柚皮苷对人卵巢癌SKOV3细胞P38MAPK及ERK1/2蛋白表达的影响

目的:探讨中药柚皮苷对人卵巢癌SK-OV3细胞P38MAPK及ERK1/2蛋白表达水平的影响.方法:体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,分为空白对照组、柚皮苷10、20、40 μmol/L组、塞来昔布80 μmol/L组.Western Blot测定培养48 h后各组细胞中P38MAPK及ERK1/2蛋白表达水平.结果:Western Blot结果显示,与空白对照组相比,低浓度柚皮苷组(10、20 μmol/L)对SKOV3细胞P38MAPK及ERK1/2蛋白的表达无明显影响,而40 μmol/L柚皮苷及塞来昔布组可明显下调P38MAPK及ERK1/2蛋白表达,具有统计学差异(P＜0.05).结论:柚皮苷能抑制人卵巢癌SKOV3细胞P38MAPK及ERK1/2蛋白的作用,从而可能阻断卵巢癌的发生、发展.     

柚皮苷对糖尿病心肌病大鼠心肌组织核因子KB炎症信号通路的影响

目的探讨柚皮苷对糖尿病心肌病大鼠心肌组织核因子KB（NF—KB）炎症信号通路的影响,初步阐明柚皮苷对糖尿病心肌病的防护作用机制。方法高脂高糖喂养和-次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）建立糖尿病心肌病大鼠模型,完全随机分为模型对照组（糖尿病心肌病组,9只）、柚皮苷治疗组（9只）和正常对照组（10只）。糖尿病大鼠模型成功后,柚皮苷治疗组予Naringin粉末40mg／kg灌胃,正常对照组和糖尿病心肌病组则按体重予蒸馏水灌胃。通过免疫组织化学法测定心肌组织NF—KB蛋白的表达,放射免疫分析法分别检测外周血肿瘤坏死因子仪（TNF-a）、白细胞介素6（IL-6）、IL-1p含量,透射电镜观察心肌组织超微结构。结果与正常对照组比较,糖尿病心肌病组大鼠心肌组织NF—KB蛋白的阳性平均光密度以及外周血TNF-a、IL-6、IL-1p分泌明显增加（均P〈0．05）,柚皮苷治疗后,NF—KB蛋白、TNF-a、IL-6和IL．1B水平明显下降[（0．162±0．013）μg／L比（0．222±0．018）μg／L,（1．35±1．02）μg／L比（1．98±1．37）μg／L,（15．8±14．6）μg／L比（35．8±21．1）μg／L,（0．14±0．15）μg／L比（0．27±0．23）μg／L,均P〈0．05]。与正常对照组比较,糖尿病心肌病组大鼠心肌超微结构损伤明显;柚皮苷治疗组心肌超微结构损伤减轻。结论柚皮苷可减轻糖尿病心肌病心肌的损伤,其机制可能与其抑制糖尿病心肌病大鼠心肌组织的NF—KB信号炎症通路有关。     

塞来昔布对人胃癌SGC-7901细胞迁移、MMP-9和VEGF表达的影响

目的观察塞来昔布对人胃癌SGC-7901细胞迁移能力及其对MMP-9 mRNA和VEGF mRNA表达的影响。方法体外培养胃癌SGC-7901细胞,将细胞分为对照组及塞来昔布低、中、高剂量组（分别加入塞来昔布25、50、100μmol/L）,处理SGC-7901细胞24 h后,应用损伤修复实验观察塞来昔布对SGC-7901细胞迁移能力的影响;RT-PCR法检测塞来昔布对SGC-7901细胞MMP-9 mRNA和VEGF mRNA表达的影响。结果 SGC-7901细胞的迁移距离随塞来昔布浓度的增加而减少,中、高剂量组与对照组比较差异有统计学意义（322.33±0.75、245.51±0.58 vs 713.23±0.44,P＜0.05）。RT-PCR法检测结果显示,随着塞来昔布处理浓度的增高,胃癌细胞MMP-9 mRNA和VEGF mRNA的表达均降低,且与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论塞来昔布可抑制人胃癌SGC-7901细胞的迁移,其抗肿瘤机制可能与抑制COX-2下游的MMP-9和VEGF表达有关。     

