同一酒店两起副溶血性弧菌食物中毒的病原体分型溯源及耐药性研究

目的对同一酒店、同一时间两起副溶血性弧菌食物中毒中分离到的副溶血性弧菌,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行同源性分析,为查明原因和溯源提供依据。方法对患者和食品中分离到的菌株进行分离鉴定、药敏试验、PFGE分子分型和聚类分析。结果两起食物中毒中共检出8株副溶血性弧菌,其中5株来自A组患者,2株来自B组患者,1株来自菜鱼饼样本。8株菌株经PFGE分子分型和聚类分析显示,按100%相似度可分2个基因型别,型别间同源性为70.8%。8株菌株的耐药状况也大致分为2大类,与PFGE分型结果一致。结论 2起食物中毒无相关性,为独立暴发,PFGE可有效应用于食物中毒溯源分析及分子流行病学研究。     

2018-2019年茂名市水产品中创伤弧菌的分子特征和耐药性分析

目的 对茂名地区2018-2019年水产品中分离的创伤弧菌进行毒力相关基因、耐药性分析和分子基因分型,初步建立该菌区域病原学特征数据库和耐药谱,为创伤弧菌的溯源和临床用药提供依据。方法 采用PCR技术进行毒力相关基因和生物型、血清分型的鉴定;脉冲场凝胶电泳技术（PFGE）和微量肉汤稀释法进行基因分子分型和药物敏感性（AMS）分析。结果 175份水产品分离出51株创伤弧菌,阳性率为29.14%。41株创伤弧菌毒力相关基因vcg C/E和16S rRNA A/B分型结果显示共有3种型别,分别为CB型、EA型、CAB型;生物分型全为BT1型。药敏结果显示该菌对头孢类抗生素出现较多耐药株。PFGE指纹图谱结果显示41株创伤弧菌有41种分子型别。结论 茂名市水产品中创伤弧菌污染较为严重。毒力基因型别以CB型为主;PFGE型别多,菌株存在遗传多样性。因此,需对茂名水产品中创伤弧菌的食品安全进行风险评估和耐药监测,预防食源性疾病的暴发。     

北京市房山区腹泻病例分离副溶血性弧菌的分子流行病学特征

目的了解2016年北京市房山区腹泻病例副溶血性弧菌分离株的血清型、毒力基因、耐药性及PFGE分子分型特征。方法依照GB 4789.7-2013《食品安全国家标准食品微生物学检验副容血性弧菌检验》进行副溶血性弧菌生化鉴定,使用玻片血清凝集法进行血清分型,实时荧光聚合酶链式反应(PCR)测定毒力基因,微量肉汤稀释法进行药敏试验,脉冲场凝胶电泳进行分子分型及聚类分析。结果在检出的20株副溶血性弧菌中,O3:K6血清型占60%。所有菌株均携带tlh、tdh基因,trh基因的携带率为10%,tdh~+trh~-为优势基因型。抗生素敏感性结果显示,90%的菌株对至少1种抗生素耐药,其中多重耐药菌株5株。耐药率高的前3种抗生素分别是:头孢唑林(85%)、庆大霉素(75%)、氨苄西林(30%)。PFGE分型共得到10种带型,5株菌的PFGE带型一致,为优势带型。副溶血弧菌的血清型和PFGE带型之间具有高度的一致性。结论本地区副溶血性弧菌以tdh~+,trh~-的O3:K6型别为主,对头孢唑林、庆大霉素、氨苄西林等早期用药耐药率高,应慎重使用。     

