体外诱导胚胎干细胞分化为神经细胞特性的实验研究

目的研究体外利用全反视黄酸(RA)诱导小鼠胚胎干细胞(mESC)分化为神经细胞的培养方法。方法悬滴3天转悬浮1天两者结合的培养方法得到胚体(EBs),再利用RA对其处理4天后,进行免疫组织化学、RT-PCR以及兴奋性功能的检测,观察神经细胞获得的效率及其生理特性。结果利用RA诱导方法得到的神经细胞,免疫组化表明nestin蛋白表达的阳性率为(53.49±6.02)%,且RT-PCR法分析其能表达nestin、glutaminase和Brn-3等神经细胞特异基因,同时在Glu刺激下具有与脑来源神经元相似的特性和功能。结论利用本实验诱导方法,获得神经细胞的比例较高,且具有与神经元相似的生物学特性。     

胚胎干细胞的分化研究

胚胎干细胞的分化研究已成为发育生物学和临床细胞替代治疗的研究热点。本文仅就胚胎干细胞分化的理论基础、定向分化研究现状及临床潜在应用价值作一综述。     

体外培养胚胎干细胞分化为心肌细胞特性的初步研究

目的了解干细胞在实验条件下分化发育为心肌细胞的特征表达与培养时间的关系。方法收集体外培养条件下第2、4、6、8、10、12、14、16、18和20天的胚胎干细胞,采用RT-PCR方法对其中心肌细胞特异表达基因(浕/β-MHC)的表达量进行检测,并通过管家基因(GAPDH)表达量作为内对照;另外收集第0、3、5、10天培养的干细胞,检测3种管家基因(GAPDH、HGPRT、β-tublin)表达的稳定性。结果胚胎干细胞在体外特定培养条件下,第6天起浕/βMHC出现,且表达量随培养时间延长逐渐增加,至14天时表达量最高,其后随着培养时间延长,表达量保持稳定;不同管家基因表达量随培养时间的变化,稳定性相差较大,其中GAPDH基因表达的波动相对稳定。结论EST实验体系分化抑制实验的周期设计为10~14天较为合理,GAPDH适合用于作为目的基因表达量检测的内对照。     

胚胎干细胞的分化研究

胚胎干细胞的分化研究已成为发育生物学和临床细胞替代治疗的研究热点。本文仅就胚胎干细胞分化的理论基础、定向分化研究现状及临床潜在应用价值作一综述。     

药物介导小鼠胚胎干细胞体外定向分化为心肌细胞

[目的 ]胚胎干细胞 (embryonicstemcells ,ES细胞 )是从早期胚胎内细胞团或桑椹胚分离出来的全能细胞系 ,具有体外不分化的无限增殖能力 ,当处于适合的培养条件下 ,可定向分化形成多种单一的细胞。本研究利用ES细胞的这种特性 ,旨在构建一种可提供生物信息量大而专一性强的体外药物筛选和安全性评价模型。由于ES细胞体外定向分化模型重演了基因按照特定的时间、空间表达的过程。在与药物共培养的过程中 ,ES细胞定向分化模型提供了药物介导机体生理、病理情况下生命现象的所有生物信息。基于ES细胞具有的全能性 ,用以筛选某种特定作用的药物时 ,在其定向分化为某一特定细胞过程中 ,可采集到核酸层面和蛋白层面的生物信息及其转录、翻译过程中的信号转导和修饰过程。 [方法 ]以小鼠ES细胞作为生物测试载体 ,将ES细胞用胰酶消化后 ,以合适的密度制成单细胞悬液 ,采用悬滴培养方法和特定的药物改变其培养微环境进行分化培养。 [结果 ]按上述方法经过约 13d的培养 ,先后分两批定向分化出 30余个具有自律性搏动的心肌细胞团。其搏动频率有差异 ,范围在 80～ 130次 /min之间 ,各细胞团搏动的节律非常有规则 ,以搏动频率与节律作为评价指标 ,定向分化成功率达 80 %以上。 [结论 ]本研究构建了小鼠ES细胞体外定向     

