MOLECULAR COLNING AND SEQUENCE ANALYSIS OF THE IMMUNOGLOBULIN LIGHT

获得抗体的可变区基因是由鼠源性ＭｃＡｂ制备重组抗体的前提，本实验合成 与轻链可变区ＦＲ１和ＦＲ４互补的通用引物，由分泌抗人Ｃ１－ＩＮＨＭｃＡｂ的杂交瘤Ｆ７细胞株提取总ＲＮＡ，经ＲＴ－ＯＰＣＲ扩增出Ｆ７ＶＬ的ｃＤＮＡ片段，并将其克隆入ｐＵＣ１８／１９测序载体，     

MOLECULAR CLONING AND SEQUENCE ANALYSIS OF THE IMMUNOGLOBULIN LIGHT CHAIN VARIABLE REGION GENE OF A MURINE ANTI-HUMAN C1-INH IgG

获得抗体的可变区基因是由鼠源性ＭｃＡｂ制备重组抗体的前提，本实验合成与轻链可变区（ＶＬ）ＦＲ１和ＦＲ４互补的通用引物，由分泌抗人Ｃ１－ＩＮＨＭｃＡｂ的杂交瘤Ｆ７细胞株提取总ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增出Ｆ７ＶＬ的ｃＤＮＡ片段，并将其克隆入ｐＵＣ１８／１９测序载体，从两端进行双脱氧核苷酸随机终止法的ＤＮＡ序列测定。结果显示：ＶＬｃＤＮＡ是由３０３个碱基组成，编码１０１个氨基酸残基。由国际联机检索进行ＥＭＢＬ和Ｋａｂａｔ基因库扫描发现：Ｆ７ＶＬ仅与Ｉｇ同源，符合小鼠Ｉｇ的ＶＬ基因特征，同源性为６０％～８０％。根据Ｋａｂａｔ分类方法，Ｆ７ＶＬ基因推导的氨基酸序列应归属于小鼠Ｉｇ的ＶＬ基因ＩＶ亚组，是由Ｖｋ－Ｊｋ１重排产生。ＣＤＲ３含有９个氨基酸残基，其中含３个不相同氨基酸残基，ＶＬ大多数的氨基酸变化集中在ＦＲ１和ＣＤＲ１区，Ｆ７ＶＬ符合ＩｇＶＬ氨基酸残基变化的基本特征。Ｃｙｓ２３和Ｃｙｓ８８残基位于Ｆ７ＶＬＣＤＲ１和ＣＤＲ３的起始点，与二硫键形成有关。成功获得Ｆ７ＶＬ基因为进一步构建和表达单链Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体打下了良好的基础。     

鼠抗hTNF—α单克隆抗体轻链可变区基因片段的克隆和cDNA…

目的：获得鼠抗人肿瘤坏死因子－α（ｈＴＮＦ－α）单克隆抗体轻链可变区基因序列。方法：采用反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，以一对针对鼠Ｉｇ轻链可变区（ＶＬ）基因的引物，从分泌鼠抗ｈＴＮＦ－α单克隆抗体的Ｅ６杂交瘤细胞株中扩增和克隆ＶＬ基因片段，用双脱氧链终止法测定其核苷酸序列，并进行计算机分析。结果：此ＶＬ基因长３４２ｂｐ，可编码１１４个氨基酸，为开放读框；有明确的框架区（ＦＲｓ）和抗原互补决定区     

鼠抗hTNF－α单克隆抗体轻链可变区基因片段的克隆和cDNA序列测定

目的：获得鼠抗人肿瘤坏死因子－α（ｈＴＮＦ－α）单克隆抗体轻链可变区基因序列。方法：采用反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，以一对针对鼠Ｉｇ轻链可变区（ＶＬ）基因的引物，从分泌鼠抗ｈＴＮＦ－α单克隆抗体的Ｅ６杂交瘤细胞株中扩增和克隆ＶＬ基因片段，用双脱氧链终止法测定其核苷酸序列，并进行计算机分析。结果：此ＶＬ基因长３４２ｂＰ，可编码１１４个氨基酸，为开放读框；有明确的框架区（ＦＲＳ）和抗原互补决定区（ＣＤＲＳ）；含有抗体可变区特征性的两个半胱酸残基。在基因数据库（ＥＭＢＬＧｅｎｅＢａｎｋ１９９５）中，未查见相同序列的基因。结论：此ＶＬ基因系重排的鼠Ｉｇ轻链基因。     

抗人TNF-α单抗基因的克隆及鉴定

目的克隆抗人ＴＮＦ－α鼠单抗得可变区基因以构建人－鼠嵌合抗体表达载体。方法采用ＲＴ－ＰＣＲ技术,以前导肽序列的引物从１个分泌抗人ＴＮＦ－α的鼠单抗杂交瘤细胞系中克隆抗体轻链、重链可变区基因（Ｖκ,ＶＨ）,在大肠杆菌中表达Ｆａｂ段核实其功能活性。结果分别得到了２个Ｖκ和２个ＶＨ基因。ＤＮＡ序列测定表明,其中１个轻链可变区基因为骨髓瘤细胞系中固有的无功能基因。１个重链可变区基因经原核系统表达测活表明无抗体活性。另一个轻链和重链可变区基因的成熟蛋白编码部分与从第一骨架区引物所克隆的、可在大肠杆菌表达出抗体活性的Ｖκ、ＶＨ序列相符。将该轻链、重链基因分别克隆到了人－鼠嵌合轻链、重链表达载体中。结论通过原核表达系统核实,获得了抗ＴＮＦ－α单抗的可变区基因     

