甬沪两地海产品中副溶血性弧菌携带与分型

目的:了解宁波和上海两地市售海产品中副溶血性弧菌污染情况以及菌株的流行优势型和毒力等.方法:用PCR快速筛检与GB法相结合方法分离海产品中副溶血性弧菌;用血清学和PFGE方法对菌株进行分群和基因分型;用PCR方法检测tdh和trh毒力基因;结果:从3 740份海产品中分离出1 507株疑似副溶血性弧菌,检出率为40.29％,其中宁波地区检出率为41.42％,上海地区检出率为21.86％;菌株的生化反应典型,560株副溶血性弧菌分出10个血清群,有30株VP未被分型,分型率为95.06％,377株副溶血性弧菌分出29个PFGE型;497株副溶血性弧菌检出7株带tdh毒力基因的副溶血性弧菌,均未检出trh毒力基因,检出率为1.41％.结论:宁波、上海海产品中副溶血性弧菌携带率较高,是诱发副溶血性弧菌疾病的原因食品.菌株的血清型和PFGE型较分散,其流行优势群与致病性副溶血性弧菌的相关性不明显;菌株带tdh和trh毒力基因较低,与病人分离株有明显差别,根据该特征,可将副溶血性弧菌分为致病的和非致病两类,便于分析和检测.     

宁波地区首次检出产色素副溶血弧菌的分析

目的:通过与副溶菌标准株和病人分离株的生物学特性、耐药情况和毒力基因比较,确认副溶血弧菌产色素株的存在,了解副溶血弧菌产色素株耐药性和毒力,以提高副溶血弧菌的鉴别率。方法:从食品中分离的2株弧菌,用Vitek-32型细菌鉴定仪和API20E生化试剂鉴定分析;用PCR方法测定其tdh和trh毒力基因;用纸片法检测耐药性。结果:该2株菌生化典型符合副溶血弧菌特征,生化结果与参考标准株ATCC18072和病人分离株的副溶血弧菌一致,可定为产色素的副溶血弧菌。结论:产色素的副溶血弧菌比较少见,本次检出占副溶血性弧菌总数的7.14%,有一定的比例,提示我们在鉴定工作中应引起我们的关注,发现产色素株有助于我们进一步提高食品中副溶血弧菌的检出率。     

南平市食品中副溶血性弧菌污染及毒力基因携带状况分析

目的了解南平市食品中副溶血性弧菌污染状况及毒力基因携带情况。方法收集南平市2013—2018年6类食品,按GB 4789.7-2013方法对副溶血性弧菌进行检测。结果样品中副溶血性弧菌检出率12.6%(28/223),其中淡水产品检出率(17.2%,26/151)高于海产品(2.8%,2/72);6类食品中有4类食品检出副溶血性弧菌,以两栖及爬行类检出率最高(36.4%);不同来源样品的检出率差异无统计学意义;毒力基因检测结果:28株阳性株中,不耐热溶血毒素(tlh)基因携带率为100%,均未检出副溶血性弧菌耐热直接溶血素(tdh)和耐热直接溶血相关毒素(trh)基因。结论南平市食品存在不同程度的副溶血性弧菌污染,特别是淡水产品,应引起重视、提高防范意识,加强对该菌的食源性监测。     

宁波地区海产品中副溶血性弧菌分布与研究

目的了解宁波地区海产品中副溶血性弧菌的分布,菌株血清型、PFGE型别及产毒基因等特征,为防控副溶血性弧菌引起的食源性疾病提供依据。方法用PCR筛检与GB法相结合方法分离细菌;用标准血清和PFGE对菌株进行分群和基因分型;用PCR方法检测tdh和trh毒力基因;用K-B法进行耐药性测定。结果从3 525份海产品中检出1460株副溶血性弧菌,检出率为41.42%;象山、宁海检出率分别为73.72%和70.69%,与其他县(市)区差异有统计学意义(χ2=42.694,P<0.01);560株副溶血性弧菌分出10个血清群,0∶6群和0∶5群为流行优势血清群;菌株对氨苄西林耐药率达92.64%,但对常用抗生素均敏感;450株副溶血性弧菌检出5株带tdh的,阳性率为1.11%,未检出trh毒力基因。依据PGFE带型差异将330株副溶血性弧菌分为29个型。结论在海产品中副溶血性弧菌带菌率较高,是引发疾病的高危食品;菌株的流行优势群型较分散;可用常用抗生素治疗;菌株带tdh和trh毒力基因较低,根据该特征可将副溶血性弧菌分为致病的和非致病两类。     

