黏附分子CD44在哮喘气道炎症反应中的作用

目的：观察不同时段哮喘大鼠肺组织黏附分子CD44在哮喘气道炎症反应中的作用。方法：32只Sprague-Dawley大鼠随机分成4组：哮喘模型组（激发1周组、2周组）与正常对照组(对照1周组,对照2周组),每组8只。以卵蛋白致敏制备大鼠哮喘模型,分别在激发后的1周、2周取肺组织,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学S-P方法研究肺组织CD44的表达;收集支气管肺泡灌洗液(BALF)行细胞分类计数。结果：哮喘激发后1周和2周后哮喘大鼠BALF中淋巴细胞和嗜酸性粒细胞比例显著增加(P<0.05),巨噬细胞比例显著降低（P<0.05）,哮喘激发后1周中性粒细胞比例也显著增加(P<0.05)。CD44在mRNA和蛋白水平的表达与BLAF中淋巴细胞、嗜酸性粒细胞呈显著正相关（均P<0.05）,与激发1周时的巨噬细胞百分比呈显著负相关(P<0.05)。结论：哮喘肺组织CD44的过度表达与炎性细胞向哮喘气道炎症组织趋化浸润密切相关,在哮喘气道炎症反应过程中发挥着重要作用。［中国当代儿科杂志,2009,11（2）：142-145］     

依那西普对哮喘大鼠的抗炎作用研究

目的 探讨抗TNF-α受体单抗--依那西普(益赛普)对哮喘大鼠的抗炎作用及其机制.方法 30只SD雄性大鼠随机分成3组,每组10只.哮喘组:于第1、第8及第15天分别予腹腔注射10%鸡卵清蛋白(OVA)1 ml、氢氧化铝100 mg,于第16、17、18天密闭雾化罐中用1%OVA雾化吸入,每天激发20min致其哮喘发作;益赛普组:诱喘方法 同哮喘组,从第1天开始(致敏或激发后1 h)每隔1 d皮下注射益赛普0.5 mg/kg;对照组:以生理盐水代替OVA和益赛普.运用免疫组织化学方法 测定肺组织标本IL-4阳性细胞数,对支气管肺泡灌洗液(BALF)沉淀细胞进行计数以及运用ELISA方法 对BALF上清中TNF-α水平进行测定.结果 益赛普组大鼠肺组织中IL-4阳性细胞数较哮喘组明显降低(P<0.05);BALF中嗜酸性粒细胞和中性粒细胞数目较哮喘组明显减少(P<0.01),TNF-α水平(196±13)较哮喘组(236±8)明显降低(P<0.01);TNF-α、IL-4阳性细胞数、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞数目均明显高于对照组.结论 益赛普可以减少哮喘大鼠BALF及肺组织中TNF-α和Th2细胞因子水平,减轻哮喘气道炎症.     

褪黑素对哮喘大鼠CD4+CD25+调节性T细胞的影响及抗感染作用

目的 探讨褪黑素(MT)对哮喘大鼠CD4 CD25 调节性T细胞(CD4 CD25 Tr)的影响及抗感染作用.方法 SPF级SD大鼠32只随机分成4组,每组8只.哮喘组:造模第1、7天,大鼠腹腔注射卵清蛋白(OVA)和氢氧化铝混悬液体,第14天,用10g/L的OVA溶液对大鼠进行雾化激发,1次/d,20min/次,连续7d;MT组:致敏、诱导哮喘方法同哮喘组,在每次激发前30min,腹腔注射MT0.1mg/kg;地塞米松组:致敏、诱导哮喘方法同哮喘组,在每次激发前30min,腹腔无菌注射地塞米松0.5mg/kg;对照组:注射、雾化方法同哮喘组,以9g/L盐水替代OVA和氢氧化铝致敏液及雾化液.各组于最后1次雾化激发后取其外周血涂片染色,计数其外周血嗜酸性粒细胞(EOS)百分比;收集其肺泡灌洗液(BALF),计数其炎性细胞总数;制作肺组织石蜡切片,HE染色计数其呼吸道周围EOS数目;用免疫增强浊度法检测其血清IgE水平;用流式细胞术检测其外周血CD4 CD25 Tr水平.采用SPSS 10.0软件进行统计学分析.结果 哮喘组外周血CD4 CD25 Tr/CD4 T细胞值与呼吸道周围EOS细胞数呈高度负相关(r=-0.73 P<0.05),与BALF细胞总数亦呈高度负相关(r=-0.78 P<0.05),与血清IgE水平未见显著相关.CD4 CD25 Tr/CD4 T细胞值哮喘组显著高于其他各组(Pa<0.01),其他3组比较,差异无统计学意义(Pa>0.05).MT组呼吸道周围EOS计数、外周血EOS比例、BALF细胞总数及IgE水平显著低于哮喘组(Pa<0.01).结论 CD4 CD25 Tr参与哮喘的发病.MT能显著降低哮喘大鼠CD4 CD25 Tr的数目,对哮喘大鼠CD4 CD25 Tr的调节作用与地塞米松相当,可有效减轻哮喘大鼠呼吸道炎性反应和血清IgE上升水平.     

