小鼠B7-1基因转染的黑色素瘤细胞免疫原性探讨

目的 探讨Ｂ７－１分子对肿瘤细胞免疫原性的影响。方法 将小鼠Ｂ７－１基因转染的黑色素瘤细胞（Ｂ１６－ｍＢ７．１）与野 生型及空载体转染细胞（Ｂ１６－ｗｔ和Ｂ１６－ｎｅｏ）的免疫原性在体内外进行了比较。同源淋巴细胞肿瘤细胞混合培养（ＭＴＬＣＳ）后测定淋巴增殖指数和ＣＴＬＳ活性,将Ｂ１６－ｎｅｏｐ和Ｂ１６－ｍＢ７．１细胞接种于小鼠皮下,观察肿瘤生长速度。结果 Ｂ１６ｍＢ７．１在体外刺激淋巴细胞增殖和诱     

细胞因子处理联合B7—1基因转染制备有效的肝癌疫苗

在体外用ＩＦＮ－γ和ＴＮＦ－α等细胞因子处理的Ｂ７－１表达阳性的Ｈｅｐａｌ－６，观察其对小鼠肝癌表面ＭＨＣ Ｃｌａｓｓ Ｉ和ＩＣＡＭ－１表达的调节作用和对体内外抗肿瘤免疫反应的影响。结果发现：单独Ｂ７－１基因转染的Ｈｅｐａｌ－６的致癌性消失，但仅能诱导部分细胞毒性和部分保护性免疫反应，而Ｂ７－１基因转染与细胞因子处理联合应用则能诱导强的细胞毒杀伤活性和完全的抗Ｈｅｐａｌ－６保护性免疫反应。结论Ｂ７－     

细胞因子处理联合B7—l基因转染制备有效的肝癌疫苗

在体外用IFN-Y和TNF-。等细胞因子处理B7-1表达阳性的Hepal-6,观察其对小鼠肝癌表面MHC Class Ⅰ和ICAM-1表达的调节作用和对体内外抗肿瘤免疫反应的影响。结果发现:单独B7-1基因转染的Hepal-6的致瘤性消失,但仅能诱导部分细胞毒性和部分保护性免疫反应,而B7-1基因转染与细胞因子处理联合应用则能诱导强烈的细胞毒杀伤活性和完全的抗Hepal-6保护性免疫反应。结论B7-1共刺激分子在小鼠肝癌的表达是激活抗肿瘤免疫所必需的但不充分,而B7基因转染联合IFN-7等细胞因子处理能诱导彻底的抗肿瘤免疫反应。     

腺病毒介导入B7—1基因对肝癌细胞免疫原性的影响

目的 研究同时含人ｐ５３、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｂ７－１、ＩＬ－２基因的重组腺病毒载体Ａｄ－ｍｕｌｔｉｇｅｎｅｓ,对肝癌细胞免疫原性的影响。方法 应用人外周血淋巴细胞和肿瘤细胞的混合培养、外周血Ｔ淋巴细胞杀伤活性试验,分析导入目的基因的人肝癌细胞免疫原性的变化。结果 导入Ａｄ－ｍｕｌｔｉｇｅｎｅｓ的肝癌细胞系ＨｅｐＧ２、ＢＥＬ－７４０２,体外能刺激正常人外周血Ｔ淋巴细胞的增殖,并能增强Ｔ淋巴细胞的杀瘤细胞活性,加入ＩＬ－１２有协同增强作用。结论 肝癌细胞导入含Ｂ７－１基因的Ａｄ－ｍｕｌｔｉｇｅｎｅｓ后,其免疫原性得到增强。     