浙江省某地海产品中副溶血性弧菌污染及耐药性分析

【目的】了解浙江省某区市售海产品中副溶血性弧菌污染状况及耐药性,为防控副溶血性弧菌引起的食源性疾病提供基础数据。【方法】根据GB 4789.7—2013标准对海产品中副溶血性弧菌进行分离鉴定,利用实时荧光聚合酶链反应(PCR)法鉴定毒力基因,采用K-B法进行药敏试验。【结果】从210份样品中检出副溶血性弧菌阳性样本55份,检出率为26.19%,不同海产品种类检出率差异较大,腹足类和双壳类污染较为严重。分离所得的55株副溶血性弧菌均不含毒力基因tdh和trh,所有菌株均检出2种特异性基因tlh和toxR。大部分菌株对氨苄西林和阿莫西林耐药,耐药率均为96.36%。所有菌株对氨苄西林/舒巴坦、四环素、环丙沙星、左氧氟沙星、氧氟沙星、氯霉素完全敏感。【结论】市售海产品普遍存在副溶血性弧菌污染,分离菌株存在一定程度的耐药情况,应加强海产品副溶血性弧菌污染状况监测,规范养殖和临床抗生素使用。     

南京夏秋季海产品中副溶血性弧菌的污染监测及其毒力与耐药性

目的了解南京市夏秋季海产品中副溶血性弧菌(Vibro parahaemolyticus,VP)的污染状况以及分离菌株的毒力与药物敏感性。方法自农贸市场与饭店采取海产品样品,参考国标法(GB/T4789-2008)对样品进行检测,用科玛嘉弧菌显色培养基进行分离培养,对紫红色菌落进行PCR鉴定,对分离菌株进行神奈川试验与药物敏感试验。结果在296份样品中共检出副溶血性弧菌237株,检出率为80.1%,其中冷冻与保鲜海鱼类检出率为96.4%,贝壳类产品检出率为80.8%,鲜活鱼虾类检出率为6.7%,鲜海带类检出率为40.9%,海蜇类检出率为66.7%。VP种属特异性的基因tlh的PCR鉴定与显色培养基的鉴定结果一致;237株VP神奈川试验阳性69株;常用抗生素出现不同程度耐药,完全不耐药的分别为头孢曲松、头孢呋肟、万古霉素、美满霉素、奥复星、麦迪霉素、先锋霉素Ⅴ、丁胺卡那霉素、诺氟沙星、丙氟哌酸、复达欣等。结论南京夏秋季海产品中存在严重的副溶血性弧菌污染,分离菌株含毒力占29.1%,对16种抗生素存在不同程度的耐药。显色培养基用于海产品中副溶血性弧菌的快速检测与PCR检测结果一致。     

一起副溶血弧菌污染小龙虾的病原学鉴定

目的:通过对食物中毒中采集的小龙虾等样品中副溶血性弧菌的分离培养和鉴定,查找食物中毒的原因。方法:参照GB/T4789.7-2008对小龙虾等样品进行副溶血性弧菌分离培养,ATB进行生化鉴定及耐药试验,PCR扩增毒力基因进行致病性分析。结果:所检测的小龙虾和呕吐物中副溶血性弧菌均为不致病性副溶血性弧菌。小龙虾分离菌株对替卡西林和头孢噻吩耐药。结论:食用了被副溶血弧菌污染的小龙虾存在风险,可能引起食物中毒。     

感染性腹泻中副溶血性弧菌的监测与研究

目的:了解余姚市感染性腹泻中副溶血性弧菌的感染状况及其研究。方法:采集感染性腹泻病人的大便或肛拭标本,依据GB/T4789.7进行增菌、分离、生化鉴定、血清分型,最后进行药敏试验和PCR毒力基因检测。结果:2007~2008年共检验标本513份,检出副溶血性弧菌43株,检出率为8.38%。药敏试验:43株副溶血性弧菌对阿莫西林棒酸、青霉素、氨苄西林、环丙沙星、头孢唑林、头孢哌酮、庆大霉素7种抗生素的耐药率分别为58.1%、55.8%、、44.2%、7.0%、4.7%、4.7%、4.7%,对另外13种抗生素均敏感。血清分型:43株副溶血性弧菌分布于O1、O2、O3、O4、O6、O11共6个O抗原群;其中以03群为主,占67.4%。毒力基因:有40株副溶血性弧菌检出含有tdh基因,检出率高达93.02%,均未检出trh基因。结论:检出的副溶血性弧菌以03群为主,占67.4%;对阿莫西林棒酸、青霉素耐药性最强,分别为58.1%、55.8%;93.02%的菌珠含有tdh基因,所有菌株均不含trh基因。     

