犬左右心室肌细胞L型钙电流不均一性的研究

目的测定犬左、右心室3层心肌细胞上参与离子流平衡的内向电流L型钙电流(ICa.L)的特性。方法经酶解分离获得犬左、右心室外膜下细胞、M细胞和内膜下细胞,应用全细胞膜片钳技术,记录并比较不同部位心肌细胞的ICa.L,分析电流-电压曲线。结果ICa.L的峰值电流密度(pA/pF)在右心室外膜下细胞、M细胞和内膜下细胞分别为:-4.896±1.907(n=31),-3.406±0.904(n=37)和-2.788±0.756(n=33),心外膜下心肌细胞与M细胞比较,差异有统计学意义(P<0.05);在左心室分别为:-3.824±1.201(n=18),-4.854±1.485(n=20)和-2.988±1.082(n=17),3者之间两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。ICa.L的峰值电流密度在右心室心外膜下心肌细胞大于左心室(P<0.05),而右心室M细胞小于左心室(P<0.01),心内膜下心肌细胞左、右心室之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论ICa.L在犬左、右心室肌的不同细胞(外膜下心肌细胞、M细胞、内膜下心肌细胞)存在不均一性,导致右心室跨室壁的电不均一性较左心室明显。     

模拟失重大鼠心肌细胞I_(Ca)对β-受体激动剂的反应性

目的　研究模拟失重大鼠心肌细胞钙电流 (ICa)对β-肾上腺素受体激动剂的反应性变化 .方法　用尾部悬吊大鼠模型模拟失重 (4 wk) ,胶原酶分离心肌细胞 ,用膜片钳全细胞方式记录单个心肌细胞的膜电容和 ICa等 .给予β-肾上腺素受体激动剂 (异丙肾上腺素 ) ,记录观察 ICa的反应性 .结果　对照组与悬吊组的 ICa密度无明显差别 (P>0 .0 5 ) ,ICa电流密度 -电压曲线基本一致 ;加入异丙肾上腺素后 ,两组 ICa密度均明显增大 ,但是两组的增加幅度不同 ,悬吊组的增加幅度 (84.3± 8.2 ) %明显小于对照组 (10 9.3± 7.9) % (P<0 .0 5 ) .结论　模拟失重 4wk大鼠心肌细胞的 ICa密度无明显改变 ;模拟失重后心肌细胞 ICa对 β-肾上腺素受体激动剂的反应性降低     

犬左心室肌细胞钙电流异质性

目的研究犬左心室壁外膜层、中层(M细胞)及内膜层细胞的L型钙电流大小,观察氯化镉阻断钙电流后,三层心肌单个细胞跨膜动作电位的变化。方法应用膜片钳全细胞记录技术。结果去极电压为 10mv时,I_(Ca,L)电流的峰值达最大,在心外膜、M细胞及心内膜细胞间存在显著差异,分别为-4.0±1.2、-5.3±0.4及-4.3±1.2pA/pF,(P<0.05)。在其它去极电压,三层细胞钙电流值无显著差异。氯化镉(0.2mM)使三层细胞动作电位均缩短,心内膜、M细胞及心外膜细胞APD_(90)分别由用药前的436.4±39.0ms,511.6±48.7ms,431.8±42.36ms缩短至用药后的293.4±41.7,296.7±50.3,295.2±40.9ms,APD_(90)分别缩短32.8％,42.0％,31.6％(P<0.05)。结论犬心室外膜、中层(M细胞)及内膜细胞的L型钙电流分布的差异性。     