鼠抗hTNF—α单克隆抗体重链基因片段的克隆和cDNA序列测定

采用反转录ＰＣＲ方法，以一对锚ＰＣＲ引物和一对针对鼠ＩｇＶＨ区基因的引物，从分泌鼠抗ｈＴＮＦ－α单克隆抗体的Ｅ６杂交瘤细胞株中，分别扩增和克隆了自５′非翻译区至Ｃγ１近３′端的重链基因片段和重链可变区基因片段，并测定了其核苷酸序列。计算机分析表明，系重排的鼠Ｉｇ重链基因。     

成纤维细胞生长因子受体1(FGFR-1)基因在人肠癌组织中的变化

为观察人ＦＧＦＲ－１基因变化与结肠癌发生的关系。采用ＲＴ－ＰＣＲ法从人肺成纤维细胞中钓取ＦＧＦＲ－１全编码区ｃＤＮＡ，用此ｃＤＮＡ探针与人肠癌及癌旁组织ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析。结果表明：与癌旁组织相比结肠癌组织Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹图谱发生了改变。提示ＰＧＦＲ－１基因变化与肠癌发生可能存在一定相关性。     

抗TNF-α人-鼠嵌合抗体的构建及表达

目的：构建和表达抗ＴＮＦ－α人－鼠嵌合抗体。方法：将抗ＴＮＦ－α鼠单抗Ｚ８的轻、重链可变区基因插入到含有人ｋ链和ＩｇＧ１重链恒定区基因的真核细胞表达载体中,分别构建轻、重链分开表达和共同表达的人－鼠嵌合抗体真核表达载体转染真核细胞,通过ＥＬＩＳＡ,ＲＴ－ＰＣＲ、免疫印迹检测ＴＮＦ－α的活性。用Ｌ９２９细胞检测嵌合抗体体外中和ＴＮＦ－α的活性。结果：ＥＬＩＳＡ鉴定结果表明该嵌合抗体与ＴＮＦ－α特异性     

成纤维细胞生长因子受体1（FGFR—1）基因成人肠癌组织中的变化

为观察人ＦＧＦＲ－１基因变化与结肠癌发生的关系。采用ＲＴ－ＰＣＲ法从肺成纤维细胞中钓取ＦＧＦＲ－１全编码区ｃＤＮＡ,用此ｃＤＮＡ探针与人肠癌及癌旁组织进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析。     

TNFR相关蛋白在信号传导中的作用

ＴＮＦ具有广泛的生物学洗性，其诱导的各种细胞反应是由细胞表面两类特异性受体ＴＮＦＲ１和ＴＮＦＲ２介导的。最近证实两类与ＴＮＦＲ信号传导相关的胞浆蛋白：①３４ＫＤ的ＴＲＡＤＤ。它与ＴＮＦＲ１的Ｃ－末端死亡区相互作用，触动ＴＮＦ的两个最重要的生物学效应（ＮＦ－ＫＢ活化和调亡）的特异性信号销链；②分子量分别为４５ＫＤ和５６ＫＤ的ＴＲＡＦ１和ＴＲＡＦ２。它们可形成异源二聚体与ＴＮＦＲ２胞浆区Ｃ－末端结合，     

足背短肌的应用解剖

本文用手术显微镜及测微器在50侧(男30、女20)成人尸体的标本上对伸(足母)短肌和伸趾短肌的形态.血供和神经支配进行解剖与测量.伸(足母)短肌的长54.8±0.90mm,宽15.90±0.44mm厚3.46±0.18mm;伸趾短肌的长65.65±1.58mm,宽19,46±0.51mm,厚3.43±0.19mm.血供主要来自跗外侧动脉,其起点处的外径1.72±0.09mm,入肌处的外径0.82±0.06mm,可游离的长度24.85±1.41mm;肌肉由腓深神经分支支配.本文还讨论了该肌瓣的临床应用及作为供体时应注意的问题.     

大鼠角膜中央区SP样、CGRP样免疫阳性纤维的起源

向角膜中央区注射ＨＲＰ后，用抗ＳＰ和抗ＣＧＲＰ抗体对三叉神经节、颈上神经节和迷走神经节进行免疫组织化学处理。结果证明：双重阳性细胞出现于三叉神经节的内侧区且集中分布于背内侧部．ＣＧＲＰ样双重阳性细胞主要分布在节的背内侧部的周边区；ＳＰ样双重阳性细胞散在于节的背内侧部的深部。两者均为圆形或椭圆形。在颈上神经节和迷走神经节内未见双重阳性细胞。     

云南正常人角膜前曲率半径的测量

测定统计了云南正常人515例(1030)眼的角膜前曲率半径,结果如下:水平经线前曲率半径为7.728±0.301mm((?)±s);垂直经线前曲率半径为7.627±0.307mm.水平经线与垂直经线间以及男女性别间的测定值存在显著差异,而同性别中左右眼间无显著差异,随年龄增大,角膜前曲率半径值呈增大趋势.     