2010年浙江省桐庐县市售食品副溶血性弧菌污染调查分析

目的:了解浙江省桐庐县市售食品中副溶血性弧菌污染状况。方法:对桐庐县5个主要集贸市场和2个超市采集8大类9个品种509份食品,进行副溶血性弧菌检测。结果:桐庐县8大类9个品种509份食品中检出溶血性弧菌71株(检出率为13.94%),均在381份生鲜食品中检出,检出率18.64%。水产品、海产品、禽肉、猪肉、牛羊兔肉中副溶血性弧菌检出率分别为31.42%、23.33%、14.06%、10.53%和9.26%。结论:水产品、海产品和禽肉是桐庐县主要副溶菌污染食品。夏季未控温市场的生鲜动物性食品副溶血性弧菌污染严重。对夏秋季开放性市场进行控温和卫生方面改造,可以使生鲜食品副溶菌污染率下降76%。     

青岛市售贝类副溶血性弧菌污染状况及耐药性分析

目的:对青岛市售贝类中副溶血性弧菌进行污染状况调查,并对分离菌株进行毒力基因检测和耐药性分析,为贝类产品的食用安全及食源性疾病的防控提供依据。方法:根据GB/T 4789.7-2008标准对贝类中副溶血性弧菌进行分离鉴定,PCR法检测毒力基因,K-B法进行药敏试验。结果:143份样品中82份检出副溶血性弧菌,检出率达57.3%,不同品种和不同季节检出率差异显著。从阳性样品中分离到98株副溶血性弧菌,所有菌株均不含毒力基因tdh和trh,大部分菌株对氨苄西林和阿莫西林耐药,耐药率分别为92.9%和71.4%,所有菌株对头孢曲松、头孢吡肟、庆大霉素、卡那霉素、诺氟沙星、环丙沙星、萘啶酸、吡哌酸、氯霉素和呋喃妥因100%敏感。结论:青岛市售贝类副溶血性弧菌污染较严重,存在一定程度的耐药情况,应加强对水产品副溶血性弧菌的监控和抗生素的使用管理。     

宁波地区副溶血弧菌分型与毒力分析

目的:了解宁波地区不同来源副溶血性弧菌的毒力及血清型、基因型,为追溯病原和防控副溶血性弧菌提供依据。方法:海产品菌株分离采用PCR+GB筛检方法,病人采用全国临床检验操作规程方法;用诊断血清进行血清学分型,用PFGE进行基因分型;用PCR检测tdh和trh毒力基因。结果:海产品流行优势血清群为O6群和O5群,病人株为O3群;海产品株PFGE分型与病人株相比较为分散;88.04%的病人株带毒力基因,海产品株带毒力基因仅有1.11%。结论:海产品株和病人株在流行优势株上存在明显差别,提示血清型分型和PFGE分型能发现菌株间的亲缘关系,可用于病原的追踪与溯源;病人株带毒率明显高于海产品株(P<0.01),认为海产品株致病性不强,建议将VP分为致病的和非致病两类,有利于鉴别和防控措施的改进。     

2016-2019苏州市副溶血性弧菌的毒力基因和耐药性及分子分型研究

目的 了解2016-2019年苏州市副溶血性弧菌( Vibrio parahaemolyticus ,VP)分离株毒力基因携带情况,耐药性及分子分型。 方法 利用荧光定量PCR 技术对154株分离自苏州各区、县级市的VP的3种毒力基因（ tlh 、 tdh 、 trh ）进行检测。采用微量肉汤稀释法测定其对14 种抗生素的耐药性。采用脉冲场凝胶电泳（Pulsed-Field Gel Electrophoresis, PFGE）进行分子分型。采用卡方检验对统计结果进行分析（ α =0.05）。 结果 154株VP分离株 tlh 基因均为阳性; trh 基因阳性4株,阳性率为2.60%,均为病患分离; tdh 基因阳性107 株,阳性率为69.48％,其中病患分离株阳性106株,食品及环节(用具)分离株阳性1株。154株VP仅对氨苄西林耐药,总体耐药率为80.52%（124/154）,其中病患分离株耐药率为88.98%（105/118）高于食品及环节分离株耐药率52.78%（19/36）,差异具有统计学意义（ P <0.001）。154株VP 经PFGE分子分型显示带型相似性为45%～100%,按相似度85%为判读标准可分为73个带型簇（各带型簇:1≤n≤10）。 结论 苏州市VP的 trh 基因的携带率较低,病患分离株的 tdh 基因的携带率较高,远高于食品及环节分离株。VP分离株对多数抗生素不耐药,仅对氨苄西林存在较高的耐药率。PFGE带型较为分散,没有明显的优势带型簇。     

