缺氧诱导因子-1抵抗缺氧诱导的肿瘤细胞凋亡

目的 通过对结肠癌SW480细胞中缺氧诱导因子-1(HIF-1)的有效干扰,观察沉默HIF-1后对肿瘤细胞缺氧环境下凋亡的影响.方法 以三气培养箱诱导缺氧环境,pGenesil-11 质粒为载体转染SW480细胞沉默HIF-1.透射电镜观测肿瘤细胞的形态学变化;荧光染料Hoechst 33258、DNA Ladder检测细胞凋亡.结果 与第3天(0.19±0.02)、第15天(0.20±0.03)比较,第7天(0.16±0.02)时RNA干扰效果最好(P<0.05).RNA阳性干扰组结肠癌SW480细胞:电镜下可见凋亡小体形成等形态学变化;细胞凋亡荧光检测,染色呈强蓝色荧光,并可见核碎裂;DNA Ladder检测出现细胞凋亡时典型的梯状条带.结论 HIF-1具有对抗缺氧诱导的肿瘤细胞凋亡的作用.     

缺氧诱导因子-1α小干扰RNA对人膀胱癌小鼠移植瘤生长的实验研究

目的 观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)siRNA对人膀胱癌小鼠膀胱原位移植瘤生长的抑制作用,探讨HIF-1α作为膀胱癌基因治疗靶点的有效性.方法 把已稳定转染pGC-siHIF-1α的人膀胱癌细胞株T24接种至小鼠膀胱.通过CT观察肿瘤生长,应用免疫组化(SABC)检测肿瘤细胞HIF-1α和肿瘤间质CD34的水平,根据CD34表达情况评价肿瘤微血管密度(MVD).末端脱氧核苷酸转移酶标注法(TUNEL)测定肿瘤细胞凋亡指数;二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法测定肿瘤细胞增值率;流式细胞仪(FCM)测定肿瘤细胞周期分布.结果 实验组与对照组相比较,实验组成瘤率低,肿瘤生长速度缓慢(p＜0.05);HIF-1α水平下降(P＜0.01);肿瘤微血管密度减少(P＜0.01);凋亡指数升高(P＜0.01);增殖能力减弱(P＜0.01);G0/GI期细胞增多,G2/M期和S期细胞均减少(P＜0.05);与对照组相比较,组间差异均具有统计学意义.结论 以HIF-1α为靶点的siRNA有抑制H1F-1α表达,遏制膀胱癌T24细胞在体内生长的作用,HIF-1 0有可能成为临床膀胱癌基因治疗的新的有效靶点.     

缺氧诱导因子-1α在胃腺癌中的表达及其与肿瘤细胞增殖、凋亡的关系

目的 探讨缺氧诱导因子(HIF)-1α在胃腺癌中的表达及其对肿瘤细胞增殖、凋亡的影响和临床意义.方法 采用免疫组织化学SP法检测100例胃腺癌组织中HIF-1α、Cyclin D1和bcl-2的表达.结果 随着胃腺癌分化程度的降低、浸润深度的增加及发生淋巴结转移,HIF-1α、Cycfin D1阳性表达率也增加(X2值分别为4.99、7.20、11.65、5.36、4.55、4.58;P<0.05或P<0.01);随着浸润深度的增加及发生淋巴结转移,bcl-2的表达也明显升高(值分别为6.21、7.66;P<0.05或P<0.01).胃腺癌中Cyclin D1与bcl-2表达呈显著正相关(,值为5.96,P<0.05).HIF一1α阳性表达者中Cyclin D1、bel-2的阳性表达率均明显高于其阴性表达者,HIF-1α表达与CyclinD1、bcl-2的表达明显相关(X2值分别为5.94、6.14;P均<0.05).结论 三者的检测对判断胃腺癌的浸润转移能力及预后具有重要的临床意义;胃腺癌的浸润转移在一定程度上是肿瘤细胞不断增殖和凋亡抑制的结果 ;HIF-1α在一定程度上能够诱导肿瘤细胞的增殖、抑制其凋亡而促进胃腺癌的发生发展.     

