一种简便快速提取细菌质粒的方法改进

介绍一种简便快速提取细菌质粒的改进方法,不需要按常规对细菌培养物离心和用溶液Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ处理,而是直接用酚-氯仿(1∶1)处理,离心分层取上清,异丙醇沉淀,所得质粒产量高,纯度足以用于酶切。     

一种改良的质粒DNA的快速提取方法

目的：建立一种确实有效的更实用的小量质粒ＤＮＡ的提取方法。方法：将一含有目的质粒的大肠杆菌扩增后采用改良后的方法提取质粒ＤＮＡ，然后采用紫外分光光度计测定含量，并且进行酶切。结果：每毫升原细菌培养物质粒ＤＮＡ的产量明显增高，且酶切效果极好。结论：改良后的质粒ＤＮＡ提取法具有速度快、收获量多、纯度高、经济又方便等优点，适合于应用与推广。     

一种简捷的质粒DNA提取及纯化方法

介绍一种快速获取高纯度质粒ＤＮＡ方法,在碱裂解法快速获取质粒ＤＮＡ粗制品的基础上,利用一种不溶解蛋白质而溶解ＤＮＡ的溶液ＴＥＳ纯化质粒ＤＮＡ,同时对本法所提取的质粒的ＤＮＡ的回收率、纯度及可能的用途进行验证。此法简易,所得样品纯度高,可以直接用于转化、酶切和基因克隆。     

微波炉加热质粒DNA快速提取法

介绍一种以微波炉加热快速提取质粒的方法，所提取的ＤＮＡ纯度，重复性均好，操作简便，整个提取过程不超过２０ｍｉｎ，省时省力，适用于规模筛选重组克隆子，也可直接用于转化、酶切及ＤＮＡ序列测定。     

质粒DNA的快速提取及其在重组子大量筛选中的应用

目的 介绍一种质粒DNA的快速提取方法及其在重组子大量筛选中的应用。方法 利用微量碱变性一步法快速提取质粒DNA。结果 应用该法能在大量的重组菌株中筛选出所需的重组质粒。结论 本法便捷，经济，适合于在大量DNA库中筛选出所需目的基因。     

一种简便有效的枯草杆菌质粒克隆方法

目的　在用枯草杆菌质粒克隆并表达白喉毒素突变型DT del14 8时 ,出现A70 0T突变 ,导致Ile2 0 9Leu氨基酸取代 ,为纠正这一突变 ,设计一种简便有效的枯草杆菌质粒克隆方法。方法　首先对含I2 0 9L突变的载体PSM6 0 4 DT del14 8 I2 0 9LDNA进行计算机限制内切酶谱分析 ,以位于PflMⅠ及HindⅢ间的唯一切点的限制内切酶KpnⅠ消化 ,然后去磷酸化 ,热灭活相应酶 ,加入不含I2 0 9L突变的大肠杆菌质粒PET15b DT del14 8,再以PflMI、HindⅢ消化 ,浓缩后进行连接、转化、筛选克隆 ,最后DNA序列分析。结果　经限制内切酶消化及序列分析 ,所有转化子均含目的基因片段。载体DNA仅需 30 0ng ,转化效率达 4 5× 10 2 转化子 / μg ;结论　方法简便、有效、快捷 ,成本低、成功率高 ,值得推广和借鉴     

一种改良的质粒DNA的快速提取方法技术方法

目的:建立一种确实有效的更实用的小量质粒DNA的提取方法.方法:将一含有目的质粒的大肠杆菌扩增后采用改良后的方法提取质粒DNA,然后采用紫外分光光度计测定含量,并且进行酶切.结果:每毫升原细菌培养物质粒DNA的产量明显增高,且酶切效果极好.结论:改良后的质粒DNA提取法具有速度快、收获量多、纯度高、经济又方便等优点,适合于应用与推广.     