北京市副溶血弧菌病原学和分子流行病学特征分析

目的 了解北京市副溶血弧菌腹泻病例分离株的病原学和分子流行病学特征.方法 2010年4-12月从临床收集散发腹泻病例2118份粪便标本,进行副溶血弧菌的分离培养、生化鉴定.阳性菌株进行血清分型;采用药敏纸片法对12种抗生素进行敏感性检测;用实时荧光定量PCR方法检测毒力基因tlh、tdh和trh;用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型.结果 2118份粪便标本分离出副溶血弧菌114株,阳性分离率为5.38％.114株副溶血弧菌分属于23种血清型,其中O3:K6为优势血清型,占63.16％.临床分离株对氨苄西林和庆大霉素产生耐药;对阿莫西林、头孢曲松、氯霉素、亚胺培南、萘啶酸和四环素等均具有较高敏感性.全部菌株tlh基因阳性;tdh存在于大部分菌株中,所占比例为93.86％;只有1株菌trh阳性.O3:K6型菌株tdh基因阳性率(98.61％)明显高于非O3:K6型菌株(85.71％)(P=0.0098).114株副溶血弧菌分成54种PFGE型别,72株O3:K6型菌株分成34种PFGE型别,带型分散,无明显聚集性.结论 北京地区感染性腹泻病例副溶血弧菌分离株以O3:K6型为主.毒力基因tlh和tdh携带率高,且O3:K6型临床分离株毒力更强.副溶血弧菌对多数抗生素均具有较高敏感性.PFGE结果提示北京地区流行的副溶血弧菌存在多克隆来源.     

嘉兴市副溶血性弧菌分离株检测分析

目的比较分析嘉兴市副溶血性弧菌分离株的血清型、毒力基因和分子分型特征。方法采用血清学和分子生物学方法对63株副溶血性弧菌分离株进行血清型分布、毒力基因耐热直接溶血素基因(tdh)和耐热相关溶血素基因(trh)携带以及ERIC-PCR分型研究。结果食物分离株tdh和trh均为阴性,患者分离株大部分为tdh阳性trh阴性;血清型和ERIC-PCR型别,食物分离株分布较为分散,而患者分离株70%的血清型为O3:K6和80%的ERIC-PCR型别为1型。结论食物分离株和患者分离株毒力基因的携带情况不同,血清型和ERIC-PCR型别,食物分离株较为分散而患者分离株较为集中。     

南京市一起斯坦利沙门氏菌食物中毒的病原学检测及溯源分析

目的 对食物中毒事件中所采集样本进行食源性致病菌的分离鉴定,快速查明食物中毒原因并进行同源性分析。方法 应用实时荧光PCＲ技术对一起食物中毒10份可疑食品、2份餐具涂抹样和5份患者粪便进行检测,同时进行病原菌培养分离鉴定,分离菌株采用CLSI 推荐的改良K-B纸片法进行抗生素敏感试验,应用PFGE分型技术进行同源性分析。结果 1份可疑食物和3份患者粪便经实时荧光PCR检测为沙门菌阳性,同时分离到4株斯坦利沙门氏菌,4株沙门氏菌的药敏试验结果一致,PFGE 带型完全一致。结论 本次食物中毒是由斯坦利沙门氏菌污染引起。实时荧光PCR技术能够快速准确地对食物中毒做出病原学诊断,PFGE基因分型技术可对病原菌进行溯源分析,对研究病原菌流行病学规律具有重要意义。     

广东省食源性副溶血弧菌表型特征与分型比较研究

目的 了解广东省食源性副溶血弧菌的表型特征,并对其分型进行综合比较.方法 对分离自广东省水产品和食物中毒的74株副溶血弧菌分离株进行生化鉴定、药敏试验、耐热直接溶血素(tdh)和耐热直接溶血素相关溶血素(trh)毒力基因的PCR检测.并对副溶血弧菌进行血清分型、核糖体基因分型(Ribotyping)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型,应用BioNumerics软件对不同来源、时间和地点的分离株进行比对,分析菌株之间的相关性.结果 副溶血弧菌除对氯霉素100.00％敏感外,对其余13种抗生素均有不同程度的耐药.tdh阳性率为24.32％、trh阳性率为4.05％.74株副溶血弧菌分为26种血清型,O5:K17和O2:K28型为水产品分离株的优势血清型,O3:K6型为食物中毒分离株的优势血清型.74株副溶血弧菌分为62个核糖体型、67个PFGE型,表现出较大的遗传多样性.结论 广东省大部分食物中毒副溶血弧菌分离株携带tdh毒力基因.3种分型方法中,PFGE的分辨率最高,Ribotyping居中,血清分型最低,3种方法相结合可提高分辨率.     