穿心莲内酯对哮喘小鼠嗜酸性粒细胞表达的影响及其作用机制

目的：穿心莲内酯是中药穿心莲的主要有效成分,在体内外均具有较强的抗炎作用。该研究观察穿心莲内酯对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中嗜酸性粒细胞、eotaxin及IL-5表达的影响。方法：32只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组、布地奈德组、穿心莲内酯组,每组8只。以卵清蛋白（OVA）致敏激发建立哮喘小鼠模型。ELISA法检测BALF及外周血中eotaxin、IL-5的水平,实时荧光定量PCR法检测肺组织eotaxin、IL-5 mRNA的表达。结果：穿心莲内酯明显抑制哮喘小鼠BALF中嗜酸性粒细胞（P0.05）。结论：穿心莲内酯通过降低哮喘小鼠eotaxin、IL-5的表达,抑制哮喘气道嗜酸性粒细胞浸润。     

哮喘模型IL-4、IL-13与肺组织炎症指标及 STAT6的相关性研究

目的 探讨哮喘模型支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-13水平与肺组织炎症指标以及信息转导与转录活化因子6(STAT6)的相关性.方法 利用PBS致敏、鸡卵白蛋白(OVA)激发作为正常对照组,采用OVA致敏和激发构建哮喘模型,比较两组小鼠BALF中IL-4、IL-13水平,并对哮喘模型BALF中IL-4、IL-13水平与肺组织炎症指标以及STAT6的相关性进行分析.通过ELISA检测细胞因子,采用免疫组织化学方法 分析STAT6的表达.结果 哮喘模型鼠BALF中IL-4、IL-13水平以及肺组织STAT6的表达较正常对照组明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);哮喘模型鼠BALF中IL-4、IL-13水平与BALF中嗜酸性粒细胞计数、血清IgE含量以及STAT6呈明显正相关.结论 BALF中IL-4、IL-13水平是反应哮喘炎症水平的重要指标.     

槐杞黄对哮喘大鼠模型的作用及其机制研究

目的 探索槐杞黄在哮喘大鼠模型中的作用及相关机制。方法 将40只Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组、哮喘模型组、布地奈德组和槐杞黄组（n=10）。通过卵白蛋白致敏并激发建立哮喘大鼠模型,布地奈德组在每次激发前以布地奈德2 mg雾化,槐杞黄组在每次激发前以槐杞黄4 g/kg溶于水中灌胃。苏木精-伊红染色观察各组大鼠肺组织病理变化;计数肺泡灌洗液（BALF）中嗜酸性粒细胞比例;ELISA法检测各组BALF中细胞因子IL-3、IL-4、IL-5、IL-10、INF-γ及IgE浓度;流式细胞术检测外周血及脾脏中Th1/Th2细胞比例;RT-PCR法检测肺组织中T-bet、GATA-3 mRNA表达;应用Western bolt检测肺组织中T-bet、GATA-3蛋白表达。结果 与对照组相比,哮喘组大鼠气道炎症程度明显增加;BALF中嗜酸性粒细胞比例显著升高;IL-3、IL-4、IL-5、IgE浓度显著升高,而IL-10、INF-γ浓度明显下降;外周血及脾脏Th1细胞比例明显降低,Th2细胞比例明显升高;肺组织T-bet mRNA及其蛋白表达水平明显降低,GATA-3 mRNA及其蛋白表达水平明显升高（P < 0.05）。槐杞黄及布地奈德均能明显改善哮喘大鼠气道炎症及上述指标水平（P < 0.05）,且效果相当;但与对照组比较,差异仍有统计学意义（P < 0.05）。结论 槐杞黄能改善哮喘大鼠气道炎症,缓解哮喘症状,其机制可能与调节相关细胞因子水平及Th1/Th2比例有关,这一作用可能经T-bet和GATA-3通路进行调控。     

