX300细胞与敏感细胞SKOV3筛选出202个差异基因,其中上调基因88个,下调基因114个;SKOV3/TAX30细胞与SKOV3敏感细胞筛选出358个差异基因,其中上调基因144个,下调基因214个.这些基因主要包括细胞外基质、细胞信号传递、细胞周期、细胞凋亡、药物代谢等方面.其中细胞外基质成分TNC在两种耐药细胞中均为明显上调.荧光定量PCR、RT-PCR检测TNC mRNA和MDR1 mRNA水平,Western blot验证TNC和MDR1的表达,结果均与芯片结果一致.结论 本研究筛选出的基因可能为进一步探讨卵巢癌肿瘤细胞耐药机制提供新的途径,细胞外基质成分TNC可能是紫杉醇耐药的相关基因.     

白花蛇舌草注射剂联合紫杉醇对HO-8910和HeLa细胞生长抑制作用的研究

目的:研究白花蛇舌草注射液(ODI)联合紫杉醇(PTX)对人卵巢癌HO-8910PM细胞株与人宫颈癌HeLa细胞株的生长抑制作用.方法:用M1T法测定白花蛇舌草注射液及其联合紫杉醇分别作用于HO-8910和Hela细胞的生长抑制作用,并用IC50值进行评价.结果:ODI作用于HeLa和HO-8910细胞的IC50值分别为8.88μg/ml和2.91μg/ml(按ODI总黄酮计);LY294002作用于HeLa与HO-8910细胞的IC50分别为43.92μg/ml和23.91 μg/ml;PTX作用于HeLa和HO-8910的IC50值分别为>100μmol/L与46.75μgmol/L;PTX联合ODIICl0(10%生长抑制浓度,ICl0)作用于HeLa和HO-8910细胞的IC50值分别为>100μmol/L与31.02μmol/L,PTX联合LY2940021C10作用于HeLa和HO-8910的IC50值分别为73.26μmol/L和36.01μmol/L.结论:ODI对HO-8910和HeLa细胞均有明显的生长抑制作用,且呈浓度依赖;无毒性剂量或ICl00DI联合PTX)(可明显增加HO-8910细胞对PTX的细胞毒作用或敏感性,但对HeLa细胞无明显影响.     

三氧化二砷联合抗坏血酸对高转移性卵巢癌细胞系HO-8910PM的抗肿瘤实验研究

[目的]在高转移性上皮性卵巢癌细胞株HO-8910PM中观察AS2O3联合抗坏血酸（VitaminC）的抗肿瘤效应。[方法]本研究以高转移性上皮性卵巢癌细胞株HO-8910PM为研究对象,以MTT药敏实验、流式细胞仪以及Western-blot方法检测AS2O3和VitaminC单药及联合的抗肿瘤效应及其机制。[结果]AS2O3和VitaminC单药对HO-8910PM细胞株均具有剂量依赖性的生长抑制作用。AS2O3联合VitaminC后具有明显的协同抗肿瘤效应,并且出现S期阻滞效应。Western-blot结果显示。AS2O3和VitaminC联合作用后,凋亡抑制蛋白bcl-2和凋亡促进蛋白bax分别进一步表达下调和上调。[结论]对高转移性的上皮性卵巢癌细胞株,VitaminC和AS2O3单药均具较好的抗肿瘤效应,VitaminC对AS2O3有较好的化疗增敏效应,两者的联合应用值得在卵巢癌方面进一步研究探讨。     