B7-1和B7-2基因转染神经母细胞瘤细胞免疫原性的研究

目的比较免疫共刺激信号B7-1和B7-2以腺病毒为载体转染神经母细胞瘤（NB）SH-SY5Y细胞株,观察其对肿瘤细胞免疫原性的影响。方法以携带绿色荧光蛋白的腺病毒质粒（Ad-GFP）转染SH—SYSY细胞,通过流式细胞仪（FCM）判断转染效率,确定合适的感染倍数（MOI）。分别以空病毒质粒（Ad）及携带B7-1或B7-2的腺病毒质粒转染SH-SYSY细胞,即对照组和B7-1或B7-2组;并以未转染的肿瘤细胞为空白对照（空白组）。采用流式细胞仪（FCM）检测B7-1分子和B7-2蛋白表达,Ficoll密度梯度离心法直接分离和纯化外周血单个核细胞,分别以效靶比5∶1和10∶1进行混合淋巴细胞培养后,测定放射性核素闪烁计数（cpm）/min,同时检测上清液中细胞因子IFN-γ及IL-2的分泌水平。结果腺病毒对SH-SY5Y细胞有较高的转染效率,转染后目的基因B7-1和B7-2得到了有效表达。B7-1组、B7-2组cpm值及上清液IFN-γ、IL-2水平明显高于Ad组、SH组（P〈0.01）;B7-1组与B7-2组比较,cpm值及细胞因子水平增高无明显差别（P〉0.05）。效靶比5∶1时,与10∶1相比,cpm值及IFN-γ、IL-2含量的增加更明显（P〈0.05）。结论 B7-1和B7-2分子可促进T淋巴细胞的增殖及活化T细胞分泌IFN-γ、IL-2,而B7-1与B7-2两组间cpm值及细胞因子水平无明显差别。     

B7／CD28和ICAM—1／LFA—1共刺激信号对T及B细胞功？…

目的 研究共刺激途径Ｂ７／ＣＤ２８和ＩＣＡＭ－１／ＬＦＡ－１对Ｔ细胞活化以及Ｂ细胞效应的作用。方法 在体外建立ＡＰＣ：Ｔ：Ｂ细胞反应系统,用Ｂ７－１单抗和ＩＣＡＭ－１单抗分别阻断Ｂ７／ＣＤ２８和ＩＣＡＭ－１／ＬＦＡ－１共刺激途径,利用＾３Ｈ－ＴｄＲ法检测Ｔ细胞增殖,ＥＬＩＳＡ法测定Ｂ细胞分泌的杭体,用ＲＴ－ＰＣＲ法检测细胞因子基因的表达。结果 Ｂ７－１单抗和ＩＣＡＭ－１单坑均可抑制Ｔ细胞增殖及ＩＬ     

多发性硬化患者B淋巴细胞B7-1、B7-2的表达及临床意义

多发性硬化 (Ｍｕｌｔｉｐｌｅｓｃｌｅｒｏｓｉｓ,ＭＳ)病因及发病机制至今未明 ,我们选择抗原提呈细胞Ｂ淋巴细胞 ,观察其Ｂ7分子表达 ,探讨ＭＳ患者免疫学发病机制。研究对象为 45例ＭＳ患者 ,男性 2 3例 ,女性 2 2例 ,年龄 2 0～ 42岁 ,平均 32 .5± 9.1岁 ,病程 2月～ 11年 ,平均病程2 .18年 ,标准 :依据Ｐｏｓｅｒ诊断标准为临床确诊的ＭＳ患者 ,其中活动期 (ａｃｔｉｖｅＭＳ ,ＡＭＳ) 2 5例 ,稳定期 (ｓｔａｂｌｅＭＳ ,ＳＭＳ)2 0例。所有患者在测定Ｂ淋巴细胞表面Ｂ7分子前 2月内未用免疫抑制剂或激素。对照组为 2 0例健康献血员…     

B7-1分子诱导体外抗肝癌免疫反应

目的：了解Ｂ７分子在体外抗肝癌免疫中的作用。方法：健康人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）与ＨｅｐＧ２／ｈＢ７－１，ＨｅｐＧ２／ｎｅｏ及亲代ＨｅｐＧ２瘤苗混合培养（ＭＬＴＣ），检测淋巴细胞活化增殖能力，淋巴细胞ＨＬＡ－Ｉ类抗原的表达，培养上清ＩＦＮ－γ水平，ＴＮＦ活性及ＬＡＫ，ＣＴＬ细胞活性。结果：ＨｅｐＧ２／ｈＢ７－１瘤苗促淋巴细胞增殖最高达１４．６倍，明显高于ＨｅｐＧ２／ｎｅｏ和ＨｅｐＧ２瘤苗的作用     

