抗乙型肝炎核心抗体独特型抗体[抗(抗-HBc)Id]的研究——Ⅰ.兔抗鼠单克隆抗-HBc独特型的研究

本文用小鼠单克隆抗HBcIgG及其Fab片段免疫家兔制备出了特异性的抗独特型抗体(抗Id),抗Id针对的部位与抗体的抗原结合位点密切相关。应用这种抗Id在同种小鼠的抗-HBc中检出了交叉反应独特型(Idx),而在人、猴、马、豚鼠和鸡,鸽的抗-HBc血清中未能检出相应的Idx。我们的研究还表明用IgG Fab片段来免疫制备抗Id较用IgG全分子效果好。此外,我们建立了两种特异检测抗Id的ELISA方法,应用它们可以排除抗同种型和同种异型抗体的干扰,对免疫过程中动物产生抗Id的水平进行观察。     

抗人Id3蛋白多克隆抗体的制备及其在肿瘤细胞内的定位研究

目的:表达及纯化重组人分化抑制因子3(Id3)蛋白,制备兔抗人Id3多克隆抗体。方法:在大肠杆菌BL21(DE3)中表达并纯化重组人Id3融合蛋白,以纯化Id3重组蛋白为免疫原,免疫新西兰家兔,制备兔抗人Id3多克隆抗体,通过亲合层析实验去除抗血清中非特异性成分,免疫双向扩散、间接ELISA及Western blot法检测抗体效价和特异性。用间接免疫荧光试验(IFA)对人乳腺上皮癌细胞(MCF7)、人前列腺癌细胞(PC-3M)、人肺腺癌细胞(A549)细胞内Id3表达进行定位研究。结果:SDS-PAGE电泳、Western blot分析证实,表达载体Id3/pET-32a在大肠杆菌BL21中经诱导可大量表达His-Tag Id3融合蛋白;表达产物通过镍离子亲和层析法纯化得到相对分子质量(Mr)为34 000的Id3融合蛋白;Id3重组蛋白免疫家兔获得的抗血清效价分别为1∶8(双向扩散)和1∶8 000(ELISA),Western blot分析表明抗体具有抗人Id3的良好特异性。IFA结果发现,A549细胞内Id3表达量很低;在MCF7和PC-3M细胞内,Id3呈高水平表达,且主要定位于核浆。结论:重组人Id3蛋白的表达纯化及抗人Id3多克隆抗体的研制为进一步研究该蛋白的功能及其临床应用研究提供了有利工具。     

单克隆的抗-HBs在同系鼠体内诱导抗-HBs的观察

作者采用BALB/c鼠的抗-HBs单克隆抗体(Ab_1)作为抗原,免疫同系BALB/c小鼠,使其在自身体内产生Ab_2,观察了由Ab_2诱导的Ab_3的消长情况。经测定其血清,免疫小鼠在第7天出现Ab_2,随后第9天、第19天出现Ab_2的显著增高。Ab_3的出现是在第9天,随后在第11天,第17天和第21天出现增高现象。Ab_2与Ab_3的量的变化,呈周期性消长。一般说来,当Ab_2增高时,Ab_3减低;若Ab_2降低,则Ab_3增高。实验过程中,还发现Ab_3能与外界进入体内的HBsAg结合。上述实验中出现的Ab_2和Ab_3之间的相互刺激和相互中和的现象,表明是小鼠体内自身的抗个体型抗体的调节作用的结果,因而出现了上述周期性的动态变化,支持体内存在着一个个体型——抗个体型免疫网络的理论,本文依据实验事实,认为传统的被动免疫方法,在一定条件下,也能诱导出主动免疫。     

带有HBsAg表位内影像的单克隆抗独特型抗体的建立和鉴定

本文采用鼠单克隆抗-HBs(Ab_1)作抗原免疫同系鼠,取免疫鼠的脾细胞与SP_2/0骨髓瘤细胞融合,经过反复筛选、克隆化获得两株(B_3,C_2)持续分泌单克隆的抗独特型抗体其(Ab_2)。对其中之一B_3作了深入鉴定。B_3的Ig类型为IgG,亚类为IgG_2a。核型分析结果染色体数为106条。通过ELISA抑制试验对B_3进行鉴定,发现B_3一方面能与纯化HBsAg发生阳性的竞争性抑制,另一方面又能与不同来源的抗-HBs发生结合,出现阳性的中和抑制。无论竞争性抑制还是中和抑制,都呈现剂量依赖关系。将B_3Ig免疫同系鼠,经一次免疫后就能诱导出具有抗-HBs活性的抗-抗-独特型抗体(Ab_3)。以上结果表明:B_3株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗独特型抗体是带有HBsAg表位内影像的单克隆抗体。并对B_3Ig的可能应用意义进行了讨论。     

