顺铂联合紫花牡荆素抑制人卵巢癌细胞增殖的研究

目的:探讨顺铂(DDP)是否具有敏化紫花牡荆素(CAS)抑制体外培养人卵巢癌SKOV3细胞生长增殖的作用。方法:体外培养SKOV3细胞;用MTT和平皿克隆法检测顺铂、CAS在亚细胞毒性浓度下,以及两者联合对SKOV3细胞生长增殖的影响;用FCM检测CAS对SKOV3细胞周期的影响;Western blot分析p21和cyclin B1蛋白表达的变化。结果:顺铂具有敏化CAS抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖活性的作用;与亚细胞毒性浓度的顺铂和CAS相比,顺铂和CAS联合作用SKOV3细胞集落形成率明显下降(P<0.01);经亚细胞毒性浓度的顺铂和CAS联合作用48h后SKOV3被阻滞于G2/M期,同时cyclin B1蛋白表达降低,p21蛋白表达增高。结论:顺铂具有敏化CAS抑制体外培养人卵巢癌SKOV3细胞生长增殖的作用,其机制可能是通过降低cyclin B1表达、活化p21实现的。     

谷胱甘肽-S-转移酶P1启动子调控的胞嘧啶脱氨酶和尿嘧啶磷酸核糖转移酶融合基因对卵巢癌顺铂耐药细胞的体外杀伤作用

目的　观察谷胱甘肽 S 转移酶P1(GSTP1)启动子调控的胞嘧啶脱氨酶和尿嘧啶磷酸核糖转移酶融合基因 (CD UPP ,即自杀基因 )表达的腺病毒载体 ,对卵巢癌顺铂耐药细胞的体外杀伤作用。方法　采用细菌内同源重组法构建腺病毒载体 ,设立卵巢癌顺铂敏感细胞株A2 780和以其诱导的耐药细胞株A2 780 /DDP ,在体外用重组腺病毒转染两组细胞并联合应用前药 5 氟胞嘧啶 (5 FC) ,观察两组卵巢癌细胞对 5 FC的敏感性。将CD UPP阳性和CK UPP阴性的A2 780 /DDP细胞按不同比例混合后给予 5 FC ,观察 5 FC对混合细胞的杀伤作用。结果　当重组腺病毒滴度为 10 0感染复数(MOI)、5 FC浓度为 2 5 0 μg/ml时 ,对顺铂耐药的A2 780 /DDP细胞的存活率为 (3 6± 1 0 ) % ,对顺铂敏感的A2 780细胞的存活率为 (76 5± 2 8) % ,两者比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。此外 ,2 0 ? UPP阳性A2 780 /DDP细胞 ,即可引起 80 3%的混合细胞死亡 ,CD UPP / 5 FC系统表现出明显的旁观者效应。结论　由腺病毒介导的含有GSTP1调控的CD UPP/ 5 FC系统 ,对卵巢癌顺铂耐药细胞具有特异性杀伤作用 ,为临床上克服卵巢癌化疗耐药 ,提供了一条安全、高效的治疗途径。     

β-连环素对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响

目的:探讨信号分子β连环素(β-catenin)在多个卵巢癌耐药细胞系中的表达及其对顺铂耐药性的影响。方法:首先在2个卵巢癌耐药细胞系(C13K,SKOV-3),2个卵巢癌敏感细胞系(OV2008,A2780),A2780顺铂敏感株、A2780-cis顺铂耐药株,COC10顺铂敏感株、COC1-cis顺铂耐药株中检测β-catenin蛋白的水平。通过小干扰RNA(si RNA)介导的RNA干扰技术靶向沉默细胞中β-catenin的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)验证β-catenin基因沉默效果。台盼蓝染色方法分析β-catenin基因沉默对细胞化疗药物顺铂敏感性的影响,流式细胞术检测顺铂处理后β-catenin基因沉默细胞的凋亡率。Western blotting筛选多个凋亡相关信号分子的改变。结果:β-catenin在2个卵巢癌耐药细胞系C13K,SKOV-3中蛋白水平较敏感细胞系明显上调。与亲本A2780和COC10细胞相比,在耐药株A2780-cis和COC1-cis中表达水平也明显增高。β-catenin si RNA能显著抑制细胞中β-catenin蛋白的水平。β-catenin基因沉默后,卵巢癌耐药细胞C13K,SKOV-3对顺铂敏感性显著增高;流式细胞术进一步分析发现β-catenin基因沉默可以促进顺铂介导的卵巢癌耐药细胞的细胞凋亡。Western blotting发现β-catenin基因沉默后,顺铂处理可以显著上调促凋亡分子p53和caspase-3蛋白水平。结论:β-catenin在卵巢癌耐药细胞系表达明显增高,β-catenin沉默可以促进卵巢癌耐药细胞对顺铂的敏感性,并同时促进了顺铂介导的细胞凋亡。     

