人胎盘与骨髓源性间充质干细胞体外培养及生物学特性对比

背景：组织工程修复大块组织缺损需要高浓度、大量的细胞接种,骨髓间充质干细胞是种子细胞的主要来源,但存在数量上的局限性及长期传代后细胞功能老化的问题。 目的：体外分离培养、扩增人胎盘源性间充质干细胞与人骨髓间充质干细胞,并对其生物学性状进行比较。 设计、时间及地点：细胞学体外对照观察,于2008-09/2009-02在东直门医院实验室完成。 材料：胎盘由解放军空军总医院妇产科提供,骨髓来源于健康成人献髓者。 方法：采用密度梯度离心法从胎盘中分离、纯化和传代培养人胎盘源性间充质干细胞;骨髓肝素抗凝后,采用密度梯度离心法分离、纯化和传代培养人骨髓基质干细胞。 主要观察指标：用倒置相差显微镜观察两种细胞形态及细胞生长情况,流式细胞仪分析检测第5代细胞表面标志的表达,Von Kossa染色及油红O染色检测分化能力。 结果：镜下两种细胞均为贴壁生长,形态为均一成纤维细胞样,传5代后细胞的增殖能力随传代次数的增加而有所下降,体外培养10代后细胞生长速度减慢,但人胎盘源性间充质干细胞扩增倍数较人骨髓基质干细胞平均高出两三个数量级。两种细胞具有均一的细胞表型,均表达CD29,CD44,CD166,不表达CD34,CD45,HLA-DR。两种细胞都具有成骨、成脂分化潜能,但人胎盘源性间充质干细胞分化潜能更强。 结论：人胎盘源性间充质干细胞与人骨髓基质干细胞具有相似的生物学特性,且前者具有更强的增殖能力。     

大鼠骨髓间充质干细胞体外向成骨细胞分化培养的生物学特性

背景：骨髓间充质干细胞因取材方便、对机体损伤小,是目前最为合适的骨组织工程种子细胞,但其体外培养的具体方法及生物特性仍无定论。 目的：建立一种简单有效的骨髓间充质干细胞的体外培养及成骨诱导方法,并探讨其体外培养的生物学特点。 方法：采用贴壁法分离提纯Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,传至第3代细胞后,分别在普通培养基(对照组)和成骨诱导培养基(实验组)中培养10 d,绘制细胞生长曲线。于培养第4,7,10,13,16天检测两组细胞碱性磷酸酶活性,并对细胞爬片行Von kossa染色。 结果与结论：采用贴壁法获得了均一性较好的骨髓间充质干细胞,对照组细胞生长速度明显快于实验组细胞。对照组细胞碱性磷酸酶活性明显低于实验组(P < 0.05)。实验组细胞Von kossa染色为阳性,对照组为阴性。说明贴壁筛选法是一种简单有效的骨髓间充质干细胞的分离纯化方法,骨髓间充质干细胞在体外可诱导分化为成骨细胞。     

体外培养慢性粒细胞白血病患者骨髓间充质干细胞的生物学特性

背景：课题组从胎儿骨髓间充质干细胞的培养体系中鉴定出一类贴壁细胞,已证实此类细胞在单细胞水平可以向造血及内皮细胞分化。 目的：检测骨髓间充质干细胞的生物学特性,为慢性粒细胞白血病的治疗提供相关的依据。 方法：以慢性粒细胞白血病患者骨髓为研究对象,体外培养并扩增原始间充质干细胞,检测其BCR/ABL融合基因的表达、免疫学特性和生长曲线,使用RT-PCR和FISH的方法检测其BCR/ABL融合基因的表达情况。 结果与结论：慢性粒细胞白血病患者骨髓来源的间充质干细胞呈成纤维样生长,大部分细胞处于G0/G1期,并且高表达Flk1,CD13,CD29,CD44,用RT-PCR和FISH的方法能够检测出BCR/ABL融合基因的表达。提示慢性粒细胞白血病的白血病基因转化可能发生在比造血干细胞更高的骨髓间充质干细胞水平上,对慢性粒细胞白血病的疾病起源及干细胞移植治疗有重要的意义。     

