氯硝柳胺对肾上腺皮质癌SW-13细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究氯硝柳胺对人肾上腺皮质癌SW-13细胞株细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞迁移力、侵袭力的影响.方法 通过体外培养SW-13细胞,采用CCK8法和iCELLigence实时无标记细胞增殖监测仪检测不同浓度氯硝柳胺对细胞增殖的影响;设对照组和氯硝柳胺组,流式细胞技术检测氯硝柳胺作用后SW-13细胞周期的变化,AO/EB染色法和Annexin V/PI染色流式细胞技术测定细胞凋亡率的变化,Transwell实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭、迁移能力的变化,Western blot(WB)法检测β-catenin/LRP6表达的变化.结果 不同浓度的氯硝柳胺分别作用SW-13细胞24、48、72、96、120 h后,呈时间和浓度依赖性抑制SW-13细胞增殖(F=157.93,P<0.001);流式细胞仪周期检测结果显示24、48、72 h后,与对照组相比氯硝柳胺组将SW-13细胞周期阻滞在G0/G1期(P=0.001、0.005、0.008);AO/EB染色法和Annexin V/PI染色法结果均显示氯硝柳胺组的凋亡率与对照组相比明显升高(P<0.001);Transwell实验结果示氯硝柳胺组SW-13细胞的侵袭力降低(P<0.001),细胞划痕实验结果显示氯硝柳胺组SW-13细胞的迁移能力下降(P=0.002),WB结果示氯硝柳胺组SW-13细胞β-catenin/LRP6的表达明显降低(P<0.001).结论 氯硝柳胺抑制人肾上腺皮质癌SW-13细胞增殖,阻滞细胞周期,抑制侵袭及迁移能力,促进细胞凋亡;可能与其抑制Wnt/β-catenin信号通路有关.     

胰岛素样生长因子及其Ⅰ型受体抗体对人肾上腺皮质癌SW-13细胞株体外生长的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子及其Ⅰ型受体抗体对人肾上腺皮质癌SW-13细胞株体外生长的影响.方法 采用MTT法描绘不同浓度胰岛素样生长因子及其Ⅰ型受体抗体作用后SW-13细胞株体外培养生长的促进及抑制曲线,并比较不同浓度胰岛素样生长因子和其Ⅰ型受体抗体组及单一胰岛素样生长因子或其Ⅰ型受体抗体组与阴性对照组之间的差异.结果 胰岛素样生长因子能明显促进SW-13细胞增殖,其作用效果与作用浓度在一定浓度范围内呈正相关(P＜0.05);而胰岛素样生长因子Ⅰ型受体抗体能抑制胰岛素样生长因子对SW-13细胞的刺激作用,并且对SW-13细胞的增殖亦有直接抑制的作用(P＜0.05).结论 胰岛素样生长因子可促进SW-13细胞株的生长,而这种作用亦是通过胰岛素样生长因子Ⅰ型受体传导;胰岛素样生长因子Ⅰ型受体抗体可明显抑制这种生物学作用,可能在肾上腺皮质癌的治疗中发挥重要作用.     

胰岛素样生长因子及其I型受体抗体对人肾上腺皮质癌SW-13细胞株体外生长的影响

目的探讨胰岛素样生长因子及其I型受体抗体对人肾上腺皮质癌SW-13细胞株体外生长的影响。方法采用MTT法描绘不同浓度胰岛素样生长因子及其I型受体抗体作用后SW-13细胞株体外培养生长的促进及抑制曲线,并比较不同浓度胰岛素样生长因子和其I型受体抗体组及单一胰岛素样生长因子或其I型受体抗体组与阴性对照组之间的差异。结果胰岛素样生长因子能明显促进SW-13细胞增殖,其作用效果与作用浓度在一定浓度范围内呈正相关(P<0.05);而胰岛素样生长因子I型受体抗体能抑制胰岛素样生长因子对SW-13细胞的刺激作用,并且对SW-13细胞的增殖亦有直接抑制的作用(P<0.05)。结论胰岛素样生长因子可促进SW-13细胞株的生长,而这种作用亦是通过胰岛素样生长因子I型受体传导;胰岛素样生长因子I型受体抗体可明显抑制这种生物学作用,可能在肾上腺皮质癌的治疗中发挥重要作用。     