EFFECTS OF GLUCOCORTICOIDS ON DIFFERENTIATION OF ZONA GLOMERULOSA OF FETAL ADRENAL CORTEX OF RATS

The tissue differentiation of the zona glomerulosa of the fetal adrenal cortex of rats was studied by giving experimental treatments to the fetus in vivo. A low-glucocorticoid-condition was given to the fetus by bilateral adrenalectomy of pregnant rats for removing exogenous glucocorticoids from the fetus, and by brain aspiration of the fetuses for removing the fetal pituitary gland (ACTH) and endogenous glucocorticoids. When the fetus was placed under a low-glucocorticoid-condition for the last couple of days of gestation, poor differentiation of the zona glomerulosa occurred speciflcally in the fetal adrenal cortex. The degree of the poor differentiation seemed to be proportional to the duration of the low-glucocorticoid-condition. Supplemental administration of glucocorticoids could prevent this poor differentiation of the zona glomerulosa. These results indicate that the tissue differentiation of the zona glomerulosa of the fetal adrenal cortex depends much on glucocorticoids.     

川楝素对家蝇生长发育的影响

本文通过实验室饲养研究了川楝素对家蝇(Musca     

几种实验啮齿动物精母细胞联会复合体的初步观察

本文对实验啮齿动物豚鼠、兔、大白鼠、小白鼠(津白Ⅰ号、津白Ⅱ号和昆明种)精母细胞联会复合体进行了观察。其联会复合体基本组成是相同的,如都包括2条侧体和两侧体间的空间中的一条中体,并有较细的横丝等,但在形态上,还存在一定差异。同源染色体和其间的联会复合体,吸附于核内膜上,核内膜加厚形成板状物,其中体明显到达核膜。性泡是X染色体和Y染色体在减数分裂期间配对。小鼠核仁密切联系性泡。性泡也可紧密贴于核膜,中体上存在有数目不等的小结节。     

大鼠胸腺传入纤维在中枢内的跨节投射——CB-HRP法

本文将CB-HRP注入大鼠胸腺,研究了标记细胞在感觉神经节的分布及初级感觉终末在脊髓、脑干中的投射。结果表明:1.在双侧迷走神经结状节中有标记细胞;2.在C_1-T_5段双侧脊神经节中有标记细胞,推测这些标记细胞可能随交感神经传入,其中C_3-C_4段的投射可能随膈神经传入;3.脊髓中的标记终末,见于C_1-C_8节段,主要分布在Ⅰ层内;4.脑干中的标记终末,主要见于双侧孤束核的全长及连合核中。在疑核标记的节前神经元附近有的也可见终末分布,提示胸腺的一级传入与传出神经元间可能存在直接联系。     

改变力学环境后松质骨胞元结构的预测

松质骨是骨的重要组成部分,结构疏松、多孔,由针状、片状骨小梁组成多种胞体,其结构称为胞元结构。正常生理状态下,骨质的形成与吸收呈平衡态,骨结构稳定,当骨所处的力学环境发生变化时,骨的结构形态也随之变化。松质骨细观结构数值模拟变化的力学环境与骨结构的关系目前未见报道,本文是采用带有生理限定应力的自适应生理模型与有限元相结合的方法,在力学环境发生变化后用计算机预测松质骨胞元结构;定量的研究了松质骨胞元结构从一种优化平衡态到另一种平衡态与其力学环境的关系,模拟了松质骨胞元结构的变化与力学环境的适应性。把这种骨结构预测从宏观水平提高到细观水平。     

我国恶性疟原虫裂殖子表面蛋白MSP-2的抗原表位分析

根据我国恶性疟原虫株MSP-2基因序列,检索我国虫株MSP-2是否具有国外已鉴定的MSP-2抗原表位。结果显示,我国虫株MSP-2具有已鉴定的FC-27等位基因型可变区抗原表位STNS和DTPTATE。同时应用计算机辅助抗原表位分析技术对MSP-2进行抗原表位分析预测,并以合成肽技术鉴定了预测表位的免疫原性。抗原指数分析表明,MSP-2分子亲水性指数和侧链易曲性指数最高的区域分别位于aa153～166和aa65～72,而aa53～60可能是我国虫株特异的抗原表位。用4个合成肽进行免疫学鉴定,证实预测的表位可以诱导抗肽抗体反应,免疫血清可识别重组MSP-2和恶性疟原虫全抗原中MSP-2抗原区带,且合成肽可与我国流行区高度免疫人群免疫血清反应。由于这些表位存在于我国海南、云南、安徽株MSP-2序列中,可以作为研制我国恶性疟重组多价表位疫苗的候选抗原表位。