骨髓间充质干细胞的分离方法和生物学特性**

背景：骨髓间充质干细胞具有自身增殖能力强、分化范围广,能够修复损伤的功能组织及免疫调节等功能特点,具有广阔的治疗前景。骨髓间充质干细胞的分离方法众多,在不同的生长时期和不同的生长条件下具有较大的表达差异,但目前尚无统一的鉴定方法。 目的：综述骨髓间充质干细胞的分离方法及其生物学特性,并比较骨髓间充质干细胞在有或无血清,分裂增殖前后,分化和诱导前后的表达差异。 方法：应用计算机检索2003-01/2009-06中国期刊全文数据库(http://dlib.cnki.net/kns50/)相关文章,检索词为“骨髓间充质干细胞,分离,培养,分化,表型,特点”,并限定文章语言种类为中文。同时计算机检索2003-01/2009-06 Pubmed数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/PubMed)相关文章,检索词为“bone marrow mesenchymal stem cells,isolation,culture,induce,marker,characterization”,并限定文章语言种类为English。共检索到文献237篇。 结果与结论：用全骨髓培养法获得的骨髓间充质干细胞与密度梯度离心法获得的相比,CD44的阳性表达率和CD34的阴性表达率都要低一些。然而,全骨髓培养法的骨髓间充质干细胞比密度梯度离心法的骨髓间充质干细胞具有细胞活性更高,细胞增殖速度更快,细胞汇合时间更早和传代时间更短等优势,至于其他的分离方法存在耗资多、实验设备要求高等缺点。目前对骨髓间充质干细胞的分离鉴定主要依靠以下几个条件：贴壁性,细胞表面分子阳性和阴性选择标记,自身增殖能力强,具有多向分化能力。骨髓间充质干细胞在有或无血清,分裂增殖前后,分化和诱导前后具有较大的表达差异。     

骨髓间充质干细胞生物学特性及其在组织修复中的应用***☆

学术背景：骨髓间充质干细胞是具有多向分化能力的非造血多能干细胞,是细胞工程及基因治疗理想的靶细胞。 目的：综述骨髓间充质干细胞的生物学特性及其在组织修复中应用的研究进展。 检索策略：应用计算机检索PubMed1997-01/2007-07 期间相关文章，检索词为“mesenchymal stem cells, bone marrow, biological characterization，mesenchymal stem cells, bone marrow, tissue engineering”，并限定文章语言种类为English，同时检索中国期刊全文数据库2001-01/2007-03期间相关文章，检索词为“骨髓间充质干细胞，组织工程”。对资料进行初审，并查看每篇文献后的引文。纳入标准：文章所述内容应与骨髓间充质干细胞的生物学特性及其在组织修复中应用的研究进展相关。排除标准：重复研究或Meta分析类文章。共收集到313篇相关文献，26篇文献符合纳入标准，排除的287篇为内容陈旧或重复文献。 文献评价：从检索到的313篇文献中选择符合要求的相关文献26篇。符合纳入标准的26篇文献中，12篇涉及骨髓间充质干细胞的生物学特性，14篇涉及在组织修复中的研究进展。 资料综合：骨髓间充质干细胞主要存在于骨髓、软骨膜、骨膜、骨骼肌、骨小梁中，以骨髓组织中含量最为丰富。骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能，在特定的条件下能向多种细胞系分化，具有向损伤局部集中的趋化性及“局部专一诱导性分化”、免疫调节、支持造血等生物学特性，目前已广泛应用于骨和软骨、心脏、皮肤、神经系统等多种组织修复的实验及临床研究，展现出良好的应用前景。 结论：随着对骨髓间充质干细胞研究、认识的深入，其在组织修复领域将有着广阔的临床应用前景。     

