山莨菪碱对失血性休克肝枯否细胞IκB激酶-β的影响及意义

目的 :探讨 IκB激酶 β( IKKβ)在失血性休克肝脏损伤中可能的病理机制以及山莨菪碱 ( 6 5 42 )的治疗作用。方法 :通过失血性休克和内毒素双项打击制备家兔休克模型 ,采用原位杂交方法 ( ISH)结合原位定量分析检测肝枯否细胞 ( KC)中 IKKβ的 m RNA表达 ;用凝胶电泳迁移率改变分析法 ( EMSA)和酶联免疫吸附实验 ( EL ISA)分别检测 KC中 NFκB活性和细胞培养液上清中 TNFα含量 ,并进行肝脏组织的病理学光镜检查。结果 :休克组 KC中 IKKβ的 m RNA表达 ( 0 .2 1± 0 .0 3)、NFкB活性 ( 2 .2 9± 0 .2 5 )和培养液上清中TNFα含量〔( 5 6 0 .2 1± 31.0 4) ng/ L〕均较正常对照组明显增高 ( P均 <0 .0 1)。 6 5 42能明显降低 IKKβm RNA的表达 ( 0 .14± 0 .0 3)、NFκB的活性 ( 1.35± 0 .17)以及 TNFα的含量〔( 30 0 .79± 2 3.47) ng/ L〕,P均 <0 .0 1,并能减轻肝脏组织的损伤程度。结论 :IKKβ激活在失血性休克和内毒素导致的肝脏损伤中起关键作用 ;6 5 42通过抑制 IKKβ表达 ,影响 IKKβ、NFκB和 TNFα信号转导通路 ,发挥对失血性休克继发肝脏损害的保护作用。     

失血合并内毒素诱发多器官功能障碍综合征的分子病理机制研究

目的 :探讨失血性休克合并内毒素血症致多器官功能障碍综合征 ( MODS)家兔可能的分子病理机制。方法 :采用失血合并内毒素损伤诱发 MODS家兔模型 ,用原位杂交 ( ISH)和凝胶电泳迁移率改变分析法( EMSA)分别检测肺泡巨噬细胞 ( PAM)以及肝枯否氏细胞 ( KC)中 IκΒ激酶 β( IKKβ) m RNA表达和核因子κB( NFкB)的活性 ;用酶联免疫吸附法 ( EL ISA)检测两种细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α( TNFα)含量 ;同时进行动脉血气、血生化及肺、肝、小肠病理组织学检查。结果 :诱发 MODS家兔 PAM和 KC中 IKKβm RNA表达 ( 0 .15± 0 .0 3,0 .17± 0 .0 4)、NFκB活性 ( 1.49± 0 .30 ,1.72± 0 .36 )和上清液 TNFα的含量〔( 2 79.74± 2 5 .91) ng/ L 和 ( 30 0 .0 5± 30 .86 ) ng/ L〕均较正常动物〔IKKβ m RNA表达 0 .0 3± 0 .0 1和 0 .0 2±0 .0 1,NFκB活性 0 .2 5± 0 .0 6和 0 .31± 0 .10 ,TNFα含量 ( 137.33± 6 .0 9) ng/ L 和 ( 134.85± 12 .0 9) ng/ L〕明显增高 ( P均 <0 .0 1) ;血尿素氮 ( BU N)和丙氨酸转氨酶 ( AL T)均明显升高 ,氧分压下降 ,内脏组织出现明显炎症病理改变。结论 :IKKβ、NFκB、TNFα在休克合并内毒素诱发 MODS的炎症病理改变中有重要作用。     