ERK信号转导途径在小檗碱抑制脂多糖诱导的COX一2表达中的作用

目的探讨小檗碱是否抑制脂多糖诱导的COX-2mRNA及蛋白表达,以及小檗碱是否通过ERK信号转导途径抑制cOx-2的表达。方法取健康志愿者外周血,分离及培养单核细胞,分为五组,分别为对照组;脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）组;LPS＋小檗碱25μmol／L组;LPS＋小檗碱50μmol/L组;LPS＋小檗碱100μmoL／L组。分别在培养后30min,6h,12h,24h提取细胞,行RT—PCR法测定COX-2mRNA水平,行westemblot法测定ERK、P—ERK及COX-2蛋白水平。同时加入选择性ERK抑制剂,分别测定C0X-2mRNA及蛋白水平。结果与对照组相比,LPS组COX-2mRNA及蛋白表达明显增强（P〈0．01）。与LPS组相比,小檗碱组COX-2mRNA及蛋白表达明显抑制（P〈0．05）,且随着浓度增加,抑制作用更明显,在给药后12h,小檗碱对COX-2抑制作用最强。与LPS组相比,小檗碱组ERK活性水平有明显统计学差异（P〈0．05）。加入ERK抑制剂之后,COX-2mRNA及蛋白水平降低明显（P〈0．05）。结论小檗碱能抑制人外周血单核细胞cOx-2mRNA及蛋白水平,其作用程度呈浓度依赖性,小檗碱对ERK活性蛋白表达有明显抑制作用。小檗碱可能通过ERK信号转导途径抑制人外周血单核细胞C0x_2mRNA及蛋白表达。     

柚皮素对氧化应激所致成骨细胞凋亡的影响及机制研究

目的：观察柚皮素对氧化应激导致的成骨细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法体外分离培养成骨细胞,细胞分空白对照组、单纯 H2 O2作用组、H2 O2＋0 J．1μmol／L 柚皮素组、H2 O2＋1μmol／L柚皮素组、H2 O2＋10μmol／L柚皮素组。 MTT法检测成骨细胞活力;流式细胞术检测成骨细胞凋亡率;荧光显微镜观察活性氧（ ROS）含量;比色法检测丙二醛（ MDA）含量;Real time-PCR和Western-blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表达情况。结果与空白对照组比较,单纯H2 O2处理组细胞活性明显降低,凋亡率及ROS、MDA含量明显增加;同时Bcl-2 mR-NA和蛋白表达明显下调,Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达明显上调（ P ＜0．05）。与单纯H2 O2处理组比较,柚皮素预处理24 h能够明显增强细胞活性,降低细胞凋亡率及ROS、MDA含量,上调Bcl-2 mRNA和蛋白表达,下调Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达,呈剂量依赖性（ P ＜0．05）。结论柚皮素在氧化应激条件下能够促进成骨细胞增殖,抑制成骨细胞凋亡,其机制与上调Bcl-2表达,下调Bax、Caspase-3表达有关。     

5-氟尿嘧啶对人SKOV3卵巢癌细胞株细胞增殖和Skp2的影响

目的：探讨体外不同浓度5-氟尿嘧啶对人SKOV3卵巢癌细胞株细胞增殖和Skp2表达的影响。方法不同浓度5-氟尿嘧啶0、10、20、40和80μg／ml作用于人SKOV3卵巢癌细胞株后72h,通过细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测各组卵巢癌细胞增殖情况,采用免疫细胞化学染色法和Realtime PCR技术检测各组Skp2蛋白和mR-NA水平的变化。结果不同浓度的5-氟尿嘧啶作用于人SKOV3卵巢癌细胞株72h后,随着浓度的增加,细胞增殖受限明显,Skp2蛋白和mRNA表达水平明显降低,并与5-氟尿嘧啶的浓度呈负相关（ r＝－0．816,P＜0．05;免疫组化Skp2：r＝－0．926,P＜0．05;RealtimePCRmRNA：r＝－0．899,P＜0．05）。结论5-氟尿嘧啶能够抑制SKOV3卵巢癌细胞株的增殖,并能抑制Skp2蛋白和mRNA的表达。     