人脂肪间充质干细胞的分离培养与生物学特性☆

背景：脂肪来源间充质干细胞取材于吸脂手术所获得的脂肪抽吸物,可反复取材,原料来源充足。 目的：建立一种体外分离培养人脂肪来源间充质干细胞的方法,并分析其生物学特性。 方法：采用胶原酶消化法分离获取人脂肪来源间充质干细胞并进行体外培养,倒置相差显微镜下观察细胞形态;观察分析传代第3,7,10 代细胞生长曲线;采用流式细胞仪检测传代第5 代细胞表面标志表达。取传代第4代细胞行体外成骨细胞诱导和成脂诱导,采用碱性磷酸酶染色及油红O染色鉴定。冻存传代细胞,分别于 2,6 个月后复苏,锥虫蓝染色计数复苏后细胞存活率。 结果与结论：原代细胞3 d 贴壁,6 d 后开始快速增长并形成集落,11 d左右达80%~90%融合,多呈纤维样;传代后细胞维持纤维样形态。传代细胞潜伏期24~48 h,对数增殖期三四天,对数增殖期后第五六天进入平台期。间充质干细胞表面CD34、CD14、HLA-DR 呈阴性表达,CD44、CD105、CD13呈阳性表达,HLA-ABC呈弱阳性表达。具有向脂肪细胞、成骨细胞分化的能力,冻存复苏后细胞存活率达 90% 以上,且与未冻存传代细胞具有相同的生长特性。     

全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞及其生物学特性*

背景：培养出生长状态良好、数量足够多的大鼠骨髓间充质干细胞是其作为种子细胞在组织工程等领域广泛应用的重要前提。 目的：寻求快捷有效的大鼠骨髓间充质干细胞体外培养条件,观察培养的间充质干细胞生物学特性。 方法：全骨髓法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,贴壁筛选法进行纯化,倒置相差显微镜下观察细胞形态及生长特征,免疫荧光分析细胞骨架,MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测其表面标记。 结果与结论：分离培养的细胞呈长梭形或多边形;细胞生长曲线呈S形;微丝免疫荧光染色结果显示,培养的骨髓间充质干细胞具有良好的细胞骨架系统。第3代骨髓间充质干细胞CD29、CD44、CD71、CD90均呈阳性表达,而CD13、CD34、CD45、CD133呈阴性。提示,经全骨髓贴壁法体外分离培养的细胞在形态学和细胞表面标志物表达方面具有干细胞生物学特性,经鉴定为骨髓间充质干细胞,其第3代活性最佳,可用于后续实验。     

脂肪与骨髓来源间充质干细胞生物学特性的比较☆

背景：近几年来脂肪来源的间充质干细胞因其取材容易也被广泛研究。 目的：比较脂肪来源和骨髓来源间充质干细胞的生物学特性。 方法：分离及体外培养人骨髓源间充质干细胞和脂肪源间充质干细胞,比较它们的表型、细胞倍增时间及分泌因子水平等。 结果与结论：脂肪来源和骨髓来源的间充质干细胞在细胞表型上类似,只有CD106的表达有差异。脂肪来源间充质干细胞增殖速率比骨髓来源的间充质干细胞快。在相同体积的脂肪组织中能够得到的干细胞前体细胞的数量是骨髓的10倍以上。提示脂肪来源和骨髓来源的间充质干细胞具有相同功能,但脂肪组织是一个更有应用前景的干细胞来源。     