失血性休克肝枯否氏细胞I-κB激酶的表达及意义

目的探讨IκB激酶-β(IKK-β)在失血性休克继发肝脏损伤中的作用.方法采用失血性休克家兔模型;分离培养肝脏枯否氏细胞(KC),用原位杂交方法(ISH)、凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)和酶联免疫吸附实验(ELISA)分别检测KC中IKK-β mRNA表达、核因子(NF)-κB活性和KC培养液上清中TNF-α含量.并进行肝脏组织的病理学光镜检查.结果模型组KC中IKK-β的mRNA表达(0.17±0.04)、NF-κB活性(1.72±0.36)和培养液上清中TNF-α含量(300.05±30.86) ng/L较对照组[IKK-β(0.02±0.01)、NF-κB(0.31±0.10)、TNF-α(134.85±12.09) ng/L]明显增高(P均＜0.01).模型组肝脏组织病理损伤严重.结论 IKK-β介导NF-κB活化诱发细胞因子释放在失血性休克诱发肝脏损害的病理机制中发挥重要作用.     

急性肺损伤肺泡巨噬细胞NF-κB激活通路的实验研究

目的　观察急性肺损伤 (ALI)大鼠肺泡巨噬细胞 (PAM)中NF -κB的活化路径 ,探讨ALI可能的分子病理机制。方法　采用ALI大鼠模型 ,伤后 8h处死动物分离、培养PAM ,用原位杂交 (ISH)技术、凝胶电泳迁移率改变 (EMSA)及酶联免疫吸附试验 (ELISA)法 ,观察PAM中IκB激酶 (IKK - β)激活、抑制蛋白 (IκB -α)降解、核因子 (NF) -κB核移位 (活化 )和上清液TNF -α的含量变化。结果　ALI大鼠PAM中IKK - βmRNA表达 (0 118± 0 0 2 6)、NF -κB活性 (0 85 7± 0 0 5 8)、TNF -α的含量 [(3 95 82±87 45 )ng/L]较对照组大鼠明显升高 [分别为 (0 0 42± 0 0 0 5 )、(0 2 5 0± 0 0 12 )、(196 2 6± 2 5 98)ng/L](P均 <0 0 1) ;而I-κB水平(0 40 1± 0 0 19)较对照组 (0 685± 0 0 3 5 )比较则显著降低 (P <0 0 1)。结论　IKK - β激活 /IκB降解 /NF -κB活化 /TNF -α合成的通路效应可能是ALI病理损害的重要机制。IKK - β在NF -κB转导通路介导的ALI中发挥重要作用     

核因子-κB在小鼠急性肺损伤发病中的作用及治疗干预研究

目的　探讨核因子 (NF) -κB在内毒素 (LPS)诱导的急性肺损伤 (ALI)小鼠发病中的作用以及地塞米松 (Dex)的干预作用。方法　腹腔内注射LPS诱导小鼠ALI模型 ,随机分为LPS组、LPS +Dex组 ,LPS注射后 0、1、3、6、12h测定肺湿重 干重比值 (W D)、肺组织NF -κB活性、肺组织匀浆中肿瘤坏死因子 (TNF)α及白细胞介素 (IL) - 10浓度 ,检测mRNA表达 ,并观察肺组织光镜、电镜病理改变。结果　LPS注射后 ,W D明显增高 ,3h开始明显升高 ,6h达到高峰 ( 4 82± 0 10 ) ,显著高于注射前 ( 3 6 7± 1 0 4,P <0 0 5 ) ;肺组织核蛋白NF -κB活性 1h开始明显升高 ,6h达到峰值 ( 40 5 7± 6 2 4) ,显著高于注射前( 44 8± 30 9,P <0 0 5 ) ;肺组织匀浆TNF -α和IL - 10浓度分别在注射后 6h和 12h升高最明显 ,分别为 ( 197 1± 5 2 4)pg mL和 ( 16 4 9± 39 7)pg mL ,显著高于注射前。地塞米松明显抑制NF -κB活化 ,肺组织匀浆中TNF -α、IL - 10及其mRNA表达明显下降。肺组织病理显示LPS可导致肺泡出血、水肿 ,大量炎症细胞浸润 ,电镜下见Ⅰ型肺泡上皮细胞断裂 ,Ⅱ型肺泡上皮细胞变性 ,地塞米松可明显改善肺损伤。结论　LPS导致肺组织NF -κB的活化 ,介导炎症介质大量表达 ,参与ALI发生 ,地塞米松通过抑制炎症反     