胚胎干细胞体外分化为原始生殖细胞与精子

胚胎干细胞（ESC）是全能干细胞，理论上讲可分化为全部生殖层的所有组织细胞包括生殖母细胞．进而分化出成熟精子。结合最近研究进展对胚胎干细胞体外分化为原始生殖细胞（PGC）。进而分化出可使成熟卵母细胞受精的精子，以及胚胎干细胞和由胚胎干细胞体外分化的原始生殖细胞（PGC）和精子的鉴定，以及促进ESC体外分化为PGC的影响因素和ESC体外分化为精子的意义和存在的问题做一综述。     

胚胎干细胞体外分化为原始生殖细胞与精子

胚胎干细胞(ESC)是全能干细胞,理论上讲可分化为全部生殖层的所有组织细胞包括生殖母细胞,进而分化出成熟精子.结合最近研究进展对胚胎干细胞体外分化为原始生殖细胞(PGC),进而分化出可使成熟卵母细胞受精的精子,以及胚胎干细胞和由胚胎干细胞体外分化的原始生殖细胞(PGC)和精子的鉴定,以及促进ESC体外分化为PGC的影响因素和ESC体外分化为精子的意义和存在的问题做一综述.     

胚胎干细胞向生殖细胞分化的研究进展

<正>近年来,不断有研究证明人胚胎干细胞(hESC)的多能性,以及小鼠胚胎干细胞(mESC)能够分化为早期配子并形成囊胚样结构。2003年5月,Hbner等研究发现,小鼠胚胎干细胞在体外可分化为卵母细胞。Nayernia等研究发现,mESC可于体外分化为未成熟的精子,并且成功获得了存活的后代。这些研究对发展新的生殖工程学提供了开创性思     

诱导脐血间充质干细胞分化为神经细胞的研究综述

脐血间克质干细胞是指从脐带血中分离、培养出来的一种成体肝细胞，具有多潜能性，可以向神经细胞分化。临床研究发现，脐血间充质干细胞于神经损伤、神经退行性疾病、卒中等神经系统疾病临床治疗中具有显著功效。近年来，关于脐血间充质干细胞相关研究工作不断推进，取得了多项研究成果。本文着重针对诱导脐血间充质干细胞分化为神经细胞问题进行了分析总结。     

胚胎干细胞在心肌样环境中向心肌样细胞的分化情况

目的探讨心肌细胞促进胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)分化为心肌样细胞的诱导作用。方法收集小鼠3.5d胚龄的囊胚,将其培养在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上,4～5d后取内细胞团接种在饲养层上分离培养出ESCs。取3～5代ESCs,先将ESCs悬浮培养形成2～3d的拟胚体(embryoid bodies,EBs),再与新生大鼠心肌细胞共培养诱导向心肌细胞分化,相差显微镜下观察分化细胞的形态学变化,免疫细胞荧光技术检测心肌细胞特异性肌钙蛋白T(TnT)、а-肌动蛋白(а-Actin)的表达。结果诱导d3起可见自发性、有节律跳动的拟胚体出现,12d时共培养组约有93%的拟胚体出现节律性收缩,显著高于对照组,均表达心肌细胞特异性蛋白cTnT、а-actin,心肌细胞直接接触诱导组其分化比率达56.5%,分化的细胞形态较单一。结论心肌细胞与胚胎干细胞直接接触能促进胚胎干细胞向心肌细胞分化。     

胎儿骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为胰岛样细胞

目的探索体外诱导胎儿骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为胰岛样细胞的最佳分化条件。方法取流产胎儿的长骨骨髓,体外培养扩增MSCs,先后予以2-巯基乙醇、表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、B27及尼克酰胺,通过三阶段诱导MSCs分化为胰岛样细胞,观察细胞形态变化、免疫荧光鉴定巢素蛋白(nestin)、胰十二指肠同源异型盒基因(PDX-1)、胰岛素(insu lin)和胰高糖素(glucagon)的表达、双硫腙染色鉴定胰岛细胞中的锌离子、电化学发光法测定人胰岛素的分泌量。结果MSCs易于体外分离和扩增,诱导二阶段细胞表达nestin及PDX-1,诱导三阶段形成胰岛样细胞团,表达insu lin及glucagon;双硫腙染色呈棕红色;胞浆胰岛素分泌量为81.3±23.6μu/m l;有一定程度葡萄糖刺激的胰岛素释放。结论MSCs可以诱导分化为胰岛样细胞团,尼克酰胺20 mmol/L是合适的促进胰岛细胞分化和成熟的浓度。     