食品中分离的李斯特氏菌的致病基因分析

１９９６—１９９７年作者对全国１２个省市的７类食品共３７４６份进行了李斯特氏菌的污染调查,共分离出李斯特氏菌１６５株。用ＰＣＲ技术对分离菌株中李斯特氏菌的２种主要致病因子李氏溶血素Ｏ和内化素的基因进行了检测,其中５７株仅有内化素基因,２７株同时具有内化素基因和李氏溶血素Ｏ基因。两种致病基因均未检出的共有８１株。本研究说明判断单增李氏菌的主要指标是小鼠毒力试验阳性而不是其溶血反应,同时检测溶血素Ｏ和内化素２种基因对单增李氏菌有鉴别意义。     

水(海)产品中副溶血性弧菌污染现状及预防控制

目的了解惠州市区超市售卖及酒楼菜肴所用的海产品和淡水产品中副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的污染情况,为相应水(海)产品副溶血性弧菌的危险性进行评估提供检测数据。方法自各大超市、市场及酒楼采取海产品和淡水产品样品,依据国标方法(GB/T4789.7-2008)进行检测。结果抽取样品61份,检出VP25份,阳性率为41.0%,其中生吃水产品阳性率为41.2%,鲜冻水产品阳性率为40.9%;夏秋季采集的水(海)产品副溶血性弧菌检出率高于其他季节(P0.01)。结论实验结果说明惠州市区的水(海)产品中副溶血性弧菌的污染率较高,存在着食用安全隐患,采取有效措施控制生食和熟食海产品交叉污染,是重要防范措施。     

2005—2007年河北省水产品副溶血性弧菌主动监测及耐药性研究

目的了解河北省水产品中副溶血弧菌（Vibrio Parahaemolyticus，VP）的污染状况及耐药性的变化，为建立VP食源性疾病的预警提供数据基础。方法依据GB／T4789．7—2003对河北省各类水产品进行VP分离，用API20E进行生化鉴定，同时用纸片法进行耐药性监测。结果363份样品检出108株副溶血性弧菌，检出率29，8％，2005—2007年检出率逐年降低，统计学有显著性差异（x^2=44．42，P〈0．01）。分离菌株对诺氟沙星和氯霉素100％敏感，对氨苄西林、链霉素、磺胺、阿米卡星显示高度耐药，对氨苄西林的耐药率高达94．4％。结论河北省水产品VP污染严重，继续加强VP食源性疾病预警，同时加强水产品抗生素使用的管理，防止耐药菌株的传播。     

杭州市下城区副溶血性弧菌菌群菌型分布、毒力基因及耐药性研究

目的:通过对副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)食物中毒分离株菌群菌型、毒力基因、耐药性检测分析,掌握VP血清群型、毒力基因及耐药状况。方法:按国标方法进行分离鉴定,药敏试验采用K-B法,毒力基因采用普通PCR法。结果:341株VP分属9个血清群15种血清型,前四位占96.19%,依次是O3、O4、O1、O2血清群,余五个血清群占3.81%。血清型以O3:K6为主,O4:K8型次之。282株VP携带tdh,仅1株携带trh,58株不携带毒力基因,无同时携带tdh和trh菌株。341株VP对诺氟沙星、复方新诺明、阿米卡星、头孢噻肟、妥布霉素5种抗生素100%敏感,对阿莫西林、氨苄西林、头孢噻吩、庆大霉素、环丙沙星耐药程度各异。结论:本区VP引起的食物中毒以O3:K6型为主;82.69%的VP携带tdh;诺氟沙星、复方新诺明、阿米卡星、头孢噻肟、妥布霉素是临床首选的抗生素。     