多黏菌素B对内毒素诱导大鼠肺泡巨噬细胞I-κB激酶mRNA表达的影响

目的 :观察多黏菌素 B(PMB)对内毒素 (L PS)刺激大鼠的肺泡巨噬细胞 (PAM)中 IκB激酶(IKKβ)、抑制蛋白 (IκBα)和核因子 κB(NFκB)的影响 ,探讨 PMB可能的抗炎机制。方法 :分离、培养大鼠PAM,分为正常对照组、L PS刺激组、PMB+L PS干预组。在 L PS刺激后 0 .5 h采用原位杂交 (ISN)技术、酶联免疫吸附试验 (EL ISA )法及凝胶电泳迁移率改变分析法 (EMSA ) ,分别检测各组 PAM中 IKKβ m RNA、IκBα水平、NFκB活性变化。结果 :与正常对照组比较 ,L PS刺激组 PAM中 IKKβ m RNA的表达 (0 .14 7±0 .0 15 )、NFκB的活性 (0 .82 8± 0 .0 19)均明显升高 (P均 <0 .0 1) ,IκBα水平 (0 .2 2 8± 0 .0 2 1)显著降低 (P<0 .0 1) ;PMB干预后能明显下调 L PS刺激组 IKKβ m RNA表达 (0 .112± 0 .0 2 2 )和 NFκB的活性 (0 .35 8±0 .0 11) ,上调 IκBα水平 (0 .4 77± 0 .0 16 ) ,P均 <0 .0 1。结论 :L PS能激活 PAM中 IKKβ m RNA表达 ,介导IκBα降解和 NFκB活化 ;PMB通过干预 IKKβ/IκBα/NFκB传导通路发挥抗炎作用。     

创伤性急性肺损伤Ⅰ—кB激酶的变化及意义

目的探讨I-κB激酶(IKK)在创伤性急性肺损伤(ALI)病理变化中可能的作用机制.方法复制创伤性ALI家兔模型,用原位杂交方法结合原位定量分析检测肺组织中IKKβ的mRNA表达,用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)和酶联免疫吸附(ELISA)法分别检测肺泡巨噬细胞(PAM)中核因子-κB(NF-κB)的活性和PAM培养上清液中TNF-a 、IL-6的含量.结果创伤性ALI家兔组肺组织中IKK-β的mRNA表达(0.106 3±0.021 8)以及PAM中NF-κB活性(2 987.85±163.85)和上清液中 TNF-a、IL-6的含量[分别为(235.6±30.8) ng/L和(398.8±243.6) ng/L]均较正常对照组[分别为0.042 7±0.024 1、922.02±28.36、(36.4±8.0) ng/L和(78.6±39.4) ng/L]显著增高(P均<0.01).结论蛋白激酶IKK的激活介导NF -κB活化和分泌高水平细胞因子在创伤性ALI的炎症反应中发挥重要作用.     

