霍乱弧菌链霉素耐药性与其耐药基因相关性研究

目的研究霍乱弧菌链霉素耐药表型与耐药基因strA、strB、aadA1、aadA2之间的相关性。方法选取1994-2005年福建省霍乱弧菌保存菌株100株,采用WHO推荐的改良K-B纸片法进行链霉素的药物敏感试验。PCR方法检测耐药基因strA、strB、aadA1、aadA2。使用SPSS 17.0软件分析链霉素耐药基因与耐药表型的相关性,采用χ2检验和Fisher确切概率法检验,P0.05为差异有统计学意义。结果链霉素耐药基因strA和strB全部都是同时存在。福建省霍乱弧菌实验菌株链霉素耐药性与耐药基因strA和strB相关,未发现链霉素耐药性与耐药基因aadA1、aadA2之间相关。结论福建省霍乱弧菌链霉素耐药性与耐药基因strA或strB相关。     

O139群霍乱弧菌β-内酰胺酶相关耐药基因检测及分析

目的：通过检测分析2004年至2005年21株O139群霍乱弧菌临床分离株对β-内酰胺类抗生素耐药情况和菌株β-内酰胺酶相关耐药基因携带情况,探讨产生耐β-内酰胺类抗生素的分子生物学机制.方法：K-B纸片扩散法药物敏感实验检测细菌耐抗菌药物情况,PCR方法扩增CARB-2、TEM、OXA、VEB和SHV型β-内酰胺酶相关耐药基因,同时用PCR方法检测1型整合子结构.结果：21株O139群霍乱弧菌均对氨苄西林和羧苄西林等耐药,而对头孢噻肟等敏感,PCR均检出TEM-1耐药基因,检出率达100%.未检出CARB-2、OXA、VEB和SHV等基因.测序分析证明该耐药基因与AF397075有高度同源性.PCR定位实验表明该耐药基因不存在于1型整合子内.三相水解实验证明这种耐药为β-内酰胺酶引起.结论：从O139群霍乱弧菌中检出β-内酰胺酶相关TEM-1耐药基因,介导对氨苄西林和羧苄西林等的耐药.     

112株霍乱弧菌的生物学特性、毒力基因和耐药变迁的研究

目的：了解浙江温岭霍乱弧菌的生物学特性、毒力基因和耐药情况,为霍乱防治提供科学依据.方法：以霍乱弧菌主要毒力因子基因ctx为引物,对112株霍乱弧菌（O1群92株、O139群20株）进行了PCR扩增.采用WHO推荐的改良K-B纸片法,对所有菌株进行了18种抗菌药物的药敏试验.结果：除外环境检出的4株O1群霍乱弧菌菌株外,其余的霍乱菌株均扩增出与阳性对照一致的ctx毒力基因条带.药敏试验结果显示O139群霍乱弧菌的耐药性明显高于O1群霍乱弧菌,不同年份的菌株耐药的程度不一致.结论：从所有病人中分离到的菌株均为产毒株,与致病性和流行强度有关,治疗霍乱病人应结合本地区情况,根据不同菌型选择相应的抗生素药物.     

江西省2006-2008年人间霍乱弧菌致病力及药敏检测

目的掌握江西省人群中霍乱弧菌菌型变迁、毒力基因、耐药情况,为霍乱防治提供科学依据。方法采用血清学分型法对人群分离的霍乱弧菌进行分型,同时以主要毒力基因ctx为引物对分离的霍乱弧菌进行PCR扩增,并采用改良K-B纸片法对部分菌株进行10种抗生素的药物敏感试验。结果 2006-2008年期间,共从人群中分离到霍乱菌株139株(O139群136株,O1群小川型3株),其中从患者中分离到O139群41株、O1群小川型1株;从密切接触者中分离到O139群95株、O1群小川型2株。毒力实验结果显示O139群中除1株外,其余的均扩增出与阳性对照一致的毒力基因(ctx)条带,而O1群小川型均未扩增出毒力基因(ctx)条带,与阴性对照一致。药敏结果显示:O139群和O1群小川型霍乱弧菌均对利福平、丁胺卡那、氟哌酸、环丙沙星、头孢噻肟100%敏感,耐药性在90%以上的药物是四环素、强力霉素。结论江西省2006-2008年间人群中分离到的霍乱弧菌中,O139群与O1群小川型并存,O139群为优势菌;O139群菌株绝大多数为产毒株,小川型均为非产毒株。药敏结果供霍乱治疗和必要时的预防药物选择提供依据。     