雌激素对大鼠心肌细胞钙的调控作用研究

目的　观察雌激素对大鼠心肌细胞钙转运的调控作用 .方法　应用膜片钳全细胞记录方法观察 L型钙通道电流 (ICa.L) ,共聚焦显微镜系统分析细胞内钙浓度 ([Ca2 +]i)的变化 .结果　应用 10 μmol· L- 1和 30 μmol· L- 1的 17β- Estradiol,分别使 ICa.L抑制到正常的 (4 8.1± 4.5 ) %和 (2 9.3± 5 .2 ) % (n=5 ,P<0 .0 1) . 10μmol· L- 1 的 17β- Estradiol可升高静息的培养心肌细胞[Ca2 +]i,荧光强度 (FI)值由 5 4.2± 13.6增加到 86 .5± 15 .3(n=6 ,P<0 .0 1) ;而对具有自发收缩的心肌细胞钙瞬变幅度有明显的抑制作用 ,由给…     

藻酸双酯钠对豚鼠心室肌细胞离子电流的作用

目的:观察藻酸双酯钠(Polysaccharide sulfate,PSS)对豚鼠单个心室肌细胞离子流的影响。方法:采用Ⅰ型胶原酶分离单个豚鼠心室肌细胞的方法,利用全细胞膜片箝记录技术,在不同箝制条件下,记录并分析了PSS对L-型Ca2+电流(ICa,L)、内向整流K+电流(IK1)的影响。结果:①PSS使ICa,L的激活时间常数变大,电流幅度减小,Ⅰ-Ⅴ曲线上移。在箝制电位为+10 mV时,PSS在6-9 min内使ICa,L的激活时间常数从(0.92±0.10)ms增加到了(1.15±0.11)ms(n=5,P<0.052);ICa,L的电流幅度从(16.80±1.71)pA/pF下降至(13.86±1.67)pA/pF(n=5,P<0.01)。②PSS可使IK1的内向成分和外向成分均增加。当箝制电位在-170 mV时,PSS能使IK1内向电流幅度从(224±16.17)pA／pF增加至(257±17.36)pA／pF(n=7,P<0.01);箝制电位在-50 mV时,PSS使IK1的外向电流幅度从(8.89±0.86)pA／pF增加至(10.38±1.18)pA／pF(n=7,P<0.05)。在反转电位附近时(-70--120 mV),PSS的作用不明显。PSS能使IK1的激活时间常数减小,当箝制电位在-160 mV时,激活时间常数从加药前的(1.05±0.11)ms减小到了加药后的(0.78±0.90)ms(n=7,P<0.01);同时,IK1的电导值变大,从(2.53±0.17)nS／pF增加到了(2.82 ±0.20)nS／pF(n=7,P<0.05)。结论:PSS对L-型Ca2+电流有抑制作用,对内向整?     

丹参对缺血心肌细胞L-型钙电流的影响

目的 :观察丹参对缺血心肌细胞L 型钙电流 (ICa L)的影响。方法 :应用膜片钳全细胞记录技术。结果 :5 0 ,10 0 ,2 0 0mg/L丹参分别将缺血心肌细胞ICa L 的峰值从 (6 5 9.7± 14 8.5 ) pA降至 (5 31.9± 113.2 ) pA、(492 .4± 4 9.3) pA、(341.8± 72 .6 )pA(n =8,P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论 :丹参能有效地减少缺血心室肌细胞的ICa L ,这种作用可能是其抗心肌缺血以及缺血性心律失常的机制之一     

在体犬心肌M区单相动作电位研究

目的比较在体犬M区(心肌中层)与心内膜层和心外膜层心肌的单相动作电位(MAP).方法应用Franz MAP接触电极记录技术.结果(1)心率为110次/分时体表心电图基本正常.M区和心外膜MAP,在复极早期有典型的"峰和园顶".此时心内膜层单相动作电位时程(MAPD)与M细胞相似均比心外膜层MAPD90长,分别为213±18ms、210±35ms和201±41ms(P＜0.01,n=9).(2)内膜层激动时间最短,M区的次之,外膜层的最长,它们分别为4.3±2.1ms、8.2±4.3ms和15.9±5.0ms(P＜0.01,n=9).结论在体情况下,心内膜层MAPD与M细胞相似均比心外膜层的长.     

