Notch信号通路在造血调控和白血病发生中的作用

Notch是最早从果蝇中发现的基因，后来的研究证实Notch广泛存在于各种动物体内。Notch信号通路在生物进化过程中高度保守，是在多种细胞分化发育过程中起关键作用的信号途径^[1]。同时Notch信号通路在胚胎发育、造血细胞自我更新及肿瘤形成等生理病理过程起重要的调节作用。我们就Notch受体（NotchR）、配体、信号转导、对造血干细胞（HSC）分化的影响及其与白血病的关系进行综述。     

NOTCH、VEGF信号通路在急性髓性白血病发生及血管新生中的作用

急性髓性白血病（acute myeloid leukemia,AML）是一种侵袭性很强的造血祖细胞恶性克隆性血液病,近年研究表明AML的发生、发展及化疗敏感性都与血管新生密切相关^[1-2]。血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）与NOTCH通路在调节胚胎血管发育和肿瘤血管新生（angiogenesis）中起到关键调控作用。然而,VEGF与NOTCH     

Notch信号通路与慢性淋巴细胞白血病的研究进展

慢性淋巴细胞白血病（chronic lymphocytic leukemia,CLL）是一种惰性B淋巴细胞肿瘤,临床病程异质性较大.Notch信号通路是进化上十分保守的一条信号通路,参与调控正常细胞的生存、增殖、分化、凋亡等生理过程.近年来,越来越多学者研究Notch信号通路与CLL的关系,发现CLL细胞中存在Notch分子高表达或突变,与患者预后相关,参与肿瘤细胞抗凋亡及耐药机制等等.本文就近年来CLL与Notch信号通路的研究进展作一综述,包括CLL细胞Notch分子表达水平,CLL细胞Notch分子抗凋亡和耐药,CLL细胞中Notch分子突变,Notch分子与CL预后关系和Notch分子抑制剂应用前景等.     

Notch信号通路与慢性粒细胞白血病关系的研究进展

正慢性粒细胞白血病(CML)是一种起源于骨髓多能造血干细胞的恶性克隆性肿瘤,其临床分期为慢性期、加速期、急变期。CML分子遗传学特征为BCR/ABL融合基因,该融合基因编码出具有酪氨酸激酶活性的癌蛋白,干扰细胞凋亡,导致粒细胞增殖。酪氨酸激酶抑制剂的出现可使CML迅速得到缓解,但治疗过程中仍会出现耐药,疾病进展。Notch信号通路调节造血干细胞的分化、增殖和凋亡~([1]),造血祖细胞,淋系、     

Notch信号通路在脑缺血的研究进展

Notch信号通路对中枢神经系统、血管细胞及免疫细胞生长分化发挥重要的调节作用。脑血管疾病引起的脑缺血激活Notch信号通路,活化的Notch信号通路调控神经前体细胞增殖和分化、介导炎症介质释放和促进血管细胞生成等在神经损伤修复、炎症反应、血管缺血区血管生成等起重要的调节作用。此外,Notch还与遗传性疾病CADASIL发病有关。本文就Notch信号通路在脑血管病中的作用及机制进行了分析。     

Notch1信号通路与肿瘤的发生发展

Notch1信号通路作为一种进化保守的细胞间相互作用机制,在细胞的发育、增殖、分化、生存凋亡、和肿瘤的发生发展中起着重要的作用。近年来发现研究Notch1信号与各种肿瘤的关系已成为医学界研究的热点之一。作者就该信号通路在肿瘤中研究进展作一综述。     

Notch通路与白血病的研究进展

Notch信号通路在细胞增殖、分化、凋亡及肿瘤发生等病理生理过程中起重要作用,由Notch受体、Notch配体和细胞内效应分子CSLDNA结合蛋白3部分组成.Notch信号通路不仅对维持机体正常的造血功能起重要作用,而且其信号异常和白血病的发生、细胞周期阻滞和疗效预后相关.     