RORγt在支气管哮喘小鼠肺组织中的表达及布地奈德对其抑制作用

目的：观察布地奈德（BUD）对支气管哮喘小鼠肺组织中Th17细胞的特异性转录因子RORγt表达的影响,探讨BUD治疗哮喘的机制。方法：采用卵清蛋白（OVA）致敏方法建立支气管哮喘小鼠模型;Balb/c雌性小鼠30只随机分为对照组、哮喘组、BUD组,每组各10只。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)技术检测小鼠肺泡灌洗液（BALF）、血清中白细胞介素-17（IL-17）水平;对BALF中炎性细胞进行计数;苏木精-伊红（HE）染色评价各组小鼠气道炎症程度;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测肺组织中RORγt mRNA表达水平。结果：哮喘组小鼠BALF、血清中IL-17水平较对照组明显升高（P<0.01）,BUD治疗后IL-17水平明显降低（P<0.01）。肺组织中RORγt mRNA在哮喘组较对照组明显升高（P<0.01）,BUP治疗后RORγt mRNA水平明显降低（P<0.01）。哮喘组细胞总数、中性粒细胞数和嗜酸性粒细胞数均较对照组明显增多（P<0.01）,BUD组细胞总数、中性粒细胞数和嗜酸性粒细胞数与哮喘组比较明显减少（P<0.01）,与对照组比较差异无统计学意义。HE染色表明BUD治疗后气管炎性反应明显缓解。结论：哮喘小鼠RORγt表达水平和IL-17水平增高,导致哮喘小鼠的全身和局部炎症反应增强,可能是导致哮喘发生的机制之一。BUD可通过抑制RORγt和IL-17的表达水平,发挥其免疫抑制功能而起到治疗哮喘的作用。     

反义寡核苷酸和激素干预对哮喘小鼠GATA-3表达的影响

目的 探讨转录因子GATA-3在支气管哮喘发病中的作用,评价反义寡核苷酸干预及吸入糖皮质激素对其调节作用.方法 40只雌性BALB/c小鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘组(B组)、激素治疗组(C组)及GATA-3反义寡核苷酸治疗组(D组)4组.采用卵清白蛋白致敏、激发建立哮喘小鼠模型,对小鼠血及支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞进行计数,并测定小鼠血清IgE含量;采用Western b1ot及RT-PCR技术检测治疗前后哮喘小鼠肺组织中GATA-3蛋白和GATA-3 mRNA的表达.结果 通过小鼠行为学变化、血和BALF嗜酸性粒细胞计数、血清IgE水平以及肺组织病理切片鉴定模型成立.哮喘小鼠气道管壁及伴行动脉周围可见炎性细胞浸润、杯状细胞增生及平滑肌增厚.Western blot结果显示哮喘组小鼠肺组织GATA-3蛋白表达增高,GATA-3反义寡核苷酸治疗组和激素治疗组GATA-3表达均下降,GATA-3反义寡核苷酸治疗组较激素治疗组下降略明显,但差异无统计学意义.RT-PCR结果与Western blot结果一致.结论 蛋白质水平及mRNA水平显示哮喘小鼠模型肺组织GATA-3表达升高,激素和反义寡核苷酸干预可下调GATA-3表达,可能是其抑制气道炎症形成的重要作用机制;应用反义寡核苷酸可能为哮喘治疗提供一种新的方法.     

