人脐带间充质干细胞移植治疗中枢神经系统疾病的研究进展

神经系统疾病发生后,由于病变的神经细胞不能有效地进行再生修复,而使神经系统疾病成为致死率、致残率高居榜首的疾病之一.因此,中枢神经系统的修复与再生一直是研究热点,近年来干细胞在修复神经系统损伤中的作用备受关注.目前研究较多的干细胞主要有3类,即胚胎干细胞、胎儿干细胞和成体干细胞.     

人脐带间充质干细胞治疗膝关节骨性关节炎及与中医药的相关性探讨

人体的各种组织,包括骨髓、脂肪、滑膜、外周血和脐带均含有间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells,MSCs）。人类脐带间充质干细胞（Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells,HUMSCs）属于MSCs的一种,具有自身的独特之处。MSCs功能十分强大,可以分化成脂肪细胞、肌肉细胞、神经细胞、骨细胞等多种组织细胞。MSCs不仅可以更新修复旧的人体细胞,治疗多种免疫性疾病,还擅长治疗骨骼和肌肉衰退型疾病。基于此,MSCs备受推崇。膝关节骨性关节炎（Knee Osteoarthritis,KOA）是一种以关节软骨退变为主的迁延性疾病,患者以中老年患者居多。现有疗法中无论是口服药还是注射药,疗效都不是十分理想。文章介绍MSCs用于临床的潜力、HUMSCs对关节软骨的作用机制,以及中医药与HUMSCs的相关性等,旨在为临床及科研诊疗KOA提供新思路。     

脐血干细胞和脐带间充质干细胞联合移植治疗自闭症

目的探讨干细胞移植治疗自闭症的可行性、疗效和安全性。方法将脐血干细胞和脐带间充质干细胞分别通过静脉输注和腰穿鞘内注射途径移植到自愿接受干细胞移植的2例自闭症患者体内。术后随访6个月定期观察患者临床症状及各项指标的变化,并采用儿童自闭症评定量表(CARS)和临床总体评定量表(CGIS)进行综合分析。结果治疗后患者临床症状较治疗前明显好转,并且随访半年症状持续缓解无复发。2例患者CARS较治疗前明显降低、CGIS较治疗前明显好转,移植过程中及治疗后未出现严重的并发症和明显的不良反应。结论脐血干细胞和脐带间充质干细胞联合移植治疗自闭症患者是一种值得借鉴的方法。     

脐带间充质干细胞辅助治疗难治性类风湿关节炎2例分析

目的观察脐带间充质干细胞辅助治疗难治性类风湿关节炎的疗效和安全性。方法将细胞总数为(5~7)×107个的脐带间充质干细胞通过静脉输注途径移植到自愿接受干细胞移植的2例难治性类风湿关节炎患者体内,4次为1个疗程,每次间隔1周。治疗后随访1年定期观察患者临床症状及各项生化和免疫学指标的变化并进行综合分析。结果脐带间充质干细胞辅助治疗后1个月,2例患者的临床症状均明显改善,28个关节的疾病活动度评分(DAS-28)由3.6分和4.0分别降低为2.2分和2.6分,血沉、C反应蛋白水平和类风湿因子抗体滴度也较治疗前明显降低。随访1年未观察到与治疗有关的不良反应,且症状持续缓解无复发。结论脐带间充质干细胞辅助治疗难治性类风湿关节炎可缓解临床症状,且未观察到与治疗有关的不良反应,安全性好。     

枸杞多糖保护人脐带间充质干细胞对抗氧化损伤研究

目的：探讨枸杞多糖(LBP)对人脐带间充质干细胞(HUC-MSCs)的抗氧化损伤保护作用。方法：采用200μmol/L H₂O₂刺激HUC-MSCs 6 h建立氧化损伤模型。细胞随机分为正常对照组(NC)、H₂O₂处理的模型组(M)、VC处理的阳性药对照组(PC)、枸杞多糖低剂量组(LBP-L)、枸杞多糖中剂量组(LBP-M)和枸杞多糖高剂量组(LBP-H)。用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力,荧光分光光度计检测细胞内活性氧(ROS)水平。RT-PCR技术分析细胞凋亡相关基因Bax、Caspase-3和Caspase-9表达水平。结果：经200μmol/L H₂O₂刺激HUC-MSCs 6 h后,细胞体积缩小,呈明显的凋亡样变,表明HUC-MSCs氧化损伤模型建立成功;CCK-8实验结果显示,与NC组比较,M组的细胞存活率明显降低(P <0.01);与M组相比,LBP处理组细胞存活率逐渐升高(P <0.05)。ROS实验结果表明,与NC...     