Notch信号通路在呼吸道变态反应性疾病发生发展中的调控作用

<正>呼吸道变态反应性疾病包括变应性鼻炎(allergicrhinitis,AR)和支气管哮喘(bronchial asthma,BA)。众所周知,AR是一种人体在接触变应原后产生的、由特异性免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)介导的Th2型鼻黏膜慢性非感染性炎症反应,其临床表现包括鼻塞、鼻痒、喷嚏和流涕等。AR的全球平均发病率高达5%～50%,这不仅会严重影响患者的生活质量,还是引发哮喘的一个独立高危因素^[1]。     

Notch信号通路在长春新碱诱导神经病理性疼痛中的作用

目的:研究Notch信号通路在长春新碱(vincristine, VCR)诱导大鼠神经病理性疼痛中的作用。方法:大鼠鞘内置管并筛选出合格SD大鼠40只,采用随机区组的方法分为4组(n=10):对照组(control)、长春新碱致化疗痛模型组(VCR)、DAPT多次给药+VCR组(DAPT(8)+VCR)、DAPT单次给药+VCR组(DAPT(1)+VCR)。隔日腹腔注射长春新碱(125μg/kg)建立化疗痛模型,Notch信号通路抑制剂DAPT从建模前1 d起鞘内注射(50μg/μl),其它各组注射生理盐水。测痛仪测定大鼠痛阈值;分子生物学技术检测脊髓背角NICD蛋白、Hes1 mRNA表达。结果:与对照组比较,VCR组大鼠痛阈值显著降低(P <0.01),NICD、Hes1 mRNA表达显著升高(P <0.01);与VCR组比较,DAPT多次给药+VCR组、DAPT单次给药+VCR组大鼠痛阈值均升高,NICD、Hes1 mRNA表达显著降低(P <0.05 or P <0.01)。结论:Notch信号通路的活化可能参与了长春新碱诱导的神经病理性疼痛的发生、发展;抑制其活化能有效缓解大鼠痛觉过敏反应。     

Notch信号通路在小胶质细胞活化中的作用

Notch信号通路是一种相邻细胞之间相互作用调控细胞命运的短程信号转导通路。Notch信号通路可以直接接收邻近细胞的信号,转导至细胞核,激活并调控相关转录因子,进而调控细胞的活化。作为中枢神经系统免疫防御的第一道防线,小胶质细胞是维持中枢神经系统稳态的固有免疫细胞,其活化与多种神经系统疾病有关。Notch信号通路在小胶质细胞的活化过程中发挥着重要作用,并可调控小胶质细胞释放炎症介质。     

Notch信号通路和多发性骨髓瘤

Notch信号通路是介导细胞和细胞之间直接接触的主要信号通路之一,调控了多细胞机体的细胞凋亡、增殖和分化,是造血微环境调节造血细胞增殖与分化的重要信号通路,与多种血液系统恶性肿瘤的发病有关。多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）是以浆细胞克隆性增殖为特征的B系肿瘤。由于骨髓瘤细胞的增殖比例低及多药耐药的形成,因此其对常规剂量的化疗药耐药,使得MM的临床治疗仍十分困难。近年来的研究发现,多发性骨髓瘤病人肿瘤细胞和骨髓瘤细胞株都大量表达Notch的配体Jagged-2,而正常的浆细胞或是其它恶性疾病来源的病人肿瘤细胞低量表达Jagged-2。Jagged-2可诱导基质细胞分泌白介素6（IL-6）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、胰岛素样生长因子－1（Insulin—like growth factor 1,IGF－1）。Notch信号通路激活后可通过与NF－κB,C—myc的相互作用,调节细胞的增殖,促进骨髓瘤细胞的生长,从而抑制骨髓瘤细胞的凋亡,它与骨髓瘤的发生和耐药有关。抑制Notch信号通路能诱导骨髓瘤细胞的凋亡,增强化疗药的细胞毒作用。研究表明,单独使用Notch信号通路的特异性化学抑制剂γ－分泌酶抑制剂（γ－secrctase inhibitors,GSI）可通过特异性阻滞Notch信号通路从而诱导骨髓瘤细胞的凋亡,并且与传统化疗药物联合应用可以增强骨髓瘤细胞对化疗药的敏感性。本文就Notch信号通路的组成、Notch信号通路的作用机制及Notch信号通路与多发性骨髓瘤的关系进行综述．     