胰岛素样生长因子及其Ⅰ型受体抗体对人肾上腺皮质癌SW-13细胞凋亡的调控

目的 探讨胰岛素样生长因子及其I型受体抗体对人肾上腺皮质癌SW-13细胞凋亡的调控和其可能机制. 方法 原位凋亡(TUNEL)法检测胰岛素样生长因子及其I型受体抗体单独或联合作用于SW-13细胞后细胞的凋亡的情况,同时观察细胞形态及数量的变化. 结果 各组细胞凋亡率比较有显著统计学差异(P<0.001),其中1单用IGF-I组或IGF-Ⅱ组细胞凋亡率低于空白对照组低于混合作用组低于单用anti-IGF-IR组.而单用IGF-I组和IGF-Ⅱ组、IGF-I anti-IGF-IR组和IGF-Ⅱ anti-IGF-IR组组间比较无统计学差异(P>0.05).加入antli-IGF-IR组细胞形态也发生了明显的变化.结论 胰岛素样生长因子可促进SW-13细胞株的生长,这与其抑制了细胞凋亡有关,而这种生物学作用是通过胰岛素样生长因子I型受体介导,胰岛素样生长因子I型受体抗体可明显抑制这种生物学作用,可能在肾上腺皮质癌的治疗中发挥重要作用.     

冬凌草甲素诱导结直肠癌细胞SW-1116凋亡与衰老的体内外实验研究

目的 探讨冬凌草甲素(Ori)在体内外抑制结直肠癌细胞的作用及机制.方法 应用不同浓度Ori(0、6.25、12.5、25、50和100 μmol/L)处理结直肠癌细胞SW-1116及其建立的裸鼠移植瘤模型,CCK-8法检测Ori对SW-1116细胞的抗增殖效应;流式细胞仪检测Ori处理SW-1116后细胞周期的改变及细胞的凋亡;β-半乳糖苷酶染色检测Ori诱导SW-1116细胞衰老;软琼脂细胞克隆形成实验检测Ori对SW-1116细胞克隆形成的影响;观察Ori对SW-1116细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其机制.结果 Ori可诱导结直肠癌细胞SW-1116生长抑制、细胞周期阻滞、凋亡、衰老和克隆形成能力.Ori还显著抑制SW-1116裸鼠移植瘤的生长,随着Ori剂量的增加裸鼠移植瘤中的细胞凋亡与衰老增加.结论 体内外实验研究表明,Ori具有抗结直肠癌的活性,可能成为治疗结直肠癌的一个新的候选化合物.     

华蟾素抑制人结肠癌SW-480细胞增殖及诱导凋亡的研究

目的：观察华蟾素（Cinobufacini）抑制人结肠癌（SW-480）细胞系增殖及诱导凋亡的生物学效应。方法：以人结肠癌SW-480细胞为研究对象,采用MTT法观察细胞增殖抑制的影响;采用吖啶橙（AO）/溴乙锭（EB）荧光染色法观察细胞凋亡形态,并计算凋亡率。结果：在20~120μg/mL,华蟾素能明显的抑制SW-480细胞的增殖;AO/EB荧光染色法显示：随着药物浓度的增加细胞凋亡率逐渐增加。结论：华蟾素具有抑制人结肠癌（SW-480）细胞生长增殖,促进凋亡的作用。     

γ-氨基丁酸对人末梢血γδT细胞作用的实验研究

目的 研究γ-氨基丁酸(GABA)对人外周血γδT细胞的增殖、细胞周期、凋亡的变化、杀伤活性的影响及其可能的作用机制.方法 在体外用不同浓度的GABA与人γδT细胞作用后,用MTT比色法和流式细胞仪(FCM)以及乳酸脱氢酶(LDH)法分别检测人γδT细胞的增殖能力、T细胞周期、凋亡和杀伤活性的变化.结果 GABA能显著抑制γδT细胞的生长(P＜0.01),并具有浓度依赖性; GABA显著影响细胞周期比例的分布,促进细胞凋亡;GABA抑制γδT细胞对人胰腺癌细胞株SW-1990的杀伤活性.结论 GABA能显著抑制γδT细胞的增殖,抑制γδT细胞的杀伤活性.提示GABA可能是通过影响细胞周期及凋亡对γδT细胞发挥作用,进而影响其杀伤活性.     