褪黑素对哮喘大鼠核因子-κB表达的影响及抗炎作用

目的　探讨褪黑素 (MT)对支气管哮喘 (BA)大鼠模型肺组织核因子 κB(NF κB)表达的影响及其抗炎作用。方法　将 2 4只体重 12 0～ 170克的健康雄性SD大鼠随机分为 3组 ,每组 8只 :(1)哮喘组 :用 10 %鸡卵白蛋白 (OVA) 1ml、氢氧化铝 10 0mg无菌腹腔注入 ,2周后用 1%OVA超声雾化每天吸入激发 2 0min ,连续激发 1周致其哮喘发作 ,在每次激发前 30min腹腔注入生理盐水(NS) 1m/只。 (2 )MT组 :诱喘方法同哮喘组 ,在每次激发前 30分钟腹腔注入MT 10mg/kg。 (3)对照组 :以NS代替诱喘剂和腹腔注入药。每组分别于最后一次激发后 6h测定气道反应性 ,随后处死大鼠 ,并行支气管肺泡灌洗液 (BALF)中细胞计数、分类 ;用硝酸还原酶法测定BALF中一氧化氮(NO)含量 ,以及肺组织中诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)和结构型一氧化氮合酶 (cNOS)活性 ;用免疫组织化学染色法观察气道上皮细胞NF κB的表达。结果　 (1)MT组大鼠气道反应性及BALF中淋巴细胞、嗜酸性粒细胞数明显低于哮喘组 (P <0 .0 1) ;(2 )MT组BALF中NO含量、肺组织中iNOS低于哮喘组 (P <0 .0 1) ,且等级相关分析显示哮喘组BALF中NO含量与肺组织iNOS高度正相关 (r =0 .83P <0 .0 1) ;(3)免疫组织化学染色显示哮喘组、MT组、对照组NF κB表达胞核阳性的上皮细胞占气道     

布地奈德雾化治疗对哮喘小鼠糖皮质激素受体及核因子-κB表达的影响

目的观察布地奈德雾化吸入对哮喘小鼠糖皮质激素受体(GR)和核因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法 24只健康6~8周龄雄性BALB/c小鼠随机分为生理盐水对照组、哮喘模型组(哮喘组)和布地奈德治疗组(BUD组),每组8只。通过腹腔注射卵清蛋白和氢氧化铝混悬液致敏以及卵清蛋白溶液雾化吸入激发哮喘。末次激发24 h后处死小鼠,取支气管肺泡灌洗液(BALF)进行嗜酸性粒细胞计数,取肺组织行病理学检查及免疫组化检测GR和NF-κB表达水平。结果哮喘组BALF中嗜酸性粒细胞计数较对照组显著增加(P0.05);BUD组与哮喘组相比嗜酸性粒细胞数量显著减少,但仍较对照组增高(P0.05)。哮喘组小鼠肺组织可见嗜酸性粒细胞、淋巴细胞等炎症细胞浸润,BUD组炎症细胞浸润较哮喘组明显减轻。哮喘组GR阳性细胞百分比与对照组比较明显减少(P0.05),BUD组GR阳性细胞百分比较哮喘组明显增加,但仍低于对照组(P0.05);哮喘组NF-κB阳性细胞百分比较对照组明显增加(P0.05),BUD组NF-κB阳性细胞百分比较哮喘组明显减少,但仍高于对照组(P0.05)。结论 BUD治疗哮喘小鼠的作用机制可能与上调GR水平及抑制NF-κB的活性有关。     

中性粒细胞哮喘与嗜酸性粒细胞哮喘小鼠中Kv1.3钾离子通道表达及电流改变

目的 Kv1.3钾离子通道在与T细胞介导相关疾病的发生有一定的联系.该研究旨在研究Kv1.3钾离子通道在中性粒细胞及嗜酸性粒细胞哮喘模型中的表达及功能变化.方法 选择24只Balb/c小鼠,随机分成3组:正常对照组、中性粒细胞性哮喘组、嗜酸性粒细胞哮喘组.应用卵清蛋白联合内毒素建立哮喘模型,无创肺功能仪测定小鼠气道反应性、肺组织HE染色观察肺部炎症改变、免疫组织荧光检测Kv1.3钾离子通道在肺组织的定位、Western blot检测肺组织中Kv1.3钾离子通道蛋白表达量、全细胞膜片钳技术Kv1.3钾离子通道电流强度.结果 Kv1.3钾离子通道在哮喘气道及肺泡上皮区域表达增高,在中性粒细胞哮喘模型中表达强于嗜酸性粒细胞哮喘模型.中性粒细胞哮喘模型及嗜酸性粒细胞哮喘模型中肺泡灌洗液淋巴细胞上Kv1.3电流强度增加,且中性粒细胞哮喘模型增幅强于嗜酸性粒细胞哮喘模型.结论 Kv1.3钾离子通道在哮喘气道及肺泡上皮区域表达增高,电流强度增高.且在中性粒细胞哮喘模型中表达强于嗜酸细胞哮喘模型,为哮喘的治疗提供新的靶点.     