针刺治疗缺血性脑卒中的Notch信号通路研究进展

Notch信号通路是一种进化上高度保守的信号通路途径,缺血可激活该通路,在细胞凋亡、血管生成、神经发生、免疫炎症等方面发挥作用.缺血性脑卒中后针刺治疗,可以影响Notch信号通路相关因子的表达,促进缺血脑组织的神经发生,增强缺血耐受性,抑制细胞凋亡,促使血管生成等.     

基于Notch信号通路研究银杏内酯B对非酒精性脂肪肝病的影响

目的:基于Notch信号通路探讨银杏内酯B对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的干预作用,为银杏内酯B治疗NAFLD提供参考。方法:72只SD大鼠按照随机数字表法分为正常组和实验组,分别为12、60只。正常组采用普通饲料喂养12周,实验组采用高脂高糖饲料(83.25%基础饲料、10%猪油、5%蔗糖、1.5%胆固醇和0.25%胆酸钠)喂养12周,构建NAFLD动物模型(造模成功标准为:肝脏HE染色有明显大量脂肪空泡)。造模成功后,大鼠按随机数字表法分为模型组,辛伐他汀组,银杏内酯B低、中、高剂量组,每组10只。正常组、模型组均给予1 mL/d生理盐水灌胃;辛伐他汀组按2 mg/(kg·d)剂量给予辛伐他汀灌胃;低、中、高剂量组分别按0.5、1.0、2.0 mg/(kg·d)剂量给予98%银杏内酯B灌胃。干预4周后,比较血浆中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、血脂低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)指标的差异;比较肝脏和血浆中转化生长因子-β1(TGF-β1)以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的差异;采用HE染色方法观察肝脏组织病理学变化;分别采用实时荧光定量PCR法、Western blot法检测Notch-3、Hes-1蛋白及mRNA的表达情况。结果:(1)生化指标结果:与正常组比较,模型组AST、ALT、LDL-C、HDL-C、TGF-β1和TNF-α明显升高(P<0.05);与模型组比较,辛伐他汀组、低剂量组、中剂量组和高剂量组AST、ALT、LDLC、TGF-β1、TNF-α均明显降低(P<0.05),而HDL-C无明显差异(P>0.05);与辛伐他汀组比较,低、中、高剂量组AST、ALT、LDL-C、HDL-C均无明显差异(P>0.05),TGF-β1和TNF-α明显降低(P<0.05)。(2)组织病理学结果:正常组几乎没有脂肪空泡出现,而模型组则出现有大量脂肪空泡;与模型组比较,辛伐他汀组,高、中、低剂量组脂肪空泡数量明显降低(P<0.05)。(3)Notch-3、Hes-1蛋白及mRNA表达结果:与正常组比较,模型组Notch-3和Hes-1蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,辛伐他汀组,低、中、高剂量组Notch-3、Hes-1蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.05);与辛伐他汀组比较,中、高剂量组Notch-3、Hes-1蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.05)。结论:银杏内酯B可以改善NAFLD大鼠肝功能,降低血脂水平,减轻炎症反应,其作用机制与调节Notch信号通路,抑制肝脏组织中Notch-3、Hes-1蛋白及mRNA表达有关。     

Notch与恶性血液病研究进展

Notch信号通路由Notch受体、配体和胞内的效应分子组成。1991年,第1个人类Notch家族成员Notch1基因在具有t（7;9）（q34;q34.3）染色体易位的急性T淋巴细胞白血病中发现,由此揭示了Notch信号通路是一条影响细胞命运的保守而重要的信号通路,几乎涉及所有细胞的增殖、分化和凋亡。与此同时,Notch信号通路在恶性血液病和实体瘤的形成和发展中所起的作用也日趋清晰。在超过半数的急性T淋巴细胞白血病中发现了突变型Notch1基因,但其作为原发还是继发仍不确定。近年来的研究发现,Notch信号通路具有致癌和抑癌双重作用。现就Notch信号通路在不同类型恶性血液病发生和发展中所起的作用、急性T淋巴细胞白血病中突变型Notch1基因类型、Notch信号通路与其它相关信号通路的关系及Notch信号通路抑制剂在恶性血液病治疗中的作用等相关研究进展进行综述。     