严重烧伤后小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子的变化及免疫功能机制

背景：严重烫伤导致机体免疫系统各方面的功能紊乱，活化的巨噬细胞可分泌许多生物活性递质。烧伤后巨噬细胞功能紊乱与信号转导的关系目前尚不清楚。目的：观察严重烫伤后不同时相点及运用特异性NF—κB抑制剂吡咯啉烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)后小鼠腹腔巨噬细胞内NF—κB活性、IκB—α的表达及肿瘤坏死因子(TNF—α)的变化，从信号转导的角度探讨巨噬细胞功能紊乱的机制。设计：随机对照的实验研究。单位：创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室。材料：实验于1999—01／06在第三军医大学烧伤研究所实验室(国家级)完成。实验动物为健康清洁级近交系昆明小白鼠30只。干预：以小鼠常规烫伤模型造成体表面积15％Ⅲ度烫伤实验按烫伤前及伤后不同时相随机分为6组，即0(正常对照组)，2，6，12，24，48h组。收集腹腔巨噬细胞采用放射免疫法检测TNF—α的含量，电泳迁移率改变分析法测NF—κB的活性，免疫印迹法测IκB—α的表达，反转录—PCR测TNF—α mRNA的表达。主要观察指标：①检测TNF—α的含量，②测定NF—κB的活性，③检测IκB-α的表达。④测TNF—α mRNA的表达。结果：烫伤后巨噬细胞分泌TNF—α亢进，于伤后12h达到高峰，为(1085．65&;#177;122．99)ng／L，较正常对照组明显增高(t=14.92，P&;lt;0．01)。NF—κB活性于伤后明显活化，于2h达到了高峰(t=13．31，P&;lt;0．01)，为(56．8&;#177;73)RDU，早于TNF—α的增多。与正常对照组相比．IκB—α的表达于烫伤后2h显著下降(t=4．23，P&;lt;0．01)，达到0．632&;#177;0.086，以后上升，至24h达到高峰(t=7．06，P&;lt;0．01)，为1．161&;#177;0．097，48h稍降(t=4．82，P&;lt;0．01)，为1．149&;#177;0.167以伤后12h为调控点，予PDTC后NF—κB活性及TNF—α mRNA表达量均显著下降(P&;lt;0．01)。结论：烫伤后NF—κB活性及TNF—α表达明显增强，IκB—α对NF—κB在高水平上维持着一种制约关系。烫伤后小鼠腹腔巨噬细胞内NF—κB信号途径参与TNF—α表达的调控。     

川芎嗪对肺损伤肺泡巨噬细胞中NF-κB活化的影响

目的探讨川芎嗪(Lig)在失血性休克合并内毒素诱发急性肺损伤时对肺泡巨噬细胞(PAM)核因子(NF)-κB活化的调节干预作用。方法采用家兔失血性休克合并内毒素诱发肺损伤时模型,30只家兔随机分为:模型组、川芎嗪干预组和对照组。测动脉血气、肺湿/干质量比(W/D),提取PAM中核蛋白并用凝胶电泳迁移率(EMSA)法测NF-κB活性,原位杂交法(ISH)结合原位定量检测PAM中IKK-β的mRNA表达,并用酶联免疫吸附试验(ELSA)测PAM培养上清液中TNF-α含量。结果干预组W/D、PaCO2低于模型组,而PaO2高于模型组;模型组和干预组的IKK-βmRNA的表达、NF-κB活性、TNF-α含量均高于对照组(Ρ<0·01),干预组与模型组比较有差异(Ρ<0·05)。讨论川芎嗪可减轻失血性休克并内毒素诱发的急性肺损伤,可能与川芎嗪干预抑制肺泡巨噬细胞NF-κB的活化有关。     