人脐带间充质干细胞分离培养条件的优化及其生物学特性

背景：由于大量获取骨髓细胞存在困难,并且骨髓间充质干细胞随年龄的增加出现数量及分化潜能下降,因此需要寻找其他间充质干细胞来源。 目的：优化人脐带间充质干细胞的分离培养条件,进一步明确其生物学特性。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2006-09/2008-03在中国医学科学院血液学研究所国家重点实验室完成。 材料：17份脐带标本取自健康足月新生儿,由天津市中心妇产医院提供。 方法：脐带采集后在6 h内分别用植块法、胶原酶消化法、胶原酶与胰酶联合消化法进行分离培养,于培养第14天计数集落数,超过50个细胞计为集落。当细胞达70%~80%融合时,胰蛋白酶-乙二胺四乙酸混合消化,以(2.5~5.0)×103/cm2密度传代培养。 主要观察指标：比较不同培养方法所获贴壁细胞的形态学特征、细胞产率,应用流式细胞技术分析细胞增殖活性、免疫表型,特异性染色方法鉴定细胞的多向分化潜能。 结果：植块法培养6~10 d可见成纤维样细胞从植块边缘爬出,形态与骨髓间充质干细胞相似,散在分布或形成小克隆,原代可获得(5.2±1.7)×105个贴壁细胞/0.5 cm脐带组织,至少可稳定传15代,平均每代扩增6.2倍,在原代细胞克隆数、细胞产率、传代时间及扩增倍数上与胶原酶消化法比较存在明显差异(P < 0.05);而胶原酶与胰酶联合消化法接种后未见明显贴壁细胞。人脐带间充质干细胞的倍增时间为45 h,72.09%细胞处于G0/G1期,不表达造血细胞及内皮细胞标记,高表达整合素和黏附分子CD44,CD90,CD95以及CD73,CD105,在特定诱导条件下,人脐带间充质干细胞能够向成骨及成脂肪细胞方向分化。 结论：应用植块法可以从人脐带组织中简便高效地分离出一群具有高增殖活性及多向分化潜能的间充质干细胞,其免疫表型类似于骨髓间充质干细胞。     

全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞及其诱导分化

背景：骨髓中的间充质干细胞含量极少,每1×104~1×105个单核细胞中约有1个骨髓间充质干细胞,需要在体外分离、纯化、扩增后才能满足体内移植要求。 目的：观察体外分离培养的骨髓间充质干细胞生物学特性及多向分化潜能。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2007-10/2008-12在福建医科大学附属协和医院泌尿外科研究室完成。 材料：清洁级雄性近交系SD大鼠30只,由上海斯莱克实验动物有限公司提供。 方法：通过全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,待细胞融合至80%~90%胰蛋白酶消化传代。取传至第3代细胞,分别向成骨、成脂方向诱导分化。 主要观察指标：倒置相差显微镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测其表面标记,茜素红染色检测其成骨能力,油红O染色检测其成脂能力。 结果：原代及传代的骨髓间充质干细胞均呈长梭形成纤维细胞样,连续传代10代以上,细胞始终保持旺盛的生长及扩增能力。第3代骨髓间充质干细胞CD90,CD44,CD106均呈阳性表达,而CD34,CD45,CD11b呈阴性。成骨诱导21 d后,可见大量橘红色矿化结节形成。成脂诱导2周后,可见细胞的胞浆内出现大量红染脂滴。 结论：全骨髓贴壁培养法可大量分离纯化、扩增骨髓间充质干细胞,所获细胞具有间充质干细胞的一般生物学特性,经诱导培养后具有多向分化潜能。     