缺氧诱导乳鼠脊髓神经元HIF-1α表达和凋亡的体外实验研究

目的 研究缺氧诱导脊髓神经元低氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达和凋亡的变化，探讨HIF-1α在耐受缺氧和诱导凋亡机制中的作用。方法 以体外培养的乳鼠脊髓神经元细胞为研究对象。采用激光共聚焦显微镜（LCSM）、DNA琼脂糖凝胶电泳观察缺氧诱导脊髓神经元凋亡的变化；免疫组化检测HIF-1α在缺氧脊髓神经元中的表达；流式细胞术（FCM）检测缺氧对脊髓神经元P53、bcl-2蛋白水平表达的影响。结果 持续缺氧显著抑制脊髓神经元细胞的生长；荧光显微镜下可见脊髓神经元细胞呈典型凋亡的形态学改变。脊髓神经元缺氧2、4h时HIF-1α、P53、bcl-2表达上调（P〈0．01），8h时其表达下调（P〈0．05）。结论 缺氧诱导的HIF-1α的表达，在脊髓神经元的耐受缺氧和诱导凋亡机制中起着重要的作用。     

缺氧对肠上皮细胞缺氧诱导因子1α活化影响的实验研究

目的 了解缺氧对肠上皮细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)活化的影响. 方法 将肠上皮细胞分为常氧处理(正常对照)、缺氧(设缺氧1、2、6、12、24 h)及缺氧+寡霉素处理(分别用浓度为5、10、20、40μg/mL寡霉素处理1 h,再缺氧6 h).采用蛋白质印迹法检测HIF-1α蛋白表达,免疫荧光法观察HIF-1α向细胞核转位的情况. 结果 与正常对照(0.08±0.07)相比较,缺氧1 h肠上皮细胞HIF-1α蛋白表达(0.52±0.30)即显著升高(P＜0.05),6 h达峰值(2.37±1.08,P＜0.05),同时HIF-1α向细胞核转位也明显增加.寡霉素呈剂量依赖性地抑制缺氧引起的肠上皮细胞HIF-1α蛋白表达增加,用5、10、20及40μg/,mL寡霉素处理的缺氧肠上皮细胞HIF-1α蛋白表达量分别为1.62±0.96、1.48±0.56、1.08±0.36及0.58±0.11,均较单纯缺氧6 h(2.67±1.38)显著降低(P＜0.05),HIF-1α向细胞核转位也被抑制. 结论 呼吸链抑制剂寡霉素可抑制缺氧肠上皮细胞HIF-1α活化,线粒体呼吸链可能在其发生机制中具有重要作用.     

丙泊酚对缺氧诱导的大鼠肺泡上皮Ⅱ型细胞凋亡的调控作用

目的 探讨丙泊酚预处理对缺氧条件下大鼠Ⅱ型肺泡七皮(ATⅡ)细胞凋亡的影响.方法 体外分离并培养大鼠ATⅡ细胞,将细胞分为三组:缺氧组(H组)、丙泊酚-缺氧组(P组)和对照组(C组).测定各组细胞存活率、早期凋亡率、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA及Bnip3LmRNA 表达水平.结果 与C组比较,H组和P组细胞存活率显著降低(P＜0.05)、早期凋亡率显著升高(P＜0.05),HIF-1α mRNA及Bnip3LmRNA表达显著增强(P＜0.05).与H组比较,P组上述指标显著降低(P＜0.05).结论 丙泊酚预处理可抑制缺氧条件下大鼠ATⅡ细胞凋亡,推测其与丙泊酚-HIF-1α-缺氧反应元件(HRE)轴的抑制有关.     