淫羊藿苷对兔心室肌细胞L-型钙电流的影响

目的:利用膜片钳技术研究淫羊藿苷(ICA)对兔单个心室肌细胞L-型钙电流(ICa,L)的影响。方法:采用酶解法分离兔单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术观察10,20,40μmol/L的ICA对心室肌细胞ICa,L的作用。结果:①10,20,40μmol/L的ICA使兔心室肌细胞ICa,L最大峰电流密度从(15.81±1.23)pA/pF分别降至(11.27±0.89)pA/pF,(9.48±0.85)pA/pF和(6.87±0.81)pA/pF(n=6,P<0.05),抑制率分别为28.7%,40.0%和56.5%;ICA使ICa,L的电流-电压曲线上移,但不改变其基本形状;②20μmol/L ICA可以使钙通道稳态失活曲线左移并可减慢L-型钙通道失活后的恢复过程。结论:ICA对ICa,L具有浓度依赖性阻滞作用,这可能是其抗心律失常的重要机制之一。     

心房峡部L型钙电流特征的研究

目的研究心房峡部L型钙电流的特性,探讨心房峡部参与心律失常的机制。方法新西兰大白兔15只,麻醉后取心脏,灌流后分离右心房峡部及游离壁,利用全细胞膜片钳技术,对比观察心房峡部和右心房游离壁L型钙电流的电流密度,并观察异丙肾上腺素灌流后,其电流密度的变化。结果正常状态下,心房峡部和右心房游离壁L型钙电流的电流密度分别为-(7.03±0.71)pA/pF、-(6.30±0.61)pA/pF,二者比较差异无显著意义(P>0.05)。异丙肾上腺素灌流后,心房峡部和右心房游离壁L型钙电流的电流密度分别为-(11.01±0.46)pA/pF、-(8.51±0.31)pA/pF,两处的L型钙电流均显著增大,且心房峡部的L型钙电流密度显著大于右心房游离壁(P<0.01)。结论L型钙电流的异常变化可能是心房峡部参与心律失常发生机制的重要因素。     

利多卡因对家兔左右心室外膜心肌细胞电不均一性的影响

目的:探讨利多卡因对家兔左、右心室心外膜心肌细胞动作电位和钠电流(INa)的影响,阐明利多卡因引起左、右心室心外膜心肌细胞电不均一性机制。方法:酶解法分离家兔单个左、右心室心外膜心肌细胞,全细胞膜片钳技术记录左、右心室心外膜心肌细胞动作电位和INa在应用利多卡因前后变化。结果:在电流钳制下,对照组中的左、右心室心外膜心肌细胞上记录动作电位都具有典型的0至4期的形态,2相平台期有心外膜心肌细胞特有的穹窿样凸起;但在利多卡因组,左、右心室心外膜心肌细胞动作均明显地失去2相平台期穹窿样凸起和高度,右室心外膜心肌细胞动作电位失去2相平台期立即复极,形似三角形,左、右心室心外膜心肌细胞动作电位的幅度(APA)和复极化50%和90%(APD50和APD90)均明显减少(P<0.05),且右室心外膜心肌细胞的APA和APD50以及APD90受利多卡因影响后减小最为严重(P<0.05或0.01)。通过电压钳制方式,利多卡因使左、右心室心外膜心肌细胞的INa在各个指令电位下明显减小,而且右室心外膜心肌细胞INa减小的幅度要显著强于左室心外膜心肌细胞INa的减小幅度,当钳制电压为-20mV时,左、右心室心外膜心肌细胞的INa分别由(62.1±4.5)和(54.2±2.9)减小为(40.8±3.2)和(26.5±2.1)(P<0.05或0.01)。利多卡因还使左、右心室心外膜心肌细胞INa的I-V曲线明显上抬,尤其是使右室心外膜心肌细胞INa的I-V曲线处在其他曲线最上面,同时引起左、右心室心外膜心肌细胞的INa电流密度的最大峰值由-20mV略向右偏为-10mV。结论:利多卡因可以引起左、右心室心外膜心肌细胞电不均一性,其可能原因是利多卡因对右室心外膜心肌细胞动作电位和INa的影响程度明显强于左室相同情况。     