溴化结构域蛋白抑制剂JQ1对哮喘小鼠气道重塑作用机制研究

目的探讨溴化结构域蛋白抑制剂JQ1对哮喘小鼠气道重塑治疗的分子学机制。方法将24只小鼠随机分成对照组、OVA诱导哮喘组(OVA组)、JQ1干预哮喘组(JQ1+OVA组)(n=8)。采用OVA致敏/激发制备哮喘小鼠模型,雾化激发前1h,JQ1+OVA组小鼠经腹腔注射JQ1溶液(50μg/g)。末次激发24h后留取支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织,计算各组BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞百分比,肺组织行病理染色观察各组小鼠肺组织病理改变;采用RT-PCR及Westernblot法分别检测小鼠肺上皮间质转化(EMT)过程中钙黏蛋白(E-Cadherin)、波形蛋白(vimentin)m RNA及蛋白水平的表达变化。结果与对照组比较,OVA组小鼠气道炎性细胞明显浸润,气道壁增厚,黏液渗出增多;BALF中细胞总数增加,嗜酸性粒细胞百分比增多(P0.01)。与OVA组比较,JQ1+OVA组小鼠气道炎症反应明显减轻;BALF中细胞总数明显减少,嗜酸性粒细胞百分比降低(P0.01)。与对照组比较,OVA组小鼠肺组织气道上皮E-Cadherinm RNA及蛋白表达水平明显下调,vimentinm RNA及蛋白表达水平明显上调(P0.01);与OVA组比较,JQ1+OVA组E-Cadherinm RNA及蛋白表达水平升高,vimentinm RNA及蛋白表达水平下降(P0.01);JQ1+OVA组与对照组上述指标表达水平比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 OVA哮喘小鼠存在EMT气道重塑;溴化结构域蛋白抑制剂JQ1可降低哮喘小鼠气道炎症,抑制EMT,减轻气道重塑,为哮喘治疗提供了一个潜在的新方向。     

白三烯受体拮抗剂抑制小鼠急性哮喘呼吸道炎症的研究

目的应用白三烯受体1拮抗剂孟鲁斯特(montelukast,MK)治疗小鼠急性哮喘呼吸道炎症,探讨MK对白细胞介素-5(IL-5)和嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)表达及血清总IgE水平的影响。方法卵清蛋白(OVA)致敏并激发Balb/c小鼠建立急性哮喘模型。静脉予MK(25 mg/kg)或Saline 3 d。瑞氏染色观察小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)炎症细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织、BALF和血清IL-5和eotaxin及血清总IgE水平。半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测IL-5和eotaxin的mRNA表达。液相色谱方法检测血MK水平。结果OVA激发后24 h,MK组BALF白细胞总数、嗜中性和嗜酸性粒细胞(EOS)分别为(26.0±18.9)×107/L(、5.92±8.09)×107/L和(0.74±0.88)×107/L,较Saline组相应数明显减少(P均<0.05)。EOS减少达80%以上。MK组BALF和肺组织IL-5分别为(48.52±14.45)ng/L和(27.40±9.62)ng/g蛋白,较Saline组相应值明显降低(P均<0.05);MK组血清IL-5和总IgE水平明显减低。MK组BALF中eotaxin水平也明显降低(P<0.05);MK组肺组织IL-5 mRNA显著降低,肺eotaxin及其mRNA水平无明显下降。结论MK可能通过抑制IL-5和IgE产生和分泌起抗炎作用。     

高氧致新生大鼠支气管肺发育不良肺成肌纤维细胞分布的变化及意义

目的 观察高氧致新生大鼠支气管肺发育不良(BPD)肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达及胶原的变化,探讨高氧致新生大鼠BPD的发生与成肌纤维细胞的内在联系.方法 将新生大鼠持续暴露在85%高氧环境中,在实验的1、3、7、14、21 d,取左肺组织固定、脱水、石蜡包埋、切片,用于肺组织病理变化观察及α-SMA表达的免疫组织化学检测;右肺-80℃冰冻,用于Ⅰ型胶原(ColⅠ)蛋白和mRNA表达检测.结果 新生大鼠长期高氧暴露可致肺泡简单化,肺泡数目减少,终末气腔扩张,次级隔数目减少,肺泡间隔显著增厚,出现纤维化.高氧暴露14和21 d时,α-SMA在肺泡间隔和肺泡表面表达显著增强,呈条素状分布;但空气组仅在次级间隔的顶端呈点状分布.随高氧暴露时间延长,Col Ⅰ表达增加,并且高氧组肺组织α-SMA表达与Col Ⅰ mRNA表达呈明显正相关(r=0.59,P< 0.05).结论 新生大鼠高氧暴露导致肺损伤符合早产儿BPD的病理改变,成肌纤维细胞分布紊乱可能在BPD的发病过程中起重要作用.     