骨髓间充质干细胞体外诱导向内皮和上皮细胞的分化☆

背景：骨髓来源的间充质干细胞在体外具有多系分化潜能,但其在体外向肺组织细胞的分化能力尚存在争议。 目的：体外诱导验证小鼠骨髓间充质干细胞向内皮细胞和上皮细胞分化的能力。 方法：分离小鼠骨髓来源的间充质干细胞,以内皮诱导液向内皮细胞分化。另外将小鼠骨髓间充质干细胞分别在以下诱导培养基中进行上皮诱导3周：单纯上皮诱导培养液,上皮诱导培养液加10 μg/L 转化生长因子β1,并以未经诱导的小鼠骨髓间充质干细胞作为阴性对照,肺泡上皮作为阳性对照。 结果与结论：小鼠骨髓间充质干细胞在上皮诱导培养液中诱导培养3周后,部分细胞由梭形变为典型的卵石样上皮细胞形态,诱导后约60%细胞表达广谱上皮细胞标志pan-CK,RT-PCR结果显示分化后的细胞表达上皮细胞特异标志CK18,未经诱导的间充质干细胞未表达。小鼠骨髓间充质干细胞在内皮诱导24 h后即出现了典型的血管网状结构,vWF免疫荧光染色显示约70%的细胞呈阳性,RT-PCR显示分化后的细胞表达内皮细胞特异性标志CD31、vWF和CD34。提示骨髓来源的间充质干细胞体外诱导培养具有跨胚层多系分化能力。     

小鼠胚胎卵黄囊与成体间充质干细胞的比较：生物学特性相似吗？

背景：与成体间充质干细胞相比,来源于早期胚胎的卵黄囊间充质干细胞有更强的自我更新能力和可塑性,且在胚胎发育过程中可分化为成血管细胞和造血干细胞,启动胚胎血管发生和造血组织发育。 目的：探讨小鼠卵黄囊间充质干细胞的生物学特征。 设计、时间及地点：重复测量设计,细胞学体外观察,于2006-03/2007-01在首都医科大学组织学与胚胎学实验室完成。 材料：妊娠10 d的ICR小鼠80只,由首都医科大学动物部提供。 方法：显微分离ICR小鼠胚胎卵黄囊,经Ⅰ型胶原酶消化得到卵黄囊细胞,取贴壁细胞培养,于接近90%融合时按1∶2进行传代。取生长状态良好的第1代细胞,以地塞米松、胰岛素定向诱导卵黄囊间充质干细胞向脂肪细胞方向分化;以血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子体外诱导其向血管内皮细胞方向分化。 主要观察指标：相差显微镜下观察卵黄囊间充质干细胞形态;流式细胞仪检测卵黄囊间充质干细胞表面标志和细胞周期;钙钴法测定卵黄囊间充质干细胞碱性磷酸酶活性;细胞组织化学检测卵黄囊间充质干细胞化学变化;油红O检测诱导成脂能力;免疫荧光法鉴定诱导成血管内皮细胞能力。 结果：体外培养获得的小鼠卵黄囊间充质干细胞大多数呈梭形;原代和第1代细胞均为CD44,CD105阳性,CD34也有少量表达;67.4%细胞处于G0/G1期,13.9%细胞处于S期;P1代细胞碱性磷酸酶染色及苏丹黑B反应呈阴性,PAS染色呈阳性;成脂诱导1周后,胞浆中有脂滴形成,经油红O染色脂滴为鲜红色;成血管内皮细胞诱导后,细胞由原来梭形或多角形渐变为圆形或椭圆形,且内皮细胞标志物FLK1染色呈阳性。 结论：小鼠卵黄囊间充质干细胞的生物学特征与成体间充质干细胞相似。     

Time-sensitive effects of hypoxia on differentiation of neural stem cells derived from mouse embryonic stem cells in vitro

Abstract

Objectives:

Oxygen tension is an important component of microenvironment for the differentiation of embryonic stem cells including neural lineage. However, the comprehensive influence of hypoxia on neural differentiation during embryonic neural development has not yet been examined.

Methods:

In this study, we investigated the effect of low oxygen levels (5% O₂), or hypoxia, in two stages of neural differentiation in vitro: (1) inducing mouse embryonic stem cells into neural stem cells (NSCs); and then (2) inducing NSCs into neural progenitor cells in neurospheres.

Results:

In the first stage, NSCs generation was reduced under hypoxia. Less mature morphological changes (including neural marker) of NSCs were observed, suggesting the prevention of early differentiation under hypoxic conditions. Thus undifferentiated stem cells were maintained in this stage. However, in the second stage, hypoxia induced neural differentiation in neurospheres. Nevertheless, non-neural progenitor cell formation, such as mesoderm progenitor cell lines or epithelial cell lines, was restricted by low oxygen tension.

