丙烯腈对大鼠脑组织和神经胶质细胞中核因子-kB信号传导通路活性及相关基因表达的影响

目的 丙烯腈(ACN)对大鼠脑组织和大鼠神经胶质细胞中核因子KB(NF-kB)信号传导通路活性及相关基因表达的影响.方法 利用micorarray和EMSA实验测定了SD大鼠经0和200mg/kg ACN分别作用14、28和90天后,大鼠脑组织NF-kB信号传导通路活性的变化及相关基因表达的变化;大鼠神经胶质细胞经0、25、50和75μg/ml ACN作用4和24h后细胞NF-kB信号传导通路活性的变化及相关基因表达的变化.结果 ACN促进大鼠脑组织(体内)和神经胶质细胞(体外)NF-kB信号传导通路相关基因(NIK、IKK、NF-kB1、NF-KB2、IkBa和c-myc)的表达.EMSA实验也进一步证实了ACN可激活大鼠脑组织和大鼠神经胶质细胞中NF-kB信号传导通路.结论 ACN诱导的氧化应激和ACN激活NF-kB信号传导通路具有一定的关系.     

丙烯腈对大鼠神经胶质细胞凋亡、增殖及基因表达的影响

目的 研究丙烯腈(acrylonitrile,ACN)对大鼠神经胶质正常细胞(DI TNC1)和大鼠神经胶质肿瘤细胞(C6细胞)的生长、凋亡、增殖及相关基因表达的影响.方法 ACN作用于DI TNC1和C6细胞的浓度是25、50和75μg/ml,对于细胞生长、凋亡和增殖实验,作用时间是24 h;对于微点阵(microarray)试验,作用时间分别是4、24 h.结果 25、50和75μg/ml ACN作用DI TNC1后,DNA合成指数降低,分别为对照的93.1%、81.3%和74.9%,细胞凋亡指数增加,分别为对照的118%、122%和143%;C6细胞的DNA合成指数和凋亡指数在ACN作用后基本没有变化;cyclin和p53等细胞增殖和凋亡相关基因的表达也有一定的变化.结论 ACN抑制了DI TNC1细胞的增殖和促进了其凋亡,对C6细胞的凋亡和增殖没有变化.     

氟对原代培养大鼠海马细胞周期及细胞凋亡和核因子-κB表达的影响

目的 探讨氟对原代大鼠海马细胞存活、细胞周期、凋亡和核因子-κB(NF-κB)表达的影响.方法 原代培养大鼠海马细胞分别暴露于20、40和80μg/ml氟化钠24 h后,采用噻唑蓝(MTT)、流式细胞术(FCM)、逆转录PCR(RT-PCR)分别检测大鼠海马细胞存活情况、细胞周期分布、凋亡率、NF-κB表达水平.结果 与对照组比较,80 μg/ml剂量组海马细胞存活率下降(P＜0.05);40、80 μg/ml剂量组凋亡率和S期细胞百分率皆显著高于对照组(P＜0.05),各剂量组NF-κB mRNA显著高于对照组(P＜0.05).结论 一定剂量氟可抑制海马细胞存活,诱导NF-κB mRNA表达和凋亡发生.氟对发育中海马细胞NF-κB表达水平的影响可能是氟神经毒性的机制之一.     

氯化镉对小鼠脑组织氧化损伤及核因子κB表达的影响

目的探讨氯化镉(CdCl_2)对小鼠脑组织氧化损伤以及核因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、可溶性小鼠细胞间粘附分子(ICAM-1)表达的影响。方法 32只健康成年ICR雄鼠随机分为CdCl_2 2.0、1.0和0.5 mg/kg处理组及生理盐水(NS)对照组,各组经腹腔注射CdCl_2,连续14 d。末次染毒后进行旷场实验;颈椎脱臼处死取脑组织,测定活性氧(ROS)含量,ELISA法检测TNF-α和ICAM-1的表达,免疫组化及蛋白质印迹法观察脑组织NF-κB P65蛋白的表达,HE染色大脑神经病理学检查。结果随CdCl_2剂量的增加,实验动物体重增长程度下降(P<0.05),CdCl_2 2.0 mg/kg组体重增加程度显著低于其他各组(P<0.05)。在旷场实验中,CdCl_2 2.0 mg/kg组跨越格子数显著高于NS对照组(P<0.05)。CdCl_2 2.0和1.0mg/kg组小鼠脑组织中ROS水平增高(P<0.05)、CdCl_2 2.0 mg/kg组TNF-α表达增加(P<0.05),ICAM-1各组间差异无统计学意义。免疫组化结果和Western blot均提示,CdCl_2 2.0 mg/kg组NF-κB P65表达增加。病理检查发现,CdCl_2 2.0 mg/kg组大脑皮质及海马层细胞稀疏。结论镉暴露后小鼠脑组织中ROS表达增加,ROS可以激活NF-κB通路,上调炎性细胞因子TNF-α的表达。     