长沙地区产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌的分子流行病学特征

目的了解长沙地区多重耐药铜绿假单胞菌（PA）产金属β-内酰胺酶(MBL)菌株基因型和流行情况。方法收集该地区7所综合医院临床分离的PA,对菌株进行鉴定和药敏试验,采用EDTA协同试验、E-test MBL进行MBL表型筛选,聚合酶连反应（PCR）明确其基因型,肠杆菌科基因间重复序列聚合酶链反应(ERIC-PCR)进行同源性分析。结果经EDTA协同和E-test MBL初步筛查,81株PA中仅10株为强阳性;PCR结果显示,18株 PA MBL基因阳性,其中IMP-9型11株,IMP-1型1株和VIM-2型6株,未检测出SIM、SPM、GIM和NDM-1基因型。ERIC-PCR分型结果显示,12株产IMP-PA存在多个型别,而6株产VIM-2菌株为同一型别。结论长沙地区多重耐药PA以IMP-9和VIM-2基因型最常见。     

2011年-2014年宁波地区腹泻患者中食源性病原菌检测与流行特征分析

目的了解宁波地区感染性腹泻患者中食源性病原菌与流行情况,为防控食源性疾病提供实验依据。方法检测采用直接与增菌分离相结合的方法;鉴定采用生化筛检、API鉴定条、VITEK 32或/VITEK 2鉴定分析系统等方法;分型采用血清分型和PFGE分型;药敏试验采用K-B法,耐药基因和毒力基因检测采用PCR法。结果从14 658份标本检出8类18种共5 767株食源性病原菌,检出率为39.34%,以副溶血性弧菌最高,与其他病原菌比较差异有统计学意义(P0.05);血清分型发现各病原菌均有优势株;PFGE副溶血性弧菌分出19个型,甲型副伤寒沙门菌分出12个型,伤寒沙门菌分出30个型。药敏显示,从多种病原菌中检出多重耐药菌,占检测菌株24.39%(630/2 583)。结论宁波地区感染性腹泻患者中由食源性病原菌引起的机率较高,且有普遍性。病原菌对多种抗生素敏感,可用于预防和治疗。     

引起腹泻的肠道沙门菌双相亚利桑那亚种病原学鉴定

目的对双相亚利桑那亚种肠道沙门菌进行种属、血清型及序列型的病原学鉴定。方法对5株来自散发腹泻患者粪便样本的可疑双相亚利桑那亚种肠道沙门菌在系统生化鉴定的基础上,应用实时荧光PCR方法进行分子检测、血清凝集、MLST分型及药敏试验。结果 VITEK系统生化鉴定3株为双相亚利桑那亚种肠道沙门菌,其中2株菌沙门菌特异性种属基因hisJ阳性,经血清学鉴定为肠道沙门菌双相亚利桑那亚种61:l,v:1,5,(7),MLST序列分型为ST1850,12种抗生素的MIC药敏试验显示2株菌除对链霉素耐药外,其他均为敏感。结论从腹泻患者监测样本中分离的2株双相亚利桑那亚种肠道沙门菌血清型为61:l,v:1,5,(7),序列型为ST1850,提示该型别沙门菌在人间散发存在,今后应加强该菌型的监测,提高实验室检测能力,并开展有针对性的溯源。     