胚胎干细胞向肝细胞的诱导分化研究

胚胎干细胞在体外一定条件下能够分化为与原代培养肝细胞表型相似,并表达部分成熟肝细胞功能的类肝细胞.尽管目前在诱导条件的优化、分化过程的调控及临床应用的安全性等方面仍面临一系列问题,但研究胚胎干细胞向肝系的诱导分化及纯化,为终末期肝病的细胞移植治疗、生物人工肝及药物代谢和毒理研究提供了丰富的细胞来源.     

乙醇对胎鼠脑新皮质神经干细胞凋亡的影响

目的探讨乙醇对胎鼠神经干细胞凋亡的影响。方法将妊娠14 d胎鼠脑新皮质来源的神经干细胞暴露于终浓度分别为0(对照)、25、50、100 mmol/L的乙醇培养基溶液3 d。采用Annexin V/PI法检测细胞早期和晚期凋亡情况,采用JC-1探针法检测线粒体膜电位的改变,并检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果与对照组比较,50、100 mmol/L乙醇染毒组神经干细胞的早期凋亡细胞率明显升高,差异有统计学意义(P0.05);而各浓度乙醇染毒组神经干细胞的晚期凋亡率无明显改变。且随着乙醇染毒浓度的升高,神经干细胞的早期凋亡细胞率呈上升趋势。仅100 mmol/L乙醇染毒组神经干细胞线粒体膜电位低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,各浓度乙醇染毒组神经干细胞Bax mRNA的表达水平均上升,差异有统计学意义(P0.05);而Bcl-2和Caspase-3 mRNA的表达水平均无明显改变。且随着乙醇染毒浓度的升高,Bax mRNA表达量呈上升趋势。与对照组比较,50、100 mmol/L乙醇染毒组神经干细胞Bax蛋白的表达水平均升高,而Bcl-2/Bax蛋白的比值均降低,差异有统计学意义(P0.05);各浓度乙醇染毒组神经干细胞Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达水平均无明显改变。结论乙醇可引起神经干细胞早期凋亡,其机制可能与线粒体损伤和Bax表达上调有关。     

干细胞向生殖细胞分化的研究进展

胚胎干细胞（ESC）是一种多能干细胞,具有向生殖细胞分化的能力,由于具有致瘤性和伦理问题,限制了ESC向临床应用发展的前景。成体干细胞（ASC）也是一类多能干细胞,理论上也能分化为生殖细胞,但诱导分化过程往往受到阻滞。诱导性多能干细胞（iPS）是一种具有多能性的重编程体细胞,一定程度上可替代ESC用于基础和临床研究。目前,全球不孕不育的发生率呈逐年递增的趋势,充分认识干细胞向生殖细胞分化的机制是解决该难题的重要理论前提。就各种干细胞向生殖细胞分化的研究进展作一综述。     

诱导多能干细胞体外分化为雄性生殖细胞的研究进展

男性不育是影响生殖健康的重要问题,由于致病因素和发病机制复杂,临床上针对非梗阻性无精子症等不明原因的男性不育症往往缺乏特异性治疗措施。随着生殖细胞体外诱导培养的技术的发展,研究者们希望利用无精子症患者源性的多能干细胞体外培养出自身具有功能性的精子,从而治疗男性不育症。体外培养生殖细胞的策略,通常是先将诱导多能干细胞分化...     

胶质瘤干细胞研究现状

恶性胶质瘤是一种常见的原发性神经肿瘤,目前尚无有效的治疗方法,且预后差复发率高,严重威胁着人类的健康。近年来,越来越多证据发现胶质瘤组织存在类似神经干细胞特性的细胞,并由此提出了胶质瘤干细胞理论,使胶质瘤研究进入了新的阶段。通过对胶质瘤干细胞的深入研究,人们对此类肿瘤有了更全面的认识,这也给疾病的治愈带来了希望。着重从胶质瘤干细胞的特异性生物学标记物、生物学特征、细胞起源等方面进行综述。