缺氧诱导因子1α对CO2气腹环境下人胃癌细胞凋亡的影响

目的 通过体外模拟CO2气腹环境,构建沉默缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的RNAi表达载体,探讨HIF-1α对CO2气腹环境下人胃癌细胞MKN-45凋亡的影响及机制.方法 利用密闭培养箱模拟CO2气腹,气腹机维持培养箱内压力分别为0、5、10、15mm Hg.采用荧光定量RT-PCR方法和Western blot方法观察沉默HIF-1α前后MKN-45细胞HIF-1α mRNA和蛋白表达的变化;免疫细胞化学技术观察沉默HIF-1α前后细胞bcl-2/bax表达的变化;Annexin V-FITC/PI双标染色、流式细胞仪检测沉默HIF-1α前后细胞凋亡比例的变化.结果 沉默HIF-1α前15 mm Hg组细胞HIF-1αmRNA和蛋白表达(分别为1.51±0.04、4.44±0.30)均显著高于对照组(0.584±0.06、2.01±0.06)(P<0.01).沉默HIF-1α前15mmHg组细胞bcl-2/bax比值(0.77±0.05)较对照组(1.43±0.02)明显降低(P<0.05),细胞凋亡比例(11.60±2.11)较对照组(0.30±0.02)增加.而在沉默HI-1α后15 mm Hg组细胞HIF-1α mRNA(0.464±0.04)和蛋白表达(0.92±0.02)、bcl-2/bax比值(1.61±0.04)、细胞凋亡比例(0.4±0.03)与对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05).结论 在CO2气腹环境压力为0、5、10mm Hg CO2时MKN-45细胞凋亡比例与对照组比较无差异,压力为15mm Hg时CO2气腹可促进胃癌细胞凋亡.HIF-1α可能为促进细胞凋亡的原因之一.     

缺氧诱导因子1α在缺氧缺血性损伤中的研究进展

目的 分析缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)在缺氧缺血性损伤及其修复过程中的作用和可能机制.方法 查阅和分析近年有关HIF-1α在缺氧缺血性损伤及其修复中作用的相关文献,并作进一步综合分析.结果 HIF-1α参与了多种器官或组织的缺氧缺血性损伤及其修复过程.结论 HIF-1α对治疗临床常见缺氧缺血性损伤具有良好的应用价值和发展前景.     

缺氧诱导因子-1与肿瘤(文献综述)

肿瘤细胞的缺O2适应与缺氧诱导因子-1(HIF-1)有关.HIF-1是一种异源二聚体转录因子,它与缺氧反应基因上的HIF-1结合位点结合,从而启动与肿瘤适应缺氧有关基因的转录,而后者在肿瘤的生长、转移中起重要的作用.HIF-1在多种肿瘤细胞中有广泛的表达,且受多种因子的调控或影响.以HIF-1为靶点可能是肿瘤治疗的又一进展.     

HIF-2α在肾透明细胞癌血管生成中的作用

目的探讨体外水平HIF-2α在肾透明细胞癌血管生成中的作用。方法采用RNAi方法,体外化学合成HIF-2α序列特异的siRNAs,转染肾透明细胞癌786-0细胞抑制HIF-2α表达,Western blotting、ELISA方法检测VEGF表达变化,应用BrdU抗体ELISA比色法研究HIF-2α抑制后肿瘤细胞血管生成能力改变。结果肾透明细胞癌786-0细胞不表达HIF-1a,仅表达HIF-2α,缺氧诱导HIF-2α蛋白表达增加。HIF-2α序列特异的siRNAs特异抑制HIF-2α蛋白的表达,转染效率>80%,抑制率(72.0±8.0)%;HIF-2α抑制后,缺氧诱导的细胞结合型VEGF表达减少,分泌型VEGF在正常氧压情况下抑制率(21.7±3.8)%,缺氧情况下抑制率(37.8±4.7)%,肿瘤细胞在体外水平的血管生成能力降低(42.7±5.0)%。结论HIF-2α在肾透明细胞癌中具有促进肿瘤血管生成的作用,抑制HIF-2α下调细胞结合型与分泌型VEGF表达而降低肾透明细胞癌在体外水平的血管生成能力。     

