中药提取液对离体大鼠卵巢颗粒细胞雌二醇(E2)分泌的影响

近年来研究发现,在不育夫妇中,免疫性不育引起越来越广泛的关注.中药消抗安胎提取液治疗免疫性不育经多年临床应用,疗效较好.患者抗体阳性转阴率达82.2%[1].但对其作用机制了解甚少.本实验采用离体实验孵育大鼠卵巢颗粒细胞模型,观察消抗安胎提取液对颗粒细胞雌二醇分泌的影响.     

宁心红杞含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞超微结构及雌激素分泌的影响

目的:探讨宁心红杞含药血清对离体大鼠卵巢颗粒细胞超微结构及雌激素分泌的影响.方法:体外培养的卵巢颗粒细胞用氯化镉造模,加入宁心红杞舍药血清作用24h后,在电镜下观察颗粒细胞超微结构的变化,放射免疫法测定培养液中雌激素的浓度.结果:宁心红杞舍药血清可明显增加雌二醇(B)的分泌,能明显改善离体大鼠卵巢颗粒细胞超微结构,电镜下表现为分泌颗粒增多,滑面内质网增多等.结论:宁心红杞胶囊可通过增加雌二醇的分泌及超微结构的改变来改善卵巢功能,延缓卵巢衰老.     

育泡饮对大鼠卵巢颗粒细胞EGFR表达的影响

目的:观察中药育泡饮对体外培养大鼠卵巢颗粒细胞EGFR表达的影响。方法:颗粒细胞预培养48h后,随机分组加入促卵泡激素FSH(50ng/mL)和不同剂量的育泡饮,并设立空白对照组,继续培养48h,Western-Blot法检测各组颗粒细胞EGFR的表达。结果:育泡饮水提醇沉液呈剂量依赖性促进颗粒细胞EGFR表达。在低剂量作用下颗粒细胞EGFR表达开始增强,与空白对照组比较具有明显差异(P<0.05),高剂量组的促进作用最为显著(P<0.05)。与FSH组比较,低剂量组促颗粒细胞EGFR表达的能力明显降低(P<0.05)。而高剂量组与FSH的作用相比较无统计学差异(P>0.05)。结论:育泡饮通过调节EGFR的表达量,可能是育泡饮促卵泡发育的内在机制之一。     

补肾活血方对离体培养卵巢颗粒细胞性激素分泌的影响

目的:比较不同浓度补肾活血方含药血清对离体培养卵巢颗粒细胞内分泌功能的影响.方法:采用针刺提取卵泡颗粒细胞、离心分离,HE染色及FSHR免疫组化鉴定细胞,分别用0ng/mL、2.5ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL FSH刺激颗粒细胞,wst-1法测定相关OD值.用ELISA法测定不同浓度补肾活血方含药血清对离体培养卵巢颗粒细胞E2、P激素分泌的影响.结果:分离培养的颗粒细胞存活率＞90％;光镜下细胞贴壁规则,形态完整,呈梭型;HE染色:核深蓝色,胞浆淡红色;免疫组化:核呈蓝紫色,浆呈棕黄色.结论:补肾活血方能明显促进卵巢颗粒细胞的分泌功能,且中剂量效果更为显著.     

中药育泡饮对大鼠卵巢颗粒细胞P38MAPK表达的影响

目的:观察中药育泡饮对体外培养大鼠卵巢颗粒细胞P38MAPK表达的影响。方法:颗粒细胞预培养48 h后,随机分组,加入促卵泡激素FSH(50 ng/mL)和不同剂量的育泡饮,并设立空白对照组,继续培养48 h,Western-Blot法检测各组颗粒细胞P38MAPK的表达。结果:与空白组相比较,育泡饮各剂量组及FSH组均能促进P38MAPK表达(P﹤0.05)。与FSH组比较,除了低剂量组育泡饮P38MAPK表达明显降低(P﹤0.05),中、高剂量组P38MAPK表达与之无显著性差异(P﹥0.05)。结论:育泡饮通过激活颗粒细胞P38MAPK通路,可能参与了对卵泡发育、成熟的调控。     

补肾健脾、养血通利中药对多囊卵巢综合征大鼠颗粒细胞自噬影响的实验研究

目的 观察补肾健脾、养血通利中药对于PCOS大鼠激素及卵巢形态及卵巢颗粒细胞自噬发生的影响,从而探索中药治疗PCOS的相关作用机制.方法 建立来曲唑诱导PCOS大鼠动物模型,灌服中药治疗,并以氯米芬为阳性对照组,与正常组、模型组进行对照,检测大鼠用药后激素水平、卵巢结构,并应用MDC荧光染色及流式细胞术测定大鼠颗粒细胞...     