青藤碱对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞核因子κB信号转导的影响及其机制

背景：青藤碱是从中药青风藤中提取的生物碱单体。在治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)方面，具有较明确的疗效，但其治疗机制尚不清楚。目的：观察不同剂量的青藤碱体外作用对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis，AA)大鼠滑膜细胞核因子-κB(NF-κB)活性及肿瘤坏死因子(TNF—α mRNA、白细胞介素1β(IL—1β)mRNA、白细胞介素10(IL-10)mRNA的影响，以阐明该药治疗RA的可能机制。设计：以细胞为研究对象，分组对照的重复测量设计、单位：一所军医大学医院的中医科和烧伤研究所。材料：实验于2002—03／2002—10在全军烧伤研究所实验室完成。实验动物为健康清洁级雄性Wistar大鼠25只。以AA大鼠为模型，收集滑膜细胞，依次作如下分组：正常对照组，AA组，AA+青藤碱30mg／L组，AA+青藤碱60mg／L组，AA+青藤碱120mg／L组。电泳迁移率改变分析法测NF—κB的活性，反转录PCR检测TNF-α mRNA，IL—1β mRNA，IL—10 mRNA的表达。主要观察指标：不同剂量的青藤碱体外作用对后佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞NF—κB活性，TNF—1β mRNA，IL—1β mRNA及IL—10 mRNA的对比结果。结果：与正常对照组相比，AA后滑膜细胞内NF—κB活性与TNF—α mR—NA，IL—1β mRNA，IL—10 mRNA的表达均显著升高，分别为17&;#177;6，0．570&;#177;0．047，0．730&;#177;0．093，0．683&;#177;0．081(t=2．71—4．07，P&;lt;0．05)。经青藤碱作用后，NF—κB活性的变化趋势与TNF—α mRNA，IL-1 mRNA的相关性较好(r=0．810，P&;lt;0．001；r=0．562，P&;lt;0．05)，与IL-10 mRNA无统计学上的相关性，青藤碱在一定的浓度范围(30～120mg／L)内呈浓度依赖性抑制NF—κB活性与TNF—α mRNA，IL—1β mRNA的表达，而对IL—10 mRNA的抑制效应与浓度无关。结论：青藤碱可能通过抑制NF—κB活性而降低滑膜细胞内TNF-α mRNA及IL—1βmRNA的表达。     

NF-κB和HSP70在失血性休克肝枯否细胞中的活性变化研究

目的 探讨NF-κB和HSP70在失血性休克诱发肝脏损伤中的活性变化和相互影响机制.方法 采用原位杂交(ISH)、凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)方法检测失血性休克家兔模型动物休克后不同时间点(2、6、12、24 h)肝脏枯否细胞(KC)中HSP70 mRNA表达和NF-κB活性变化.结果 休克动物NF-κB 活性于2 h已升高(0.722±0.115)、6 h升高最明显(1.163±0.229)、12 h开始下降(0.732±0.229)、24 h下降到最低点(0.512±0.102);而HSP70 mRNA表达2 h(0.088±0.013)开始升高、6 h(0.125±0.019)逐渐升高、12 h(0.161±0.011)至24 h(0.185±0.039)增高最为显著.结论 失血性休克肝脏炎症损伤过程中NF-κB活化可能受到体内HSP70活性变化的抑制调控.     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对失血性休克诱导急性肺损伤小鼠器官组织核转录因子-κB活化的影响

目的探讨特异性抗粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）的抗体（22E9）和地塞米松（DEX）对失血性休克诱导急性肺损伤（ALI）小鼠肾、肝、心、肺组织核转录因子-κB（NF-κB）活化的影响，为失血性休克继发的多器官损伤防治提供理论依据。方法C57BL／6雄性小鼠20只，用心脏穿刺致失血性休克诱导ALI小鼠模型。制模前经鼻分别滴入磷酸盐缓冲液（PBS，PCG组）、PBS＋1μg 22E9（HS1组）、PBS＋10pg22E9（HS10组）、PBS＋20μgDEX（DEX组）进行干预，阴性空白对照组（NCG组）经鼻滴入PBS后仅予心脏穿刺。休克4h时采用凝胶电泳迁移率改变分析法（EMSA）检测肺、心、肝、肾组织NF—κB活性；用酶联免疫吸附法（ELISA）检测肺、心组织肿瘤坏死因子-α（TNF—α）含量。结果与PCG组比较，高、低剂量22E9均可显著抑制肝、心、肺组织NF—κB活性，且低剂量的抑制效果比高剂量明显，同时可增加肾组织NF—κB活性（P均〈0．05）。DEX可增强肾、肝组织NF—κB活性（P均〈0．05），但与PCG组比较，DEX对肾、肝、肺组织NF—κB活性未见明显的抑制作用。22E9干预可显著抑制心、肺组织TNF—α含量的升高，DEX仅能有效抑制心组织TNF—α含量（P均〈0．05）。结论22E9能显著抑制失血性休克诱导ALI小鼠多器官组织NF-κB的活化及炎症反应，减少失血性休克引起的多器官损伤；DEX的抑制作用不显著。     