广东省2011—2013年腹泻病例非O1/O139群霍乱弧菌耐药性及分子特征

目的分析2011—2013年广东省腹泻病例非O1/O139群霍乱弧菌的耐药性及分子特征,为霍乱防控提供依据。方法选取2011—2013年广东省腹泻病例非O1/O139群霍乱弧菌分离株20株,以及同时期海水产品分离株4株,采用抗菌药物敏感试验、毒力基因PCR检测和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型方法,分析其耐药性及分子特征。结果抗菌药物敏感性试验结果显示,分离株对复方新诺明、萘啶酸和四环素的耐药率分别为70.8%(17/24),37.5%(9/24)和20.8%(5/24);对头孢曲松和阿米卡星则完全敏感。毒力基因PCR检测结果显示,所有的菌株均携带hly A和toxR基因,而所有菌株均未检出ctxA、tcp A、ace、zot、st等5种毒力基因。菌株经NotⅠ酶切后的PFGE型别表现出明显的多样性,病例菌株与海水产品分离株的带型差别较大。结论广东省非O1/O139群霍乱弧菌毒力基因和遗传特征复杂多样,菌株对多种抗菌药物高度耐药,耐药率较高,需加强腹泻病例中非O1/O139群霍乱弧菌的菌株型别变异及耐药监测。     

8株霍乱弧菌耐药状况及RAPD同源性分析

目的分析蚌埠市2010年霍乱弧菌对抗生素的敏感性和同源性,为霍乱防控提高依据。方法选取2010年安徽省蚌埠市O1/O139群霍乱病例分离株8株,采用WHO推荐的改良Kirby—Bauer纸片法,分析霍乱弧菌对15种抗生素在体外的药物敏感性;应用随机引物扩增多态性(RAPD)技术对其作分子流行病学分型和同源性分析。结果所有O1/O139群霍乱弧菌对氨苄西林、头孢唑啉、丁胺卡那、庆大霉素、舒普生、氧哌嗪青霉素、头孢曲松、亚胺培南均100%敏感,对复方新诺明、四环素、强力霉素均100%耐药。O139群霍乱弧菌在氯霉素、诺氟沙星、环丙沙星等的敏感度上与O1群霍乱弧菌有一定的差异。根据随机扩增多态DNA聚类分析可以将检出的O1/O139群霍乱弧菌分为2个型别。结论 O139群霍乱弧菌耐药率较O1群霍乱弧菌高,应根据不同菌型选择相应的抗生素药物进行治疗。分离的O1群霍乱弧菌有同源性。     

广东省2009－2013 年霍乱弧菌病原学特征分析

目的 分析广东省2009－2013 年霍乱病例及环境来源O1/O139 群霍乱弧菌病原学特征。方法 选取2009－2013 年广东省霍乱病例来源、环境（水体和海水产品）来源的O1/O139群霍乱弧菌。采用血清分型、抗菌药物敏感性试验、毒力基因PCR 检测和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型方法 , 研究不同来源的霍乱弧菌血清型、抗菌药物敏感性、毒力基因携带以及分子分型方面的异同。结果 2009－2013 年广东省共分离得到各类来源O1/O139 群霍乱弧菌190株（病例16 株, 外环境174 株）。病例来源菌株分为O1 群稻叶型（3 株）、小川型（7 株）和O139 群（6株）3 种菌型;其中10 株ctxA 基因阳性, 2 株小川型菌株携带不完整CTXΦ噬菌体;5 株菌对11 种抗菌药物完全敏感, 3 株对4 种抗菌药物表现出耐受。外环境来源菌株中53 株稻叶型, 22 株小川型和2 株O139 群菌株携带不完整CTXΦ噬菌体;2 株O139 菌株检出ctxA 基因阳性;25 株对≥4 种抗菌药物耐受, 其中有2 株同时对11 种抗菌药物中的7 种耐受, 以水产品中的稻叶型菌株为主（13株）。PFGE分子分型结果显示, 菌株经NotⅠ酶切后的PFGE型别表现出明显的多样性。稻叶型和O139 群病例菌株的带型聚集在同一个聚类中, 小川型病例菌株带型分散在不同的聚类中, 病例来源菌株与环境来源菌株的带型差别较大。结论 广东省O1/O139 群霍乱弧菌毒力基因和遗传特征复杂多样, 菌株多重耐药形势严峻, 需要加强菌株型别变异及耐药监测。     