坤宁安丸对更年期大鼠卵巢颗粒细胞超微结构的影响

目的：研究坤宁安丸对更年期大鼠卵巢颗粒细胞的影响。方法：采用更年期大鼠模型，应用光镜和电镜观察大鼠卵巢组织学变化和超微结构。结果：治疗组颗粒细胞超微结构与更年期对照组比较有明显差异，主要表现为线粒体和滑面内质网非常丰富，胞质内有大量脂滴，凋亡小体少见。结论：提示坤宁安具具有预防和延缓颗粒细胞凋亡而达到阻止卵泡闭锁、颗粒细胞分泌雄激素增多的目的，可能是防治更年期综合征的主要机理。     

去卵巢大鼠性激素和骨钙素的含量变化及补肾中药对其影响

本文采用摘除大鼠的双侧卵巢的方法模拟因雌激素水平低下造成的骨质疏松症，观察去卵巢大鼠血清Ｅ２，ＦＳＨ，ＬＨ，ＢＧＨ含量的变化以及补肾中药对它们的影响。结果显示：去卵巢后大鼠血清Ｅ２，ＢＧＰ含量均显著下降；ＬＨ，ＦＳＨ含量均明显上升。补肾中药虽对去巢大鼠Ｅ２水平无明显改变，但能明显升高去卵巢大鼠ＢＧＰ的含量，疗效接近雌激素治疗组。     

乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞INHB＼FSHRmRNA及分泌功能的影响

[目的】运用血清药理学方法观察乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞抑制素（INHB）、促卵泡激素受体（FSHR）mRNA的表达及其分泌功能的影响。[方法]在大鼠卵巢颗粒细胞培养体系中加入乌萸汤、尿促卵泡激素（FSH）及正常大鼠含药血清,培养48h后,分别用酶联免疫吸附法（ELISA）,逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）及放免法测定颗粒细胞INHB、FSHR、mRNA及培养液中雌二醇（E2）含量。【结果】各用药血清组E2含量较对照组均明显升高;颗粒细胞INHB、FSHRmRNA表达量明显增多,其中乌萸汤中剂量血清组效果优于西药组。[结论1乌萸汤含药血清能明显促进卵巢颗粒细胞INHB、FSHRmRNA的表达以及E2分泌,说明乌萸汤可以通过调控卵巢局部因子、增强FSHRmRNA的表达从而提高卵巢对促性腺激素的反应性,改善下丘脑-垂体-卵巢轴,促进E2的分泌,以促进卵泡发育成熟及排出。     

消抗灵对大鼠hcG诱导的颗粒细胞雌孕激素生成的影响

妊娠抗磷脂综合症是引起女性不育的常见免疫性疾病 ,中药消抗灵对免疫性不育已获得了满意的疗效[1 ] ,但对其机理研究却很少 ,本实验采用离体细胞培养的方法 ,观察消抗灵对大鼠ｈｃＧ诱导的颗粒细胞雌二醇 (Ｅ2 )和孕激素 (Ｐ4)分泌的影响 ,并对其作用机理进行了初步研究。1　材料与方法1.1　实验药品　人绒毛膜促性腺激素 (ｈｃＧ)及Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ为Ｓｉｇｍａ公司产品 ;消抗灵为哈医大附属二院药学部产品 ,批号 970 4 818;Ｅ2 、Ｐ4药盒为上海生物制品研究所产品。1.2　动物处理与细胞培养　　选用 2 1～ 2 5天健康Ｗｉｓｔａｒ大鼠 …     

乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞INHB、FSHR mRNA及分泌功能的影响

[目的]运用血清药理学方法观察乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞抑制素(INHB)、促卵泡激素受体(FSHR)mRNA的表达及其分泌功能的影响。[方法]在大鼠卵巢颗粒细胞培养体系中加入乌萸汤、尿促卵泡激素(FSH)及正常大鼠含药血清,培养48h后,分别用酶联免疫吸附法(ELISA),逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及放免法测定颗粒细胞INHB、FSHR、mRNA及培养液中雌二醇(E2)含量。[结果]各用药血清组E2含量较对照组均明显升高;颗粒细胞INHB、FSHRmRNA表达量明显增多,其中乌萸汤中剂量血清组效果优于西药组。[结论]乌萸汤含药血清能明显促进卵巢颗粒细胞INHB、FSHRmRNA的表达以及E2分泌,说明乌萸汤可以通过调控卵巢局部因子、增强FSHRmRNA的表达从而提高卵巢对促性腺激素的反应性,改善下丘脑-垂体-卵巢轴,促进E2的分泌,以促进卵泡发育成熟及排出。     

补肾活血方联合微囊化颗粒细胞移植对大鼠血清FSH、LH及E_2的影响

目的:探讨补肾活方联合微囊化细胞移植技术对大鼠生殖内分泌的影响。方法:将50只SD雌性大鼠随机分成5组:空白组(A组)、去卵巢组(B组)、微囊化GC细胞移植组(C组)、低剂量补肾中药+微囊化GC细胞移植组(D组)、高剂量补肾中药+微囊化GC细胞移植组(E组)。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测治疗前后血清雌二醇(E_2)、卵泡刺激素(FSH)及黄体生成素(LH)浓度。结果:微囊化GC细胞移植后,C组大鼠血清E_2水平与B组比较显著升高(P0.05);FSH、LH水平均明显降低(P0.01);补肾活血方联合微囊化GC细胞移植后,D、E组E_2水平与C组比较显著升高(P0.05),FSH、LH水平均明显降低(P0.05)。结论:与单纯移植微囊化GC细胞相比,补肾活血方联合微囊化细胞移植技术能改善去卵巢大鼠激素分泌状态,其作为临床中医药预防和治疗卵巢早衰的一种手段具有良好的应景前景。     

毓麟合剂及其拆方对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌的影响

目的:探讨毓麟合剂及其拆方对离体大鼠卵巢颗粒细胞(GC)增殖及雌、孕激素分泌的影响。方法:体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞,加入毓麟合剂及其拆方汤剂作用24h后,在显微镜下观察卵巢颗粒细胞数量的变化,MTT法测定卵巢颗粒细胞增殖数量,ELISA法测定培养液中雌、孕激素的浓度。结果:毓麟合剂可明显增加卵巢颗粒细胞数量,并增加雌二醇(E2)和孕酮(P)的分泌。HE染色显微镜下观察可表现为卵巢颗粒细胞增多等。结论:毓麟合剂能够增加离体大鼠卵巢颗粒细胞数量并能够促进雌二醇和孕酮的分泌。     

补肾为主的中药复方对去卵巢大鼠血脂谱影响的实验研究

更年期绝经后女性动脉粥样硬化、冠心病的发病率明显高于育龄期女性 ,一般认为此与其卵巢功能衰退、雌激素分泌减少 ,导致脂质代谢紊乱有密切关系。与人相似 ,雌性老龄大鼠其血脂也会出现紊乱。因此 ,治疗绝经期综合征的同时 ,积极防治该类患者易患的动脉粥样硬化及冠心病是十分必要的。依据肾主生殖及主骨生髓的中医药理论 ,我们以肉苁蓉、补骨脂、当归、黄芪等补肾为主的中药组成复方 ,临床治疗绝经期综合征疗效肯定。为了弄清该方在治疗绝经期综合征有效的同时 ,是否还能预防性调治绝经期综合征患者易发的动脉粥样硬化或冠心病这一问题 ,…     

滋阴补阳方序贯疗法对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞(GC)分泌功能和细胞因子基因表达的影响