模拟失重大鼠心肌细胞ICa对β-受体激动剂的反应性

目的研究模拟失重大鼠心肌细胞钙电流（I     

人参皂甙单体Rb_1对豚鼠心肌细胞ICa~(2+)电流阻滞作用的研究

研究人参单体Ｒｂ１对ＩＣａ２＋电流的影响。采用全细胞电压钳技术记录了豚鼠心室肌细胞ＩＣａ２＋电流，绘出了电流—电压关系曲线。在保持电压－５０ｍＶ时，阶跃命令在一５０～＋６０ｍＶ，０ｍＶ时电流最大。并发现Ｒｂ１对ＩＣａ２＋电流有明显的阻滞作用。而且在１００μｍｏｌ／Ｌ，２００μｍｏｌ／Ｌ，３００μｍｏｌ／Ｌ，４００μｍｏｌ／Ｌ范围时有剂量依赖关系。     

乙醇对兔心室肌细胞L-型钙离子通道电流的影响

【目的】观察乙醇对兔心室肌细胞L-型钙离子通道电流（ICa,L）的影响。【方法】采用蛋白酶消化的成年兔单个心室肌细胞及膜片钳全细胞技术，记录不同浓度乙醇对ICa,L的作用。【结果】（1）乙醇抑制ICa,L峰值，24mmol／L和240mmol／L乙醇抑制率差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）24、80、240mmol／L乙醇使ICa,L的电流一电压（I—V）曲线上移，在各测试电压下，电流均减小，但不影响曲线形状，用乙醇后最大激活电压仍在0mV左右。【结论】致毒浓度（24mmol／L）的乙醇对ICa,L具有明显抑制作用。可导致心肌产生负性肌力作用，动作电位时程缩短，诱发心律失常。     

Sevoflurane postconditioning alleviates action potential duration shortening and L-type calcium current suppression induced by ischemia/reperfusion injury in rat epicardial myocytes

Background  It has been proved that sevoflurane postconditioning (SpostC) could protect the heart against myocardial ischemia/reperfusion injury, however, there has been few research focused on the electrophysiological effects of SpostC. The objective of the study was to investigate the effects of SpostC on action potential duration (APD) and L-type calcium current (I_{Ca, L}) in isolated cardiomyocytes.

Methods  Langendorff perfused SD rat hearts were randomly assigned to one of the time control (TC), ischemia/reperfusion (I/R, 25 minutes of ischemia followed by 30 minutes of reperfusion), and SpostC (postconditioned with 3% sevoflurane) groups. At the end of reperfusion, epicardial myocytes were dissociated enzymatically for patch clamp studies.

Results  Sevoflurane directly prolonged APD and decreased peak I_{Ca, L} densities in epicardial myocytes of the TC group (P <0.05). I/R injury shortened APD and decreased peak I_{Ca, L} densities in epicardial myocytes of the I/R group (P <0.05). SpostC prolonged APD and increased peak I_{Ca, L} densities in epicardial myocytes exposed to I/R injury (P <0.05). SpostC decreased intracellular reactive oxygen species (ROS) levels, reduced the incidence of ventricular tachycardia and ventricular fibrillation, and decreased reperfusion arrhythmia scores compared with the I/R group (all P <0.05).

Conclusions  SpostC attenuates APD shortening and I_{Ca, L} suppression induced by I/R injury. The regulation of APD and I_{Ca, L} by SpostC might be related with intracellular ROS modulation, which contributes to the alleviation of reperfusion ventricular arrhythmia.