低剂量阿霉素富集肾上腺皮质癌干细胞的实验研究

目的:探讨肾上腺皮质癌干细胞的有效富集模式和其可能的表面标志物.方法:构建裸鼠皮下移植瘤反复传代联合化疗药物阿霉素干预的动物模型,富集人肾上腺皮质癌细胞系SW-13的干细胞,并进行富集效率检测("悬浮球"形成试验;平板克隆形成实验).流式细胞术检测肿瘤标志物组合CD184+CD338+,研究SW-13干细胞可能的表面标志物.结果:裸鼠皮下移植瘤成瘤率为100%.空白对照组及各代SW-13裸鼠皮下移植瘤细胞的"悬浮球"形成率、平板克隆形成率比较差异均有统计学意义(P<0.05),富集第2代细胞>第1代细胞>空白对照组.流式细胞术检测富集第2代细胞的CD184+CD338+表达率较第1代细胞与空白对照组增高(P<0.05).结论:裸鼠皮下移植瘤反复传代联合化疗药物阿霉素干预的富集模式,可有效富集肾上腺皮质癌SW-13干细胞样细胞.CD184+CD338+可作为肾上腺皮质癌SW-13干细胞的候选标志物组合.     

冬凌草甲素诱导结直肠癌细胞SW-1116凋亡与衰老的体内外实验研究

目的探讨冬凌草甲素（Ori）在体内外抑制结直肠癌细胞的作用及机制。方法应用不同浓度Ori（0、6.25、12.5、25、50和100μmol/L）处理结直肠癌细胞SW-1116及其建立的裸鼠移植瘤模型,CCK-8法检测Ori对SW-1116细胞的抗增殖效应;流式细胞仪检测Ori处理SW-1116后细胞周期的改变及细胞的凋亡;β-半乳糖苷酶染色检测Ori诱导SW-1116细胞衰老;软琼脂细胞克隆形成实验检测Ori对SW-1116细胞克隆形成的影响;观察Ori对SW-1116细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其机制。结果 Ori可诱导结直肠癌细胞SW-1116生长抑制、细胞周期阻滞、凋亡、衰老和克隆形成能力。Ori还显著抑制SW-1116裸鼠移植瘤的生长,随着Ori剂量的增加裸鼠移植瘤中的细胞凋亡与衰老增加。结论体内外实验研究表明,Ori具有抗结直肠癌的活性,可能成为治疗结直肠癌的一个新的候选化合物。     

氯硝柳胺联合顺铂抑制肾上腺皮质癌的实验研究

目的 研究氯硝柳胺和低剂量顺铂联合应用对人肾上腺皮质癌SW-13 细胞株增殖、凋亡,以及 迁移力、侵袭力的影响,并探讨其作用机制。方法 体外培养SW-13 细胞,CCK-8 法检测氯硝柳胺和不同 浓度顺铂对细胞增殖的影响。设对照组、氯硝柳胺组、顺铂组、联合用药组,分别用Annexin V/PI 和吖啶 橙/ 溴化乙锭（AO/EB）染色检测细胞凋亡率的变化,Transwell 实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭、迁移 能力的变化,Western blot 检测B 细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）、波 形蛋白（Vimnetin）、E- 钙黏蛋白（E-cadherin）表达的变化。结果 氯硝柳胺增强顺铂对SW-13 细胞增 殖的抑制作用。Annexin V/PI 和AO/EB 染色结果表明,与联合用药组比较,氯硝柳胺、顺铂促进细胞凋亡 （P <0.05）。Transwell 和划痕实验结果表明,与联合用药组比较,氯硝柳胺、顺铂降低SW-13 细胞的侵袭能 力（P <0.05）。Western blot 检测结果表明,与联合用药组比较,氯硝柳胺、顺铂抑制Bcl-2、Vimentin 的表达, 促进Caspase-3、E-cadherin 的表达（P <0.05）。结论 氯硝柳胺能够增强低剂量顺铂对SW-13 细胞增殖的 抑制作用,促进细胞凋亡,抑制侵袭及迁移能力,可能与其抑制Bcl-2、Caspase-3、E-cadherin、Vimentin 的 表达有关。     

ABCG2在不同微环境下肾上腺皮质癌细胞中的表达及意义

目的:探讨ABCG2在不同微环境下在肾上腺皮质癌细胞中的表达和意义.方法:利用SW-13细胞株建立体内及体外微环境模型,流式细胞技术检测ABCG2在不同微环境下肾上腺皮质癌组织及细胞中的表达情况.结果:ABCG2在裸鼠转移淋巴结中的表达率[(5.41±2.57)%]明显高于标准培养基[(1.04±1.01)%]、干细胞...     