B7家族的新成员—B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-DC

T细胞的活化需要TCR与抗原肽-MHC的第一信号，以及共刺激因子的第二信号系统。B7家族是重要的共刺激分子，属于免疫球蛋白家族。除B7-1和B7-2外，近几年又发现了B7家族的新成员——B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-DC等，与T、B细胞的活化及免疫应答等有关。深入研究B7家族成员的结构和作用机制，有助于T、B细胞活化机制以及免疫耐受、肿瘤免疫研究的深入和发展。     

B7—1基因修饰的肿瘤细胞疫苗抗肿瘤的实验研究

目的：研究B7-1基因修饰的肿瘤细胞作为瘤苗的抗肿瘤作用。方法：通过逆转录病毒载体。将小鼠B7-1基因导入EL-4淋巴瘤细胞中,研究EL-4/B7-1在同系C57BL/6小鼠中的成瘤性及其诱导抗肿瘤免疫的效果。结果：转B7-1基因诱导了CD80的高表达,EL-4/B7-1细胞在小鼠中的成瘤性下降,在肿瘤生长的早期对实验性荷瘤小鼠进行治疗。基因修饰的瘤苗作用明显增强,EL-4/B7-1细胞能有效地保护野生型肿瘤细胞的攻击,射线灭活的EL-4/B7-1瘤苗作用减弱。结论：B7-1基因修饰的肿瘤疫苗可诱导体内的抗肿瘤免疫反应,导致肿瘤的部分根除,为基因修饰的肿瘤疫苗的临床应用提供了实验依据。     

B7—1（CD80）基因的克隆及其在小鼠黑色素瘤细胞中的表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ技术从人Ｂ淋巴瘤细胞系Ｒａｊｉ中克隆到Ｂ７－１（ＣＤ８０）ｃＤＮＡ，并经测序证实，将其插入至真核表达载体ｐＬＸＳＮ中，用脂质体转染小鼠黑色素瘤细胞Ｂ１６，Ｇ４１８筛选，并经流式细胞仪检测，得到了细胞表面表达Ｂ７－１的重组克隆。ＰＣＲ从其基因组ＤＮＡ中扩增到Ｂ７－１基因，提示Ｂ７－１ ｃＤＮＡ已整合至宿主细胞的基因组ＤＮＡ中，本文为研究Ｂ７－１在肿瘤免疫中所起的作用奠定了基础。     

B7H1在胰腺癌panc-1细胞的表达及其功能研究

目的:探讨胰腺癌细胞株panc-1中B7同源物1(B7H1)的表达及其对T细胞增殖活化的调节作用。方法:分别应用RT-PCR和流式细胞术检测B7H1在γ-干扰素(IFN-γ)处理或B7H1小干扰RNA(siRNA)转染前后panc-1细胞中的表达。采用植物血凝素(PHA)刺激人外周血T细胞体外增殖,加入IFN-γ处理或B7H1-siRNA转染前后panc-1细胞混合培养72 h,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测T细胞的增殖,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测共培养上清中的IFN-γ、白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-10(IL-10)的分泌。结果:panc-1细胞组成性表达B7H1。IFN-γ处理可以显著上调B7H1表达,抑制共培养T细胞的增殖和IFN-γ、IL-2分泌,但是促进IL-10的分泌。相反,应用B7H1-siRNA阻断B7H1表达后则显著促进T细胞增殖和IFN-γ、IL-2的分泌,但下调IL-10的分泌。结论:B7H1分子在体外通过抑制T细胞增殖和Th1类细胞因子分泌来下调T细胞功能。应用siRNA技术阻断B7H1有望成为治疗胰腺癌的新途径。     

人B7—1分子对小鼠淋巴细胞活化的辅助刺激作用

本文用脂质体法将人Ｂ７－１基因导入小鼠前胃癌细系ＦＣ及人白血病细胞系ＨＬ６０，获得了稳定高效表达Ｂ７－１分子的ＭＦＣ和ＨＬ６０克隆（分别命名为Ｂ７和ＨＬ６０－Ｂ７）。在ＭＦＣ－Ｂ７及ＨＬ６０－Ｂ７刺激鼠脾淋巴细胞的增殖实验中，野生型肿瘤细胞中只能引起微弱的增殖反应，而转染Ｂ７－１分子的肿瘤细胞能非常显著刺激脾细胞的增殖（Ｐ＜０．００１）。这种效应能被抗Ｂ７－１单抗所阻断。结果表明人Ｂ７－１分子能为鼠淋巴细胞的活化增殖提供辅助刺激信号。     