缺氧诱导因子-1α对体外模拟CO2气腹下人胃癌细胞凋亡的影响

目的 通过体外模拟CO2气腹环境,构建沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的RNAi表达载体,探讨HIF-1α对CO2气腹环境下人胃癌细胞MKN-45凋亡的影响及机制.方法 利用密闭培养箱模拟CO2气腹,气腹机维持培养箱内压力分别为0、5、10、15 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),采用RT-PCR方法和Western blot方法观察沉默HIF-1α前后MKN-45细胞HIF-1α mRNA和蛋白表达变化.免疫组化技术观察沉默HIF-1α前后细胞bcl-2/bax表达变化.Annexin V-FITC/PI舣标染色、流式细胞仪检测沉默HIF-1α前后细胞凋亡比例变化.结果 沉默HIF-1α前15 mm Hg组细胞HIF-1α mRNA和蛋白表达(1.48±0.22和1.34±0.09)以及10 nnn Hg组细胞蛋门表达(1.25±0.10)均显著高于对照组(0.55±0.17和0.83±0.04)(P＜0.05).0、5、10 mm Hg组细胞HIF-1α mRNA和0、5 mm Hg蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).沉默HIF-1α前15 mm Hg组细胞bcl-2/bax比值(0.78±0.05)较对照组(1.43±0.15)明显降低(P＜0.05),细胞凋亡比例(11.70±0.12)较对照组(0.22±0.07)显著增加(P＜0.01).而在沉默HIF-1α后15 mm Hg组细胞HIF-1α mRNA表达(0.52±0.11)和蛋白表达(0.92±0.02)、bcl-2/bax比值(1.57±0.04)、细胞凋亡比例(0.45±0.11)与对照组比较均无显著差异(P＞0.05).结论 在CO2气腹环境压力为0、5、10 mmHg CO2时MKN-45细胞凋亡比例与对照组比较无显著差异,压力为15 mm Hg时CO2气腹可促进胃癌细胞凋亡,HIF-1α可能为促进细胞凋亡的重要因子.     

反义缺氧诱导因子-1α对胰腺癌细胞BxPC-3化疗敏感性的影响

目的： 观察反义缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对胰腺癌细胞BxPC-3化疗敏感性的影响。方法：实验分组：（1）缺氧条件下(0.5% O2)体外培养4h，未转染反义HIF-1α质粒的BxPC-3细胞设为缺氧对照组；（2）常氧条件下体外培养，未转染反义HIF-1α质粒的BxPC-3 细胞设为常氧对照组；（3）缺氧条件下(0.5% O2)体外培养4h，稳定转染反义HIF-1α质粒的BxPC-3细胞设为实验组。采用逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR)和免疫印迹(Western Blot)检测各组的HIF-1α和survivin表达情况。 流式细胞术和MTT比色法检测不同剂量的化疗药物(5-氟尿嘧啶、阿霉素、吉西他宾)对各组的凋亡率和生长抑制率的影响。 结果：实验组HIF-1α和survivin的表达明显降低 (P<0.05)，与对照组相比，实验组的凋亡率、抑制率与剂量成正比，高剂量引起高抑制(P<0.05)。 结论：反义HIF-1α可能通过阻断survivin的表达而增强胰腺癌对化疗的敏感性。据此可望通过阻断HIF-1α的表达为胰腺癌基因治疗提供一种新途径。     

缺氧诱导因子-1α对肿瘤侵袭转移的影响

肿瘤的形成和演变依赖于机体氧气和各种营养物质的供给,但肿瘤异常增殖和过度生长使瘤内出现严重缺氧,此时肿瘤细胞便通过调节自身代谢克服机体氧气和营养物质的不足,保证存活、快速生长和转移。缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α、HIF-1α）是近年来发现的广泛表达于人和哺乳动物细胞内的一种调控缺氧应答的转录因子,与肿瘤细胞去分化、增殖、凋亡、新生血管生成、侵袭和转移、放化疗耐受等密切相关[1-3]。大量的研究显示其在良性肿瘤中表达较低,恶性肿瘤中表达升高,而转移性肿瘤中的表达则更高,提示HIF-1α在肿瘤侵袭与转移方面起着非常重要的作用,并且是导致不良预后的主要原因。目前,HIF-1α关于肿瘤侵袭和转移中的作用及机制成了研究的热点,而对其阻断的研究可能使诊治上取得突破。现对HIF-1α关于肿瘤侵袭和转移方面的研究进展作一综述。     