一种适合序列分析的快速重组质粒DNA制备法

应用阳离子去垢剂十六烷基三甲基溴化铵沉淀重组质粒ＤＮＡ，得到的ＤＮＡ制剂纯度高，可直接用于双股ＤＮＡ序列分析，本法省时，ＤＮＡ序列分析重复性好。     

一种简单、高效的小分子量DNA沉淀法

沉淀是浓缩核酸最常用的方法。通过核酸沉淀可以改变核酸的溶解缓冲液 ,重新调节核酸在溶液中的浓度 ,还可以去除溶液中某些盐离子与杂质 ,达到纯化核酸的目的[1] 。　　大分子量核酸样品的沉淀方法很多 ,操作简单、效果比较好。而小分子量ＤＮＡ(特别 <5 0ｂｐ的寡聚核苷酸 )的沉淀方法往往依赖于高速或超速冷冻离心机 ,且操作步骤繁锁 ,一般实验室难以满足实验条件[2 ] 。本文介绍一种简单、有效的小分子量ＤＮＡ沉淀方法 ＺｎＣｌ2 沉淀法 ,具体操作步骤如下 :①准确测量ＤＮＡ样品的体积 ;②加入 0 .0 5倍ＤＮＡ样品体积的 1ｍｏｌ/Ｌ…     

碱裂解法提取质粒DNA的研究

目的对碱裂解法提取质粒DNA中主要试剂的作用进行研究.方法采用不同的溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ分别进行质粒DNA的提取.结果方法3得到质粒DNA的量明显偏少,方法4得到的质粒DNA含蛋白质较多.结论溶液Ⅰ对实验结果影响不大,溶液Ⅱ中的NaOH关系到所提取质粒DNA量的多少,溶液Ⅲ中的醋酸钾是蛋白质能否去除的一个重要因素.     

一种迅捷、经济及高效回收DNA片段方法的建立

目的:建立一种迅捷、经济、高效的从凝胶中回收DNA的方法。方法:以二氯二甲基硅烷硅化晴纶纱,以硅化的晴纶纱作为过滤垫层,冻融处理凝胶,离心收集液体,计算不同硅化晴纶纱厚度、不同冻融时间、不同离心力、不同离心时间和不同DN片段长度的DNA回收率。结果:用硅化晴纶纱从凝胶中回收DNA时,0.5～2.0 mm硅化晴纶纱厚度DNA片段回收率均在85%左右,提示不同硅化晴纶纱厚度对DNA片段回收率影响较小;冻融时间在30 min 前,随着冻融时间延长,回收率上升明显,至30 min 回收率达85%,再增加冻融时间回收率变化不显著,提示冻融时间对回收率影响较大,冻融时间应为1 h;在5 000 r•min^-1前,随着离心力增加,回收率上升明显,至5 000 r•min^-1回收率达85%,再增加转速,回收率有略微上升,提示离心力对回收率影响较大,离心力应超过10 000 r•min^-1 (约合10 000 g);以10 000 r•min^-1离心,30 min前,离心时间对回收率影响较大,至30 min时,回收率达85%,增加离心时间,回收率不再增加; 250～2 000 bp 长度DNA片段,回收率为80.7%～88.4%,即使100 bp小片段回收率也能达到76%以上,表明片段大小对回收率影响较小,说明本方法的有效性。结论: 硅化晴纶纱厚度0.5～2.0 mm,冻融时间≥1 h,离心力≥10 000 g,离心时间30 min DNA回收率较高;硅化晴纶纱法可以高效地从电泳凝胶中回收目的DNA片段。     

氨基甘露聚糖对质粒DNA构象的影响因素及机制研究

目的研究氨基甘露聚糖（aminoglucomannan,AGM）对质粒DNA构象影响的机制和影响因素。方法根据琼脂糖电泳条带的改变来检测阳离子化的聚糖与DNA质粒聚合后的情况并与多种糖类进行比较,改变聚糖浓度、pH、离子强度（NaCl浓度）、温度条件及质粒DNA种类,分析其对该聚合过程的影响。结果AGM和质粒DNA聚合后,电泳条带发生明显的向大分子量方向的移动变化,与AGM浓度呈剂量依赖趋势,且该作用与酶切作用不完全相同,氨基半乳糖和中药木芙蓉提取物有相似作用。pH、离子强度（NaCl浓度）、温度可影响其聚合作用。结论该AGM在适当的条件下有与DNA聚合并对质粒DNA构象产生影响的作用,该作用可能与其分子结构中的氨基有关。     