DOC-2对卵巢癌细胞HO-8910致瘤力的影响

背景与目的：作为近年发现的新的肿瘤抑制基因，DOC-2的作用机制还不完全清楚。本实验的目的在于观察DOC-2转染后对卵巢癌细胞系HO-8910在克隆形成率、细胞周期、裸鼠致瘤能力等方面的影响，并对其作用机制进行初步探讨。方法：实验分3组：卵巢癌细胞系HO-8910（无DOC-2基因的表达）、8910-P93（经转染并表达DOC-2基因）、8910-pcDNA3．1（转染空载体pcDNA3．1），首先通过软琼脂克隆形成实验比较3组细胞克隆形成率的差异，之后利用流式细胞仪观察其细胞周期的变化，最后用裸鼠荷瘤实验进一步验证DOC-2对肿瘤细胞致瘤能力的影响。结果：卵巢癌细胞系HO-8910在转染DOC-2后其克隆形成率明显降低，与转染前差异明显（P〈0．05），同时G．和G，期细胞明显增多而S期细胞明显减少，移植瘤裸鼠荷瘤实验显示HO-8910-P93细胞在裸鼠体内生长缓慢，肿瘤体积及重量均明显低于对照组（P〈0．05）。结论：DOC-2基因能明显抑制卵巢癌细胞系HO-8910的致瘤力。     

紫杉醇对浆液性卵巢癌细胞HO-8910细胞凋亡的诱导作用

目的:探讨紫杉醇对体外培养的浆液性卵巢癌细胞HO-8910细胞凋亡的诱导作用。方法:体外培养卵巢癌细胞HO-8910,用浓度1×10-9 mol/L、1×10-8 mol/L、1×10-7 mol/L和1×10-6 mol/L的紫杉醇作用细胞12 h,24 h,48 h后,提取细胞DNA片段进行2.0 mg/L 琼脂糖凝胶电泳;消化HO-8910细胞并经碘化丙锭(IP)染色后,流式细胞仪(FCM)对细胞进行细胞周期分析;电子显微镜对紫杉醇作用后的HO-8910细胞进行形态学分析。结果:体外培养的卵巢癌HO-8910细胞经不同浓度的紫杉醇处理后,细胞生长明显受到抑制;于1×10-7 mol/L 紫杉醇作用48 h后可观察到细胞凋亡特异的DNA梯状电泳;流式细胞仪分析证实,细胞凋亡率达19.7 %;且电镜下可观察到典型的凋亡早期形态学改变。结论:卵巢癌HO-8910细胞对紫杉醇具有药物敏感性,紫杉醇对卵巢癌细胞的杀伤作用,是通过诱导细胞凋亡途径实现的。     

紫杉醇治疗卵巢癌裸鼠移植瘤过程中WT1的表达及意义

研究紫杉醇治疗卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤过程中WT1基因的表达和意义。方法:建立卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤模型,随机进行紫杉醇化疗（紫杉醇组）及生理盐水（对照组）处理,测量移植瘤体积并对移植瘤标本进行苏木精-伊红染色、流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期改变、免疫组化检测Bcl-2及WT1蛋白表达、RT-PCR检测WT1 mRNA的表达。结果:紫杉醇化疗对裸鼠移植瘤的生长具有明显的抑制作用,与对照组相比,紫杉醇组细胞凋亡率增加（P<0.05）;同时,移植瘤组织中Bcl-2、WT1蛋白及WT1 mRNA的表达均显著下降（P<0.05）。结论:WT1基因在卵巢癌凋亡过程中可能发挥着一定的作用,其作用机制或许与抗凋亡基因Bcl-2有关。      

米非司酮对高转移卵巢癌细胞株HO-8910PM蛋白水解作用的影响

目的研究高转移卵巢癌细胞株HO-8910PM基质金属蛋白酶的表达情况及米非司酮对HO-8910PM细胞水解基质蛋白作用的影响.方法应用免疫组化染色法,检测H0-8910PM卵巢癌细胞基质金属蛋白酶的表达情况;采用水解空斑法检测不同浓度米非司酮对HO-8910PM细胞的体外水解人血浆基质蛋白空斑的变化.结果HO-8910PM细胞MMP-10及MMP-9表达较高,MMP-2表达较低;10 μmol/L、20μmol/L米非司酮培养48小时可显著降低具有蛋白水解作用的HO-8910PM细胞的百分比(P＜0.01),而5 μmol/L米非司酮组无明显变化(P＞0.05);不同浓度的米非司酮(5 μmol/L、10 μmol/L、20μmol/L)明显缩小HO-8910PM细胞的平均水解空斑面积.结论HO-8910PM细胞可表达MMP-10、MMP-9、MMP-2;米非司酮可抑制HO-8910PM细胞体外水解基质蛋白的能力.     