MDM2蛋白对卵巢癌细胞药物敏感性的影响

卵巢癌在进行化学药物治疗(化疗)中的耐药问题十分棘手。目前，关于p53-MDM2蛋白对癌细胞对顺铂类化疗药物敏感性(药敏性)影响的研究日渐深入，MDM2蛋白是p53的调节因子，是一种细胞原癌蛋白，其过度表达时，可阻断p53的功能。为了解MDM2蛋白在卵巢癌细胞中的表达及对卵巢癌细胞耐药性的影响，我们选取p53野生型的人类     

AD-p53及联合顺铂治疗卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤及腹水的实验研究

目的:探讨腺病毒载体介导的p53基因(AD-p53)对人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞系(SKOV-3)的影响,探讨AD-p53及联合顺铂(DDP)以及不同剂量的AD-p53对卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤及腹水的抑制作用.方法:培养SKOV-3细胞,分组后行免疫荧光染色,绘制细胞生长曲线;建立裸鼠腹腔移植瘤模型.共6组:空白对照组、DDP组、低AD-p53组、高AD-p53组、低AD-p53+DDP组、高AD-p53+DDP组.计算抑瘤率及裸鼠腹水形成量.结果:①成功转染基因并表达p53蛋白的细胞在染色后呈红光,当MOI=100及以上时,转染率可达90%以上.②体外实验结果:经AD-p53作用的各组,细胞生长曲线受到不同程度抑制.③体内试验结果:a:各治疗组与空白对照组、联合用药组与单用药组之间瘤重差异均有统计学意义(P＜0.05),DDP组与单用AD-p53组、不同剂量AD-p53组之间瘤重差异无统计学意义(P＞0.05).b:空白对照组裸鼠均出现血性腹水,量0.4～2.0 ml,各治疗组无明显腹水形成.高AD-p53组荷瘤裸鼠的一般状态较其他组差.结论:AD-p53可成功转染SKOV-3细胞,并对细胞生长有抑制作用;AD-p53能抑制卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤,并对腹水的形成有抑制作用,其与顺铂有协同抗癌性;无限制地增大AD-p53剂量不会增加疗效,反而会对用药个体不利.     

