血管紧张素Ⅱ-2型受体对糖尿病心肌病大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:研究血管紧张素Ⅱ-2型受体(AT2)对2型糖尿病心肌病大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法:77只雌性4周龄wistar大鼠被给予高糖高脂饮食喂养4周后形成胰岛素抵抗(IR)模型,随机抽出14只大鼠作为对照组,余作为实验组腹腔注射链脲佐菌素(STZ)。第28周末,将存活的实验组大鼠(均末次空腹血糖≥16·7mmol/L)和7只对照组大鼠(对照1组)经颈动脉插管行心脏血流动力学检测,将等容舒张期左室内压力下降的最大速率(-dp/dtmax)绝对值<5250mmHg/s的实验组大鼠中随机抽取8只(实验A亚组)与对照1组大鼠一起进行心脏重量(HW)和心肌细胞凋亡指数(CAI)检测。其余实验组大鼠被随机分为激动剂亚组(实验B亚组,8只)、拮抗剂亚组(实验C亚组,9只)和非干预亚组(实验D亚组,7只),分别腹腔内注射AT2激动剂(CGP42112A)、AT2拮抗剂(PD123319)和等量的双蒸水,均每天1次,连续4周。第32周末,检测实验B、C、D亚组与7只对照组(对照2组)大鼠的HW和CAI,逆转录聚合酶链反应法检测心肌细胞AT2和Bcl-2mRNA量,免疫组化染色法检测心肌细胞上AT2和Bcl-2蛋白质量。结果:实验A亚组-dp/dtmax绝对值明显低于对照1组(P<0·01);实验A亚组HW和CAI均明显高于对照1组(均P<0·01),且HW和CAI分别与-dp/dtmax绝对值呈正相关(均P<0·01)。实验B、C、D亚组-dp/dtmax绝对值、Bcl-2的蛋白质和mRNA表达均明显低于对照2组(均P<0·01),其中实验B亚组均明显低于实验C、D亚组(均P<0·01),实验D亚组明显低于实验C亚组(P<0·01);实验B、C、D亚组HW、CAI、AT2的mRNA量和蛋白质表达量均明显高于对照2组(均P<0·01),其中实验B组均明显高于实验C、D亚组(均P<0·01),实验D亚组明显高于实验C亚组(P<0·01)。结论:糖尿病心肌病大鼠心肌细胞AT的高表达促进心肌细胞的凋亡。     

糖尿病树鼩血栓性脑缺血时心脏血流动力学及心肌超微结构的变化

目的观察实验性糖尿病树鼩在血栓性局部脑缺血时心脏血流动力学及心肌超微结构的变化。方法链脲佐菌素(STZ)55mg/kg空腹腹腔注射制备糖尿病树鼩模型,一周后通过光化学反应诱导局部血栓性脑缺血。将树鼩随机分为糖尿病组,脑缺血组,糖尿病加脑缺血组,并设假手术对照组,每组8只,用多导生理仪观察左心室内压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP),左心室收缩与舒张瞬间变化最大速率(±dp/dtmax),收缩动脉压(SAP),舒张动脉压(DAP)及心率(HR)。并取左心室心肌组织,行透射电镜观察心肌超微结构变化。结果 与假手术对照组相比,脑缺血组LVSP、+dp/dtmax下降(P<0.05),-dp/dtmax明显下降(P<0.01),LVEDP升高(P<0.05);糖尿病组-dp/dtmax下降(P<0.05),LVEDP明显升高(P<0.01)。与脑缺血组相比,糖尿病加脑缺血组LVSP、+dp/dtmax降(P<0.05),-dp/dtmax明显下降(P<0.01),LVEDP升高(P<0.05)。脑缺血组和糖尿病组心肌超微结构观察显示:心肌肌原纤维间水肿,一些肌原纤维可见收缩小带形成,部份线粒体固缩,部份线粒体肿胀。糖尿病加脑缺血组树鼩可见:大部分线粒体固缩,部分线粒体肿胀、嵴溶解,心肌纤维较多收缩带形成,间质充血水肿,毛细血管内皮细胞见较多空泡。结论树鼩血栓性脑缺血时伴有心脏血流动力学及心肌超微结构的异常,糖尿病急     