2009-2012年江西省外环境霍乱弧菌致病力及药敏检测

目的掌握江西省外环境中霍乱弧菌菌型分布、毒力基因、耐药现状,为霍乱防治提供科学依据。方法采用血清学分型法对外环境中分离的霍乱弧菌进行分型,同时以主要毒力基因ctx为引物对检索的霍乱弧菌进行PCR扩增,并应用K-B纸片法对部分菌株进行10种抗生素的药物敏感试验。结果 2009-2012年期间,共从外环境中分离到霍乱菌株156株。毒力实验结果显示37株O139群中15株扩增出与阳性对照一致的毒力基因(ctx)条带,而119株O1群除2株小川型外,其余均未扩增出毒力基因(ctx)条带,与阴性对照一致。药敏结果显示:O139群和O1群对丁胺卡那霉素、诺氟沙星、环丙沙星、头孢噻肟90%以上敏感。结论江西省2009-2012年间外环境中分离到的霍乱弧菌中,O139群与O1群并存,O1群为优势菌;水产品中O139群菌株绝大多数为产毒株,而O1群菌株绝大多数为非产毒株。应重点加强水产品的霍乱监测。药敏结果供霍乱治疗和必要时的预防药物选择提供依据。     

海宁市霍乱病原学调查检测

目的:为了查清我市水体等外环境及患者中霍乱弧菌的菌型分布特征、毒力基因、药敏等,为霍乱防控提供科学依据。方法:采用GB15984-1995附录A、C及《霍乱防治手册》第五版中有关要求进行调查检测。结果:从外环境标本和患者中共检出霍乱弧菌83株,经血清学鉴定分型,其中:O1群埃尔托霍乱弧菌(Vibriocholerae serotypeO1,b iotype E ltor,EVC)稻叶型38株,占45.78%,O1群EVC小川型16株,占19.28%,O139群霍乱弧菌29株,占34.94%。23株霍乱弧菌噬菌体生物分型以O1群EVC稻叶型1 f居多,占86.96%(20/23);14株霍乱弧菌毒力基因检测结果均为阳性(携带ctx,ace,zot 3种毒力基因);药敏试验O1群、O139群霍乱弧菌对抗菌药物均有不同程度的耐药,其中对磺胺的耐药率高达100%;对头孢噻肟、诺氟沙星、丁胺卡那霉素敏感率高达100%。结论:河水中菌型复杂,O139群、小川、稻叶三型并存,但以O139群为主,占48.94%;井水中检出4株埃尔托霍乱弧菌均为稻叶型;甲鱼塘水中O139群与O1群小川型并存;患者中以O1群EVC稻叶型为主,占88.24%(15/17)。经噬菌体生物分型,以不常见流行株为主,毒力基因检测均为产毒株。     