目的:研究滋阴补阳方序贯疗法对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞(GC)分泌功能和细胞因子基因表达产生的影响。方法:利用随机数字表法将实验雌性性SD大鼠分为3组,包括空白对照组、滋阴组以及补阳组;选取6周龄同样大鼠灌胃,调配空白血清与用药血清;对PCOS大鼠GC及黄素化颗粒细胞进行分离培养,并以随机方法分为10组,比较各组细胞培养液里面雌二醇(E_2)、类胰岛素增长因子(IGF-1)、干细胞因子(SCF)以及睾酮(T)水平,并观察SCF mRNA表达情况。结果:模型组1GC里面E_2水平明显低于对照组(P0.05),且SCF水平明显高于对照组;滋阴方组2SCF与滋阴方组3SCF水平均明显低于模型组1(P0.05),而滋阴方组2E_2与滋阴方组3E2水平均明显高于模型组1(P0.05);模型组1大鼠GC SCF mRNA表达明显高于对照组,且IGF-1灰度值明显小于对照组(P0.05),滋阴方组2与滋阴方组3GC SCF mRNA表达均显著低于模型组1(P0.05),滋阴方组3IGF-1灰度值明显高于模型组1(P0.05);模型组大鼠卵巢部位黄素化颗粒细胞里面T水平明显高于对照组(P0.05);补阳方组2与补阳方组3T水平明显低于模型组(P0.05),而补阳方组1T水平与模型组的比较无显著差异(P0.05);对照组、模型组、补阳方组黄素化颗粒细胞里面SCF水平、SCF mRNA表达以及IGF-1灰度值比较无显著差异(P0.05)。结论:对PCOS采取滋阴补阳方序贯疗法,能提高GC分泌功能,同时可以降低卵泡期SCF基因在体内的表达实现,可为PCOS排卵障碍临床治疗提供依据。     

四物合剂对化疗后大鼠卵巢形态及颗粒细胞凋亡的影响

目的:探讨四物合剂对化疗所致卵巢储备功能下降的大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响.方法:以40只雌性SD大鼠为研究对象,随机分为正常对照组(正常组)、顺铂模型组(模型组)、四物合剂组(四物组)和倍美力组,每组各10只.模型组、四物组和倍美力组连续7d腹腔注射顺铂2mg·kg-1·d-1,正常组连续7d腹腔注射等量的生理盐水,随后正常组和模型组连续7d纯净水灌胃10 mL·kg-1·d-1,四物组连续7d四物合剂灌胃1mg·kg-1·d-1、倍美力组连续7d倍美力溶液灌胃1 mg·kg-1·d-1.自实验第1天起,每日制作大鼠阴道分泌物涂片以观察大鼠动情周期;实验第14天大鼠称重、麻醉,取血清运用放免法测血中卵泡刺激素( FSH)、黄体生成激素(LH)、雌二醇(E2)和孕酮(Pro):取双侧卵巢,同侧切片后常规HE染色,图像分析仪下进行颗粒细胞层最大厚度的显微测量,并运用原位细胞死亡检测法检测颗粒细胞凋亡情况.结果:与正常组比较,模型组大鼠FSH和凋亡指数均升高,差异有统计学意义(P＜0.05),同时E2值下降.与模型组比较,四物组大鼠FSH和凋亡指数降低,差异有统计学意义(P＜0 05),同时E2值升高.结论:四物合剂对化疗后大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡有一定的抑制作用,能促进卵巢功能恢复,但还不能起到完全修复的作用.     