     

新型重组海葵毒素hk2a对大鼠心室肌细胞离子通道的影响

目的观察新型基因重组海葵毒素rhk2a对大鼠心室肌细胞离子通道的影响。方法采用全细胞膜片钳技术分别记录rhk2a对大鼠心室肌细胞钠电流、L型钙电流和钠-钙交换电流的影响。结果与对照组相比,新型重组海葵毒素rhk2a能够明显减慢大鼠心室肌细胞钠通道的时间依赖性失活(τh)(14.15±4.6 ms vs2.03±0.30 ms, P<0.05),而rhk2a对大鼠心室肌细胞钙通道电流(-8.86±0.35 PA/PF vs-8.99±0.64 PA/PF,P>0.05)和钠-钙交换电流(-0.65±0.2 PA/PF vs-0.69±0.15 PA/PF, P>0.05)无明显直接作用。结论rhk2a对大鼠心室肌细胞钠通道的时间依赖性失活的减慢是rhk2a对心脏具有正性肌力效应的重要机制。     

四氢小檗碱衍生物86035对豚鼠心室肌L型钙通道的抑制作用

目的　研究氯苄基四氢小檗碱 (CPU) 86 0 35对豚鼠单个心室肌细胞L型钙通道的抑制作用 ,分析对L型钙通道相互作用的状态依赖性。方法　采用膜片钳全细胞技术 ,记录不同浓度(5 0～ 2 5 0 μmol/L)CPU86 0 35作用前后的L型钙电流 (ICa L)。结果　 (1)CPU86 0 35呈剂量依赖性地抑制L型钙电流 ,半数抑制浓度 (IC50 )为 75 μmol/L。(2 )CPU86 0 35对L型钙电流的抑制依赖于保持电位(HP)。HP =- 4 0mV时 ,75 μmol/LCPU86 0 35的抑制率为 4 9%± 2 % ,HP =- 80mv时 ,抑制率为6 4 %± 4 %。 (3)CPU86 0 35作用后 ,稳态激活曲线右移 ,V1/ 2 由对照的 6 7mV± 1 6mV变为 15 4mV±0 8mV。 (4)CPU 86 0 35作用后 ,稳态失活曲线右移 ,V1/ 2 由对照的 - 19 1mV± 2 5mV变为 - 12 6mV± 2 7mV。 (5 )用药后L型钙通道从失活状态恢复的时间变长。结论　CPU86 0 35对L型钙通道有较强的抑制作用 ,药物可能主要与通道的静息状态结合     

Angiotensin Ⅱ type 1 receptor modulation of L-type calcium currents in guine a-pig ventricular cells

Objective To study the cellular mechanism of the effect of Ang Ⅱ on I(Ca,L)in sing le guinea-pig ventricular cells by using losartan and 1-(5-Isoquinolinylsulfo nyl)-2-Methyl-Piperazine (H-7) as the Ang Ⅱ type 1 receptor (AT(1)) inhibit or and protein kinase C inhibitor, respectively.Methods Patch clamp techniques were used to study the cellular mechanism of the effect o f Ang Ⅱ on I(Ca,L) in single guinea-pig ventricular cells.Results In the whole cell patch clamp recording model, Ang Ⅱ stimulated I(Ca,L) in a concentration dependent manner; the maximal effect was obtained at 100 nmol/ L (n=9). At 30 nmol/L, Ang Ⅱ stimulated peak I(Ca,L) from 11.3±0.6 pA /pF to 15.3±0.6 pA/pF (at +10 mV, n=9, P&lt;0.05). 100 nmol/L Losartan, a specific AT(1) receptor inhibitor, had no effect on I(Ca,L) (n=9), but th e effect of Ang Ⅱ on I(Ca,L) was inhibited by 100 nmol/L Losartan. Ang Ⅱ on I(Ca,L) was also inhibited by 20 μmol/L H-7, a specific protein kinas e C inhibitor, whereas H-7 alone has no effect on I(Ca,L) (n=9).Conclusion Ang Ⅱ stimulates I(Ca,L) in guinea-pig ventricular cells by binding to AT 1 through a transduction pathway involving protein kinase C.