miR-34c对Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞生长和凋亡的影响

目的：研究miR-34c对Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞的生长及凋亡的影响。方法：用hsa-miR-34cmimics转染HEC-1-B细胞。流式细胞技术测定细胞转染率,实时荧光定量PCR验证转染后miR-34c的表达。CCK-8检测细胞增殖能力的改变。细胞克隆形成实验观察miR-34c对细胞生长的长期抑制。流式细胞技术测细胞凋亡。结果：细胞转染率为81．16％。相对于对照组,转染后实验组miR-34c表达明显增加,细胞增殖、克隆形成能力减弱,凋亡增加（P〈0．05）。结论：miR-34c能明显抑制Ⅱ型子宫内膜癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,是Ⅱ型子宫内膜癌的潜在抑癌基因。     

羟基喜树碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨羟基喜树碱在体外对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响,为乳腺癌的临床用药提供实验依据。方法：将不同浓度（10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L）的羟基喜树碱作用于人乳腺癌MCF-7细胞48 h,并设不加羟基喜树碱溶液的MCF-7细胞作为对照组,用MTT法测定MCF-7细胞的增殖情况,用Hoechst33258染色检测MCF-7细胞的凋亡情况,以RT-PCR检测羟基喜树碱对MCF-7细胞Casepase-3 mRNA表达的影响。结果：与对照组比较,50μmol/L、100μmol/L及200μmol/L羟基喜树碱对细胞增殖均有抑制作用（P〈0.05、P〈0.01）,尤以200μmol/L的抑制作用最明显,其抑制率呈浓度依赖性增加。荧光显微镜观察显示,100μmol/L及200μmol/L羟基喜树碱处理组中可见典型的凋亡形态学改变。与对照组比较,各羟基喜树碱处理组中MCF-7细胞Caspase-3 mRNA表达水平均升高（P〈0.05、P〈0.01）,并呈浓度依赖性升高趋势。结论：羟基喜树碱可在体外抑制MCF-7细胞增殖,并通过Caspase-3途径诱导细胞凋亡,达到抑制肿瘤细胞生长的作用。     

吡格列酮对肝门部胆管癌QBC939细胞增殖、凋亡和侵袭力的影响

目的：探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）配体吡格列酮（pioglitazone,PGZ）对胆管癌细胞增殖、凋亡和体外侵袭力的影响．方法：体外培养人肝门胆管癌QBC939细胞;采用流式细胞技术与TUNEL酶标记法检测PGZ对QBC939细胞增殖和凋亡的影响．通过Matrigel侵袭实验和过河实验检测PGZ对QBC939细胞体外侵袭力和运动能力的影响．结果：流式细胞仪分析显示,PGZ能明显抑制QBC939细胞增殖,使其停滞于G2／M期,促使诱导细胞凋亡;TUNEL酶标记显示凋亡的QBC939细胞出现凋亡小体;Matrigel侵袭实验和过河实验显示,随着PGZ浓度的增加,透过Matrigel膜的细胞数减少,过河时间延长（P〈0．01）,呈剂量一效应关系．结论：PGZ能明显抑制QBC939细胞增殖,诱导细胞凋亡,对QBC939细胞的体外侵袭力有明显的抑制作用．PPAR-γ配体PGZ有望成为治疗胆管癌新的切入点．     

2-（3-羧基-1-丙酰氨基）-2-脱氧-D-葡萄糖诱导人结肠癌SW1116凋亡的作用

目的：研究D-葡萄糖衍生物2-（3-羧基-1-丙酰氨基）-2-脱氧-D-葡萄糖（COPADG）对人结肠癌SW1116细胞生长增殖的影响,进而探讨COPADG诱导SW1116细胞凋亡的作用。方法：用不同浓度的COPADG处理SW1116,采用MTT法测定其对SW1116细胞生长增殖的抑制作用,通过DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术观察其对SW1116细胞诱导凋亡的效应。结果：COPADG能抑制SW1116细胞的生长增殖,并呈一定的浓度、时间依赖性;COPADG能诱导结肠癌SW1116细胞凋亡;DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型的DNA梯形条带图谱;流式细胞仪检测出现典型的亚二倍体凋亡峰。结论：COPADG在体外可显著诱导结肠癌SW1116细胞凋亡。     