Rock2和TGF-β1在哮喘大鼠中的表达及药物干预

目的：探讨Rho激酶2（Rock2）和转化生长因子-β1（TGF-β1）在哮喘急性发作期的作用及糖皮质激素干预对其表达的影响。方法：48只大鼠随机分为哮喘组（AST组）、对照组（CON组）、地塞米松治疗组（DXM组）和布地奈德治疗组（BUD）4组,每组12只。用改良卵白蛋白进行致敏和激发制备大鼠哮喘模型,观察大鼠肺组织病理变化、分析支气管肺泡灌洗液（BALF）中的细胞计数。采用免疫组织化学法测定Rock2蛋白质表达和原位杂交法测定TGF-β1 mRNA表达。结果：BUD组和DXM组大鼠病理变化较哮喘组明显减轻。哮喘组BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞（EOS）、多形核粒细胞（PMN）和淋巴细胞（Lym）百分率均显著高于CON组（P﹤0.01）,巨噬细胞（Mф）百分率显著低于对照组（P﹤0.01）,而BUD和DXM组中BALF中细胞总数及EOS、Lym百分率低于哮喘组,Mф百分率显著高于哮喘组。哮喘组肺组织中Rock2及TGF-β1 mRNA表达显著高于CON、BUD和DXM组（P﹤0.01）,而BUD、DXM组与对照组相比,差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：哮喘急性发作期Rock2和TGF-β1的表达显著增加;糖皮质激素干预可降低Rock2和TGF-β1的表达水平,从而减轻哮喘气道炎症。［中国当代儿科杂志,2010,12(11)：877-881］     

Hes-1与哮喘大鼠气道炎症和气道重塑的关系研究

目的 观察Sprague-Dawley（SD）大鼠哮喘模型中Notch 信号通路靶基因Hes-1 的表达变化及与气道炎症和气道重塑的关系,初步探讨其在支气管哮喘发病中的作用。方法 将48 只SD 大鼠随机分成对照组和哮喘组,采用卵白蛋白致敏及激发建立哮喘模型,对照组以生理盐水替代致敏液,两组依据激发后不同处理时间点各分为4 周、8 周、12 周3 个亚组,每组8 只大鼠。光镜观察肺组织病理变化并检测支气管平滑肌厚度（Wam）;ELISA 法检测大鼠血清和支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL-4 和INF-γ 水平;分别采用免疫组织化学和实时荧光定量PCR 检测Hes-1 蛋白及mRNA 的表达水平。结果 随着激发后时间的延长,哮喘组大鼠Wam 逐渐增加,血清和BALF 中INF-γ 水平逐渐降低、IL-4 水平逐渐增加,且与同时间点对照组相比差异均有统计学意义（均PPP结论 Hes-1 蛋白及其mRNA 的表达增加与哮喘大鼠气道炎症因子水平和气道平滑肌重塑密切相关,并可能参与了哮喘的发生。     

生长相关癌基因α在哮喘大鼠中的表达意义

目的 观察哮喘大鼠生长相关癌基因α(GROα)蛋白的表达水平及布地奈德对其的影响,探讨GROα和中性粒细胞(PMN)的相关性.方法 采用哮喘大鼠模型,将30只SD大鼠随机分成哮喘组、布地奈德治疗组、正常对照组,分离纯化血PMN,应用免疫组化法测定支气管壁和血PMN中GROα蛋白的表达水平,计数肺组织PMN数目.结果 与对照组相比,哮喘组和治疗组的GROα蛋白的平均光密度值(OD值)在支气管壁(依次为0.138±0.009、0.114±0.007、0.077±0.010)和血PMN(依次为0.211±0.017,0.136±0.010,0.081±0.008)中差异均有统计学意义(P均<0.01);与哮喘组相比,治疗组的GROα蛋白的平均光密度值在支气管壁和血PMN中差异均有统计学意义(P均<0.01).三组PMN计数(对照组6.70±2.41,哮喘组26.00±6.54,治疗组196.80±25.73)两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05).GROα蛋白的表达水平与肺组织PMN计数在哮喘组和对照组之间呈显著正相关(n=19,r=0.865,P<0.01).结论 哮喘时支气管壁和PMN的GROα蛋白的表达水平及肺组纵PMN计数增加,它们参与了哮喘发病的炎症过程;布地奈德部分通过抑制GROα蛋白的表达从而减轻气道炎症,但能加剧PMN住肺组织中聚集;GROα蛋白可能与PMN在肺组织中聚集密切相关.     