卵巢癌紫杉醇耐药机制的研究进展

紫杉醇是美国北卡罗莱纳州三角研究所的Wall博士和Wani博士于1967年发现的。他们从太平洋红豆杉中分离出了这种化合物并发现它具有广泛的抗恶性肿瘤作用。紫杉醇分子是一个极其复杂的四环二萜类化合物,它是继长春新碱之后又一类具有新作用机制、抗微管解聚的细胞毒类药物。1992年经FDA批准紫杉醇作为治疗卵巢癌的新药应用于临床,随后又批准用于治疗乳腺癌。     

卵巢癌紫杉醇耐药机制的研究进展

紫杉醇是美国北卡罗莱纳州三角研究所的Wall博士和Wani博士于1967年发现的。他们从太平洋红豆杉中分离出了这种化合物并发现它具有广泛的抗恶性肿瘤作用。紫杉醇分子是一个极其复杂的四环二萜类化合物,它是继长春新碱之后又一类具有新作用机制、抗微管解聚的细胞毒类药物。1992     

苏拉明对体外培养的人卵巢癌细胞HO-8910PM增殖影响

目的 探讨苏拉明对体外培养的人卵巢癌细胞增殖的影响。方法 不同浓度苏拉明作用于人卵巢癌细胞株HO-8910PM，用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测HO-8910PM增殖情况。结果 MTT结果显示50、100,200、300,400、500、600ug／mL浓度的苏拉明作用于HO-8910PM细胞96h的生长抑制率（GI）分别是13．1％、22．6％,35．1％、43．7％、54．3％、64．8％、70．9％，不同时间及不同浓度组吸光光度值A差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 苏拉明以时间及剂量效应方式抑制体外培养的HO-8910PM增殖；提示苏拉明作为HPA抑制剂有望成为转移性卵巢癌联合化疗用药。     

肿瘤抑制基因DOC-2真核表达载体的构建及在卵巢癌细胞HO-8910中的表达鉴定

目的构建肿瘤抑制基因DOC-2的真核表达载体pCDNA3.1-p93,将其转入人卵巢癌细胞系HO-8910中,对其基因表达进行相关检测,为进一步研究DOC-2的功能奠定基础。方法利用XhoI酶切含有p93cDNA的质粒得到p93cDNA基因片段,将其连接入真核表达载体pCDNA3.1,并通过酶切鉴定。用脂质体介导法将真核表达载体pCDNA3.1-p93转染HO-8910,通过G418筛选稳定表达克隆;用免疫组化法观察人DOC-2蛋白在HO-8910中的表达。结果构建了DOC-2的真核表达载体pCDNA3.1-p93,并通过酶切鉴定。免疫细胞化学结果显示pIRES2-EGFP-p93成功转入HO-8910中。结论成功构建了真核表达载体pCDNA3.1-p93并在HO-8910中得到稳定表达,为研究DOC-2蛋白的功能奠定了基础。     

Preferential Induction of CYP1A1 over CYP1B1 in Human Breast Cancer MCF-7 Cells after Exposure to Berberine