Notch通路与骨髓基质细胞衰老的关系探讨

本研究探讨Notch通路活化与骨髓基质细胞衰老的关系。用脂质体转染法将Notch1胞内区(ICN)转入体外培养的小鼠骨髓基质细胞,转染后3天,用MTT法检测细胞增殖率;用流式细胞术检测细胞周期分布;用细胞化学法检测衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associated β galactosidase,SA-β-gal)阳性细胞百分率;用RT-PCR及Western blot法分别检测周期蛋白激酶抑制因子P53、p21Cip1/Waf1基因水平和蛋白水平的表达。结果表明,ICN转染入小鼠骨髓基质细胞后3天,骨髓基质细胞增殖受抑,细胞周期阻滞在G1期,SA-β-gal阳性细胞百分率增加,无论从基因水平还是蛋白水平均显示P53、p21Cip1/Waf1表达增高,与未转染组及转空貭粒组相比差异均具有统计学意义。结论:Notch通路活化可导致骨髓基质细胞衰老,这种作用可能是通过增加p53、p21Cip1/Waf1蛋白的表达实现的。     

shRNA干扰AKT基因对Jeko-1细胞增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响

目的:探讨RNA干扰沉默AKT基因对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株的增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响。方法:设计针对AKT基因短发夹RNA,将其连入pGPU6/GFP/Neo质粒中,构建AKT shRNA真核表达载体,经脂质体转染入Jeko-1细胞,应用RQ-PCR及Western blot鉴定其干扰效果,MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,Western blot检测凋亡相关蛋白信号及通路相关蛋白p-AKT、Notch1、HES1的变化。结果:AKT shRNA转染Jeko-1细胞后,AKT的mRNA和蛋白表达均明显下降,有统计学意义(P0.05);转染组细胞增殖率明显低于Neg-shRNA组和空白对照组(P0.05),AKT shRNA传染48 h后,凋亡率为(37.72±4.39)%,而NegshRNA组和空白对照组分别为(2.62±1.53)%、(1.57±0.42)%,差异有统计学意义(P0.01);凋亡相关蛋白BCL-2表达下降,而BAX、caspase-3、caspase-9表达上升;PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-AKT磷酸化水平下降、Notch1信号通路相关蛋白Notch1、HES1表达下调。结论:干扰沉默AKT基因可抑制套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是特异性抑制PI3K/AKT信号通路也能下调Notch1信号通路的活性。     

Notch信号通路对VEGF促大鼠间充质干细胞增殖的作用

本研究旨在探讨Notch信号传导通路在VEGF促大鼠间充质干细胞增殖中的作用.体外培养大鼠间充质干细胞,取对数生长期的细胞用于实验研究.用Notch通路阻断剂DAPT阻断Notch信号传导,观察该通路在VEGF作用下大鼠间充质干细胞的增殖情况.实验分为4组：空白对照组、VEFG组、DAPT组及VEGF＋ DAPT组.应用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,RT-PCR法检测各组相关基因（Notch1、Notch2、Flk-1、HES-1）mRNA水平的变化.结果表明,细胞培养3d,各时间点（24h,48 h,72 h） DAPT组及VEGF＋ DAPT组细胞存活率均较低,细胞形态变圆脱落,数目明显减少;VEGF组存活率最高,差异具有统计学意义（P＜0.01）;与对照组相比,VEGF组的Notch1、Notch2和Flk-1的表达水平均上调,而DAPT组及VEGF＋ DAPT组Notch1和Notch2的表达水平均下调,差异均具有统计学意义（P＜0.05）;VEGF组Hes-1基因水平下调,而DAPT组及VEGF＋ DAPT组Hes-1基因水平上调,差异具有统计学意义（P＜0.05）;DAPT组及VEGF＋ DAPT组的Flk-1基因表达水平稍有下调,但差异无统计学意义（P＞0.05）.结论：Notch信号通路在VEGF作用下对大鼠间充质干细胞的增殖具有明显促进作用,而DAPT可抑制这种增殖效应.     