创伤性急性肺损伤I-κB激酶的变化及意义

目的 :探讨 IκB激酶 (IKK)在创伤性急性肺损伤 (AL I)病理变化中可能的作用机制。方法 :复制创伤性 AL I家兔模型 ,用原位杂交方法结合原位定量分析检测肺组织中 IKKβ的 m RNA表达 ,用凝胶电泳迁移率改变分析法 (EMSA)和酶联免疫吸附 (EL ISA)法分别检测肺泡巨噬细胞 (PAM)中核因子 κB(NFκB)的活性和 PAM培养上清液中 TNF a、IL 6的含量。结果 :创伤性 AL I家兔组肺组织中 IKKβ的 m RNA表达 (0 .10 6 3± 0 .0 2 18)以及 PAM中 NFκB活性 (2 987.85± 16 3.85 )和上清液中 TNF a、IL 6的含量〔分别为 (2 35 .6± 30 .8) ng/ L和 (398.8± 2 4 3.6 ) ng/ L〕均较正常对照组〔分别为 0 .0 4 2 7± 0 .0 2 4 1、92 2 .0 2± 2 8.36、(36 .4± 8.0 ) ng/ L和 (78.6± 39.4 ) ng/ L〕显著增高 (P均 <0 .0 1)。结论 :蛋白激酶 IKK的激活介导 NFκB活化和分泌高水平细胞因子在创伤性 AL I的炎症反应中发挥重要作用。     

大黄对脓毒症大鼠核因子-κB活化的抑制作用

目的 :探讨脓毒症时肠道组织肿瘤坏死因子 α( TNFα)、单核细胞趋化蛋白 1( MCP 1)及核因子 κB( NFκB)活性的相关性 ,揭示大黄治疗脓毒症的有效机制。方法 :采用盲肠结扎穿孔术制备大鼠脓毒症模型。分别在术后 1、3、6、12、2 4、4 8h活杀大鼠取肠黏膜组织 ,用酶联免疫吸附法测 TNFα、MCP 1的含量 ,用凝胶电泳迁移法测 NFκB的活性。在脓毒症模型基础上加用大黄治疗 ,分别于治疗后 12、2 4、4 8、72 h活杀大鼠 ,用同样的方法检测 TNFα、MCP 1含量及 NFκB活性。结果 :脓毒症大鼠肠黏膜 NFκB活性及TNFα、MCP 1含量均较相应对照组明显升高 ( P均 <0 .0 1) ;大黄治疗后能明显抑制升高的 NFκB活性和TNFα、MCP 1含量 ( P均 <0 .0 5 )。结论 :TNFα、MCP 1是脓毒症早期激活的细胞因子 ,其释放与NFκB活性密切相关 ;大黄可通过抑制 NFκB活性、减少炎症细胞因子释放而达到抑制炎症反应的作用     

重组腺病毒IκBαM在血管内皮细胞ECV-304中的表达及对NF-κB活性的抑制

目的　检测重组腺病毒IκBαM(AdIκBαM)在血管内皮细胞ECV - 30 4中的表达及肿瘤坏死因子 (TNF -α)诱导下IκBαM的变化与对NF -κB活性的抑制作用。方法　用携有NF -κB抑制物IκBα突变体的AdIκBαM感染ECV - 30 4细胞 ,用West ernblot及EMSA法检测IκBαM的表达及NF -κB活性的变化情况。结果　AdIκBαM在ECV - 30 4细胞中表达且不被TNF -α诱导降解 ,感染IκBαM的ECV - 30 4 /IκBαM细胞在TNF -α刺激下NF -κB无激活 ,而未感染IκBαM的ECV - 30 4细胞经TNF -α刺激后可有NF -κB的过度活化。结论　AdIκBαM能高效扩增并有效感染ECV - 30 4血管内皮细胞 ,且不会被TNF -α诱导而降解 ,能有效抑制血管内皮细胞NF -κB的过度活化 ,抑制NF -κB活性可能保护血管内皮细胞免于TNF -α介导的细胞损害     