Estrogens are considered the major breast cancer risk factor, and the carcinogenic potential of estrogens mightbe attributed to DNA modification caused by derivatives formed during metabolism. 17β-estradiol (E2), the mainsteroidal estrogen present in women, is metabolized via two major pathways: formation of 2-hydroxyestradiol(2-OH E2) and 4-hydroxyestradiol (4-OH E2) through the action of cytochrome P450 (CYP) 1A1 and 1B1,respectively. Previous reports suggested that 2-OH E2 has putative protective effects, while 4-OH E2 is genotoxicand has potent carcinogenic activity. Thus, the ratio of 2-OH E2/4-OH E2 is a critical determinant of the toxicityof E2 in mammary cells. In the present study, we investigated the effects of berberine on the expression profileof the estrogen metabolizing enzymes CYP1A1 and CYP1B1 in breast cancer MCF-7 cells. Berberine treatmentproduced significant induction of both forms at the level of mRNA expression, but with increased doses produced16~ to 52~fold greater induction of CYP1A1 mRNA over CYP1B1 mRNA. Furthermore, berberine dramaticallyincreased CYP1A1 protein levels but did not influence CYP1B1 protein levels in MCF-7 cells. In conclusion,we present the first report to show that berberine may provide protection against breast cancer by altering theratio of CYP1A1/CYP1B1, could redirect E2 metabolism in a more protective pathway in breast cancer MCF-7cells.     

米非司酮对人卵巢癌细胞系HO-8910的生长及细胞周期的影响

目的：探讨米非司酮对人卵巢上皮性癌细胞的杀伤活性及对细胞增殖和细胞周期分布的影响。方法：采用ＭＴＴ测定,观察不同浓度米非司酮（２０、１０、５、２．５μｍｏｌ／Ｌ）对ＨＯ－８９１０细胞的杀伤活性;通过ＡＢＣ免疫组化染色及流式细胞仪分析,检测用药后ＨＯ－８９１０细胞Ｋｉ－６７抗原表达、细胞周期分布及细胞增殖指数的变化。结果：４个浓度的米非司酮对ＨＯ－８９１０细胞均有杀伤作用,并呈剂量依赖性,以２０μｍ     

PD98059抑制卵巢癌细胞株HO-8910活性的研究

目的 研究PD98059对卵巢癌细胞株HO-8910的作用.方法 采用MTT法检测卵巢癌细胞活性,用western blot和免疫细胞化学检测细胞内磷酸化c-Fos蛋白的表达.结果 与对照组相比,150μmol/L PD98059组可显著降低细胞活性(P<0.01);PD98059也可抑制细胞c-Fos蛋白的表达.结论 PD98059可能通过降低c-Fos蛋白的表达而抑制卵巢癌细胞的生长.     

高转移人卵巢癌细胞系及其母系多基因表达研究

为研究高转移人卵巢癌细胞系ＨＯ８９１０ＰＭ及其母系ＨＯ８９１０多基因表达情况及其彼此关系,采用ＳＰ免疫组化染色方法,观察了９种基因产物的表达。结果显示,除ｂａｘ外,其余８种基因产物在２株细胞均呈不同程度的阳性表达。在ＨＯ８９１０ＰＭ细胞系中,以ｐ５３、ＣｙｃｌｉｎＤ１、ＣＤ４４Ｖ６、ＥＧＦＲ的表达强度强于母系;而ｐ１６、ｎｍ２３表达强度则较母系弱。２株细胞ｃｅｒｂＢ２、ｂｃｌ２表达无明显不同。结果表明,ＨＯ８９１０ＰＭ是一株较母系ＨＯ８９１０更具侵袭和转移生长潜能的细胞株。同时也证实肿瘤的发生、浸润和转移是多基因参于、多阶段协同作用的结果     