蛋白酶体抑制剂MG132逆转子宫颈癌细胞HCE1多细胞球体对顺铂耐药的研究

目的 构建宫颈鳞癌细胞系HCE1的多细胞球体模型,研究蛋白酶体抑制剂MG132对其顺铂天然耐药的影响,探讨MG132是否可以逆转HCE1多细胞球体的天然耐药及其可能的机制.方法 (1)采用液体重叠法和旋转法建立HCE1多细胞球体模型;(2)用MG132、顺铂分别干预HCE1单层细胞及多细胞球体,分为MG132组、顺铂组、MG132+顺铂组、对照组,锥虫蓝拒染法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率;(3)用蛋白印迹法和免疫组化方法分别检测HCE1单层细胞及药物干预前后多细胞球体中核因子kB(NF-kB)和B细胞淋巴瘤/白血病2蛋白(bcl-2)的表达.结果 (1)成功建立了HCE1多细胞球体模型.(2)HCE1单层细胞和多细胞球体的细胞抑制率:MG132组分别为(11.67±2.34)%和(10.78±1.17)%,两者比较,差异无统计学意义(P>0.05);MG132+顺铂组分别为(92.67±2.52)%和(91.33±2.18)%,两者比较,差异也无统计学意义(P>0.05);顺铂组分别为(45.01±7.44)%和(9.45±5.98)%,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).(3)HCE1单层细胞和多细胞球体的凋亡率:MG132组两者凋亡率分别为8.14%和5.97%,MG132+顺铂组两者凋亡率分别为99.01%和95.22%;顺铂组两者凋亡率分别为33.61%和0.88%.(4)NF-kB的相对表达量和bcl-2的高表达率:HCE1多细胞球体对照组分别为0.67、60%,顺铂组分别为0.85、83%,MG132组分别为0.39、20%,MG132+顺铂组分别为0.47、33%.结论 (1)HCE1多细胞球体模型对顺铂可产生天然耐药,是体外研究宫颈癌对顺铂耐药的良好模型.(2)MG132对HCE1多细胞球体有抑制增殖、诱导凋亡的作用,可部分逆转HCE1多细胞球体对顺铂的天然耐药性,其机制可能与NF-kB、bcl-2表达下调有关.     

APE1 siRNA增强卵巢癌细胞铂类敏感性的实验研究

目的:本研究通过观察脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(APE1/Ref-1)小分子干扰核糖核酸(siRNA)对卵巢癌细胞中APE1表达水平及顺铂敏感性的影响,探讨以APE1为靶点的基因治疗在卵巢癌化疗增敏中的临床应用前景。方法:应用RNAi技术抑制卵巢癌顺铂敏感株A2780和顺铂耐药株A2780/CP70中APE1的表达,并用MTT法及TUNEL等技术检测APE1 siRNA对卵巢癌细胞铂类敏感性的影响。结果:MTT药物敏感试验表明,20MOI和40MOI APE1 siRNA处理后,A2780细胞顺铂IC50值由对照组的31.62μmol/L分别降低为13.38μmol/L和3.48μmol/L,有统计学差异(P<0.01)。20MOI和40MOI APE1 siRNA处理后,A2780/CP70细胞的顺铂IC50值分别为39.73μmol/L和12.43μmol/L,较对照组(64.20μmol/L)分别下降了38.12%和80.64%,有统计学差异(P<0.01)。TUNEL凋亡原位检测表明,40MOI APE1 siRNA处理后,A2780和A2780/CP70细胞的凋亡指数分别为(42.16±3.61)%和(46.11±3.81)%,分别是DDP组的3.57倍、4.94倍,有统计学差异(P<0.01)。结论:抑制APE1表达能显著增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性,APE1可能是逆转卵巢癌铂类耐药的有效靶点。     

利用外泌体评估卵巢癌患者对顺铂敏感性

目的:利用外泌体评估卵巢癌患者对顺铂敏感性。方法:超速离心法从卵巢癌细胞A2780、SKOV3、CAOV3培养上清及卵巢癌患者血清中提取外泌体。MTT法检测顺铂对卵巢癌细胞株的24h时半数抑制浓度(IC_(50)),检测出顺铂敏感细胞及耐药细胞。MTT法检测敏感细胞A2780在细胞外泌体与顺铂共培养条件下的增殖。Caspase 3/7活性凋亡检测A2780细胞在细胞外泌体与顺铂共培养条件下的凋亡。MTT法检测A2780细胞在卵巢癌患者血清外泌体与顺铂共培养条件下的增殖,并随访卵巢癌患者病情进展情况。结果:通过超速离心法能从卵巢癌细胞系培养上清及卵巢癌患者外周血清中分离出外泌体。MTT分析证实A2780为顺铂敏感细胞,SKOV3、CAOV3为顺铂不敏感细胞。细胞系来源的外泌体能显著降低A2780对顺铂的敏感性(P<0.05),同时削弱顺铂对A2780中Caspase 3/7的活性(P<0.05),其中SKOV3和CAOV3外泌体的抑制作用显著高于A2780。基于A2780细胞+顺铂模型,将30例卵巢癌患者分为顺铂敏感组和不敏感组,其中不敏感组的13例患者的血清外泌体降低A2780对顺铂敏感性(P<0.05),术后1年已有5例患者有复发情况,而敏感组无复发。结论:利用A2780细胞模型分析外泌体对顺铂杀伤作用的影响,能在一定程度上评估卵巢癌患者对顺铂的敏感性。     