不同消化时间下胶原酶对人脐带间充质干细胞分离的影响

目的:比较胶原酶的不同消化时间,观察所获得的间充质干细胞的数量,确定最为理想的消化时间。方法:分别采用3h、5h、7h的消化时间分离脐带间充质干细胞;通过传代进行纯化和扩增培养,绘制生长曲线;用流式细胞仪检测其表面标志。结果:分离出的间充质干细胞贴壁后为梭形,呈平行排列生长或漩涡状生长,并且消化时间为5h时收获到的细胞数量最多;流式细胞仪检测结果显示,获得的间充质干细胞均表达CD73、CD105、HLA-ABC,不表达CD34、CD45、HLA-DR。结论:胶原酶消化法从人脐带中分离培养的细胞具有间充质干细胞的生物学特性,并且消化5h收获得的间充质干细胞数量最多,生长状况最好。     

冻存复苏对脐带间充质干细胞生物学特性的影响

目的观察脐带间充质干细胞经冻存复苏后的生物学特性,并鉴定其是否具有间充质干细胞的特征。方法采用组织块贴壁法从人脐带组织中分离培养间充质干细胞,将传至第3代的细胞进行冻存6个月后复苏,观察冻存前和冻存复苏后细胞的形态学变化,比较冻存前后细胞的存活率,测定细胞生长曲线,并用流式细胞仪检测冻存后细胞表面抗原的表达情况。结果组织块贴壁法可以成功地分离培养脐带间充质干细胞;经低温冻存复苏后细胞仍保持贴壁生长的特性,形态未发生明显变化;复苏后细胞存活率与未冻存细胞相比差异无统计学意义;冻存前后细胞的生长曲线相似;流式细胞仪分析冻存后细胞表面高表达间充质干细胞抗原CD29、CD90、CD44、CD105,低表达或不表达造血干细胞抗原CD34、CD45和白细胞相关抗原HLA-DR。结论冻存复苏对脐带间充质干细胞的生物学特性无明显影响,冻存后细胞符合间充质干细胞的基本要求。     

脐带间充质干细胞的生物学特性及其临床应用

脐带来源的间充质干细胞（Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells,UC-MSCs）最有可能成为最具临床应用前景的多能干细胞。UC-MSCs表达多种胚胎干细胞的特有分子标志,具有分化潜力大、增殖能力强、免疫原性低、取材方便、无道德伦理问题的限制、易于工业化制备等特征,能够成为骨髓间充质干细胞的理想替代物,而且具有更大的应用潜能[1]。     

脐带间充质干细胞经肝动脉移植治疗失代偿期肝硬化的临床研究

目的探讨人脐带间充质干细胞(UC-MSC)经肝动脉途径移植治疗失代偿期肝硬化的临床疗效及安全性。方法 15例失代偿期肝硬化患者采用人UC-MSC经肝动脉途径移植治疗,治疗后定期观察患者血清转氨酶(ALT、AST)、总胆红素(TBil)、白蛋白(ALB)、凝血酶原时间(PT)和纤维蛋白原(FIB)水平变化,并观察患者临床症状及体征的改善情况及不良反应。结果 UC-MSC移植治疗后2周,各项肝功能指标与治疗前比较无显著性差异;治疗后4周,除ALT和AST有所改善外(P均<0.05),其余指标无明显改善;治疗后8周各项肝功能指标均有改善(P均<0.05),12周有显著性改善(P均<0.01)。治疗后4周大多数患者的临床症状有明显改善;12周后患者总体生存率为93%,1例患者在UC-MSC静脉移植后8周因为肝性昏迷而死亡。患者均未发生与细胞移植相关的不良反应。结论 UC-MSC经肝动脉途径移植是治疗失代偿期肝硬化的一种安全有效的方法,短期内可以改善失代偿期肝硬化患者肝功能及临床症状,是一种值得推荐的治疗方法。     