镧对仔鼠海马核转录因子-κB表达影响

目的探讨亚慢性氯化镧(La Cl3)暴露对子代大鼠海马组织核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法健康成年雌性Wistar大鼠24只,随机分为对照组及0.25%、0.5%、1.0%La Cl3组,染镧组仔鼠自雌鼠受孕至断乳后1个月通过自由饮水摄入镧;利用免疫组化法检测海马p-IKKα/β的分布和表达;应用Western blot法检测海马组织p-IκBα和p-NF-κBP65的表达。结果 0.25%、0.5%、1.0%La Cl3组仔鼠海马CA1区p-IKKα/β表达分别为(54.72±10.04)、(40.73±4.90)、(32.99±5.42),CA3区表达分别为(64.80±8.27)、(47.78±4.92)、(36.17±7.71),DG区表达分别为(303.67±34.78)、(166.83±29.8)、(87.01±17.40);CA1、CA3、DG区各染镧组仔鼠海马3区的p-IKKα/β表达与对照组比较,除DG区0.25%La Cl3组外其他各染镧组仔鼠海马p-IKKα/β表达均低于对照组(P<0.05);0.25%、0.5%、1.0%La Cl3组仔鼠海马p-IκBα和p-NF-κBp65蛋白表达IDV值分别为(0.58±0.06)和(0.46±0.06)、(0.49±0.07)和(0.36±0.08)、(0.36±0.09)和(0.25±0.08),均低于对照组的(0.68±0.05)和(0.56±0.08)(P<0.05),仔鼠海马p-IκBα和p-NF-κBp65蛋白表达均与La Cl3染毒剂量呈负相关(r=-0.994、-0.978,P<0.05)。结论亚慢性La C13染毒可引起子代大鼠海马细胞NF-κB活性降低,可能是镧引起学习记忆能力下降的机制之一。     

瓦斯爆炸伤对大鼠肺组织核因子κB及细胞间黏附分子-1表达的影响及意义

目的研究瓦斯爆炸伤肺组织中核因子κB（NF-κB）及细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的表达及二者之间关系.方法建立瓦斯爆炸伤大鼠模型,用地高辛标记NF-κB cDNA探针检测肺组织NF-κB mRNA的表达,用免疫组化SP法检测肺组织NF-κB及ICAM-1的表达.结果瓦斯爆炸伤后各实验组大鼠肺组织中NF-κB mRNA及其蛋白表达、ICAM-1的蛋白表达均较对照组明显增多,在伤后2h增多最明显.肺组织病理学检查显示,瓦斯爆炸伤后,部分气管黏膜上皮脱落、管壁明显充血、水肿、中性粒细胞浸润;肺泡出血、水肿、大量炎细胞浸润.电镜示Ⅱ型肺泡上皮细胞变性脱落,改变明显.结论瓦斯爆炸伤致NF-κB活化,并促进ICAM-1的表达,与急性肺损伤关系密切.     

肿瘤坏死因子-α诱导核转录因子-κB信号通路在肺纤维化分子机制中作用

尘肺是以肺组织弥漫性纤维化为主的全身性疾病,由职业活动中长期吸人生产性粉尘后在肺内潴留而引起[1].其临床表现主要有咳嗽、咯痰、胸痛、胸闷和气短等,易合并呼吸道感染、慢性支气管炎、肺心病等,最终因呼吸衰竭、心力衰竭而危及生命[2].目前对肺纤维化的研究已进入细胞、细胞因子和信号转导通路等领域.通过参与调控肺纤维化的细胞因子、效应分子,特别是干预介导肺纤维化的重要信号转导分子,将为肺纤维化的治疗提供新的策略和方法.近年来对肿瘤坏死因子(TNF)-α和核转录因子-KB (NF-κB)在尘肺发病过程中作用的研究较为深入.本文就TNF-α和NF-κB在肺纤维化形成中的作用进行综述.     