抗凋亡基因NF-κB和Survivin对卵巢癌细胞株耐药性的诊断价值

目的:探讨凋亡抑制基因NF-κB、Survivin对卵巢癌细胞株耐药性的诊断价值。方法:采用卵巢上皮性癌细胞株A2780和由此细胞株诱导的耐顺铂细胞株AD4,分别加入顺铂(DDP)和紫杉醇(Taxol),并设空白对照,测定两组细胞中凋亡抑制基因核因子(NF-κB)、Survivin和多耐药基因(Mdr1)mRNA的表达;同时检测各组细胞的凋亡率。结果:经DDP处理后,Mdr1在两株细胞中均无明显表达,与G3PDH的比值均低于0.1;而Taxol作用后,Mdr1在两株细胞中表达均增加,与G3PDH的比值分别为1.98和1.86,但差异无显著性。NF-κB在各组细胞中均有表达,各组之间差异无显著性。Survivin有较强表达,与G3PDH的比值为4.5,耐药细胞株的比值为6.9。在两细胞株的不同实验中,Mdr1的表达与凋亡率无明显相关性,而Survivin则是负相关(P<0.05,r=-0.89)。结论:在卵巢癌及卵巢癌耐顺铂细胞株中,紫杉醇可诱导Mdr1高表达,而DDP对Mdr1表达无影响;NF-κB主要是通过活性增加,促进Mdr1表达来诱发卵巢癌细胞耐药;Survivin的表达与细胞凋亡率呈负相关,提示Survivin可作为肿瘤细胞耐药检测指标之一。     

顺铂和环胞菌素A治疗耐铂复发卵巢癌的评价:GOG Ⅱ期研究

耐药被认为是化疗药物缺乏长期有效性的主要原因。环胞菌素A有抑制P糖蛋白的作用,而后者是与多药耐药基因I(MDRI)相关的一种蛋白产物。临床前试验已证实环胞菌素A能增强顺铂和阿霉素的细胞毒性。Kashani-Sabat等发现环胞菌素A能逆转耐顺铂细胞水平上的肿瘤基因的表达。1994年妇科肿瘤协作组(GOG)对顺铂和环胞菌素A联合使用经Ⅰ期研究后已制定出最大耐受剂量(MTD)。目前GOG已将这两种药用于有可测量病     

抑癌基因SPARCL1低表达对卵巢癌耐药和临床预后的影响

目的:探讨SPARCL1表达对卵巢癌顺铂耐药的影响,阐明SPARCL1表达与耐药及预后的相关性。方法:RT-qPCR和Western blot法检测卵巢癌细胞中SPARCL1表达,免疫组化法(IHC)检测卵巢癌组织中SPARCL1表达,Kaplan-Meier生存曲线分析基因表达与无疾病生存期(DFS)和总生存期(OS)的关系。慢病毒转染过表达或干扰基因在顺铂耐药细胞SKOV3/DDP中的表达,CCK-8法检测细胞增殖并计算IC_(50)。转录组测序研究SPARCL1表达对卵巢癌细胞分子水平的影响。结果:与卵巢癌敏感组织相比,SPARCL1蛋白在耐药组织中显著低表达(P=0.001),且该蛋白低表达能预测卵巢癌不良DFS(P=0.001)和OS(P=0.021)。SPARCL1在顺铂耐药细胞SKOV3/DDP中显著下调表达,其过表达能减缓耐药细胞增殖速度并提高对顺铂的敏感性,而干扰其表达则能加快细胞增殖并降低细胞对顺铂的敏感性。转录组测序结果发现,SPARCL1过表达可能影响p53及细胞黏附分子等经典卵巢癌耐药调控通路。结论:SPARCL1低表达促进耐药且与不良OS和DFS显著相关,有望作为卵巢癌治疗靶标和潜在预后标记物应用于临床。     