兔甲亢性心肌病不同左室构型心肌细胞的凋亡

目的:观察兔甲亢性心肌病不同左室构型心肌细胞的凋亡情况及相关bcl 2、bax蛋白表达的变化。方法: 将30只新西兰纯种白兔分为实验组(n=20)和对照组(n=10),实验组兔每日腹腔注射左旋甲状腺素(45 μg/kg体质量)共4周建立甲亢动物模型,对照组兔每日腹腔注射同等剂量的生理盐水共4周。4周后,对两组兔行常规超声心动图参数测定。实验组依据超声参数又分为向心性肥厚亚组(CH亚组)和离心性肥厚亚组(EH亚组)。第4周末处死所有兔,取心肌组织,在透射电镜下观察心肌细胞,应用原位末端标记法标记凋亡的心肌细胞,应用免疫组织化学染色法检测bcl 2、bax蛋白的表达。结果: ①透射电镜观察CH亚组和EH亚组均有大量的凋亡细胞,且凋亡指数(AI)显著高于对照组(均P<001),EH亚组的AI又显著高于CH亚组(P<001)。②CH亚组和EH亚组bcl 2蛋白的表达显著低于对照组(均P<001),EH亚组又显著低于CH亚组(P<001);CH亚组和EH亚组bax蛋白的表达显著高于对照组(均P<001),EH亚组又显著高于CH亚组(P<001)。CH亚组和EH亚组bcl 2/bax的比值显著低于对照组(均P<001)。结论: 兔甲亢性心肌病不同左室构型具有不同程度的心肌细胞凋亡,说明细胞凋亡机制参与了该病的病理过程,其作用与下调bcl 2蛋白的表达、上调bax蛋白的表达有关。     

依那普利对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及凋亡基因bcl-2、Bax的影响

目的:探讨血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)———依那普利对慢性压力负荷性心力衰竭大鼠心肌重构、心肌细胞凋亡、凋亡基因Bcl 2、Bax在心肌细胞中表达的影响,为心力衰竭的发病机制及治疗提供实验依据。方法:结扎大鼠的腹主动脉,复制慢性压力负荷性心力衰竭模型,32只大鼠随机分为心力衰竭组 12 只、依那普利治疗组(治疗组)12只、对照组8只。手术后6周,充血性心力衰竭模型形成。治疗组给予依那普利10 mg·kg-1·d-1灌胃,心力衰竭组和对照组给予同量0.85%氯化钠溶液灌胃。在 3 个月末测量血流动力学指标后,将大鼠处死,取出心脏。用原位脱氧核糖核酸酶末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;免疫组化法和免疫印迹法测 bcl 2、Bax表达。结果:心力衰竭组与对照组相比,心功能明显减退(P < 0.01);心肌细胞凋亡明显增加(P <0.01);在心肌细胞中bcl 2 表达减低,Bax表达增加。依那普利治疗后能改善心室重构(P<0.05),减少心肌细胞凋亡(P< 0.01),增加bcl 2、减少Bax在心肌细胞中的表达(P<0.05)。结论:在心力衰竭时血管紧张素Ⅱ生成增多,减低bcl 2的表达,增加Bax的表达,从而降低 bcl 2/Bax比率;依那普利可能通过血管紧张素Ⅱ的介导作用,增加bcl 2、减低Bax在心肌细胞中的表达,减轻心肌细胞凋亡。     

SMAD3，SMAD7在糖尿病大鼠心肌组织的表达

目的 探讨糖尿病大鼠心脏SMAD3和SMAD7的表达变化及其与糖尿病心肌病的关系.方法 20只雄性SD大鼠随机分成对照组和糖尿病组.腹腔注射链脲菌素建立糖尿病模型.多导生理记录仪测定大鼠心功能,测定大鼠体质量、心脏质量并计算心脏质量/体质量,电镜观察心肌超微结构改变,苦昧酸天狼星染色观察心肌间质纤维化程度,原位细胞凋亡检测法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡情况,RT-PCR测定各组大鼠的SMAD3、SMAD7的mRNA水平,免疫组化法检测SMAD3、SMAD7的蛋白水平.结果 与对照组相比,糖尿病大鼠心功能受损;HW/BW明显增高(P<0.01),电镜显示心肌肌丝溶解、断裂,问质胶原增生,VG染色显示心肌间质明显纤维化(P<0.01),心肌细胞凋亡增加(P<0.01);心脏SMAD3的mRNA表达增加(P<0.01),SMAD7的mRNA表达减少(P<0.01),SMAD3蛋白表达水平增加(P<0.01),SMAD7的蛋白表达水平降低(P<0.01).结论 SMADs信号通路活化可能参与了糖尿病大鼠心肌病的发生发展过程.     