5例异基因造血干细胞移植术后合并症应用人脐带间充质干细胞患者的护理

目前,异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)已成为治疗白血病等恶性血液病的一种有效方法。但移植术后合并症的发生严重制约了移植效果和受者术后生存时间,间充质干细胞(MSCs)在体外易于分离、扩增,同时还具有再生修复实质组织器官和免疫调节的生物学特性,在治疗移植术后合并症中有着积极作用[1-3]。人脐带间充质干细胞(HUMSCs)是胎盘和脐带来源的新的多能间充质细胞,因为其具有取材方便、来源广、数量充足、增殖能力强、长期传代不改变、分泌具有合适构成的细胞外基质等特点,越来越多地应用于临床,取得了满意的疗效[4-7]。我科自2012年1～9月对5例异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后合并症的患者行HUMSCs输注,在输注前、中及后配合精心护理,患者合并症好转,疗效显著。     

脐带间充质干细胞经肝动脉移植治疗失代偿期肝硬化的临床研究

目的探讨人脐带间充质干细胞（UC-MSC）经肝动脉途径移植治疗失代偿期肝硬化的临床疗效及安全性。方法 15例失代偿期肝硬化患者采用人UC-MSC经肝动脉途径移植治疗,治疗后定期观察患者血清转氨酶（ALT、AST）、总胆红素（TBil）、白蛋白（ALB）、凝血酶原时间（PT）和纤维蛋白原（FIB）水平变化,并观察患者临床症状及体征的改善情况及不良反应。结果 UC-MSC移植治疗后2周,各项肝功能指标与治疗前比较无显著性差异;治疗后4周,除ALT和AST有所改善外（P均〈0.05）,其余指标无明显改善;治疗后8周各项肝功能指标均有改善（P均〈0.05）,12周有显著性改善（P均〈0.01）。治疗后4周大多数患者的临床症状有明显改善;12周后患者总体生存率为93%,1例患者在UC-MSC静脉移植后8周因为肝性昏迷而死亡。患者均未发生与细胞移植相关的不良反应。结论 UC-MSC经肝动脉途径移植是治疗失代偿期肝硬化的一种安全有效的方法,短期内可以改善失代偿期肝硬化患者肝功能及临床症状,是一种值得推荐的治疗方法。     

脐带间充质干细胞移植对老年痴呆小鼠SAMP8学习记忆的影响

目的：探讨脐带间充质干细胞(HUMSCs)移植对老年痴呆小鼠SAMP8学习记忆能力的影响。方法：培养人脐带间充质干细胞,通过尾静脉以高中低3个剂量(2.5×105/0.2 mL/20 g、5×105/0.2 mL/20 g、1×106/0.2 mL/20 g)分别向7月龄SAMP8老年痴呆小鼠移植HUMSCs,并设立移植生理盐水组和R1小鼠正常对照组。HUMSCs移植45 d后,MORRIS水迷宫和跳台实验检测其学习记忆能力。结果：与R1正常对照小鼠比较,SAMP8老年痴呆小鼠生理盐水组学习记忆能力明显降低;和移植生理盐水组比较,细胞移植低剂量组水迷宫逃避潜伏期显著缩短(P<0.05),穿越平台次数显著增加(P<0.05);跳台潜伏期显著延长(P<0.05),错误次数显著减少(P<0.05),结论：低剂量的脐带间充质干细胞移植能增强老年痴呆小鼠SAMP8的学习记忆能力。     

大鼠骨髓间充质干细胞体外培养

[目的]通过实验探索并验证行之有效的体外骨髓间充质干细胞分离、纯化、培养的方法。[方法]采用密度梯度离心法和贴壁培养法相结合的方法对骨髓间充质干细胞进行体外培养。[结果]原代细胞10d左右达85%以上融合,传代后细胞约1周左右达85%以上融合;传至5代细胞形态呈较一致的长梭形。[结论]运用贴壁培养法和密度梯度离心法相结合的方法对骨髓间充质干细胞进行体外培养,可获得足够数量纯度较高的骨髓间充质干细胞。     