双氢青蒿素对人卵巢癌耐药细胞SKOV3/CDDP的体外作用

目的:观察双氢青蒿素对SKOV3/CDDP细胞的体外作用,分析双氢青蒿素抗肿瘤和逆转耐药的效果.方法:采用MTT法观察顺铂、双氢青蒿素以及顺铂联合双氢青蒿素对SKOV3及SKOV3/CDDP细胞的体外影响.结果:①顺铂对SKOV3/CDDP细胞的IC50为34.12 mg/L,是对SKOV3细胞的(IC50为7.52mg/L)4.54倍.②不同浓度的双氢青蒿素对两种细胞的抑制作用随浓度的增加而增强,呈明显的剂量依赖性,组间比较差异有统计学意义(P<0.05).双氢青蒿素对SKOV3细胞的IC50为27.45 μmol/L,对SKOV3/CDDP细胞的IC50为29.22 μmol/L.③不同浓度的双氢青蒿素联合顺铂作用于SKOV3细胞,顺铂Ic50由单用时的7.52 mg/L,下降到联用时的5.30 mg/L和2.16 mg/L.对SKOV3/CDDP细胞,顺铂Ic50由单用时的34.12 mg/L,下降为到联用时的15.25 mg/L和4.83 mg/L.结论:双氢青蒿素对人卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/CDDP具有体外抑制作用,对顺铂具有化疗增敏的作用,并能逆转SKOV3/CDDP对顺铂的耐药.     

肝素结合表皮生长因子在顺铂耐药卵巢癌中的表达及相关性研究

目的检测肝素结合表皮生长因子（HB-EGF）在顺铂耐药卵巢癌中的表达水平并探讨HB-EGF与卵巢癌对顺铂耐药性的关系。方法①体外实验：蛋白印迹法检测卵巢癌亲本细胞株A2780和顺铂耐药株A2780/CDDP中HB-EGF蛋白的表达。分别予以HB-EGF抑制剂CRM197治疗,四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞的增殖能力,酶标仪检测加药前后caspase-3蛋白的活性;②体内实验：建立A2780组和A2780/CDDP组卵巢癌裸鼠移植瘤模型,免疫组化法检测2组移植瘤中HB-EGF蛋白的表达。分别予以CRM197治疗观察移植瘤的生长情况并计算CRM197抑瘤率。结果体内外实验结果表明,与A2780组相比,HB-EGF在A2780/CDDP组中高表达。CRM197可有效地降低A2780/CDDP细胞的增殖能力和caspase-3的表达,抑制A2780/CDDP组裸鼠移植瘤的生长（P〈0.001）。结论 HB-EGF在顺铂耐药卵巢癌中高表达,并与卵巢癌对顺铂的耐药性相关。     

全反式维甲酸与顺铂联合在体外对卵巢癌细胞株3AO增殖、分化、凋亡的影响及其机制的探讨

目的 观察全反式维甲酸（ATRA）和顺铂（CDDP）在体外对人卵巢癌细胞株3AO的增殖、分化和凋亡的影响，探讨全反式维甲酸提高3AO细胞株对顺铂化疗敏感性的机制。方法 ATRA，CDDP以及两药联合分别处理卵巢癌3AO细胞株，MTT法检测细胞存活率，瑞氏染色后高倍镜下计数凋亡细胞数，细胞免疫化学测定bcl-2，p53的表达。显微镜下观察细胞形态变化。结果 细胞存活率在联用组中随ATRA剂量的增加而下降，且低于同剂量单用组（P〈0．01）；细胞凋亡率在联用组中随ATRA剂量的增加而增加，且高于同剂量单用组（P〈0．01）；bcl-2在联用组中随ATRA剂量的增加而下降，p53在联用组中随ATRA剂量的增加而增加。细胞形态随ATRA剂量的增加而趋向下成熟细胞。结论 全反式维甲酸能抑制卵巢癌细胞株3AO的增殖，诱导其分化，提高其对顺铂促凋亡效应的敏感性。其作用机制可能与bcl-2的表达下降有关，p53作用尚不清楚。     