硼替佐米对人卵巢癌耐顺铂细胞株的生长抑制作用

目的探讨硼替佐米对人卵巢癌耐顺铂细胞株（SKOV3／DDP）的逆转作用及其可能机制。方法体外培养人卵巢癌细胞株（SKOV3）和SKOV3／DDP,空白对照组加RPMI-1640完全培养基;硼替佐米组浓度分别为0．0625、0．1250、0．2500、0．5000、1．0000、2．0000μmol／L,检测不同作用时间对SKOV3／DDP的生长抑制情况;采用流式细胞术检测0．5000μmol／L硼替佐米作用后细胞周期及凋亡率的变化。结果①硼替佐米对SKOV3／DDP细胞生长抑制情况：0．0625、0．1250、0．2500、0．5000、1．0000、2．0000μmol／L的硼替佐米作用SKOV3／DDP细胞24h的生长抑制率依次为（1．19±0．07）％、（2．24±0．08）％、（3．47±0．20）％、（4．61±0．07）％、（5．80±0．17）％、（6．43±0．10）％;作用48h的生长抑制率依次为（9．39±0．08）％、（12．17±0．23）％、（18．08±0．25）％、（41．11±0．10）％、（55．45±0．41）％、（64．91±0．18）％;作用72h的生长抑制率依次为（13．21±0．32）％、（20．18±0．23）％、（22．91±0．35）％、（52．08±0．10）％、（76．59±0．39）％、（83．23±0．38）％。空白对照组抑制率为0,各实验组与空白对照组之间两两比较,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。②细胞周期及凋亡率的变化情况：0．5000μmol／L硼替佐米作用SKOV3／DDP细胞48h,细胞周期G2／M期的比例为22．8％,空白对照组为10．1％,差异有统计学意义（P〈0．05）;凋亡率分别为11．7％和2．2％,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论硼替佐米能够逆转SKOV3／DDP细胞的耐药作用;并将SKOV3／DDP的细胞周期阻滞于Gz／M期。     

Her-2基因表达下调后卵巢癌细胞对化疗敏感性的改变

目的观察Her．2基因表达下调后,卵巢癌细胞系SKOV3．ip1细胞对紫杉醇敏感性的改变。方法1．细胞培养：将原始SKOV3．ip1和低表达Her-2的SKOV3．ip1细胞常规培养于RPM11640培养基,置于37℃,5％CO2培养箱中培养;2-蛋白印迹（WesternBlot）方法检测Her12蛋白表达：WesternBlot方法分别检测Her-2基因在原始SKOV3．ip1和低表达Her-2的SKOV3．ip1细胞的表达,并比较其表达差异;3．3·（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）试验：将不同浓度（0,6,12,24,48,96μg／m1）紫杉醇注射液分别作用于SKOV3．ip1细胞和低表达Her-2的SKOV3．ip1细胞,MTT方法检测细胞抑制率,并比较高、低表达Her-2基因的SKOV3．ip1细胞抑制率的差异。结果在紫杉醇注射液浓度分别为6,12,24,48μg/ml时,低表达Her．2的SKOV3．ip1细胞抑制率分别是（45．50±0．95）％,（65．37±0．56）％,（76．83±0．27）％,（81．83±0．69）％;高表达Her-2的SKOV3．ip1细胞抑制率分别是（36,13±1．74）％,（56．43±2．19）％,（67．57±1．96）％,（74．30±1．10）％。两者比较差异有统计学意义（P〈0．01）;而当紫杉醇注射液浓度达到96μg／ml时,两种细胞的抑制率趋于一致,接近100％。结论Her-2基因表达下调后,SKOV3．ip1细胞对紫杉醇注射液敏感性提高。     

红景天苷对经紫外线辐射的成纤维细胞中Fas和Bcl-2mRNA表达的影响

目的观察红景天苷对经紫外线A／B（UVA／UVB）辐射的体外培养人皮肤成纤维细胞中Fas和Bcl-2mRNA表达的影响,探讨红景天苷抑制细胞凋亡与凋亡相关细胞因子的关系。方法在体外培养人皮肤成纤维细胞并随机分为正常对照组、红景天苷组、UVB组、UVB＋红景天苷组、UVA组、UVA＋红景天苷组6组,通过反转录聚合酶链反应法检测Fas和Bcl-2的mRNA表达。结果UVB、UVA辐射体外培养的成纤维细胞后,FasmRNA表达增加[（0．45±0．04）,（0．44±0．04）比（0．13±0．03）],Bcl-2mRNA表达减弱[0．17±O．01,0．17±0．03比（0．13±O．03）];加入红景天苷后Fas和Bcl-2的mRNA表达分别降低[（0．17±0．04）比（0．45±0．04）,0．18±0．03比0．44±0．04;（0．31±0．02）比（0．17±0．01）,（0．28±0．04）比（0．17±O．03）]。结论红景天苷对紫外线引起的Fas和Bcl-2的mRNA表达具有抑制作用,延缓UVB、UVA辐射造成的细胞凋亡过程。     