Discussions:

Our results demonstrate that hypoxia is essential for regulating neural differentiation and show the different effects on NSC differentiation dependent on the time-course of NSC development. In the early stage of NSCs induction, hypoxia inhibits neural differentiation and maintains the undifferentiated state; in the later stage of NSCs induction, hypoxia induces neural differentiation. Our study may contribute to the development of new insights for expansion and control of neural differentiation.     

大鼠骨髓间充质干细胞体外培养及分化为神经干细胞的实验研究

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells,MSCs)体外分化为神经干细胞(neural stemcells,NSCs)的可能性。方法取4～6周SD大鼠双侧股骨和胫骨骨髓细胞进行体外培养,通过传代得到纯化的MSCs后换用分化液诱导,通过形态学观察诱导后细胞形态变化,并用免疫荧光检测不同天数细胞nestin的表达率;NSCs分化实验对所诱导的NSC的分化潜能进行检测。结果MSCs诱导后的细胞nestin表达率随天数增加逐渐升高,1周后形成高表达nestin的神经干细胞球形细胞团;在含血清培养基中可自然分化为神经元和神经胶质样细胞。结论MSCs能于体外分化出神经干细胞,且具有进一步的分化能力,骨髓来源的神经干细胞将可能作为种子细胞用于神经系统疾病的治疗。     

小鼠Lewis肺癌细胞与胚胎干细胞体外共培养的生物学行为☆

背景：从发生学角度来看,肿瘤细胞和胚胎干细胞都受原癌基因调控,并具有惊人的分裂能力。将胚胎癌细胞移植入正常发育的同系小鼠的胚泡内,结果产生了不具有恶性表型的嵌合体小鼠,表明在胚胎环境中肿瘤细胞的命运可以发生改变。 目的：探讨小鼠胚胎干细胞对Lewis肺癌细胞生物学行为变化的影响。 方法：通过Transwell小室体外共培养小鼠胚胎干细胞与Lewis肺癌细胞。实验组Transwell小室中为成纤维细胞和胚胎干细胞,12孔板中为肿瘤细胞;对照组将加入到Transwell小室中的胚胎干细胞替换为成纤维细胞,保持小室中细胞的总数不变,12孔板中为肿瘤细胞。 结果与结论：与对照组比较,实验组Lewis肺癌细胞形态变化显著,部分细胞出现老化甚至凋亡迹象;实验组Lewis肺癌细胞的增殖明显减慢(P < 0.05),穿透DB胶生物膜的Lewis肺癌细胞数明显减少(P < 0.05)。提示胚胎干细胞能够抑制Lewis肺癌细胞的生长增殖及侵袭力。     

全反式维甲酸诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的研究

目的 体外探讨全反式维甲酸（ATRA）对大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）分化为神经元样细胞的作用。方法 从大鼠股髓分离出MSCs，采用贴壁法体外扩增、传代，取5代后细胞采用EGF共培养，二巯基乙醇（2-ME）预诱导，再以ATRA为诱导剂诱导，然后免疫细胞化学检测巢蛋白（nestin）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、乙酰胆碱酯酶（AchE）、酪氨酸羟化酶（TH）的表达情况。结果 MSCs诱导后具有神经元样细胞的形态，免疫细胞化学显示nestin、NSE、AchE有阳性表达，而GFAP、TH表达为阴性。结论 ATRA在体外能够有效的诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞，且可表达AchE。     