副溶血性弧菌分型研究进展

副溶血性弧菌（vibrio parahaemolyticus,VP）是一种革兰氏阴性嗜盐性海洋细菌,常导致食物中毒和急性腹泻,本文从传统分型和基因分型角度介绍其分型研究进展。随着分子生物学的发展,各种分型研究,如血清学分型、噬菌体分型、脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型、限制性片段长度多态性（RFLP）分型、随机引物扩增DNA多态性（RAPD）分型、核糖分型、肠道细菌重复基因间共有序列PCR（ERIC-PCR）分型等为VP的准确溯源提供了科学依据,可有效预防和控制该菌引起的腹泻及食物中毒事件,对研究VP分子流行病学特征具有重要意义。     

利用多重PCR检测食品中副溶血性弧菌的方法研究

目的:建立食品中副溶血性弧菌的简便、快速、准确地检测方法。方法:根据副溶血性弧菌的tl、tdh、trh基因设计引物,多重PCR扩增,进行特异性和标准菌株的验证,并用经典方法做平行试验。结果:本实验设计的引物能特异性地扩增副溶血性弧菌的450、269、500 bp的片断,而对其它种类的菌无特异性扩增。结论:本实验方法可在增菌后8 h快速、简单、准确的检测出食品中的副溶血性弧菌,灵敏度可达15 cfu/ml。     

武汉市6起食物中毒副溶血弧菌分子特征研究

目的：了解武汉地区6起食物中毒病原菌副溶血弧菌分子特征。方法：对6起食物中毒共16株分离株进行药敏分析,运用PCR技术进行耐热性溶血毒素基因（tdh）和耐热性溶血毒素相关溶血素基因（trh）检测,并进行肠道细菌重复基因间共同序列PCR（ER IC-PCR）分析。结果：16株副溶血弧菌对第三代头孢和喹诺酮类较敏感,tdh阳性,trh阴性,ER IC-PCR结果显示每起食物中毒菌株亲缘关系非常紧密,有3起属于同一个群,另外2起属于一个群。结论：武汉地区流行的主要副溶血弧菌分子特征为tdh阳性,trh阴性,ER IC-PCR技术是分析副溶血弧菌引起食物中毒菌株非常有效的工具。     

泰州市112份水产品中副溶血性弧菌检出状况及耐药性分析

目的 了解泰州市市售水产品副溶血性弧菌污染状况及对常用抗菌药物的敏感性,为有效的预防副溶血性弧菌食物中毒提供实验依据。方法 根据《食品微生物学检验 副溶血性弧菌检验》( GB/T 4789.7—2010)对112份水产品样品进行副溶血性弧菌检测,分离菌株的药敏实验采用K - B法。结果 112份样品38份检出副溶血性弧菌,副溶血性弧菌的检出率为 33.9%。副溶血性弧菌分离株对氨苄西林耐药率为52.6%,对头孢西丁、头孢噻肟、四环素、环丙沙星、庆大霉素、氯霉素、萘啶酸、复方新诺明敏感率为100.0%。结论 市售水产品中副溶血性弧菌污染较严重,并有部分菌株耐药。     

应用筛检方法快速检测小海产品中副溶血性弧菌

目的:研究筛检海产品中副溶血弧菌方法,提高检出率和检测速度。方法:用PCR快速筛检,GB法寻找目标菌,以生化分步筛检作出初步确定,再经系统生化鉴定确认之。结果:356份海产品经筛检检出副溶血弧菌141株,检出率为39.61%,其中PCR一次性检出了141株副溶血性弧菌阳性基因,GB法分离到115株副溶血性弧菌,26株通过二次增菌才分离到,生化筛检与系统特殊化一致率达100%,检出带TDH毒力基因副溶血性弧菌5株,未检出TRH毒力基因。结论:应用发现PCR、GB和典型生化分步联合的筛检方法,可用于筛检食品中副溶血弧菌,具有快捷、大容量、方便的优点,为进一步开展食品多病原污染物监测工作打下了基础。     