活性氧对核因子-κB和低氧诱导因子-1的调控

氧是需氧生物必不可少的基本物质.需氧细胞在代谢过程中产生的活性氧(reactive oxygen species,ROS),不仅参与细胞的凋亡、坏死;还作为信号分子,参与细胞信号转导、激活转录因子、影响基因表达,以协调应答各种氧分压变化.     

PM2.5对变应性鼻炎大鼠NF-κB信号通路的影响

目的 探究大气PM2.5对变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)大鼠核转录因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路的影响.方法 将40只SPF级雄性Wistar大鼠分为对照组、AR组、AR+PM2.5组和四氢化吡咯二硫代甲酸铵(pyrrolidin-edithioc...     

砷和香烟烟气溶液联合作用对大鼠淋巴细胞核因子κB的影响

目的 研究亚砷酸钠和香烟烟气溶液(CSS)联合作用对核因子κB(NF-κB)的影响.方法 将雄性Wistar大鼠淋巴细胞分为4组:亚砷酸钠单独作用组(亚砷酸钠:20 μml/L;CSS:0支/ml)、CSS单独作用组(亚砷酸钠:0μmol/L;CSS:0.008支/ml)、亚砷酸钠和CSS联合作用组(亚砷酸钠:20μmol/L;CSS:0.008支/ml)和对照组(均不暴露于砷酸钠和CSS),染毒后用凝胶迁移率变动分析检测NF-κB与DNA的结合水平,用免疫印迹检测其内源性抑制蛋白IκBα表达情况.结果 亚砷酸钠单独作用组、CSS单独作用组的NF-κB与DNA结合水平显著高于对照组(P＜0.05),而两者联合作用组的NF-κB与DNA结合水平却显著低于两个单独作用组(P＜0.05).亚砷酸钠单独作用组、CSS单独作用组IκBα的蛋白表达显著低于对照组(P＜0.05),而两者联合作用组IκBα的蛋白表达却显著高于两个单独作用组(P＜0.05).结论 亚砷酸钠和CSS单独作用能够增高NF-κB与DNA结合水平,而两者联合作用却使这种增高作用消失.     

核因子-κB、p53及Bcl-2在铅诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的探讨核因子κB(NFκ-B),p53及Bcl-2在铅诱导PC12细胞凋亡中的作用。方法应用细胞培养、流式细胞术、RT-PCR、Western Blot的方法分析NFκ-B、p53、Bcl-2基因的表达情况,研究醋酸铅诱导PC12细胞凋亡及其分子机理。结果PC12细胞经不同浓度醋酸铅(100、200和400μmol/L)处理24h后,用流式细胞仪检测其凋亡率(n=3),铅组凋亡率明显高于对照组,改变呈剂量依赖性。差异有显著性(P<0.05)。RT-PCR结果显示NFκ-B p65 mRNA、p53 mRNA转录水平随铅剂量升高而升高(P<0.05),两基因表达的改变呈剂量依赖性。Western Blot结果显示,表明随着铅浓度的增加,Bcl-2蛋白表达逐渐降低。结论铅诱导PC12细胞凋亡的这种效应可能与增强NFκ-B及p53基因的活性、降低Bcl-2基因的活性有关。     