氯化锂用于质粒DNA的提纯

在分子生物学实验中常常涉及到小量质粒 DNA的提取和纯化。用质粒 DNA提纯试剂盒 ,虽然能得到高纯度的质粒DNA,但成本过高 ,不适合大量使用。用常规的苯酚氯仿提纯法 ,步骤繁琐 ,而且得到的产物中常残留有苯酚或其它杂质而影响后续的酶切分析等工作。再者 ,苯酚有害人体健康 ,而且废弃的苯酚又可造成环境污染。在本实验中 ,已摸索出一种可用于替代苯酚氯仿提纯质粒 DNA的氯化锂质粒 DNA提纯法。该方法简便易行 ,安全经济 ,所获结果稳定性好。1　材料与方法1.1　材料1.1.1　菌株　 p BR32 2 / C6 0 0 ,RP4/ 1485为本室保存的菌株 ;p …     

天麻DNA的快速提取方法

目的建立天麻基因组DNA快速提取方法.方法CTAB 酚/氯仿法加以改良提取DNA.结果本方法提取的DNA纯度高(A260/A280》1.8),耗时短(2～3h),分子大小约为50kb,适用于随机扩增多态性DNA(RAPD)分析.结论本方法提取DNA纯度高,耗时短,成本低,提取的DNA适宜RAPD分析.     

一种制备质粒DNA的改良碱裂解法

目的介绍一种快速获取高纯度质粒DNA的方法。方法使用替代试剂，建立改良的碱裂解法进行质粒DNA提取，并用琼脂糖电泳验证所得的质粒的质量，紫外测量估算产量及纯度。限制性酶切验证其用度。结果琼脂糖电泳显示质粒DNA条带明亮，以超螺旋方式为主。A260／280为1．903，含量为320μg／mL，酶切后得到约500bp的目的片段。结论改良碱裂解法操作简单、实用，所得样品纯度高，达到了分子生物学常规实验的要求。     

人雌激素受体α真核表达载体构建及质粒免疫制备多克隆抗体

目的：克隆构建表达人雌激素受体仅（ERα）的真核表达质粒,并探讨通过质粒免疫的方法制备ERa抗体的可行性。方法：利用RT—PCR方法从MCF一7细胞中克隆出ERα基因,并将其构建在pCDNA3．1载体中,质粒经鉴定为正确后,大量提取重组质粒,利用脂质体转染试剂包裹,肌肉注射免疫BALB／c小鼠,通过测定血清抗ERα效价,观察重组质粒携带ER仪在小鼠体内的表达情况。结果：成功克隆构建了表达ERα的真核载体,细胞内瞬时转染实验证实重组质粒成功表达目的蛋白;通过采用该质粒免疫小鼠,获得了高效价的小鼠多克隆抗体,经验证抗体可识别内源性ERα。结论：采用真核表达质粒进行免疫制备ER仅抗体具有可行性,为进一步通过质粒免疫制备ERα单克隆抗体奠定基础。     

一种提取肠道细菌总基因组DNA的方法

目的:尝试提取人体肠道菌群总DNA,为研究肠道菌群结构提供依据。方法:以人体粪便为样本,使用PBS多次清洗,离心样品,沉淀粪便中的菌体。使用裂解液、溶菌酶和蛋白酶K等裂解菌体,用酚/氯仿方法抽提DNA,以提取到的肠道细菌总DNA为模板进行ERIC-PCR扩增。结果:电泳显示样品DNA条带明亮,少数样品DNA存在降解现象;ERIC-PCR扩增得到较清晰的指纹图谱。结论:经改进后的方法操作简单、实用、经济,适用于肠道菌群结构的研究。