脓毒症大鼠心肌组织Toll样受体4和肿瘤坏死因子-α表达及细胞凋亡研究

目的:检测脂多糖(LPS)诱导的脓毒症大鼠心肌组织中Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达和心肌细胞凋亡情况。方法:取72只大鼠随机分为3组,每组24只。实验1组、实验2组分别按10、12 mg/kg腹腔注射LPS建立脓毒症大鼠模型,对照组按10 mL/kg腹腔注射生理盐水。3组分别在注射后1、6、24 h,各取8只大鼠处死,处死前眼眶静脉丛采血,检测血清TNF-α水平,处死后取心脏组织,检测心肌组织中TNF-α阳性细胞率,TLR4、TNF-αmRNA表达水平及心肌细胞凋亡指数(AI)。结果:2个实验组血清TNF-α水平、心肌组织TNF-α阳性细胞率及TLR4、TNF-αmRNA相对表达量随时间均呈显著上升趋势(P 0. 05),2个实验组上述指标均高于对照组,且实验2组显著高于实验1组(P 0. 05); 2个实验组心肌细胞AI随时间呈显著上升趋势(P 0. 05),且心肌细胞各时间段AI均显著高于对照组(P 0. 05),实验2组AI水平显著高于实验1组(P 0. 05)。结论:LPS诱导的脓毒症大鼠心肌细胞凋亡水平随病情发展显著增加,心肌损害随病情程度逐渐加重,推测与TLR4、TNF-α在血清及心肌组织内的异常高表达有关。     

结缔组织生长因子在大鼠糖尿病心肌病中的作用机制

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)在大鼠糖尿病心肌病中的作用及机制。方法将56只SD大鼠随机分为实验组和对照组各28只。实验组使用链脲佐菌素一次性腹腔注射建立糖尿病模型,对照组注射等量枸橼酸缓冲液。于糖尿病成模后的第4、8及12周从两组中随机各选取5只大鼠,称其体质量(BW)后处死并计算左室质量指数(LVMI)和心体比(H/B),测定空腹血糖(FPG)水平,电镜观察其心肌超微结构及冠状动脉病变,RT-PCR法对比各时间点大鼠心肌CTGF、纤维连接蛋白(FN)、Ⅲ型胶原(Col)Ⅲ及转化生长因子(TGF)-β1的表达。结果实验组在病程12 w后心肌超微结构病变显著,冠状动脉无病变,糖尿病心肌病已形成。病程4 w时:实验组BW水平显著低于对照组,实验组H/B、LVMI及FPG水平均显著高于对照组(P0.05)。病程8、12 w时:实验组BW水平均显著低于对照组,实验组HW、左心室质量(LVM)、H/B、LVMI及FPG水平均显著高于对照组(P0.05)。实验组随着病程的增加,BW、HW、LVM、H/B、LVMI的增长明显,CTGF、FN、ColⅢ及TGF-β1的mRNA表达增长明显(均P0.05)。实验组CTGF mRNA表达与TGF-β1、FN、ColⅢmRNA表达均呈正相关(均P0.01)。结论 CTGF在糖尿病大鼠心肌病中呈高表达状态,CTGF参与了糖尿病心肌病的形成与进展。     

血管紧张素Ⅱ及其受体在大鼠糖尿病性心肌病发生中的作用

目的 观察心肌局部血管紧张素Ⅱ（ATⅡ）的活性及其受体（ATR）的变化，探讨其在糖尿病性心肌病发生中的作用。方法 实验动物Wistar大鼠被分为3个月对照组（8只）和糖尿病组（8只）6个月对照组（10只）、糖尿病组（10只）和Losartan治疗组（10只），分别于造模后3个月、6个月检测心功能，ATⅡ及其受体的相关参数。结果 糖尿病组动物3个月时首先出现－dp/dtmax减低，血浆ATⅡ增高，6个月时＋dp/dtmax,-dp/dtmax均减低，心脏重量指数持续增加，心肌和血浆ATⅡ明显增高；心肌细胞膜ATⅡ受体亲和力明显增高；治疗组dp/dtmax,-dp/dtmax及心脏重量指数较糖尿病组均有所改善，心肌和血浆ATⅡ变化不明显。结论 ATⅡ及ATR的变化在糖尿病性心肌病发生中起重要作用。     