甲基汞对脑神经胶质细胞凋亡及c-fos表达的影响

为探讨氯化甲基汞 (MMC)所致脑发育损伤及其与c fos表达的关系 ,采用光镜、电镜等形态学方法 ,观察了MMC对体外培养的大鼠脑神经胶质细胞的损害作用 ,并应用免疫细胞化学方法 (SP法 )观察MMC对培养神经胶质细胞c fos表达的影响。结果表明 ,体外培养的胶质细胞接触MMC后 ,出现胞浆浓缩、轴突回缩、染色质边聚、固缩等现象 ,呈凋亡的典型形态。MMC 0 0 2mmol L作用于神经胶质细胞 10min后 ,c Fos蛋白阳性细胞百分率随其后的培养时间而变化 :c Fos蛋白阳性细胞率 0 5h开始增高 ,2h达高峰 ,4～ 6h又逐渐减少。MMC 0 0 0 12 5、0 0 0 5、0 0 2、0 0 8和 0 32mmol L作用 10min后 ,0 32mmol L组的阳性率显著高于除0 0 8mmol L组外的其他各组 (P <0 0 1)。提示MMC可诱导体外培养大鼠脑神经胶质细胞c fos表达 ,并诱发其凋亡。MMC诱发神经细胞凋亡可能与c fos介导有关。     

丙烯腈对小鼠生精细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的探讨丙烯腈(AN)暴露对小鼠睾丸生精细胞Bcl-2、Bax蛋白表达水平的影响。方法将250只成年健康SPF级昆明种雄性小鼠,按体重随机分为阴性对照组、3个AN染毒组和阳性对照组,阴性对照组用生理盐水,各染毒组分别以1.25、2.50、5.00mg/kg AN腹腔注射(注射剂量为0.01ml/g BW),每天1次,连续5天,阳性对照组注射环磷酰胺40mg/kg一次。分别于首日染毒后的第7、14、21、28和35天采用颈椎脱臼法处死小鼠,采用免疫组织化学法(SABC)检测生精细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果 5个观察时间点AN 2.50mg/kg组和21天AN 1.25mg/kg组Bcl-2平均光密度值均显著低于阴性对照组(P<0.05);除21天AN 1.25mg/kg组外,所有观察时间点AN各染毒组Bax平均光密度值均显著高于阴性对照组(P<0.05)。Bcl-2在中剂量组和阳性对照组各观察时间点降低幅度均较大;Bax在各剂量组的不同时间点均以14天时升高幅度最大。结论 AN可诱导生精细胞Bcl-2蛋白表达减弱,以AN 2.50mg/kg组最为显著;同时可诱导生精细胞Bax蛋白表达增强,以14天时变化幅度较明显。     

β-Hydroxy-β-methylbutyrate supplementation reduces tumor growth and tumor cell proliferation ex vivo and prevents cachexia in Walker 256 tumor-bearing rats by modifying nuclear factor-κB expression

Cancer cachexia syndrome contributes to wasting and weight loss leading to inefficacy of anticancer therapy. In this study, the anticatabolic agent β-hydroxy-β-methylbutyrate (HMB) was supplemented to adult Walker 256 tumor-bearing rats during 8 weeks aiming to determine if tumor burden could be reduced. Male Wistar rats were randomly assigned to nontumor and tumor-bearing groups and fed regular chow or regular chow plus HMB supplemented (76 mg/kg body weight). β-Hydroxy-β-methylbutyrate supplementation induced a lower tumor weight and tumor cell proliferation ex vivo, totally prevented glycemia reduction, as well as blunted the increase in the serum lactate concentrations and also preserved glycogen stores in tumor-bearing rats. Reduction in tumor cell proliferation ex vivo was accompanied by increased nuclear factor-κB inhibitor-α content by more than 100%. In contrast, nuclear factor-κB p65 subunit content was suppressed by 17% with HMB supplementation. In conclusion, HMB supplementation, at a similar dose used in humans to increase muscle mass, caused antitumor and anticachectic effects, with tumor-cell nuclear factor-κB pathway participation, which might be a potential nutritional strategy in cancer therapy.     