用SP2/0瘤细胞核或DNA免疫同系小鼠诱导抗核抗体的产生

用SP2 / 0瘤细胞核或DNA分别免疫Balb/c小鼠均可获得IgG抗dsDNA、抗组蛋白、抗Sm、抗SS A/SS B等抗核抗体 ,类似于ConA活化的淋巴细胞的DNA免疫 ,而正常Balb/c小鼠的DNA不能诱导出抗核抗体。实验表明肿瘤细胞的DNA类似于活化细胞的DNA具有免疫原性 ,且能表位扩展到其他核成分     

小鼠抗—HBs的单克隆抗独特型抗体杂交瘤细胞系的建立及鉴定

用纯化的小鼠单克隆抗-HBs(Ab1)免疫同系BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓细胞融合,获得两株(MA1、MA3)持续分泌抗-HBs的单克隆抗独特型抗体(抗-1d,Ab2)杂交瘤细胞系。对MA3做了较全面的鉴定。MA3的Ig类型为IgM,核型分析结果染色体数为106条。通过ELISA竞争抑制和中和抑制试验表明,MA3所分泌的Ab2既能被不同来源的抗-HBs所中和,又能被HBsAg所竞争,且都呈现剂量依赖关系。将纯化的MA3 IgM免疫同系小鼠,诱导出具有抗-HBs活性的抗-抗-独特型抗体(Ab3)。因此认为MA3所分泌单克隆抗体(McAb),可模似HBsAg,具有类似HBsAg的免疫原性,是一种带有HBsAg表位内影像的抗-HBs的单克隆抗-1d。     

乙型肝炎病毒单克隆表面抗体的抗独特型抗体的制备与免疫效果

用乙型肝炎病毒单克隆表面抗体免疫新西兰兔制备抗独特型抗体，经小鼠γ球蛋白－ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ免疫亲和柱纯化后，用ＥＬＩＳＡ鉴定，结果表明特异性良好。以此抗独特型抗体免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，引起抗－ＨＢ＿ｓ应答，提示制备抗独特型疫苗的可能性。     

小鼠抗内质网相关的干扰素诱导病毒抑制蛋白(viperin)多克隆抗体的制备

目的 以纯化的内质网相关的干扰素诱导病毒抑制蛋白(viperin)免疫小鼠制备其多克隆抗体并鉴定其特异性。方法对BALB/c小鼠颅内注射鸭坦布苏病毒,刺激小鼠脑组织产生viperin,通过反转录PCR从小鼠大脑组织克隆viperin,并将其插入至pGEX-6P-1原核表达载体,转化至大肠杆菌Rosetta。用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)对重组蛋白诱导表达,对其进行可溶性分析,以氯化钾染色切胶法对大量表达蛋白进行纯化;将纯化的重组viperin蛋白经腹部皮下免疫小鼠制备多克隆抗体,利用间接ELISA测定多抗效价,Western blot法和间接免疫荧光法(IFA)检测BHK-21仓鼠肾成纤维细胞瞬时表达的viperin蛋白鉴定viperin抗体的特异性和敏感性。结果 成功克隆并表达小鼠viperin基因,制备的抗体效价可达1∶25 600,小鼠抗viperin多克隆抗体可特异性识别BHK-21细胞表达的viperin蛋白。结论 成功制备特异性较好的小鼠抗viperin多克隆抗体。     

氧化修饰的β2-糖蛋白-1诱导抗心磷脂抗体的产生

目的:探讨蛋白质的氧化修饰与体内抗磷脂抗体产生的关系.方法:首先,在体外以次黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶氧化系统氧化大鼠β2-GP1,然后以氧化的β2-GP1(oxβ2-GP1)免疫同种大鼠,最后以ELISA方法检测被免疫大鼠β2-GP1血清中的抗心磷脂抗体(ACA).结果:氧化的β2-GP1免疫的大鼠血清中产生高滴度的ACA.结论:β2-GP1的氧化修饰在ACA的产生上可能起十分重要的作用.     

一次融合同时获得抗独特型和抗抗独特型单克隆抗体的杂交瘤

本文在研制带有HBsAg表位内影象的单克隆抗独特型抗体的过程中,用抗-HBs单克隆抗体(Ab_1)免疫同系鼠,除筛选分泌Ab_2β的杂交瘤细胞外,还同时设计了筛选分泌Ab_3的杂交瘤。结果在一次免疫,一只免疫鼠的脾脏细胞,一次融合实验中,同时获得了分泌Ab_2β及Ab_3抗体的杂交瘤细胞株。本文报告筛选Ab_3的方法及对Ab_3所作的免疫化学鉴定。结果获得一株分泌Ab_3单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为M4。证明Ab_3具有Ab_1的特异性。这一结果不仅提示独特型网络的确在同一个体内客观存在,而且也为研制单克隆抗独特型抗体杂交瘤提供了一条简单、经济、事半功倍的经验。     