海宁市霍乱弧菌生物学特性、毒力基因特征分析

目的:为了解海宁市霍乱弧菌菌型分布、生物学特征、毒力基因和对抗菌药物敏感性,从而为霍乱防控提供科学有效的技术保障。方法:从2005年10月-2008年10月持续3年,采集水体、食物、水产品、熟食、厕所、腹泻病人、密切接触者粪便检测霍乱弧菌,并进行血清学分型、噬菌体生物分型,毒力基因鉴定及对抗菌药物敏感性分析;对霍乱弧菌阳性水体测定水温、pH值、耗氧量、氯化物。结果:3年中共采集各类样品2680份。检出霍乱弧菌104株,检出率4.03%。经血清学分型:O1群埃尔托霍乱弧菌稻叶型38株,占36.54%,小川型16株,占15.38%,O139群霍乱弧菌50株,占48.08%。23株霍乱弧菌噬菌体生物分型:稻叶型1f占86.96%(20/23)。14株霍乱弧菌毒力基因检测均为阳性(携带ctx,ace,zot3种毒力基因)。药敏试验:对磺胺类耐药;对头孢噻肟、诺氟沙星、丁胺卡那霉素敏感。首次发现同一水体中O139群、小川型、稻叶型共存(O139群占64.71%、小川型占22.06%、稻叶型占13.24%)。在对阳性水体检测中发现,水温6℃以下、pH值6.6左右、氯化物49.7 mg/L、耗氧量16.4 mg/L状态下仍检测到O139群和小川型霍乱弧菌。结论:海宁市霍乱弧菌菌型复杂,O139群、小川型、稻叶型共存,均为产毒株,对头孢噻肟、诺氟沙星、丁胺卡那霉素敏感。O139群、小川型霍乱弧菌能在水温低、氯化物含量低、耗氧量较高环境下存活。     

2005年-2010年武汉市霍乱弧菌监测分析

目的:对2005年-2010年霍乱弧菌监测中分离的25株疑似菌株进行系统鉴定。方法:分离培养、血清学试验、系统生化鉴定(VITEK32)、PCR检测其分型及毒素基因、药敏试验。结果:25株菌鉴定为霍乱弧菌的有21株,与霍乱弧菌发生交叉凝集4株;病例监测主要为O139霍乱弧菌、外环境监测主要为O1群霍乱弧菌;病例监测菌株携带霍乱弧菌毒素基因(ctxAB)、其他菌株均不携带霍乱弧菌毒素基因(ctxAB)。药敏实验结果对诺氟沙星和环丙沙星敏感,对其他抗生素有不同程度的耐药。结论:武汉市霍乱弧菌在病例监测中主要为O139群霍乱弧菌产毒株、外环境监测中主要为O1群霍乱弧菌非产毒株,不同型别菌株存在不同程度耐药性。     

2005年上海市霍乱弧菌菌株表型及ctxA毒力基因分析

目的：分析本市2005年不同来源01群和0139群霍乱弧菌菌株表型和ctxA毒力基因特征。方法：以PCR方法，对所有菌株进行ctxA毒力基因检测。采用WHO推荐的改良K—B纸片法，对所有菌株均进行了12种抗菌药物的药敏试验。结果：从病人和外环境中分离出的0139群霍乱弧菌均为产毒株；从病人中分离出的01群霍乱弧菌流行株均产毒，外环境中分离出的非流行株少数也产毒。0139群霍乱弧菌菌株耐药谱较01群霍乱弧菌菌株广；两者对氨苄青霉素、强力霉素、庆大霉素、复方新诺明、利福平耐药率有显著差异。结论：本市2005年霍乱的流行株都是产毒株，但产毒株不一定是流行株。药敏结果显示，对01群和0139群霍乱弧菌应采取不同抗菌治疗，0139群霍乱弧菌多重耐药应引起重视。     

Fluoroquinolone-resistant Vibrio cholerae isolated during a cholera outbreak in India

During the cholera epidemic of 2002 in and around Hubli, south India, Vibrio cholerae strains resistant to fluoroquinolones were isolated. Among the isolates of V. cholerae non-O1, non-O139 serogroups, 55.9% and 47.1% were resistant to norfloxacin and ciprofloxacin, respectively. However, only 12.5% of the O1 serogroup strains were resistant to both norfloxacin and ciprofloxacin. Though the O139 serogroup strains were susceptible to these antibiotics, they exhibited multidrug resistance. Emergence of fluoroquinolone-resistant V. cholerae that also exhibited multidrug resistance is of great significance in the epidemiology and control of cholera.     