雌二醇对溴氰菊酯染毒胶质细胞EAAs释放影响

目的　以原代培养的神经胶质细胞为研究对象 ,观察溴氰菊酯对胶质细胞兴奋性氨基酸 (EAAs)释放的影响 ,并探讨内分泌激素雌二醇对溴氰菊酯作用的影响。方法　高效液相色谱 (HPLC)检测不同水平 17β -雌二醇(10 -5、10 -8、10 -11mol/L)对 2× 10 -5mol/L溴氰菊酯染毒大鼠原代神经胶质细胞兴奋性氨基酸释放的影响 ,并观察雌激素受体拮抗剂Tamoxifen对雌激素有无拮抗作用。结果　 2× 10 -5mol/L溴氰菊酯可增加大鼠原代胶质细胞谷氨酸 (Glu)释放 ,释放增加率为 82 0 3% ;10 -8mol/L17β -雌二醇可部分抑制溴氰菊酯所致Glu释放增加 ,抑制率为37 77% ;Tamoxifen对雌二醇的作用并无干扰。结论　 17β -雌二醇对溴氰菊酯所致Glu释放增加表现出一定保护作用     

氯化甲基汞对发育阶段大鼠脑核因子kappaBDNA结合活性的影响

为探讨氯化甲基汞 (MMC)对发育大鼠脑组织核因子 kappa B(NF- k B) DNA结合活性的影响 ,采用凝胶移位法可见发育大鼠的大、小脑核蛋白提取物与 k B探针结合 ,对照和实验组均有 2条结合带。出生后 3天大鼠的大、小脑核蛋白提取物中 NF- k B DNA结合活性高于出生后 7天者。提示在发育大鼠脑中 NF- k B对发育起一定作用。宫内接触 MMC后出生 3和 7天的大脑核蛋白提取物中 NF- k B 和 NF- k B DNA结合活性低于对照组 ,而小脑中的 NF- k B 和 NF- k B DNA结合活性则高于对照组。在体外结合反应体系中 ,随着 MMC剂量的增高可增强大、小脑核蛋白提取物中 NF- k B DNA结合活性。提示接触MMC后大、小脑神经细胞反应能力不同 ,小脑中 NF- k B被激活。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤GDNF表达水平的动态变化及托吡酯调控机制的实验研究

[目的]探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)后胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)表达水平的动态变化及不同剂量托吡酯(topamax,TPM)干预对其表达的影响和机制. [方法]120只新生7日龄大鼠随机分为假手术组(I)、单纯缺氧缺血组(II)及[50(Ⅲ)、100(IV)、150 mg/kg(V)]TPM治疗组,建立HIBD动物模型,应用HE染色、免疫组织化学等方法,观察HIBD后不同时期脑组织病理学变化,GDNF的动态表达变化及TPM不同给药剂量对其表达的影响. [结果]①Ⅲ、Ⅳ、V组脑组织损伤较Ⅱ组明显减轻,其减轻程度与用药剂量呈正相关.②GDNF的表达于缺氧缺血后12 h出现,3 d达高峰;Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组GDNF在各时相点上的增加较Ⅱ组差异有显著性(各时相点相比P值均＜O.05),Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组之间GDNF的增加有显著性(各时相点相比P值均＜O.05). [结论]①HIBD后GDNF表达变化存在一定的时序性规律;②TPM对神经元的保护作用与剂量呈正相关;③TPM脑保护作用机制之一通过增加胶质细胞分泌GDNF实现.     

丙烯腈对小鼠生精过程的影响

目的　探讨丙烯腈对雄性小鼠生精过程的影响。方法　用腹腔注射染毒的方法 ,对 5 0只雄性未成年小鼠及 2 5只成年小鼠分别给丙烯腈 1 2 5、2 5、5mg kg ,染毒 5天 ,于初次染毒后 35天处死动物 ,应用流式细胞术检测睾丸生精细胞DNA含量及细胞周期的变化。结果　 (1)染毒组未成年小鼠的单倍体细胞 (1C)的百分含量与阴性组比较有减少 ,但无统计学差异 ;染毒组成年小鼠的单倍体细胞 (1C)百分含量与阴性组比较有减少 (P <0 0 5 ) ;成年和未成年小鼠的凋亡细胞的百分含量与阴性组比较有增加 (P <0 0 5 )。 (2 )细胞周期分析显示 ,染毒组未成年小鼠的S期细胞比例增加 (P <0 0 5 ) ,G0 G1 期细胞比例减少 (P <0 0 5 ) ;染毒组成年小鼠的G2 M期细胞比例增加 (P <0 0 5 ) ,G0 G1 期细胞比例减少 (P <0 0 5 )。结论　丙烯腈对雄性小鼠的生精过程有抑制作用。