RNA干扰沉默缺氧诱导因子-1α对人膀胱尿路上皮癌T24细胞增殖和凋亡的影响

目的 探究RNA干扰靶向沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在人膀胱尿路上皮癌(BUC) T24细胞株中的表达对T24细胞增殖和凋亡的影响.方法 构建4个针对HIF-1α的小干扰RNA(siRNA)表达质粒PGC-siHIF-1α1-4,脂质体法稳定转染T24细胞.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测转染细胞HIF-1α rnRNA和基因表达,噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖率,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期和凋亡情况.结果 4个HIF-1α mRNA表达质粒均能不同程度的抑制转染细胞的HIF-1α膜mRNA和基因表达.其中以PGC-siHIF-1 α3的作用最大,效果最佳,该组G0/G1期阻滞率(61.8±1.5)％,细胞增殖受抑率41.7％,细胞凋亡率19.3％,与对照组有统计学差异(P＜0.01).结论 HIF-1α siRNA表达质粒可抑制膀胱癌细胞生长并促进其凋亡,有望成为提高膀胱癌分子靶向治疗的新位点.     

缺氧及沉默缺氧诱导因子-1α对BxPC-3细胞中RUNX3基因表达的影响

目的 观察缺氧及应用小干扰RNA (siRNA)沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因对胰腺癌细胞株BxPC-3中RUNX3基因表达的影响.方法 构建人RUNX3基因真核表达载体质粒pEGFP-RUNX3,CoC12化学模拟肿瘤缺氧环境,检测缺氧以及siRNA沉默HIF-1α对BxPC-3细胞中RUNX3基因在mRNA和蛋白水平的影响.结果 缺氧能使BxPC-3细胞中RUNX3基因的表达较常氧时显著升高[表达为(9.13±1.55),P＜0.05],siRNA转染BxPC-3细胞后能显著下调HIF-1α蛋白表达(抑制率90％),并导致RUNX3基因的表达也受到明显抑制.结论 缺氧促使BxPC-3细胞中HIF-1α在蛋白水平表达升高,缺氧时HIF-1α能上调RUNX3基因的表达水平.     

基因沉默缺氧诱导因子-1α对BxPC-3细胞株糖酵解基因表达的影响

目的 观察沉默缺氧诱导因子(HIF)-1α基因表达对于缺氧微环境下人胰腺癌BxPC-3细胞株中糖酵解相关基因表达的影响.方法 通过合成小于扰RNA((siRNA))转染沉默BxPC-3细胞株中HIF-1α基因表达.将细胞分为空白对照组(BxPC-3)、空白质粒转染对照组(GFP)和HIF-1α基因沉默组(sh-HIF-1α),分别在正常环境(21.0％O2)和缺氧环境(0.5％～1.0％ O2)中培养48 h后,检测各组细胞中糖酵解相关基因[如丙酮酸激酶1(PDK-1)、乳酸脱氢酶A(LDH-A)和柠檬酸合成酶(CS)]的表达以及细胞糖酵解产物乳酸含量的改变.结果 与正常环境比较,缺氧培养后sh-HIF-1α组细胞内HIF-1αmRNA增加了12.4％,蛋白增加了1.6倍,显著低于BxPC-3组和GFP组(P＜0.05),PDK-1和LDH-A的表达也明显低于两个对照组(P＜0.05).相应的sh-HIF-1α组的乳酸含量为(4.8 ±0.3)nmol/106个细胞,明显低于BxPC-3组(9.1±0.5)nmol/106个细胞和GFP组(9.2±0.5) nmol/106个细胞(P＜0.05).相反,缺氧时BxPC-3组和GFP组细胞中与线粒体氧化磷酸化相关的CS基因表达明显下降,低于其在sh-HIF-1α组细胞中的表达(P＜0.05).结论 缺氧可以诱导BxPC-3细胞株中HIF-1α基因高表达并促进糖酵解相关的PDK-1和LDH-A等基因表达.而通过沉默HIF-1α基因,可以抑制上述基因的表达,并促进CS基因表达,从而抑制肿瘤细胞的糖酵解代谢.     