CTHRC1对卵巢癌细胞顺铂耐药的作用及机制研究

目的:探究胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)对卵巢癌细胞顺铂耐药的作用及其相关机制。方法:Western blot法检测卵巢癌细胞株A2780、SKOV3及顺铂耐药细胞株A2780/DDP、SKOV3/DDP中CTHRC1蛋白表达水平。慢病毒lenti-sh CTHRC1转染SKOV3/DDP细胞,下调CTHRC1表达水平。CCK-8法检测沉默CTHRC1后SKOV3/DDP细胞增殖情况及顺铂半数抑制浓度(IC_(50))的变化。Western blot法检测转染后SKOV3/DDP细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况及Akt、STAT3的磷酸化水平。结果:与A2780和SKOV3细胞相比,顺铂耐药细胞株A2780/DDP和SKOV3/DDP细胞中CTHRC1蛋白表达水平相对较高(P0.05)。靶向下调CTHRC1表达后,SKOV3/DDP-sh CTHRC1细胞的增殖能力无明显变化,但顺铂的IC_(50)显著降低(P0.01),Akt、STAT3磷酸化水平受到抑制,Bcl-2表达水平降低(P0.05)。结论:CTHRC1可能通过Akt、STAT3信号通路,调节抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,继而影响卵巢癌细胞对顺铂的敏感度。     

利用生物信息学技术探索人卵巢癌细胞株A2780对顺铂耐药基因的研究

目的:利用生物信息学技术探索人卵巢癌细胞株A2780对顺铂耐药基因的可能机制，为临床化疗提供有效的依据。方法:(1)通过GEO在线GEO2R工具从两组数据库(GSE15372和GSE33482)中，分别比较对顺铂耐药的A2780与对顺铂敏感的A2780中的基因表达差异，并筛选出高表达基因和低表达基因；使用维恩图确定两组数据库中耐药的高表达共同差异基因和低表达的共同差异基因。(2)利用GO分析和KEGG通路富集分析耐药基因的生物学功能。(3)利用蛋白质-蛋白质互作(PPI)网络及Cytoscape软件筛选出A2780对顺铂耐药核心靶基因。(4)利用Kaplan-Meier Plotter工具对Hub基因进行总生存期分析。结果:(1)两组数据集的高表达共同耐药基因共37个，低表达共同耐药基因共2个。(2)GO分析结果显示：生物学过程(BP)分析结果表明，耐药基因主要参与着细胞间信号传导、趋化作用等；细胞组成(CC)分析表明，耐药基因主要位于细胞外区域、细胞间隙、细胞表面；分子功能(MF)分析表明，耐药基因参与着趋化因子相结合等作用。KEGG通路富集分析显示，耐药基因主要在细胞因子与细胞因子...     

大蒜油单独及与顺铂联合对人宫颈癌Hela细胞生长影响的研究

目的 :探讨大蒜油对人宫颈癌Hela细胞体外生长的抑制作用 ,以及大蒜油增加Hela细胞对顺铂的敏感性 ,以期对药物治疗宫颈癌以及其他肿瘤寻找更加完善的途径。方法 :体外培养人宫颈癌Hela细胞 ,分别用大蒜油、顺铂、大蒜油加顺铂处理 4 8小时 ,采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法检测大蒜油和顺铂及两者联合应用对Hela细胞的生长抑制作用。结果 :大蒜油在浓度为 12 5mg/L、2 5mg/L、5 0mg/L、10 0mg/L时对Hela细胞的抑制率分别为 2 3 82 %、37 2 1%、5 2 2 5 %、6 7 6 9% ,与对照组 (加入等量培养液 )比较 ,差异有非常显著性 (P <0 0 1)。顺铂在浓度为 0 5mg/L、1 0mg/L、2 0mg/L时对Hela细胞的抑制率为 38 13%、4 6 16 %、6 0 38%。两者合用可大大提高对Hela细胞的抑制作用 ,抑制率分别为 4 2 5 0 %、5 5 38%、6 6 98%、78 31% ,与单纯应用大蒜油或顺铂比较差异有非常显著性 (P <0 0 1)。结论 :大蒜油能抑制Hela细胞的生长 ,同时能够增加Hela细胞对顺铂的敏感性。     