IL—12和B7—1协同抗肿瘤作用和疫苗效应的研究

研究了IL-12和B7-1基因导入小鼠EL-4胸腺瘤细胞后在小鼠体内诱导的协同抗肿瘤免疫作用。方法将逆转录病毒载体重组的小鼠IL-12,B7-1基因表达质粒分别导入小鼠EL-4胸腺瘤细胞,利用转基因细胞治疗小鼠观察其抗肿瘤免疫效果。结果转基因细胞的肿瘤原性较EL-4/Wt和EL-4/Neo组明显降低(P<0.001)。同时免疫原性明显增强,以     

B7/CD28和ICAM-1/LFA-1共刺激信号对T及B细胞功能影响的研究

目的　研究共刺激途径Ｂ７／ＣＤ２８ 和ＩＣＡＭ１／ＬＦＡ１ 对Ｔ 细胞活化以及Ｂ 细胞效应的作用。方法　在体外建立ＡＰＣＴＢ 细胞反应系统, 用Ｂ７１ 单抗和ＩＣＡＭ１ 单抗分别阻断Ｂ７／ＣＤ２８ 和ＩＣＡＭ１／ＬＦＡ１ 共刺激途径, 利用３ ＨＴｄＲ 法检测Ｔ 细胞增殖,ＥＬＩＳＡ 法测定Ｂ 细胞分泌的抗体, 用ＲＴＰＣＲ 法检测细胞因子基因的表达。结果　Ｂ７１ 单抗和ＩＣＡＭ１ 单抗均可抑制Ｔ 细胞增殖及ＩＬ２ 的产生。Ｂ７１ 单抗可下调Ｂ 细胞抗体的产生（ Ｐ＜ ０ ．０５） , 而ＩＣＡＭ１ 单抗未见明显的抑制（ Ｐ＞ ０ ．０５） 。Ｂ７１ 单抗和ＣｓＡ 联用能阻断Ｔ 细胞增殖活性及Ｂ 细胞的效应, 而ＩＣＡＭ１ 单抗和ＣｓＡ联用则无此作用。Ｂ７１ 单抗能下调ＩＬ２ 和ＩＦＮγｍ ＲＮＡ 表达,Ｂ７１ 单抗和ＣｓＡ 联用则阻断ＩＬ２ 和ＩＦＮγｍ ＲＮＡ 表达,ＩＬ４ 和ＩＬ１０ ｍ ＲＮＡ 仍可表达。结论　Ｂ７／ＣＤ２８ 和ＩＣＡＭ１／ＬＦＡ１ 共刺激途径在Ｔ 细胞活化中具有不同的作用,Ｂ７１ 单抗和ＣｓＡ 联用可导致Ｔ 细胞功能失活即无能。     

B7家族的新成员-B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-DC

T细胞的活化需要TCR与抗原肽-MHC的第一信号,以及共刺激因子的第二信号系统.B7家族是重要的共刺激分子,属于免疫球蛋白家族.除B7-1和B7-2外,近几年又发现了B7家族的新成员--B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-DC等,与T、B细胞的活化及免疫应答等有关.深入研究B7家族成员的结构和作用机制,有助于T、B细胞活化机制以及免疫耐受、肿瘤免疫研究的深入和发展.     

EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞系中通过NF-κB、AP-1促进IL-8分泌

目的：探讨EB病毒LMP1分子致瘤机制，在已证实鼻咽癌细胞系中LMP1有效激活NF－κB 或AP－1的基础上，对LMP1是否通过NF－κB 或AP－1促进IL－8分泌进行探讨。方法：以稳定表达LMP1及其3种突变体，空白载体的鼻咽癌细胞系[HNE2-LMP1,NHE2-MLP1(1-185),HNE2-LMP1(1-231),HNE2-LMP1Δ187-351和HNF3－pSG5]及antisense-LMP1处理的HNF2－LMP1鼻咽癌的细胞系为材料，将IL－8报道质粒瞬时导入这些细胞系中，通过测定luciferase值以反映LMP1是否促进IL－8转录；将mut AP-1/IL-8-luc或IκB α（S32A／S36A）表达质粒导入HNE2－LMP1细胞系中，比较其IL－8报道活性，以确定LMP1是否通过AP－1或NF－κB 诱导IL－8转录；利用ELISA方法测定HNE2－LMP1，HNE2－pSG5,anti-sese-LMP1处理的HNE2－LMP1鼻咽癌细胞系中的IL－8浓度，进一步从蛋白水平上确定LMP1是否促进IL－8分泌。结果：与HNE2－pSG5相比，在HNE2－LMP1，HNE2－LMP1Δ187－351和HNE2－LMP1（1－231）细胞系中IL－8报道活性分别升高了原来水平的11．5，8．6和3．4倍，而HNE2－LMP1（1－185）对IL－8报道活性不影响。在HNE2－LMP1细胞系中IL－8蛋白水平提高了17．4倍，而antisense-LMP1则使HNE2－LMP1细胞的IL－8报道活性及蛋白水平分别下降到原来水平的18．3％和9．2％，导入mutAP-1/IL-8-luc或IκBα（S32A／S36A）的HNE2－LMP1细胞中IL－8报道活性分别下降到原有水平39％和26％，结论：鼻咽癌细胞系中LMP1可能通过NF－κAP－1促进IL－8表达。     

B7家族PD-L1和B7-H4的研究进展

“协同刺激信号”的提出很好地解释了免疫系统对自身和外源性抗原的不同调节机制.B7家族作为唯一能从抗原提呈细胞传递信号给T细胞的共刺激分子,其与相应配体结合在调节免疫反应、炎症及癌症中都起着重要作用.对于B7家族成员在免疫反应中的调节机制仍然不甚清楚,本文综述了程序性死亡配体1(PD-L1)、B7-H4的生物学功能及其与疾病的关系.     

共刺激分子B7-1与IL-6协同诱导T细胞活化的研究

目的：探讨Ｂ７－１单独或者与ＩＬ－６联合体外诱导Ｔ细胞活化的能力。方法：在混合淋巴细胞肿瘤细胞培养（ＭＬＴＣＳ）后,测定淋巴细胞增殖指数和ＣＴＬ杀伤活性。结果：Ｂ７－１＾＋的Ｂ１６细胞能够较有效地刺激淋巴细胞增殖,诱导特导ＣＴＬ杀伤活性,当与ＩＬ－６结合时效更加显著。结论：Ｂ７－１基因在肿瘤细胞中表达可增强其免疫原性在体外有效诱导Ｔ细胞活化;在此过程中ＩＬ－６与Ｂ７－１分子存在协同效应。     

mB7-1转染大鼠卵巢癌细胞诱导细胞免疫应答及体内致瘤性研究

为探讨转染mB7 1基因大鼠卵巢癌细胞系后体外诱导细胞免疫应答及其致瘤性 ,我们以逆转录病毒为载体将mB7 1基因转染入大鼠低分化卵巢上皮癌细胞株NuTu 19中 ,流式细胞仪检测mB7 1的表达。用同源淋巴细胞肿瘤细胞混合培养实验 (MTLCs)测定淋巴细胞增殖指数 ,MTT法检测细胞毒淋巴细胞的增殖及其杀瘤活性。将NuTu 19/Neu、NuTu 19/mB7 1细胞分别接种于同源大鼠Fischer344皮下 ,观察mB7 1修饰的肿瘤细胞在动物体内的致瘤性。结果显示 ,mB7 1基因成功地转染入大鼠低分化卵巢上皮癌细胞株NuTu 19,流式细胞仪测定mB7 1基因呈阳性表达。NuTu 19/mB7 1体外刺激脾淋巴细胞增殖能力明显高于对照组细胞 (P <0 0 5 )。NuTu 19/mB7 1体外诱导的CTL较对照组对NuTu 19细胞的杀伤率显著增高 (P<0 0 1)。两种细胞体外增殖能力无明显改变 ,NuTu 19/mB7 1组在Fischer344大鼠体内成瘤时间明显晚于对照组 (P <0 0 5 )。由此可见 ,mB7 1基因修饰的鼠卵巢癌细胞可体外诱导细胞免疫应答 ,接种动物后 ,实验瘤苗的致瘤性下降