PECAM-1 siRNA对人鼻咽癌辐射致耐药CNE1/R细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨血小板内皮细胞黏附因子-1（platelet-endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1）基因小分子RNA干扰（small interfering RNA,siRNA）对人鼻咽癌辐射致耐药CNE1/R细胞增殖及凋亡的影响。方法：设计干扰RNA编码DNA特异性序列,合成siRNA片段,转染CNE1/R细胞,G418筛选出稳定转染细胞株。蛋白质印迹法检测PECAM-1 siRNA干扰后,细胞中PECAM-1蛋白表达情况;MTT法检测细胞增殖及流式细胞术检测细胞凋亡。结果：筛选出稳定转染细胞株,实验组PECAM-1蛋白表达较阴性组下调3.4倍,证实干扰有效。与阴性组及空白组相比,实验组细胞增殖能力下降,凋亡率升高。结论：PECAM-1基因siRNA可抑制CNE1/R细胞增殖,促进其凋亡。PECAM-1可能在鼻咽癌细胞辐射后生长凋亡中起作用。     

羟基喜树碱抑制肺癌A549细胞的体外增殖并下调Bcl-2基因的表达

摘要：目的研究羟基喜树碱对肺癌A549细胞生长抑制、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法羟基喜树碱处理A549细胞后用吖
啶橙/溴化乙锭（AO/EB）染色观察细胞形态学变化,琼脂糖凝胶检测DNA片段化,用流式细胞仪测定其对细胞周期影响。利用
Annexin V-FITC/PI 检测细胞凋亡,RT-PCR 检测凋亡相关基因Bcl-2 的表达变化。结果A549 细胞经羟基喜树碱作用,提取
DNA进行琼脂糖凝胶电泳可见梯状条带。经AO/EB染色,荧光显微镜下观察到早期凋亡细胞细胞核被染成绿色,呈碎片状,晚
期凋亡细胞核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状,细胞周期S期由20%升高到60%。经1 μmol/L 羟基喜树碱处理24 h后,流
式细胞术显示A549细胞的凋亡率为18.11%,明显高于对照组细胞凋亡率（0.09%,P<0.05）。经羟基喜树碱作用后,A549细胞
Bcl-2基因表达下调70%（P<0.05)。结论羟基喜树碱可以明显抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡,并下调Bcl-2基因表达,提示
Bcl-2下调参与了羟基喜树碱对A549细胞的抑制作用。
     

塞来昔布联合羟基喜树碱对胃癌细胞的生长抑制作用及机制探讨

目的观察塞来昔布联合羟基喜树碱对胃癌细胞SGC-7901的抑制作用。方法用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察两药单用及序贯用药对胃癌细胞的抑制作用,用流式细胞仪检测塞来昔布对胃癌细胞诱导凋亡作用。结果 5μg/L羟基喜树碱与25μmol/L塞米昔布联合使用时表现为联合用药组对胃癌细胞的抑制作用明显强于两单药组,5μg/L羟基喜树碱与12.5μmol/L塞来昔布联合时,表现为不同的用药顺序,其抑制作用有显著性差异。流式细胞仪检测发现塞来昔布对胃癌细胞有诱导凋亡作用。结论塞来昔布通过诱导细胞凋亡对胃癌细胞SGC-7901有生长抑制作用。两药联合可能增强对胃癌细胞的抑制作用。     

康莱特对小鼠肝癌细胞Hepa1-6增殖和凋亡的影响

目的：探讨不同浓度、不同作用时间康莱特（KLT）注射液对小鼠肝癌细胞Hepa1-6增殖和凋亡的影响。方法：采用MTT比色法观察不同浓度KLT对小鼠肝癌细胞Hepa1-6增殖抑制作用。HE染色光镜下观察细胞结构的改变。流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果：KLT对小鼠肝癌细胞Hepa1-6有明显的抑制效应,呈时间、浓度依赖性（P〈0.01）。光镜下可见细胞形态趋向良性分化。流式细胞仪检测,KLT作用Hepa1-6细胞48 h后,均出现凋亡峰,凋亡率呈浓度依赖性（P〈0.01）。结论：KLT可通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡来抑制小鼠肝癌细胞Hepa1-6的生长。