RNA干扰抑制缺氧诱导因子1α表达对缺氧内皮细胞通透性的影响

目的 了解RNA干扰技术特异性抑制缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达对缺氧血管内皮细胞通透性的影响.方法 利用质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR构建针对人HIF-1α基因的RNA干扰表达载体.将VE细胞分为正常对照组、缺氧组(置于含体积分数1%O_2的混合气体环境中缺氧处理6 h)、转染组、转染缺氧组(转染载体后再进行缺氧处理).采用RT-PCR法检测正常对照组、转染组HIF-1αmRNA表达,采用蛋白质印迹法检测4组细胞HIF-1α蛋白表达.荧光分光光度计检测单层VE细胞的通透性.将上述缺氧处理替换为HIF-1α特异性诱导剂1 mmol/L二甲氧乙二酰甘氨酸(DMOG),分为DMOG组、转染DMOG组、正常对照组、转染组,采用蛋白质印迹法观察各组HIF-1α蛋白表达.除通透性检测数据用荧光强度值表示外,其他数据用密度比值表示.实验结果进行组间两两t检验.结果 正常对照组细胞HIF-1α mRNA相对含量为0.765±0.069,转染组细胞HIF-1α mRNA相对含量为0.093±0.007,组间比较,差异有统计学意义(t=16.696,P<0.05).转染缺氧组细胞HIF-1α蛋白含量为0.591±0.029,显著低于缺氧组(2.612±0.259,t=13.415,P<0.05);转染DMOG组HIF-1α蛋白含量为0.566±0.008,显著低于DMOG组(3.243±0.551,t=6.975,P<0.05).缺氧组单层血管内皮细胞通透性(41.6±11.1)较正常对照组(9.4±1.5)显著升高(t=6.238,P<0.05),转染缺氧组单层血管内皮细胞通透性(13.3±4.5)显著低于缺氧组(t=5.430,P<0.05).结论 采用特异性针对HIF-1α基因的RNA干扰技术,能有效抑制内皮细胞HIF-1α表达,并明显抑制缺氧引起的血管内皮细胞通透性增强.     

缺氧诱导因子-1α和缺氧诱导因子-2α在人非小细胞肺癌表达的比较

目的 观察缺氧诱导因子(HIF)-1α和HIF-2α在人非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达并探讨其临床意义.方法 采用实时定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot法检测不同缺氧时程HIF-1α和HIF-2α的mRNA和蛋白表达,比较两者差异.进一步运用免疫组织化学技术检测两者在140例NSCLC患者标本中的表达,结合相关临床病理因素探讨其临床意义.结果 在缺氧条件下,HIF-1α蛋白在4h即迅速升至峰值,之后快速下降,而HIF-2α蛋白则表现为逐步上调并持续维持在较高表达水平.在140例NSCLC的标本研究中,HIF-2α与肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期关系密切(P<0.05),并且是预后的不良因素(P<0.05).结论 HIF-2α可能是肿瘤适应乏氧环境的主要调节因子,相较于HIF-1α、HIF-2α在NSCLC的靶向治疗研究中更具有价值.     