调经活血汤对多囊卵巢大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及机制研究

目的 研究调经活血汤对多囊卵巢(PCO)大鼠的血清激素水平、卵巢质量、形态及卵巢颗粒细胞凋亡等的影响,探讨其治疗效果及作用机制.方法 大鼠造模成功后随机分成中药治疗组和对照组,观察动物体重增加幅度、血清激素水平变化情况,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)观察卵巢颗粒细胞凋亡,免疫组化法观察颗粒细胞凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax表达水平的变化.结果 治疗组动物体重增加幅度明显降低,中药治疗组血清T浓度较对照组、正常组显著性降低;血清E2较对照组明显降低;血清P水平较对照组明显升高,血清FSH、LH浓度与对照组无明显差异.中药治疗组卵巢镜下可见多个囊状扩张的卵泡,但体腔较对照组明显缩小,颗粒细胞层数增加至4～7层,并可见少量黄体形成;中药治疗组卵巢颗粒细胞凋亡率较对照组显著降低,卵巢颗粒细胞Bcl-2表达的OD值较对照组显著增高,Bax表达的OD值显著降低.结论 调经活血汤能使多囊卵巢大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白bcl-2表达明显升高,Bax表达明显降低,巢颗粒细胞凋亡率显著性降低;卵巢颗粒细胞层数增加,黄体形成增加:体重、血清T、E2激素水平明显下降,血清P激素水平明显升高,其作用可能与调节卵巢颗粒细胞上Bcl-2和Bax蛋白表达,影响两蛋白的比例关系,增加Bcl-2/Bax的比值,使Bax与Bcl-2蛋白形成异源二聚体,发挥其抗细胞凋亡的作用有关.     

哈蟆油对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌的影响

目的 建立卵巢颗粒细胞的原代培养体系,探讨哈蟆油含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞增殖及分泌的影响,并分析和选择哈蟆油含药血清对颗粒细胞的最佳作用浓度,为进一步体外实验奠定基础.方法 采用SD雌性大鼠,皮下注射孕马血清促性腺激素,剖取双侧卵巢,采用机械分离方法释放卵巢颗粒细胞,分离培养.将体积分数为15％,30％,60％,120％,240％(大鼠灌胃浓度4.5 g/kg)的含药血清5个终浓度分别加入培养体系中,通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测细胞增殖情况及药物的最大无毒浓度(TD0),观察其对卵巢颗粒细胞生长的影响.采用电化学发光法测定培养基中雌二醇(E2)的含量,分析哈蟆油合药血清对颗粒细胞雌激素分泌的影响.运用流式细胞术检测活细胞及凋亡细胞所占的比率.结果 含药血清作用颗粒细胞后,呈现出不同程度的促增殖作用,含药血清最佳的作用浓度体积分数为15％ ～30％(大鼠灌胃哈蟆油剂量为4.5 g/kg)之间;哈蟆油含药血清可促进卵巢颗粒细胞分泌雌二醇,雌二醇含量分析显示雌二醇的分泌与细胞增殖情况存在正相关关系(Person r=0.406,P=0.01);流式细胞结果显示与空白含药血清比较,哈蟆油含药血清均能显著增加活细胞数目,抑制细胞无血清饥饿引发的凋亡(P值均小于0.01),起到细胞保护作用,其中体积分数为25％的含药血清作用效果更佳(P＜0.01).结论 哈蟆油含药血清对离体培养的卵巢颗粒细胞增殖具有显著的促进作用,并存在一个最佳作用浓度范围,其调节机体性激素生成作用与促进卵巢颗粒细胞生长效应相关.     

药食两用中药复方对去卵巢大鼠血脂的调节作用

目的：探讨药食两用中药复方对去卵巢大鼠血脂的调节作用。方法：以去卵巢大鼠为动物模型，己烯雌酚片为阳性对照药物，观察该中药复方对血清TG，TC，LDLc，HDLc及HDLc／TC等值的影响。结果：与去卵巢对照组比较，中药大、小剂量组均能降低血清总胆固醇及低密度脂蛋白值，升高血清高密度脂蛋白值及HDL／TC比值，差异均有显著性（P〈0．05或P〈0．01），大剂量较小剂量作用强。结论：该中药复方能有效调节去卵巢大鼠紊乱的血脂，提示其具有防治绝经期综合征患者动脉粥样硬化或冠，心病的作用。     

仙甲颗粒对去卵巢雌性大鼠雌二醇、孕酮、泌乳素的影响

目的仙甲颗粒9．0g／kg，27．0g／kg连续给药30天，能升高去卵巢雌性大鼠血清雌二醇和孕酮，与模型组比较后者有明显差异(P(0．05)，能降低血清泌乳素值，但与模型比较无明显差异(P＞0．05)，而对脏器系数垂体、子宫等基本无明显影响。