顺铂诱导人卵巢癌细胞系HO-8910细胞凋亡

[目的]探讨顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡作用的机制.[方法]应用不同浓度顺铂处理卵巢癌HO-8910细胞,于不同时间收集细胞,分别进行倒置显微镜观察活细胞,Gimsa染色观察细胞形态改变并计数凋亡率,琼脂糖凝胶电泳观察DNA降解情况,SP免疫组化染色观察凋亡过程中p53蛋白的表达情况.部分涂片还使用了TUNEL染色计数凋亡细胞,并与Gimsa染色计数的凋亡细胞数作比较.[结果]在顺铂作用下,卵巢癌HO-8910细胞呈现典型的凋亡细胞形态学改变,如细胞核固缩、染色体凝聚、有凋亡小体形成,细胞DNA电泳呈梯形带,凋亡率及凋亡相关蛋白p53表达阳性率随着药物作用时间延长及药物浓度增大而升高,且二者呈正相关.TUNEL染色计数的凋亡细胞个数明显高于Gimsa染色.[结论]顺铂可以通过诱导卵巢癌细胞系HO-8910细胞凋亡而发挥其抗肿瘤功效,且为p53依赖性细胞凋亡过程.     

CYP1B1 SNPrs1056836、ER和PR与宁夏汉族乳腺癌遗传易感性研究

[目的]探讨CYP1B1 SNPrs1056836与宁夏汉族女性乳腺癌遗传易感性的相关性,研究CYP1B1 SNPrs1056836与雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）之间的交互作用与宁夏汉族女性乳腺癌的相关性。[方法]应用等位基因特异性一聚合酶链式反应（AS—PCR）对154例宁夏汉族女性乳腺癌患者和144例健康对照进行SNP检测,用直接计数法记录基因型分析结果,用直接测序法鉴定基因型;用免疫组化方法检测114例乳腺癌患者ER、PR的表达;采用SPSS11．5统计软件进行统计学分析。[结果]CYP1B1 SNPrs1056836的三种基因型在乳腺癌组和对照组中的分布差异有显著性（P〈0．05）;未发现CYP1B1 SNPrs1056836的等位基因与基因型频率分布与ER、PR表达的状态有统计学差异。[结论]SNPrs1056836与宁夏汉族女性乳腺癌发病呈正相关,携带其突变基因型者发生乳腺癌的风险增加。     

B7-H1在卵巢癌组织中表达的临床意义

目的 探讨B7-H1在卵巢癌组织中表达的临床意义.方法 将收治的112例上皮性卵巢癌及10例良性卵巢囊肿的组织蜡块制作成组织芯片,免疫组化检测芯片协同刺激分子B7-H1的表达情况,χ2检验B7-H1表达水平与患者临床病理参数的关系.生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-rank检验及多因素COX回归.结果 B7-H1在良性卵巢囊肿中均为低表达,在卵巢癌组织中高表达率为55.4%(62/112);其表达水平与患者年龄、组织类型、细胞分化、肿瘤大小及是否合并CA125升高无关(P>0.05),而与患者FIGO分期及是否转移密切相关(P<0.05);B7-H1高表达组与低表达组患者无进展生存期(progression-free survival,PFS)和总生存期(overall survival,OS)比较差异均有统计学意义(χ2值分别为24.9和17.51,P值均<0.001).COX回归分析表明,B7-H1表达水平和FIGO分期是影响患者生存的独立预后因素.结论 卵巢癌组织中B7-H1的表达水平与预后差和生存期短相关,可为卵巢癌的免疫靶向治疗提供思路.     

榄香烯乳对肺腺癌A549细胞hnRNP A2/B1的mRNA及蛋白表达的影响

目的：观察榄香烯乳对人肺腺癌细胞株A549细胞hnRNP A2／B1 mRNA及蛋白表达的影响。方法：选用A549细胞株，应用MTT法检测细胞增殖，显微镜下观察细胞形态变化，逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测hnRNPA2／B1mRNA表达，蛋白印迹法检测hnRNP A2／B1蛋白表达。结果：榄香烯乳对A549细胞体外增殖有显著抑制作用，且呈时间和剂量依赖性，其IC50值为15μg／ml，hnRNPA2／B1mRNA及蛋白表达水平均有下降。结论：榄香烯乳可抑制肺腺癌A549细胞增殖，致其hnRNPA2／B1的mRNA和蛋白表达水平均有下降。