整合素β1与FN黏附对卵巢癌A2780细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察整合素β1介导的细胞与纤维粘连蛋白(FN)黏附对卵巢癌A2780细胞增殖及凋亡的影响,初步探索整合素β1的信号传导机制。方法:体外培养卵巢癌A2780细胞。实验分组:对照组(多聚赖氨酸铺板)、实验A组(整合素β1的配体FN铺板)、实验B组(FN铺板+整合素β1单克隆抗体)。CCK-8检测3组细胞的增殖率;PI单染技术检测细胞周期;Anexin-V/PI双染检测顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡率;实时定量RT-PCR检测Aurora B及Survivin基因mRNA水平的变化。结果:实验A组与对照组、实验B组比较,细胞增殖率升高,凋亡率下降,S+G2/M期细胞比例增加,Aurora B及Sur-vivin mRNA表达水平升高,均有显著差异(P<0.05)。结论:整合素β1介导的A2780细胞与FN黏附可促进细胞增殖、抑制细胞凋亡,其作用机制可能与诱导Aurora B及Sur-vivin的表达有关。     

不同化疗药物对宫颈癌裸鼠移植瘤微小染色体维持蛋白7表达影响的研究

目的:研究铂类和氧化嘧啶类药物对HeLa细胞裸鼠移植瘤微小染色体维持蛋白7表达的影响。方法:将HeLa细胞注射于4~6周龄雌性裸鼠皮下建立移植瘤模型,根据所用药物将裸鼠分组为A:对照组、B1:顺铂组、B2:卡铂组、B3:5-FU组、B4:卡培他滨组(capecitabine,商品名:xeloda)、B5:顺铂+5-FU组、B6:顺铂+卡培他滨组、B7:卡铂+5-FU组。RT-PCR法检测微小染色体维持蛋白7(MCM7)的表达,并与大体组织的观察指标如肿瘤体积、质量的变化及抑瘤率进行比较。结果:B1、B2、B5、B6、B7的MCM7表达低于A,差异有统计学意义(P<0.05),B7的MCM7表达低于B4,差异也具有统计学意义(P<0.05),但析因分析未显示出他们有正交互效应。结论:对宫颈癌移植瘤抑制作用强的药物其MCM7的表达低,MCM7有可能成为评价宫颈癌化疗药物疗效的生物学指标。     

RNA干扰技术抑制切除修复交叉互补基因1对卵巢上皮性癌细胞顺铂敏感性的影响

目的探讨RNA干扰技术抑制切除修复交叉互补基因(ERCC)1对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞顺铂敏感性的影响。方法体外设计、合成针对ERCC1的小分子干扰RNA(siRNA),并转染卵巢癌细胞ES2,应用RT PCR、蛋白印迹法(westernblot)和免疫组化链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶(SP)连接法检测转染siRNA后ES2细胞ERCC1基因和蛋白的表达变化,应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测干扰ERCC1后ES2细胞对顺铂敏感性的变化。结果转染针对ERCC1的siRNA后24、48、72h,ES2细胞ERCC1基因和蛋白的表达水平下降;转染ERCC1siRNA后,ES2细胞对顺铂的半数抑制量从(10.475±1.713)μg/ml提高到(0.194±0.021)μg/ml,ES2细胞对顺铂的敏感性增加了53.88倍。结论RNA干扰技术抑制ERCC1能增加卵巢癌细胞ES2对顺铂的敏感性。