ERK和P38信号转导途径对慢性髓系白血病细胞周期的调控作用

本研究探讨ERK和P38信号转导途径对慢性髓系白血病（CML）细胞周期的调控作用。以RT-PCR、Western blot和FCM方法分别检测CML患者白血病细胞和K562细胞中ERK、p38、cyclin D2、cyclin E、p27的mRNA表达及蛋白表达（其中ERK和P38为磷酸化ERK和磷酸化P38）及细胞周期分布,并分析其相关关系。结果表明：CML患者白血病细胞和K562细胞中ERK、P38、cyclin D2、cyclin E的mRNA表达和蛋白表达增高,P27的表达降低,且cyclin D2蛋白表达与cyclin E、ERK和P38蛋白表达呈正相关（P〈0.01）,与P27蛋白表达呈负相关（P〈0.01）。G0/G1期细胞减少,S期细胞增多,与对照组相比有显著性差异。结论：CML中P38、ERK mRNA表达和活性增加,激活下游的cyclin D2、cyclin E和P27等细胞周期调控因子,致使G0/G1期缩短,细胞快速通过G1/S转换点进入S期,加速细胞周期进程和细胞增殖,导致CML的发生。     

PD98059对急性淋巴细胞白血病细胞MAPK信号通路的抑制作用

本研究检测阻断Ras／Erk信号通路对原代人类急性淋巴细胞白血病（ALL）细胞重要转录因子c-fos、c-jun、弼削基因表达的影响。筛选PD98059作用的最佳有效浓度和时间,采用SYBRGreenI实时定量PCR检测PD98059作用于原代ALL细胞前后和正常人原代细胞的目的基因的表达水平。结果表明：与正常人原代细胞相比,处理前原代ALL细胞c-fos、TAK1 mRNA的相对表达升高（P值分别为0．014和0．017）。经PD98059处理后原代ALL细胞中c-fos、c-jun、TAK1 mRNA的相对表达情况为：c-los、c-jun mRNA7个样本均低表达,TAK1 mRNA5个样本低表达,2个样本高表达;较处理前c-los、c-jun、TAK1 mRNA表达明显下降（P值均为0．018）。处理后原代ALL细胞与正常人原代细胞相比,c-fos、c-jun、TAK1mRNA表达无统计学差异。结论：原代ALL细胞的c-fos和弼脚基因的活性增高,阻断ALL细胞的Ras／Erk信号通路可导致重要转录因子c-fos、c-jun、TAK1基因表达明显下降。     

线粒体途径在慢性髓系白血病信号转导中的作用

本研究旨在探讨线粒体途径在慢性髓系白血病（CML）信号转导中的作用。用脂质体转染法将bcr3／abl2反义寡核苷酸（ASO）导入CML细胞系K562细胞中;用MTr法检测bcr3／abl2 ASO对K562细胞活力的影响;流式细胞术（FCM）分析测定细胞凋亡率;荧光染料罗丹明123染色分析细胞线粒体跨膜电位（△ψm）的变化;Western blot检测线粒体凋亡信号转导通路相关蛋白细胞色素C（CytC）的表达。结果表明,2μmol／Lbcr3／abl2 ASO与K562细胞作用24小时后,可明显抑制K562细胞活力,其抑制率为65．7％;可诱导细胞凋亡,凋亡率为16．9％;可下调K562细胞线粒体△ψm,有38．33％的细胞出现线粒体△ψm下降;可增强CytC的表达,激光光度扫描仪测得其表达光密度值由2．33±0．3升高到4．78±0．1。结论：线粒体途径通过介导凋亡信号而在CML信号转导中发挥重要作用。