肾综合征出血热病毒(HFRSV)抗独特型抗体免疫调节初探

本文应用一株HFRSV抗独特型抗体(Ab_2)观察其对HFRSV感染BALB/c小鼠脾细胞体外增殖的影响,以及部分淋巴因子在其中的作用,旨在探讨抗独特型抗体对免疫应答的调节机理。从感染HFRSV小鼠脾细胞中分离制备单个核细胞悬液体外培养,加入不同剂量Ab_2,用~3H-TdR掺入法测定脾细胞增殖水平。结果Ab_2可明显抑制感染小鼠脾细胞在体外的增殖,并呈剂量依赖关系及具有独特型特异性。早期加入EL-4细胞上清或rHuIL-2可完全逆转此抑制作用,且具有剂量依赖和时间相关性。EL-4细胞上清含有IL-2和IL-6。对抗独特型抗体产生抑制作用的机制进行了讨论。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30诱导保护性免疫

作者应用正交设计观察了单克隆抗独特型抗体NP30主动免疫诱导的保护性免疫力。对照组接种SP2/0 腹水。实验结果表明,根据不同的免疫方案,NP30主动免疫可产生22.36％～50.46％的减虫率,并确定了最优化免疫方案。本文提示NP30主动免疫对尾蚴攻击可产生一定的保护力,具有血吸虫疫苗候选分子的潜能。     

Modulation of Cancer Patients' Immune Responses by Anti-idiotypic Antibodies

The immunomodulatory role of anti-idiotypic antibodies (Ab2) in patients with gastrointestinal cancer has been demonstrated in two types of clinical trials. In the first, cancer patients were treated with a monoclonal antibody (MAb) defining a tumor-associated antigen (Ag). MAb administration initiated an idiotypic network as demonstrated by the induction of both Ab2 and anti-anti-idiotypic antibodies (Ab3) in the treated patients. The Ab3 bound to tumor cells and isolated tumor Ag with the same specificity as the Mab (Ab1) at the beginning of the idiotypic cascade. A beneficial role of Ab3 is postulated for patients showing delayed clinical responses to MAb therapy.

In a recent trial, patients with advanced colorectal cancer responded to immunization with Ab2 that functionally mimicked in vitro and in vivo (animals) a gastrointestinal tumor-associated Ag by developing highly specific Ab3 with anti-tumor binding reactivities. Thus, Ab2 are promising agents in immunotherapy approaches to cancer. These studies suggest an immunoregulatory role for Ab2 in cancer patients. Modulation of cellular immune responses by Ab2 in cancer patients will be an important consideration in future studies.     

Antigenic Stimulation and Blocking of Pregnancy in Mice by an Anti-Idiotypic Antibody to Progesterone

PROBLEM: The present study was carried out to see if the anti-idiotypic (anti-Id) antibody (Ab2) to progesterone could mimic the immunogenicity of the steroid hormone by giving rise to antiprogesterone antibodies (Ab3) and whether these antiprogesterone antibodies (Ab3) were biologically active. METHOD: Twenty virgin female Balb/C mice were actively immunized with the anti-Id antibody (Ab2). The antiprogesterone antibody (Ab3) titres in the serum were determined and the animals were used for fertility studies. In the passive immunization studies Balb/C female mice were injected i.p. with 100 μg of anti-Id antibody to see its effect on pregnancy. RESULTS: The actively immunized animals when mated showed 80% reduction in their fertility rate. The duration of infertility (20–121 days) in these animals could be directly correlated with the concentration of antiprogesterone antibody (Ab3). The anti-Id antibody (Ab2) blocked pregnancy in 80% of the passively immunized mice. CONCLUSION: The studies show that anti-Id antibody to progesterone could mimic the immunogenicity of progesterone and give rise to antiprogesterone antibodies (Ab3). The anti-Id antibody successfully blocked pregnancy in mice both after active and passive immunization.     

Antibodies to poliovirus detected by immunoradiometric assay with a monoclonal antibody

An immunoradiometric assay (IRMA) for the assay of antibodies to poliovirus antigens is described. Dilutions of the test sera or whole (finger prick) blood samples were incubated with the Poliovirus antigen bound to a solid phase and the specific antibody was detected by the addition of a mouse anti-human IgG monoclonal antibody (McAb), which was itself revealed by iodinated sheep IgG anti-mouse F(ab). We have shown that this technique is suitable for the estimation of IgG anti-poliovirus antibodies induced in children following polio vaccine. The present study shows that SPRIA provides a simple and inexpensive method for serological studies with poliovirus particularly for use in large-scale surveys.     

痢疾杆菌脂多糖抗独特型(AId)单克隆抗体的制备和鉴定

以抗宋内志贺氏痢疾杆菌(Shigella sonnei)脂多糖单克隆抗体(Ab1)为抗原,免疫同系BALB/c小鼠和异系DBA小鼠,以其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞株融合,得到16株能稳定分泌抗独特型单克隆抗体(Ab2)的杂交瘤细胞株,对其中5株抗体进行了血清学、免疫化原和免疫生物学鉴定,证明其中2株(AC1和BH8)为内影像抗独特型单克隆抗体(Ab2β)。它们能够模拟宋内菌脂、多糖抗原位点,使动物产生功能类似Ab1的抗体(Ab3),为进一步研究其作为疫苗的可行性打下了基础。