细胞毒药物对小鼠肺组织和骨组织间充质干细胞增殖和分化的影响

背景：肿瘤患者接受高剂量化疗时，细胞毒药物不仅对肿瘤细胞产生杀伤作用，对正常组织细胞甚至组织干细胞也产生一定损伤。 目的：探讨细胞毒药物体外对小鼠肺组织间充质干细胞和骨组织间充质干细胞增殖及分化能力的影响。 设计、时间及地点：细胞学体外对照观察，于2007-05/2008-08在解放军军事医学科学院基础医学研究所细胞生物学室和解放军北京军区总医院肿瘤科完成。 材料：清洁级3~5周龄C57BL/6小鼠3只，由解放军军事医学科学院实验动物中心提供。 方法：从胶原酶消化的小鼠肺组织和骨片中分离培养肺组织间充质干细胞和骨组织间充质干细胞，并在含体积分数为10%胎牛血清的α-MEM培养液中培养、传代、扩增。采用MTT法测定马利兰、阿霉素、环磷酰胺、足叶乙甙、甲氨蝶呤、长春新碱、顺铂对两种间充质干细胞生长增殖的影响，参照文献设置药物浓度范围，并设立空白对照，仅加入含体积分数为10%胎牛血清的α-MEM培养液。药物作用后，分别诱导两种间充质干细胞向脂肪和成骨细胞分化。 主要观察指标：不同药物作用后，肺组织间充质干细胞和骨组织间充质干细胞的生长抑制、增殖情况及分化能力。 结果：①在治疗剂量范围内，肺组织间充质干细胞和骨组织间充质干细胞对环磷酰胺、马利兰和甲氨蝶呤耐受，而对长春新碱、足叶乙甙、顺铂、阿霉素中度敏感。肺组织间充质干细胞和骨组织间充质干细胞对环磷酰胺、马利兰的敏感性相似，但小鼠肺组织间充质干细胞对甲氨蝶呤、长春新碱、足叶乙甙、阿霉素的敏感性均低于骨组织间充质干细胞，对顺铂的敏感性高于骨组织间充质干细胞。②与空白对照比较，环磷酰胺、马利兰和甲氨蝶呤作用后对两种间充质干细胞的增殖能力影响较小。③在环磷酰胺、马利兰、甲氨蝶呤、长春新碱和足叶乙甙等药物作用24 h内，两种间充质干细胞仍能被诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞。药物作用72 h后，两种间充质干细胞向脂肪和成骨细胞的分化能力减弱甚至消失。环磷酰胺、马利兰和甲氨蝶呤对肺组织间充质干细胞和骨组织间充质干细胞的分化功能影响相对较小。 结论：细胞毒药物对小鼠肺组织间充质干细胞和骨组织间充质干细胞具有毒性作用，但不同组织器官来源的间充质干细胞对细胞毒药物的敏感性存在一定差异；药物作用后可影响两种间充质干细胞的增殖和分化能力。     

Characterization of isolated mouse cerebellar cell populations in vitro

The expression of several cell surface components (Thy-1, H-2 and NS-4 antigens and tetanus toxin receptors) was studied by indirect immunofluorescence in situ using histological sections and in vitro using freshly dissociated and cultured cells from mouse cerebellum. Thy-1 alloantigen is expressed in adult cerebellum predominantly in neuron-rich regions, i.e. molecular, Purkinje cell, and granular layers, however, it is not detectable at postnatal day 8. In cerebellar cultures of 6-day-old mice Thy-1 is absent from more than 99% of all cells when these are maintained as monolayers in vitro for up to 3 days. After 4 days in vitro some GFA protein-positive astrocytes and some fibronectin-positive fibroblast-like cells start to express Thy-1 antigen. After 14 days in vitro not all fibroblast-like cells and astrocytes are Thy-1 antigen-positive. Neurons with small cell bodies and oligodendrocytes never express Thy-1 at any stage examined. H-2 is not expressed sufficiently to be detectable in histological sections in early postnatal or adult cerebellum. In cerebellar cultures of 6-day-old mice H-2 becomes detectable on some fibroblast-like cells and some astrocytes after 7 days in culture. In histological sections of adult and early postnatal cerebellum NS-4 antigen and tetanus toxin receptors are expressed predominantly in neuron-rich regions. In the developing cerebellum both are expressed at higher levels on more mature granule cells. In cerebellar cultures NS-4 antigen and tetanus toxin receptors are expressed on neurons. Occasionally some astroglia can also show detectable levels of expression. NS-4 antigen is also present on some 04 antigen-positive oligodendrocytes, while tetanus toxin receptors are never detectable on these cells.     