内源性二氧化硫抑制血管紧张素Ⅱ致心肌肥厚小鼠心肌细胞自噬的研究

目的探讨内源性二氧化硫(SO_2)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致心肌肥厚小鼠心肌细胞自噬的抑制作用。方法 9周龄健康C57BL小鼠16只,按随机数字表法随机分为野生型对照组(WT Con组)、野生型+AngⅡ组(WT AngⅡ组);心肌特异性天冬氨酸氨基转移酶2(AAT2)转基因小鼠16只,按随机数字表法随机分为AAT2对照组(AAT2 Con组)、AAT2+AngⅡ组(AAT2 AngⅡ组)。每组8只。每只小鼠在背部皮下植入预装生理盐水或AngⅡ的胶囊渗透压泵,连续给药4周。检测4组小鼠全心重/体重(HW/BW)比值;HE染色观察心肌细胞结构变化;免疫组织化学染色检测心肌标志分子α重链肌球蛋白(α-MHC)的表达;高效液相色谱检测心肌组织SO_2含量;Western blot检测内源性SO_2生成酶AAT1和AAT2、心肌表型标志分子α-MHC和β-MHC以及心肌自噬标志分子Beclin-1、LC3、Atg4B以及p62蛋白表达变化。结果与WT Con组相比,WT AngⅡ组心肌组织SO_2含量显著降低(P0.01),AAT1蛋白表达无明显变化(P0.05),AAT2蛋白表达显著减少(P0.05),HW/BW明显增加(P0.01),心肌纤维明显增粗,免疫组织化学法显示心肌细胞浆中α-MHC蛋白表达明显减弱,Western blot结果显示心肌细胞α-MHC蛋白表达显著降低(P0.01),β-MHC蛋白表达显著升高(P0.01),心肌组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著升高,Beclin-1和Atg4B蛋白表达显著升高,p62蛋白表达显著降低(均P0.01)。与WT Con组相比,AAT2 AngⅡ组小鼠心肌组织SO_2含量和AAT2蛋白表达显著升高(P0.01),AAT1的蛋白表达无显著变化(P0.05),HW/BW显著降低(P0.05),心肌纤维的增粗显著减轻,α-MHC蛋白向β-MHC蛋白的转化显著降低(P0.01),心肌细胞自噬水平显著降低。结论内源性SO_2/AAT2体系可抑制AngⅡ致小鼠心肌肥厚及心肌细胞自噬。     

替米沙坦通过JAK/STAT通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨JAK-STAT通路的主要成员STAT1和STAT3在心肌缺血再灌注(I/R)损伤过程中激活的功能作用及AT1受体拮抗剂替米沙坦抗心肌I/R损伤的受体后机制。方法采用Langendorff离体心肌I/R模型,65只雄性Wistar大鼠分为5组,每组13只:正常对照组、I/R组、AG490组、替米沙坦预处理组、替米沙坦后处理组。动态监测LVDP和dp/dtmax;免疫印迹法检测p-STAT1,p-STAT3的蛋白表达;TTC染色计算心肌梗死面积;TUNNEL法检测心肌细胞凋亡指数(AI),RT-PCR法检测Bcl-2、Bax的mRNA表达。结果与I/R组比,JAK阻断剂AG490、替米沙坦预处理及后处理均能缩小心肌梗死面积(P<0.01),降低心肌细胞AI(P<0.01),改善心功能,使LVDP和dp/dtmax均明显升高(P<0.01),而使p-STAT1和p-STAT3的蛋白表达明显减少(P<0.01和P<0.05),以p-STAT1表达降低更为明显,p-STAT1与p-STAT3比值下调,Bax mRNA表达显著减少(P<0.01),而Bcl-2 mRNA表达增多(P<0.05)。结论替米沙坦具有抗心肌I/R损伤作用,其机制与阻断JAK-STAT通路,下调促凋亡基因Bax,上调抑制凋亡基因Bcl-2有关。