核因子-κB对急性胰腺炎时肿瘤坏死因子-αmRNA表达的调控

目的观察急性胰腺炎(acutepancreatitis,AP)发生时胰腺组织中核因子κB(NFκB)对肿瘤坏死因子αmRNA表达的调控作用。方法Wistar大鼠64只,随机均分为AP组和对照组,AP组以蛙皮素(Caerulein)腹腔内注射制成AP模型。分别于12h、24h、36h、72h后处死实验动物,用流式细胞术(FCM)检测NFκB激活水平,用半定量RTPCR检测TNFαmRNA的表达水平,并分析二者之间的相关性。结果AP组的NFκB激活及TNFαmRNA表达水平在各时间点均显著高于同时段对照组的水平(P<0.01),二者之间具有相关性(P<0.05)。结论AP发生时,胰腺组织中NFκB高度活化,促进了TNFαmRNA的表达,从而加重了胰腺的损伤。     

心肌缺血再灌注中肿瘤坏死因子—α表达及与核因子—kB活化的关系

目的 :研究心肌缺血 -再灌注时心肌组织肿瘤坏死因子 -α (TNF -α)表达与心肌核因子 -kB (NF -kB)活化之间的关系。方法 :新西兰兔 2 0 0只分为 :①缺血 -再灌注组 (IR) :结扎兔左冠状动脉前降支造成心肌缺血 4 5min后再开放 ;②吡咯基二硫氨基甲酸酯 (PDTC)预处理组 (IR +PDTC) :在心肌缺血前 1 0分钟静脉注射PDTC (1 5mg/kg) ;③抗肿瘤坏死因子 -α单克隆抗体预处理组 (IR +Anti-TNF -α -mAb) :在心肌缺血前 1 0分钟静脉注射抗肿瘤坏死因子 -α单克隆抗体 ;④假手术对照组 (Sham)。每组又分缺血前 (0 ) ,再灌注后 30、 6 0、90、 1 2 0、 2 4 0、 36 0min时相点。用酶联免疫吸附实验 (ELISA)测定心肌组织中TNF -α的表达 ,凝胶电泳迁移率(ESMA)分析检测心肌组织NF -kB的活性 ,髓过氧化酶法 (MP0 )定量测定心肌组织中浸润的中性粒细胞。结果 :与缺血前比较 ,在缺血 -再灌注组中心肌再灌注 30min后NF -kB活性开始增高 ,1 2 0min达到高峰 ,之后活性有所下降 ,但仍明显高于缺血前 (P <0 0 5 ) ;心肌TNF -α的表达在心肌再灌注 1 2 0min明显增高 (P <0 0 5 ) ,并持续保持在高水平状态 ,并与中性粒细胞浸润升高有相关性 (r=0 76 4 ,P <0 0 5 ) ;在IR +PDTC及IR +Anti-TNF -α-mAb组 ,PDTC、Anti-TNF -     

山莨菪碱对创伤性肺损伤激酶IKK的影响及意义

目的：探讨激酶IKK－β在创伤性急性肺损伤（ALI）病理变化中可能的作用机制及山莨菪碱（654－2）的影响效应。方法：复制创伤性ALI家兔模型，实验动物随机分为正常对照组，创伤模型组、654－2治疗组。用原位杂交方法检测肺组织中IKK－β的mRNA表达，用凝胶电泳迁移改变分析？（EMSA）法检测肺泡巨噬细胞（PAM）中核因子（NF）－kB的活性，用酶联免疫吸附（ELISA）法检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中肿瘤坏死因子α（TNF－α）、白细胞介素6（IL－6）的含量。同时对各组动物动脉血气，肺湿／干（W／D）比值及肺组织的病理变化进行检测。结果：654－2治疗能明显改善创伤性ALI动物的血气，减少肺W／D值，减轻肺组织的损伤程度；能明显抑制创伤性ALI家兔肺组织中IKK－β的mRNA表达和PAM中NK-kB活性降低BALF中TNF－α、IL－6含量，结论：IKK－β/NF-kB/TNF－α效应在创伤性ALI的炎症反应中发挥重要作用，654－2可通过抑制IKK－β的激活，阻止NF－kB活化，缓解TNF－α介导的组织损伤。     