嘉兴市霍乱弧菌分离株检测分析

目的比较分析嘉兴市霍乱弧菌菌株的血清型、毒力基因和分子分型特征。方法采用血清学和分子生物学方法对近年来分离到13株霍乱弧菌菌株进行血清型分布、毒力基因(ctxA、ace、zot、tcpA、cri和rtxA)携带和ERIC-PCR分型研究。结果 13株霍乱弧菌菌株,2株为O139群霍乱弧菌,11株为O1群霍乱弧菌,其中小川型9株,稻叶型2株。2株O139群霍乱弧菌菌株携带3种毒力基因;11株O1群霍乱弧菌菌株,除1株携带4种毒力基因外,其余10株携带全部6种毒力基因。ERIC-PCR分型分析显示,不同的霍乱弧菌菌株之间ERIC-PCR型别表现出一定的遗传多样性。结论嘉兴市霍乱弧菌菌株大多携带多种毒力基因,而且来源多样,防控工作任重而道远。     

Expanding multiple antibiotic resistance among clinical strains of Vibrio cholerae isolated from 1992-7 in Calcutta, India

Antimicrobial susceptibilities of Vibrio cholerae strains isolated from cholera patients admitted to the Infectious Diseases Hospital, Calcutta, India for 6 years were analysed to determine the changing trends; 840 V. cholerae strains isolated in 1992-1997 were included in this study. Among V. cholerae serogoup O1 and O139, ampicillin resistance increased from 1992 (35 and 70%, respectively) to 1997 (both serogroups 100%). Resistance to furazolidone and streptomycin was constantly high among V. cholerae O1 strains with gradual increase in resistance to other drugs such as ciprofloxacin, co-trimoxazole, neomycin and nalidixic acid. V. cholerae O139 strains exhibited susceptibilities to furazolidone and streptomycin comparable with those of O1 strains. However, after initial increase in resistance to chloramphenicol and co-trimoxazole, all the V. cholerae O139 strains became susceptible to these two drugs from 1995 onwards. Both V. cholerae O1 and O139 remained largely susceptible to gentamicin and tetracycline. V. cholerae non-O1, non-O139 strains, in contrast, exhibited high levels of resistance to virtually every class of antimicrobial agents tested in this study especially from 1995. Kruskal-Wallis one-way analysis showed that V. cholerae O1 Ogawa serogroup exhibited significant yearly increase in resistance to nine antibiotics followed by non-O1 non-O139 and O139 strains to six antibiotics and two antibiotics respectively. Interesting observation encountered in this study was the dissipation of some of the resistant patterns commonly found among V. cholerae non-O1 non-O139 or O1 serogroups to the O139 serogroup and vice versa during the succeeding years.     

市售生食水产品污染副溶血性弧菌的病原学分析

目的通过对2011～2012年合肥市售生食水产品中分离的副溶血性弧菌血清型、毒力基因和耐药性的研究,了解生食海产品污染的副溶血性弧菌的病原学特征。方法按GB/T4789.7-2008方法进行分离鉴定,用PCR技术检测不耐热溶血素(tlh)基因、耐热直接溶血素基因(tdh)和耐热直接溶血素相关溶血素基因(trh)。药敏试验采用K-B法。结果两年检获的65株副溶血性弧菌分属11个血清群,以O2(41.54%)、O1(12.31%)、O3(12.31%)群为主。65株菌均不携带tdh和trh毒力基因,tlh基因全部阳性。药敏结果显示,65株菌对15种抗生素显示出较高的青霉素(100.0%)和氨苄西林(95.4%)耐药性。结论近年来合肥市售生食水产品中污染的副溶血性弧菌以O2血清型为主,tdh基因和trh基因均为阴性。     

Cholera in a developing megacity; Karachi,Pakistan.