基于NF-κB/MMP9信号轴研究姜黄素对卵巢癌细胞增殖的抑制作用

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)/基质金属蛋白酶9(MMP9)信号轴在姜黄素抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖中的作用,为姜黄素的利用提供依据。方法 体外培养卵巢癌SKOV3细胞,随机分为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L姜黄素组和对照组,乳酸脱氢酶（LDH）实验检测姜黄素对SKOV3细胞毒性,MTT法检测卵巢癌SKOV3细胞的增殖情况。根据LDH和MTT实验结果,对10μmol/L、20μmol/L姜黄素组和对照组进行进一步分析,RT-PCR和Western blot检测卵巢癌SKOV3细胞中NF-κB、MMP9 mRNA和蛋白相对表达水平。结果 随着剂量的增加,姜黄素对SKOV3细胞的毒性增强,并具有剂量依赖性,差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组相比,随着剂量的增加,姜黄素可以显著降低卵巢癌SKOV3细胞的存活率,并具有剂量依赖性,差异有统计学意义（P<0.05）。姜黄素可以显著降低SKOV3细胞中NF-κB和MMP9 mRNA相对表达水平,降低SKOV3细胞中p-NF-κB和MMP9蛋白表达水平,差异有统计学意义（P<0....     

高效液相色谱法测定七叶灵颗粒中柚皮苷的含量

目的建立用高效液相色谱法测定七叶灵颗粒中柚皮苷含量的方法。方法使用KromasilC18色谱柱（250．0mm×4．6mm,5μm）,流动相为乙腈：4％冰醋酸（17：83）,检测波长为224nm,流速：1ml／min,柱温30℃。结果该色谱条件下显示能良好分离柚皮苷峰,避免杂质干扰,柚皮苷在0．08～2．00μg范围线性关系良好（r=0．9999）,精密度相对标准偏差（RSD）：1．97％（n=5）。柚皮苷平均加样回收率为102．60％,RSD=1．86％（n=6）。结论用高效液相色谱法测定七叶灵颗粒中柚皮苷含量方法简便,重现性好,经过多批制剂检测,结果稳定,可用于七叶灵颗粒中柚皮苷的含量测定。     

塞来昔布对兔动脉粥样硬化组织中环氧合酶-2的作用研究

目的:观察环氧合酶-2(COX-2)在兔主动脉粥样硬化(AS)组织中的表达,探讨COX-2与AS的关系及其抑制剂塞来昔布抗AS的作用。方法:取新西兰兔18只,随机分为对照组、高胆固醇组(HC)和塞来昔布组(20mg·kg·d-1)。喂养14周后测兔主动脉AS斑块面积及主动脉内膜/中膜厚度值,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化、蛋白印记法检测COX-2 mRNA和蛋白的表达。结果:与HC组比较,塞来昔布AS斑块面积、内膜/中膜厚度值、COX-2 mRNA及蛋白表达明显降低(P<0·01);COX-2 mRNA和蛋白的表达(免疫组化、蛋白印记)强弱与AS斑块面积显著正相关(r=0·98、0·97、0·96,P均<0·01)。结论:COX-2在AS斑块中表达增强,且与AS的严重程度相关,提示COX-2可作为AS治疗的新靶点,塞来昔布可抑制其表达从而发挥抗AS作用。     

丝裂霉素联合塞来昔布对膀胱癌T24细胞增殖的影响研究

目的:研究体外丝裂霉素(MMC)联合塞来昔布对浅表性膀胱癌T24细胞增殖的影响及其可能机制。方法:体外培养浅表性膀胱癌T24细胞,分为MMC[0(对照组)、2、5、10、25、50μmol/L]组及其与塞来昔布(50μmol/L)混合组,每个浓度5个复孔,采用MTT法检测作用24h后细胞的增殖抑制率。采用免疫组化法、实时定量聚合酶链式反应法、酶联免疫吸附测定法检测对照组、MMC(50μmol/L)组和混合[塞来昔布+MMC(50μmol/L)]组作用48h细胞中Bcl-2蛋白、作用24h细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达及作用96h内VEGF蛋白浓度。结果:MMC能明显抑制细胞增殖(P<0.05),且呈浓度依赖性;塞来昔布能明显增强MMC对细胞的增殖抑制作用(P<0.05);与对照组比较,MMC组和塞来昔布+MMC组细胞中Bcl-2蛋白、VEGF mRNA表达均明显降低(P<0.05),且后2组组间比较有统计学差异(P<0.05);塞来昔布+MMC组细胞中VEGF蛋白浓度随作用时间延长明显降低(P<0.01)。结论:塞来昔布可协同增强MMC抑制T24细胞增殖的作用,其机制可能与降低Bcl-2、VEGFmRNA表达水平和抑制细胞分泌VEGF蛋白作用有关。     