全反式维甲酸对肾硬化大鼠肾脏组织α-SMA表达及细胞外基质代谢的影响

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)对肾硬化大鼠肾脏组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达、Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)和纤维连接蛋白(FN)代谢的影响.方法 80只雄性8周龄Wistar大鼠随机分成4组,假手术组、模型组、苯那普利组和ATRA组,每组20只.采用单侧肾切除加1周后尾静脉注射阿霉素(5 mg/kg)的方法建立肾小球硬化(GS)大鼠模型,造模后12周末处死.肾脏病理切片采用苏木素-伊红(HE)染色,计算肾小球硬化指数(GSI).免疫组织化学方法检测肾脏组织α-SMA、Col Ⅳ和FN的蛋白表达,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肾脏组织α-SMA mRNA的表达.结果 与模型组相比,ATRA组和苯那普利组大鼠GSI显著下降(P<0.01),肾脏组织Col Ⅳ、FN及α-SMA蛋白表达显著减少,肾脏组织α-SMA mRNA表达量显著下降(P<0.05),但两治疗组间差别无统计学意义(P0.05).结论 ATRA可能通过抑制GS大鼠肾脏组织α-SMA表达,减少细胞外基质合成,最终延缓GS进展.     

Tc17细胞在中性粒细胞哮喘小鼠的表达及意义

目的 检测中性粒细胞(NEU)哮喘小鼠肺脏Tc17细胞比例,初步探讨Tc17细胞在NEU哮喘发病机制中的作用。方法 32只清洁级C57B/6小鼠,随机分成NEU哮喘组和对照组。NEU哮喘组用卵蛋白(OVA)和脂多糖(LPS)气道滴入致敏,予OVA雾化激发,对照组用生理盐水致敏和激发。在最后一次雾化结束后24 h,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)并检测其有核细胞总数及分类比例,分离肺组织行HE染色,流式细胞术检测小鼠肺脏Tc17细胞与Th17细胞百分比,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF中IL-6、TGF-β、IL-17水平。结果 NEU哮喘组小鼠BALF中有核细胞总数、嗜酸性粒细胞(EOS)及中性粒细胞百分比均明显高于对照组(PPr=0.7932,PP结论 NEU哮喘组肺脏Tc17细胞表达增高,Tc17细胞可能参与了中性粒细胞哮喘的发病,IL-17很可能是Tc17细胞在NEU哮喘中发挥作用的方式之一。     

地塞米松对哮喘大鼠肺组织血红素氧合酶-1的调控

目的(1)研究哮喘大鼠肺组织中血红素氧合酶-1(HO-1)的表达情况;(2)观察哮喘大鼠肺组织中HO-1表达与支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)占细胞总数的百分比(EOS%)、肺组织中EOS、全血一氧化碳血红蛋白(COHb)的百分比含量之间的相关性;(3)研究地塞米松对HO-1的调控作用。方法清洁级雄性SD大鼠30只,随机分为3组,每组10只:正常对照组(N组);哮喘组(A组);地塞米松治疗组(D组)。测定全血COHb的百分比含量;计数BALF沉渣中细胞总数和分类;计数肺组织中浸润的炎性细胞数;免疫组织化学染色法观察HO-1在哮喘大鼠肺组织的表达。结果HO-1主要表达在气道上皮细胞,三组HO-1阳性表达的平均吸光度分别为(0.07±0.01)、(0.22±0.03)、(0.12±0.02)。A组HO-1表达水平显著高于N组(P<0.001),D组HO-1蛋白的表达显著低于A组(P<0.01)。HO-1表达水平与全血COHb的百分比含量、BALF中EOS占细胞总数的百分比及肺组织中EOS总数均呈显著正相关(分别为r=0.916,P<0.01;r=0.874,P<0.01;r=0.895,P<0.01)。结论哮喘大鼠的肺组织HO-1表达水平显著增加,提示HO-1可能参与了哮喘的发病过程。地塞米松明显改善哮喘的气道炎症浸润,其作用机制部分是通过抑制HO-1起作用。