Despite rapid urbanization and increasing affluence in Karachi, cases of cholera are frequent. We analysed computerized isolation data from the AKUH Clinical Microbiology Laboratory, Karachi, from 1990-6 to examine microbiological, temporal and demographic trends in Vibrio cholerae infections. During this period 888 strains of V. cholerae (566 V. cholerae serogroup O1, and 204 V. cholerae serogroup O139) were isolated from specimens from 886 patients; 214/464 were adult inpatients, and 250/464 paediatric inpatients, the remaining 422 outpatients. Isolations peaked between June and August. Overlapping epidemics occurred in 1993 and 1994 of serogroup O1 (May to August), and serogroup O139 (August to October). All ages and social and economic strata were affected. Forty-four percent of all isolates were from children under the age of 5 years. The mean age of all patients with serogroup O1 infections was 19.6 years (+/-0.9) compared with 367 (+/-1.7) for serogroup O139 infections (P < 0.0001, t test). More than a quarter (27%) of all serogroup O1 isolates were from babies under 2 years of age. One patient had a serogroup O1 infection followed by a serogroup O139 infection 1 year later. Another patient was infected with serogroup O1 strains 5 years apart. Emergence of resistant strains was observed, but by 1996 serogroup O139 had disappeared. An aquatic organism, cholera nevertheless continues to take its toll in this city of 11 million situated in a desert.     

肺炎链球菌对大环内酯类的耐药机制研究

目的 探讨台州医院肺炎链球菌临床分离株的耐药性及对红霉素的耐药机制,为临床用药提供依据.方法 收集临床分离的肺炎链球菌31株,运用K-B纸片法及VITEK细菌鉴定仪检测其对抗菌药物的药敏谱;通过纸片法筛选对大环内酯类抗菌药物(红霉素)的耐药表型,PCR扩增红霉素耐药基因:ermB、mefA,并送测序鉴定.结果 K-B法纸片药敏结果显示,肺炎链球菌临床分离株主要对红霉素、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶和四环素耐药,耐药率分别为:100.0％、64.5％、32.2％;未发现有对青霉素、万古霉素及替考拉宁耐药的菌株;31株肺炎链球菌临床分离株耐药表型均为组成型耐药;31株红霉素耐药菌株的基因均为ermB(+)/mefA(+),测序结果正确.结论 台州医院肺炎链球菌临床分离株对红霉素耐药率高,erm基因介导的靶修饰作用和mef基因介导的外排泵机制的共同作用,是主要的耐药机制.     

杭州市下城区副溶血性弧菌菌群菌型分布、毒力基因及耐药性研究

目的:通过对副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)食物中毒分离株菌群菌型、毒力基因、耐药性检测分析,掌握VP血清群型、毒力基因及耐药状况。方法:按国标方法进行分离鉴定,药敏试验采用K-B法,毒力基因采用普通PCR法。结果:341株VP分属9个血清群15种血清型,前四位占96.19%,依次是O3、O4、O1、O2血清群,余五个血清群占3.81%。血清型以O3:K6为主,O4:K8型次之。282株VP携带tdh,仅1株携带trh,58株不携带毒力基因,无同时携带tdh和trh菌株。341株VP对诺氟沙星、复方新诺明、阿米卡星、头孢噻肟、妥布霉素5种抗生素100%敏感,对阿莫西林、氨苄西林、头孢噻吩、庆大霉素、环丙沙星耐药程度各异。结论:本区VP引起的食物中毒以O3:K6型为主;82.69%的VP携带tdh;诺氟沙星、复方新诺明、阿米卡星、头孢噻肟、妥布霉素是临床首选的抗生素。     

Distribution and virulence of Vibrio cholerae belonging to serogroups other than O1 and O139: a nationwide survey.

The distribution and virulence of Vibrio cholerae serogroups other than O1 and O139 in India before, during and after the advent of O139 serogroup was investigated. A total of 68 strains belonging to 31 different ''O'' serogroups were identified during the study period. With the exception of O53, there was no spatial or temporal clustering of any particular non-O1 non-O139 serogroup at any given place. Two of the 68 strains examined produced cholera toxin (CT) which could only be partially absorbed with anti-CT immunoglobulin G. Tissue culture assay revealed that some of the non-O1 non-O139 strains produced factors which evoked either a cell rounding or cell elongation response depending upon the medium used. This study indicates that serogroups other than O1 and O139 should also be continuously monitored.