腺苷蛋氨酸治疗慢性肝病伴胆汁淤积的临床观察

目的：探讨腺苷蛋氨酸治疗慢性肝病伴胆汁淤积的临床疗效。方法：选择慢性肝病伴胆汁淤积的患者61例,随机分为治疗组和对照组。对照组30例给予综合保肝治疗,静脉滴注甘草酸二胺、促肝细胞生长素;治疗组31例在上述治疗的基础上加用腺苷蛋氨酸。结果：治疗2周后,治疗组总有效率为90.3%,显著高于对照组的70.0%（P＜0.05）;总胆红素（TbiL）、胆汁酸（TBA）、碱性磷酸酶（ALP）及谷氨酸转肽酶（GGT）分别下降为（60.2±15.6）umol/L、（112.1±23.3）umol/L、（140.2±32.7）U/L、（180.6±41.3.0）U/L,与对照组比较差异具有统计学意义（P＆lt;0.05）。结论：腺苷蛋氨酸治疗慢性肝病伴胆汁淤积能显著改善临床症状和肝功能指标,加速黄疸消退,安全性好。     

尼美舒利抑制肺腺癌细胞增殖机制研究

目的探讨尼美舒利对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法用噻唑蓝比色法（MTT）法观察尼美舒利对肺腺癌细胞生长的影响;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,RT-PCR测定suvivin mRNA的表达变化,Western blot检测suvivin和caspase-3蛋白的表达变化。结果各浓度尼美舒利可抑制A549细胞的生长,其半数抑制量（IC50）为162.25μmol/L。尼美舒利可诱导肺腺癌细胞凋亡,最高凋亡率为（21.4±3.1）%。细胞周期分析表明,尼美舒利能使肺腺癌细胞G0/G1期比例增高,S期比例降低。尼美舒利作用后,环氧合酶2（COX-2）和survivin mRNA及蛋白的表达较对照组降低（P〈0.05）,而caspase-3蛋白的表达则较对照组明显增高（P〈0.05）。结论选择性COX-2抑制剂尼美舒利通过抑制COX-2和survivin的表达,导致caspase-3上调,抑制肺腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

冠脉通胶囊治疗冠心病心绞痛临床观察

目的：观察冠脉通胶囊对冠状动脉粥样硬化性心脏病心绞痛NO、MDA、SOD的影响及其临床疗效。方法：60例随机分为2组,治疗组30例口服,冠脉通胶囊,每次3粒,每日3次：对照组30例口服速效救心丸每次5丸,每日3次、记录服药前后NO、MDA、SOD、心绞痛症状、心电图ST—T改变的时间。结果：治疗组患者NO、SOD明显升高,MDA明显降低tNO由（23．52±2．60）umol／ml升高为（32．86±3．72）umol／ml。SOD由（70．11±11．24）u／L升高为（81．94±5．08）u／L,MDA由（18．32±2．02）um／ml降低为（10．21±133）um／ml;心绞痛总有效率92．65％,心电图改善总有效率为68．54％心电图缺血性ST—T改变的时间由（80．56±14．52）min改善为（15．24±5．41）min。结论：冠脉通胶囊治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病心绞痛疗效明显,能明显升高NO、SOD,明显降低MDA,且无任何毒副作用．     

颈动脉内中膜厚度与不同类型急性缺血性脑卒中的关系

目的探讨颈动脉内中膜厚度（IMT）与大动脉粥样硬化型（LAA）和小动脉闭塞型（SAO）急性缺血性脑卒中的关系。方法根据影像学以及临床表现,依据TOAST分型,将197例急性缺血性脑卒中患者分为LAA组（63例）与SAO组（134例）,2组患者均行颈部血管B型超声检查,比较2组患者IMT、C反应蛋白及血脂。结果LAA组IMT、C反应蛋白明显高于SAO组[IMT为（0．88±0．34）mm比（0．76±0．22）mm;C反应蛋白为4．63（2．29,11．99）mg／L比2．98（1．82,6．70）mg／L],LAA组血糖、糖化血红蛋白、纤维蛋白原、同型半胱氨酸、脂蛋白a、三酰甘油、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇与SAO组差异无统计学意义[分别为（6．4±2．3）mmol／L比（2．0±0．8）mmol／L、（6．4±1．6）％比（6．1±1．2）％、（3．6±1．1）g/L比（3．3±0．9）g／L、（22±11）umol／L比（20±11）umol／L、（305±181）mg／L比（267±143）mg／L、（1．5±0．8）mmol／L比（1．8±1．5）mmol／L、（4．1±1．1）mmol／L比（4．1±1．1）mmol／L、（1．33±0．29）mmol／L比（1．46±0．64）mmol／L、（2．0±0．9）mmol／L比（2．0±0．8）mmol／L,P〉0．05]。结论LAA缺血性脑卒中患者的IMT与C反应蛋白均高于SAO缺血性脑卒中患者,提示2种缺血性卒中可能有不同的发病机制。