大鼠骨髓间充质干细胞体外培养

[目的]通过实验探索并验证行之有效的体外骨髓间充质干细胞分离、纯化、培养的方法。[方法]采用密度梯度离心法和贴壁培养法相结合的方法对骨髓间充质干细胞进行体外培养。[结果]原代细胞10d左右达85%以上融合,传代后细胞约1周左右达85%以上融合;传至5代细胞形态呈较一致的长梭形。[结论]运用贴壁培养法和密度梯度离心法相结合的方法对骨髓间充质干细胞进行体外培养,可获得足够数量纯度较高的骨髓间充质干细胞。     

脐带间充质干细胞联合负压封闭引流术治疗Ⅲ、Ⅳ期压疮的临床研究

目的探讨脐带间充质干细胞移植联合负压封闭引流术(VSD)治疗Ⅲ、Ⅳ期压疮的临床效果。方法Ⅲ、Ⅳ期压疮患者143例随机分为3组。对照组30例行常规换药治疗,实验一组58例应用脐带间充质干细胞移植联合VSD治疗,实验二组55例仅应用VSD治疗。比较3组患者愈合时间及愈合效果。结果实验一组和实验二组的显效时间和愈合时间均较对照组显著缩短(P均<0.05),且实验一组较实验二组更短(P均<0.05)。实验一组的治愈率显著高于对照组(P<0.05),与实验二组比较无显著性差异,实验二组的治愈率与对照组比较无显著性差异。实验一组的总有效率显著高于对照组和实验二组(P均<0.05),实验二组与对照组比较无显著性差异。结论脐带间充质干细胞移植联合VSD较单用VSD及常规治疗方法均能更好地改善Ⅲ、Ⅳ期压疮创面的愈合,避免组织感染,提高压疮患者的生活质量。     

人骨髓间充质干细胞的分离、培养与鉴定

目的：探讨一种优化的骨髓问充质干细胞（Bonemarrow stromal stem cells,BMSCs）获取、分离、培养、鉴定的方法,为进一步骨组织工程实验研究奠定基础。方法：抽取健康自愿者骨髓,采用密度梯度离心法分离贴壁培养BMSCs,倒置显微镜观察细胞形态,结合流式细胞技术来间接鉴定BMSCs。结果：首次换液时间为5—6d,20d左右细胞逐渐汇集可以进行传代,获得纯化的人的BMSCs。结论：采用密度梯度离心法分离贴壁培养的方法能够分离纯化的人BMSCs,9代以前生长迅速,形态稳定,可传至11代,可以作为后续骨组织工程实验种子细胞。     

脂肪间充质干细胞的体外培养及其成骨分化

近年来,脂肪干细胞成为骨组织工程新的研究热点,本文就脂肪干细胞的体外培养和成骨分化进行浅析。     

兔骨髓间充质干细胞体外培养及生物学特性研究

目的:进一步研究兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)分离和培养方法及其生物学特性,为利用MSCs作为种子细胞治疗多种疾病提供实验基础。方法:通过密度梯度离心、贴壁筛选法分离培养兔MSCs。测定其接种贴壁率,在倒置显微镜下连续观察细胞的形态变化,利用甲基噻唑基四唑(methyl thiazdyl tetrazolium,MTT)法测定MSCs生长曲线,并应用流式细胞术测定细胞表面标记物。结果:MSCs接种12h后贴壁率为95%以上,细胞倍增时间约为30.8h,平均传代时间约5～7d;培养的MSCs阳性表达CD29、CD44、CD105,阴性表达CD34。结论:在适宜的实验条件下,体外培养的MSCs能够稳定生存增殖并保持多向分化潜能,可作为组织工程的种子细胞。     

大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及鉴定

目的:探索体外分离培养及纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stromal cells,MSCs)的方法.方法:采用贴壁分离和消化控制相结合的方法,分离纯化3～4周龄大鼠MSCs,免疫细胞化学法鉴定其活性和表型.结果:原代培养的MSCs呈圆形、梭形、多角形等,24 h内即可见少量细胞体贴壁伸展,7～8 d左右可达90%融合,纯化后的MSCs呈均匀一致的长梭形,24h内细胞贴壁率99%,传代周期为7d左右.免疫细胞化学检测显示CD34表达阴性,CD44表达阳性.结论:贴壁分离和消化控制相结合能有效分离纯化成年大鼠MSCs,细胞纯度较高,细胞活力强,生物学性状稳定,是目前一种比较理想的分离纯化方法.