缺氧诱导因子-1的调控

依赖缺氧诱导因子-1(HIF-1)的缺氧反应基因表达调控系统在维持肿瘤细胞的代谢适应、新血管形成及转移等方面起蘑要作用。HIF-1自身活性的调节是缺氧反应基因表达调控的中心环节，肿瘤内缺氧和影响信号转导途径的癌基因的改变均可导致HIF-1活性增加，主要涉及脯氨酸羟化酶、硫氧还蛋白、PKB、ILK、PIEN、EN及P14ARF等蛋白对HIF-1α的调控。     

缺氧诱导因子-1α对恶性肿瘤细胞侵袭性生长的影响

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对恶性肿瘤细胞侵袭性生长的作用机制.方法 人骨肉瘤细胞株经缺氧处理后,通过定点诱变来构建HIF-1α(PP)突变体.CD-1裸鼠双侧皮下注射肿瘤液观察肿瘤发生.细胞种植2周后计算群落数,评价肿瘤细胞的锚定不依赖性生长.细胞增殖使用发光法细胞活力进行检测.细胞侵袭通过计算侵袭性细胞总数.结果 HIF-1α-c-Myc通路和HIF-1α-ARNT通路的功能通过定点诱变的方式在HIF-1α稳定的条件下分别被抑制活性.随着肿瘤抑制活性的降低,HIF-1α(PP)和HIF-1α(PP)+RFC细胞的锚定不依赖性生长均有大幅增加,群落数分别为1480±8和1750±6.HIF-1α(PP)及HIF-1α(PP)+RFC致肿瘤性为100%,而US201及HIF-1α(PP)+VAT则无致肿瘤性.同时,它们的细胞增殖和人工基底膜侵犯也有显著增加,HIF-1α(PP)及HIF-1α(PP)+VAT细胞活性增为11 000±3和10 900±5,而HIF-1α(PP)+RFC及HIF-1α(PP)+RFC+VAT细胞活性为2210±6及1880±8.但是HIF-1α-c-Myc通路的失活阻止了这种增势,侵袭力下降为20%.肿瘤细胞获取侵袭性恶性特质需要H1F-1α-c-Myc通路.结论 HIF-α-c-Myc通路通过基因变异,在肿瘤恶化的缺氧调节中起着关键作用,进而导致恶性肿瘤局部浸润和上皮细胞-间充质转化.

Abstract：

Objective To explore the action mechanism of hypoxia inducible factor-1α (HIF-1α)on human osteosarcoma cells. Methods After hypoxic treatment to human osteosarcoma cell line, additional mutations were made by site-directed mutagenesis to create HIF-1α (PP) mutants. CD-1 nude mice were used for bilateral subcutaneous injections to evaluate the tumor cell tumorigenesis. Cells were seeded for 2 weeks, the total number of colonies per well was calculated and the anchorage-independent growth was analyzed. Cell proliferation was assayed by cell viability assay, and cell invasion was determined by the total number of invading cells and presented as mean ± SEM. Results The functions of the HIF-1α-ARNT pathway and the HIF-1α-c-Myc pathway were inactivated respectively by site-directed mutagenesis in the context of a stabilized HIF-1α. In accordance with diminished tumor-suppressing activities, both HIF-1α(PP) and HIF-1α (PP) + RFC cells exhibited a remarkable gain of anchorage-independent growth, and the total number of colonies per well was 1480 ± 8 and 1750 ± 6 respectively. Tumorigenicity of HIF-1α(PP) and HIF-1 α (PP) + RFC was all 100%, but US201 and HIF-1 α (PP) + VAT had no tumorigenicity. They also showed a marked increase in cell proliferation and Matrigel invasion, the cell viability of HIF1 α (PP) and HIF-1 α (PP) + VAT was 11 000 ± 3 and 10 900 ± 5, but the cell viability of HIF-1 α (PP)+ RFC and HIF-1α (PP) + RFC + VAT was only 2210 ± 6 and 1880 ± 8 respectively. Whereas inactivation of the HIF-1α-c-Myc pathway abrogated such increase, and the tumorigenicity was decreased to 20%.Gain of aggressive malignant traits required the HIF-1α-c-Myc pathway. Conclusion HIF-α-c-Myc pathway plays an essential role in mediating hypoxic effects on malignant progression via genetic alterations,resulting in formation of malignant tumors with aggressive local invasion and epithelial-mesenchymal transition.