脉冲电磁场对小鼠骨髓间充质干细胞体外成骨分化的影响★

背景：间充质干细胞的增殖分化缺乏可调控性，结合适当载体后不能高效增殖分化是阻碍其进入临床的瓶颈。脉冲电磁场若能有效调控干细胞向骨源细胞分化将具有重要的临床价值。 目的：观察脉冲电磁场刺激后，小鼠骨髓间充质干细胞体外成骨分化情况。 设计、时间及地点：细胞学体外对照观察，于2004-05/2007-10在华中科技大学同济医学院附属普爱医院骨科实验室完成。 材料：BALB/C小鼠20只，由同济医学院实验动物中心提供。脉冲电磁场发生器由海军工程大学电机系设计与制造。 方法：无菌分离小鼠双侧股骨，Percoll密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞，再用贴壁筛选法纯化扩增。取生长良好的第3代细胞，调整细胞密度为2×107 L-1接种于6孔板，分成4组：空白对照组加入完全培养基组；脉冲电磁场组给予50 Hz、正弦波形、强度1 mT的脉冲电磁场辐射，2次/d，30 min/次，间隔12 h，共10 d；成骨诱导组加入含地塞米松、甘油磷酸钠、VitC的完全诱导培养基；脉冲电磁场+成骨诱导组给予相同的脉冲电磁场辐射后加入完全诱导培养基。 主要观察指标：骨髓间充质干细胞的分化情况。 结果：碱性磷酸酶染色结果显示，干预10 d后，空白对照组为阴性；脉冲电磁场组呈弱阳性；成骨诱导组呈阳性；脉冲电磁场+成骨诱导组呈强阳性。与空白对照组比较，成骨诱导组、脉冲电磁场+成骨诱导组Ⅰ型胶原免疫组化染色吸光度值均明显升高(P < 0.05，P < 0.01)。 结论：50 Hz、正弦波形、强度1 mT脉冲电磁场干预一定时间后，能够增强小鼠骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原的表达，促进其分化成骨。     

骨髓间充质干细胞与运动性膝关节损伤

背景：膝关节损伤是运动损伤中最常见的创伤之一,严重影响了运动员的训练和比赛,其损伤还可造成心血管和代谢的运动适应性减退和失用性肌萎缩。骨髓间充质干细胞以其多向分化潜能、低免疫原性、无排斥反应等优点为其在膝关节损伤的防治领域提供了广阔的应用前景。目的：总结骨髓间充质干细胞作用于运动性膝关节损伤的应用,旨在为膝关节损伤的预防和治疗提供科学依据。方法：通过计算机检索PubMed数据库检索1994-01/2010-05的文献资料,以“骨髓间充质干细胞、运动、膝关节损伤” 为中文检索词,以“mesenchymal stem cell,sports, knee injuries” 为英文检索词。纳入骨髓间充质干细胞和运动性膝关节损伤相关文献,排除重复性研究,共选取了34篇论文进行分析讨论。结果与结论：通过对骨髓间充质干细胞的生理特性、临床应用以及运动性膝关节损伤的原因分析,探讨骨髓间充质干细胞对运动性膝关节软骨、肌腱、肌细胞和半月板损伤的修复作用。结果发现骨髓间充质干细胞以其取材方便、创伤小且易于从骨髓中分离等的优点为修复膝关节软骨损伤、促进其肌腱的修复和治疗膝关节半月板损伤等有极为重要的价值。