实时荧光定量PCR和PFGE在检测海产品中副溶血性弧菌的应用

目的 应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)筛检海产品中副溶血性弧菌,结合常规培养以提高检出率;应用PFGE对32株副溶血性弧菌进行分子分型分析。方法 在常规培养的基础上,应用RT-PCR对96件样品增菌液进行初筛,再用常规培养法确证阳性;用阳性似然比与阴性似然比、符合率与Kappa值做为指标,评价RT-PCR筛检的真实性和可靠性;用限制性内切酶 SfiⅠ对32株菌进行PFGE分子分型,用BioNumerics Version 5.01软件对图像进行聚类分析。结果 96件样品常规培养法检出率24.00%,RT-PCR/常规培养法检出率33.33%。阳性似然比为3.88,阴性似然比为0.06。符合率为80.21%,中、高度一致(Kappa值=0.57);32株菌得到31个PFGE图谱类别,相似性在62.1%~100.0%之间,可分5个聚类群。结论 RT-PCR在检测海产品中副溶血性弧菌有很好的初筛作用,RT-PCR /常规培养法使用价值高;海产品中副溶血性弧菌亲缘关系较远,显示高度多态性。     

2006-2007年南宁市零售水产品中副溶血性弧菌污染状况调查

[目的]了解南宁市零售水产品中副溶血性弧菌（VP）污染状况及危险性,为消费安全指导及预警预报系统建立提供科学依据。[方法]2006年开始,建立南宁市“市场零售-餐饮-医院”主动监测网,开展零售水产品中VP及其引起的食源性疾病标本监测检验,对检测结果及VP肠道疾病进行综合分析,提出食品安全风险预警。[结果]2006～2007年合计检测水产品328份,VP阳性的119份,阳性率为36．28％。VP阳性率,海产品为55．77％,淡水产品为6．20％（P〈0．01）;2006年为36．23％,2007年为36．32％（P〉0．05）。2006年、2007年零售水产品中VP阳性率分别为36．23Voo和36．32％（P〉0．05）。海产品中贝类VP阳性率高于鱼类、虾类、螺类和蟹类（P〈0.01）,鱼类、虾类、螺类和蟹类VP阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）;贝类中牡蛎阳性率最高,达83．02％,平均菌浓度为3607．5MPN／g。夏冬季节水产品VP平均菌浓度高于春秋季节。食源性腹泻病人标本卯阳性率2006年为2．04％,2007年检测290份均为阴性。[结论]水产品中忡污染较高,特别是海产品中VP污染始终保持在较高风险,其中牡蛎尤其突出。VP是南宁市重要的食源性疾病病原菌。     

杭州地区2000-2002年副溶血弧菌的分子分型研究

目的了解杭州地区2000-2002年副溶血弧菌临床和环境分离菌株的分子流行病学特征.方法对172株2000年和2002年从临床食物中毒患者和散发腹泻病例以及外环境（小水产品）中分离的副溶血弧菌菌株进行血清分型.对40株临床来源O3：K6型菌株及环境来源O3：KUT（K抗原未分型）型菌株,应用PCR技术进行耐热直接溶血素基因（tdh）和耐热直接溶血素相关基因（trh）的检测,并进行核糖体基因分型（ribotyping）、随机扩增多态性DNA分析（RAPD）、肠道细菌重复基因间共同序列PCR（ERIC-PCR）等.结果在调查的13起副溶血弧菌引起的食物中毒中,tdh阳性、trh阴性的O3：K6血清型引起的有11起（84.6%）;tdh阳性、trh阴性的O4：K8菌引起有2起（15.4%）.在散发腹泻病例中,tdh阳性、trh阴性的O3：K6、O4：K8和O1：KUT菌株分别占26.5%（9/34）、17.6%（6/34）和38.2%（13/34）,未能分型的占17.6%（6/34）.在水产品中分离的菌株中,37株分属7种O血清型,其中未见有O3：K6和O4：K8血清型;另外有9株未能分型;其中除1株O1：KUT菌株trh阳性外,其余tdh和trh均为阴性.绝大部分食物中毒患者和散发腹泻病例分离的O3：K6菌株在ribotyping、ERIC-PCR及RAPD三种指纹上均属于一种密切相关的克隆群,而环境分离的O3：KUT菌株与临床分离的O3：K6菌株间,在三者指纹上均有明显差异.结论临床来源和小水产品来源的副溶血弧菌菌株间血清型分布有显著差别;一群关系密切、tdh阳性、trh阴性的O3：K6血清型菌株在杭州地区呈优势流行.