内源性TGF-β_1、TNF-α在三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡中作用的研究

目的　探讨内源性TGF β1、TNF α在三氧化二砷 (As2 O3)诱导HL 6 0细胞凋亡过程中的作用。方法　建立As2 O3 诱导HL 6 0细胞凋亡模型 ,应用RT PCR、定量PCR、ELISA、缺口末端标记(TUNEL)法、片段化DNA分析等方法研究As2 O3 诱导HL 6 0细胞凋亡过程中内源性TGF β1、TNF α及其受体基因以及TGF β1蛋白表达的变化 ;进而研究TGF β1、TNF α反义磷酸硫代脱氧寡核苷酸 (PSODN)对细胞凋亡的干预作用。结果　①As2 O3 诱导HL 6 0细胞凋亡过程中伴有TGF β1、TNF α表达上调 (处理前后mRNA拷贝数分别为 135 46± 12 4,4972 16± 187和 2 32 73± 2 2 9,6 742 17± 189) ,bcl 2表达下调 (处理前、后分别为 10 42 4± 2 74和 336 1± 89) ,细胞培养 2 4h上清中TGF β1蛋白水平明显提高 ,上升为对照组的 2 .0倍。②TGF β1、TNF α反义PSODN能够明显抑制As2 O3 诱导细胞凋亡的发生 ,并使细胞bcl 2mRNA及蛋白表达恢复到处理前的水平。结论　内源性TGF β1、TNF α在As2 O3 诱导HL 6 0细胞凋亡中起重要作用 ,两者均可通过下调bcl 2表达促进细胞凋亡。     

miRNA-146a-5p对癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路的影响

目的观察miRNA-146a-5p(miR-146a-5p)对癫痫大鼠海马神经元核因子κB(NF-κB)信号转导通路的影响。方法体外培养新生SD大鼠海马神经元,随后制备癫痫海马神经元模型,随机分为三组,空白对照组(control组):转染时添加等体积opti-MEM培养基;阴性对照组(NC组):转染80 n M浓度NC至癫痫大鼠海马神经元; miR-146a-5p组:转染80 n M浓度miR-146a-5p mimics至癫痫大鼠海马神经元。转染后培养24 h,再用200 ng/ml脂多糖(LPS)诱导6 h,采用免疫荧光双染法鉴定体外培养海马神经元,采用膜片钳技术检测正常大鼠海马神经元和癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测未经LPS诱导各组海马神经元miR-146a-5p表达水平及经LPS诱导后各组海马神经元核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκBα(p IκBα)、NF-κB P65、IKB激酶-β(IKKβ) mRNA表达水平,采用Western blot法检测经LPS诱导后各组海马神经元IκBα、p IκBα、NF-κB P65、IKKβ蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测经LPS诱导后各组细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达水平。结果体外培养7 d的癫痫大鼠海马神经元与正常大鼠海马神经元相比较形态未见明显异常;癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率明显较正常大鼠海马神经元明显增加(P 0. 05); miR-146a-5p组海马神经元miR-146a-5p表达水平明显高于control组和NC组(P 0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组海马神经元p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达水平明显低于control组和NC组(P 0. 05),而IκBαmRNA及蛋白表达水平明显高于control组和NC组(P 0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组细胞培养液中TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1表达水平明显低于control组和NC组(P 0. 05)。结论miR-146a-5p可抑制LPS诱导的癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路中p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达,促进IκBαmRNA及蛋白表达,减少TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1等炎症因子的释放。