嘉兴市霍乱弧菌分离株检测分析

目的比较分析嘉兴市霍乱弧菌菌株的血清型、毒力基因和分子分型特征。方法采用血清学和分子生物学方法对近年来分离到13株霍乱弧菌菌株进行血清型分布、毒力基因(ctxA、ace、zot、tcpA、cri和rtxA)携带和ERIC-PCR分型研究。结果 13株霍乱弧菌菌株,2株为O139群霍乱弧菌,11株为O1群霍乱弧菌,其中小川型9株,稻叶型2株。2株O139群霍乱弧菌菌株携带3种毒力基因;11株O1群霍乱弧菌菌株,除1株携带4种毒力基因外,其余10株携带全部6种毒力基因。ERIC-PCR分型分析显示,不同的霍乱弧菌菌株之间ERIC-PCR型别表现出一定的遗传多样性。结论嘉兴市霍乱弧菌菌株大多携带多种毒力基因,而且来源多样,防控工作任重而道远。     

PFGE技术对一起副溶血性弧菌引起食物中毒的同源性研究

目的:了解一起食物中毒事件中副溶血性弧菌(VP)分离株的同源性。方法:按国标方法进行VP的分离与鉴定;对分离出的VP做血清分型及tdh、trh毒力基因检测;用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术进行基因分型。结果:从10例患者肛拭子和1份砧板涂抹物中分离到的11株VP,血清型均为O3:K6,tdh毒力基因均为阳性,PFGE分型图谱也完全相同。结论:这是一起因VP污染了食品加工环节而导致的食物中毒事件。     

杭州市下城区副溶血性弧菌菌群菌型分布、毒力基因及耐药性研究

目的:通过对副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)食物中毒分离株菌群菌型、毒力基因、耐药性检测分析,掌握VP血清群型、毒力基因及耐药状况。方法:按国标方法进行分离鉴定,药敏试验采用K-B法,毒力基因采用普通PCR法。结果:341株VP分属9个血清群15种血清型,前四位占96.19%,依次是O3、O4、O1、O2血清群,余五个血清群占3.81%。血清型以O3:K6为主,O4:K8型次之。282株VP携带tdh,仅1株携带trh,58株不携带毒力基因,无同时携带tdh和trh菌株。341株VP对诺氟沙星、复方新诺明、阿米卡星、头孢噻肟、妥布霉素5种抗生素100%敏感,对阿莫西林、氨苄西林、头孢噻吩、庆大霉素、环丙沙星耐药程度各异。结论:本区VP引起的食物中毒以O3:K6型为主;82.69%的VP携带tdh;诺氟沙星、复方新诺明、阿米卡星、头孢噻肟、妥布霉素是临床首选的抗生素。     

3种副溶血性弧菌分型方法的应用与比较

目的:用分型的方法分析副溶血性弧菌的流行优势型,溯源其亲缘关系,为追踪感染源提供依据。方法:用诊断血清进行血清学分群,用PFGE和ERIC进行基因分型。结果:607株分离于海产品的VP分出10个O血清群,有30株至今尚不能分群,分群率为94.64%,O6群和O5群为流行优势群;480株病人VP分为6个血清群,O3群为流行优势群。377株分离于海产品的VP分成29个PFGE型;480株病人VP分成12个PFGE型。261株不同来源的VP分出42个ERIC基因型。结论:3种方法均能用于VP的分型,但各有特点。由于基因分型方法敏感性高、特异性强、分型率和分辨率佳的优点,将逐渐取代传统的表型分型技术。     

市水产品副溶血弧菌污染状况的调查

目的:了解武汉市水产品中副溶血弧菌的污染情况,预防控制食源性疾病。方法:参照GB/T4789.7-2008《食品卫生微生物学检验》对24份样品进行副溶血弧菌的检测。结果:24份样品中检出副溶血弧菌9株,阳性率37.5%,不同品种水产品的阳性率差异无统计学意义。结论:武汉市水产品中副溶血弧菌污染比较严重,水产品卫生监管和指导有待加强。